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我们知道噬斑法和TCID50法检测的是感染性病毒的浓度,并不体现病毒的总浓度(总颗粒数)。现在有越来越多的研究显示,很多病毒在包装过程中由于缺失基因组,形成空心病毒。或者在合成过程中,基因的突变或者缺陷导致蛋白的突变,造成病毒没有感染性。而这些非感染性病毒的数量在总病毒数量中所占的比例意义重大,能影响体内和体外的研究结果。所以快速的病毒总浓度定量方法是非常必要的。流感疫苗的生产中,从鸡胚培养来源的流感疫苗在使用专门的试剂裂解后,收获免疫原蛋白HA。非传染性的流感病毒(被证实含有衣壳蛋白和部分的基因组)在裂解后同样能贡献免疫原蛋白HA。所以总病毒浓度的评估对流感疫苗的生产意义重大。此外,总病毒浓度的定量也有助于减毒疫苗的生产。减毒疫苗是复制缺陷的非感染性的但是能引发机体免疫反应的一种疫苗。减毒疫苗既然不能复制,所以就不会引起细胞病变反应,而CCID50法则以细胞病变反应为判断基准。在某种意义上来说,所有的减毒疫苗是由非感染的病毒颗粒构成,因此,采用总病毒浓度定量的方法是减毒疫苗唯一可靠的方法。在动物疾病的预防和治疗中,采用感染性方法测得病毒滴度来决定注射的剂量,往往忽视了非感染性病毒颗粒在动物免疫反应中的作用以及最终的药剂效果。比如噬斑法测得病毒滴度为1E6 pfu,但是总病毒浓度是1E8 vp/ml,在每一个感染颗粒中,有100个颗粒没有被计数,最终可能影响动物治疗结果。考虑到非感染性病毒颗粒的生物学作用以及在疫苗生产的作用,感染性病毒颗粒和总病毒颗粒的定量对于病毒疫苗的生产和研究都至关重要,而病毒计数仪在10min内能快速获得病毒总浓度,所以能广泛应用于在病毒的研究和生产中。
HPLC法测定抗病毒口服液中盐酸麻黄碱的含量 王林丽+,陈亮,付若秋,宋志永(第三军医大学野战外科研究所、大坪医院药剂科,重庆市400042)摘要目的:建立以HPLC法测定抗病毒口服液中盐酸麻黄碱含量的方法。方法:色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5um),流动相为乙腈0.1%磷酸(6:94),检测波长为207nm,流速为1.0mL·min一,柱温为室温。结果:盐酸麻黄碱进样量在5.8~29.Otzg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 6);平均加样回收率为98.13%,RSD=1.40%(n=9).结论:本法专属性强、灵敏度高、重现性好,可用于抗病毒口服液的质量控制。关键词 高效液相色谱法;抗病毒口服液;盐酸麻黄碱;含量测定http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207241912_379472_2355529_3.jpg
特性分类 具体特性 实验方法 形 态 学 病毒粒子的大小和形状(球形、子弹形、砖形、卵形或杆状、丝状或多形态) 电镜 滤膜 有无表面纤突及纤突的特征 电镜 有无囊膜 氯仿 衣壳对称形和结构,立体对称、螺旋对称还是复合对称 电镜 立体对称病毒粒子的壳粒数目或螺旋对称病毒的核衣壳直径 电镜+计算 理 化 特 征 病毒粒子的分子量、浮密度、沉降系数 病毒梯度离心 对酸碱的稳定性 PH3 PH10 TCID50 对热的稳定性 TCID50 对两价离子(Mg2+、Mn2+)的稳定性 TCID50 对脂溶剂(乙醚或氯仿)的稳定性 对去污剂的稳定性 TCID50 对辐射的稳定性 TCID50 基 因 组 核酸类型 RNA或DNA溶解实验 基因组大小(kb) 酶切,SDS-PAGE 是单股还是双股 线状还是环状 AO(丫啶橙)染色 正义、负义或双义 是整个还是分节段的,节段的大小和数目 SDS-PAGE 核酸的序列或部分序列,是否有重复序列,是否有同聚物,G+C含量 5’端帽的存在与否和类型 5’端共价结合蛋白存在与否 3’端多聚A尾的存在与否