免疫亲和柱净化(Copure® 赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱,3 mL)上样:取待净化样品 2 mL 过柱,弃掉流出的液体。淋洗和洗脱:加入 20 mL 水淋洗柱子,分两次淋洗,弃掉流出的液体,抽干小柱;加入 2 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱,流速约为 2-3 秒 / 滴。重新溶解:40℃下氮吹至近干,加 1 mL 初始流动相复溶,0.22 µ m 滤膜过滤,供 HPLC 分析。
实验结果及讨论由图1、2、3可知,SelectCore Protein G亲和柱可以特异性的结合免疫球蛋白IgG,并且BioCore SEC-300色谱柱可以有效分离杂蛋白与IgG;由表格可以看出,三种保健食品的加标回收率均在90%以上。经过测试,SelectCore Protein G 1mL亲和柱的柱容量为5mg/支,对于IgG含量较高的样品,推荐IgG最佳上样的物质的量为1 mg,为了避免亲和柱过载,可以通过减少样品称样量和上样体积来进行适当调整。