我们在GPC凝胶色谱数据工作站分析肝素纳遇到点问题,如何在色谱峰分割按面积算?
我室现想买一台ELSD,不知哪家的性价比高?另外,用高效凝胶色谱做聚合物、多糖的分子量及其分布研究是不是一定要用凝胶色谱工作站?请各位老师不吝赐教!!!请各位大虾为我推荐一下高效凝胶色谱方面的书籍。
[color=#454545]我们在GPC凝胶色谱数据工作站分析肝素纳遇到点问题,如何在色谱峰分割按面积算?[/color]
我是凝胶色谱的新手,想了解工作站的设置参数和计算方法,有完整的谱图吗?让我学习一下,哪位朋友能够帮助一下谢谢!!ttjx888@126.comQQ:569689877
本人未接触过凝胶色谱及GPC软件,日前在看标准GB/T 22494-2008附录A中肽相对分子质量分布的测定方法中提到,要具备液相色谱(配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站)本人问题:标准中所谓的“GPC数据处理软件的色谱工作站”与我们购买仪器常配的色谱工作站有什么不一样吗?我们单位有waters和热电的液相,基本都是标配,以前没听说什么GPC软件的(PS:GPC净化分离的仪器就听过)
凝胶色谱法GPC[b]分析原理:[/b]样品通过凝胶柱时,按分子的流体力学体积不同进行分离,大分子先流出[b]谱图的表示方法:[/b]柱后流出物浓度随保留值的变化[b]提供的信息:[/b]高聚物的平均分子量及其分布根据所用凝胶的性质,可以分为使用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)。
各位版友大家好,本人想用PSS(聚苯乙烯磺酸钠)标准品77000、17000、6800、4300Da 做标线,流动相用的是磷酸盐缓冲溶液(里面加了氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾),凝胶色谱柱型号为PL1149-6820 aquagel-OH 20 8μm 300×7.5mm Agilent,工作站是安捷伦12600,进样量20μL,流速1ml/min,柱箱温度25℃,标准品用的是一级水溶解(有文献说是用流动相更好),首先是做的是混合标准样,混合样峰不能很好分开如第一个图所示,接着是单个标样,我把四个重叠起来了,单个样出峰很好如图二。以前采用不同流速,柱箱温度都没有分开过,流动相也改变过,一直没分开,所以恳请大家给我点建议,谢谢![img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712282058_9184_3249142_3.jpeg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712282058_545_3249142_3.jpeg[/img]
对凝胶色谱技术,接触不多,想咨询大家它的工作流程是什么呢?
SEC/GPC凝胶渗透色谱分析的工作原理[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=91284]SEC/GPC凝胶渗透色谱分析的工作原理[/url]
水相凝胶色谱与普通凝胶色谱的区别?请高手多多指教,有相关资料更好,谢谢!
各位朋友们,我的课题是分离检测陈酿红酒中的聚合色素。在色素检测的领域,常规的是HPLC(MS),采用C18反相色谱。但只是对单体花色苷和寡聚花色苷有好的效果。聚合度提升(花色苷,黄酮类物质的互相聚合物)导致色谱分离效果下降,显示出的是一大块不能分开的大峰(hump)。这是现在问题的瓶颈所在。因为聚合色素的分子量一般都在1000以上,所以想试一试凝胶色谱的分子筛效应筛选,但是我之前没有做过分子筛,对之很不熟悉。所以想请各路朋友探讨一下方法的可行性。下面是我针对凝胶色谱的几个疑问,希望有经验的朋友帮我解答:、1,凝胶色谱是一个配备有特殊检测器和别的装置的大型仪器吗?还是只是色谱柱是凝胶色谱柱?如果将HPLC(MS)的色谱柱更换为凝胶色谱柱,是不是就达到了凝胶分离的效果,操作上可不可行?2,因为聚合色素的结构复杂,同分异构体也会很多,我自认将其每个分离纯化出来都是不可能的工作。而且,因为凝胶色谱的分离只能达到将不同水力半径的物质分离的目的所以,其最终的分离效果如何仍然未知,望有经验的朋友指点一二,不胜感激!3,我认为,聚合色素分离的关键在于色谱柱,只有符合聚合色素物理化学特性的色谱柱才能解决分析检测的能力。希望有详细介绍和讲解色谱柱技术的朋友不吝分享一下资源,小弟QQ邮箱为543351984@qq.com,万分感激!
