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请问下各位同仁,有哪位知道胶原蛋白酶活测定是用什么氨基酸制定标准曲线的?是不是不同的蛋白酶用不同的氨基酸制定标准曲线?
10月8日,有媒体报道称,经过第三方机构检测,市售的Fancl、Lumi、丸美、汤臣倍健、颜如玉、无限极、安婕妤等七款胶原蛋白产品均出现胶原蛋白含量不足的问题,其中汤臣倍健、颜如玉、无限极的三款产品甚至未能检出胶原蛋白的特征物“羟脯氨酸”。由此,业内再一次掀起有关胶原蛋白产品的讨论。由此,业内再一次掀起有关胶原蛋白产品的讨论,频频陷入舆论危机。同时还了解到目前胶原蛋白产品始终未有统一标准,特异性指标也未能明确。不过多方认可,目前胶原蛋白的检测标准主要是测羟脯氨酸的含量。琳琅满目的胶原蛋白产品中胶原蛋白的含量是否合格?如何检测?国家相关的标准状况怎样?
胶原蛋白是结缔组织的主要成分,也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的[font='Times New Roman',serif]25%~30%[/font],作为一种生物高分子,胶原蛋白具有良好的生物相容性、可生物降解性及生物活性,在食品、医药、组织工程、化妆品等领域应用广泛。 胶原蛋白作为医美产品植入剂,能够增加皮肤的紧缩性、弹性和保湿度,使肌肤更显亮丽,有效改善肌肤纹理,使松弛的肌肤恢复年轻状态。补充胶原蛋白后,外来信号刺激细胞记忆功能可使缺损、凹陷、松弛的肌肤组织复原,对痤疮疤痕、表皮或真皮组织受损、上皮紧缩、深度细纹或其他软组织的缺损,均能明显改善。还能够帮助提升皮肤的机能,平衡干性及油性肌肤的油脂分泌,增强免疫保护能力。 胶原蛋白的质量控制是其流向市场的重要一环,首先要鉴别胶原蛋白,方法是取该产品[font='Times New Roman',serif]1g[/font],加[font='Times New Roman',serif]3mL[/font]纯化水溶解后,制成[font='Times New Roman',serif]1:4[/font]的供试液,按[font='Times New Roman',serif]SDS-[/font]聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测[font='Times New Roman',serif]97000Da[/font]处有条带,相对偏差不超过[font='Times New Roman',serif]5%[/font]。 然后对产品中的胶原蛋白含量进行测定,原理是在强碱性溶液中,蛋白质与双缩脉试剂形成紫色络合物,紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比利用标准蛋白质溶液作对照,采用紫外可见分光光度法测定样品中重组胶原蛋白含量。操作过程如下:[font='Times New Roman',serif]1.[/font]精密取牛血清白蛋白[font='Times New Roman',serif] (BSA)[/font]标准品适量,用纯化水作溶剂,稀释成每[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]含[font='Times New Roman',serif]10mg[/font]的溶液,再用纯化水作溶剂准确配制成[font='Times New Roman',serif]0mg/mL.2mg/mL[/font],[font='Times New Roman',serif]4mgmL[/font],[font='Times New Roman',serif]6mgmL[/font],[font='Times New Roman',serif]8mg/mL[/font],[font='Times New Roman',serif]10mg/mL[/font]的标准蛋白溶液备用。[font='Times New Roman',serif]2.[/font]双缩脉试剂:准确称取[font='Times New Roman',serif]15g[/font]硫酸铜、[font='Times New Roman',serif]6.0g[/font]酒石酸钾钠和[font='Times New Roman',serif]5.0g[/font]碘化钾,用[font='Times New Roman',serif]500ml[/font]纯化水溶解,在搅拌下加入[font='Times New Roman',serif]300mL10%[/font]氢氧化钠溶液,用水稀释到[font='Times New Roman',serif]1000mL[/font],摇匀,即得。[font='Times New Roman',serif]3.[/font]分别取不同浓度标准蛋白质溶液各[font='Times New Roman',serif]1mL[/font],然后加入[font='Times New Roman',serif]4mL[/font]双缩脲试剂。用漩涡式混合器允分摇匀后,室温放置[font='Times New Roman',serif]30[/font]分钟,于[font='Times New Roman',serif]540nm[/font]处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。以蛋白质的浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标椎曲线。[font='Times New Roman',serif]4.[/font]取重组胶原蛋白植入剂中溶液[font='Times New Roman',serif]1mL[/font],操作同上,平行做两份。 在标准曲线中求出待测样品中重组胶原蛋白的含量,重组胶原蛋白含量应符合:[font='Times New Roman',serif]3.5mg/mL≤[/font]含量[font='Times New Roman',serif]≤5.5mg/mL[/font]。