[color=#444444]目前正在实验室做课题需要用到凝胶色谱,请教大家,测酪蛋白溶液(里面还含有一些乳化剂)溶剂是纯水,凝胶色谱要用得流动相和柱子分别是什么?[/color]
凝胶色谱的资料又积攒了不少,接力前辈,汇总一下,方便查找。要注意帖子的回复,里面也有宝藏哦~~【原创】凝胶色谱的应用 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061228/685978/【资料】GPC分析的聚合物可以选择的良溶剂方案 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101214/2999859/【资料】最近凝胶色谱相关的文献资料http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100401/2476606/ 【资料】GPC高级课程培训-柱选择 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110519/3315288/【资料】《凝胶渗透色谱操作手册》北京大学化学院 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101228/3045365/【分享】凝胶色谱的讲义 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101106/2908677/【资料】凝胶色谱柱操作 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101105/2907744/【分享】凝胶色谱仪标准操作规程(SOP) http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101012/2855479/【原创】多功能凝胶色谱仪(GPC)测聚合物分子量分布 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100510/2546330/【资料】凝胶色谱法的基本理论 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100406/2483413/下面是前辈整理的资料:2010.4【资料】凝胶色谱 和 超临界流体色谱 资料汇总http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100411/2493256/2006年【公告】凝胶色谱版的知识点汇总! http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061215/669019/
凝胶色谱仪的原理?是基于分子筛原理,利用不同分子量的物质在凝胶孔隙中的渗透速度不同来实现分离。具体来说,当样品进入凝胶色谱柱时,较大的分子(体积大于凝胶孔隙)会被排除在粒子的小孔之外,只能从粒子间的间隙通过,速率较快;而较小的分子可以进入粒子中的小孔,通过的速率要慢得多;中等体积的分子可以渗入较大的孔隙中,但受到较小孔隙的排阻,介乎上述两种情况之间。 凝胶色谱仪的工作机制可以进一步解释为:样品通过凝胶柱时,按分子的流体力学体积不同进行分离,大分子先流出,而小分子则会在色谱柱中滞留更长时间,最后流出。这种分离机制使得凝胶色谱仪能够根据分子量差异对各组分进行分离。 此外,凝胶色谱仪的检测系统包括通用型检测器、示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器等多种检测器,适用于所有高聚物和有机化合物的检测。 凝胶色谱仪的应用包括水性和油性高分子聚合物的分子量大小及分子量分布检测,以及糖类、醇、脂肪酸、脂类的定性定量分析。
耗材配件栏目,想在液相色谱柱的分类里,添加凝胶色谱柱,现做以下调查,请大家多多支持,多多关注。耗材配件:http://www.instrument.com.cn/Consumables/ 液相色谱柱:http://www.instrument.com.cn/Consumables/P1903.htm1、是否希望增加凝胶色谱柱的分类,是否方便查找?2 、对液相色谱柱的分类,有何建议?3、市面的凝胶色谱柱,现在都有哪些厂家?4、各家都有什么主推的特点?5、。。。。。。
您好,我们用的凝胶渗透色谱用的是视差折光检测器,同时还有一个参比液,我想请教以下该检测器的工作原理以及参比液的作用是什么呢,谢谢啦
最近想采购一些设备,有同事提到了凝胶色谱,我们是做食品和酒类检测,不知道这个凝胶色谱对我们的检测会有那些项目的应用呀?还有就是食品中塑化剂的检测,有个标准中提到一个前处理设备是凝胶色谱,不知道这两个是不是一个概念呀?我不懂,希望给我指教啊!谢谢
最近有个实验要用到凝胶色谱仪净化样品,可我公司没有,对这个也不太懂。请问有没有其他可替代的办法?能否买方法中要求的凝胶色谱柱,接到液相上分离?样品基质中有大量高分子脂类,试过SPE小柱,效果不佳,干扰太大。或者有没有类似SPE小柱那样的凝胶色谱小柱,可以起到分离大分子物质的东西?
凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。[B]凝胶色谱-分类[/B]根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物,凝胶色谱又可分为凝胶过滤色谱(GFC)和凝胶渗透色谱(GPC)。凝胶过滤色谱一般用于分离水溶性的大分子, [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903190825_139314_1608025_3.jpg[/img]凝胶过滤色谱柱 如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等) 相对分子质量分布分析及分离,常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布,同时根据所用凝胶填料不同,可分离油溶性和水溶性物质,分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来,凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质,不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。[B]凝胶色谱-分子筛效益[/B]一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动:垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围,有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的,就会全部被排阻在凝胶颗粒之外,这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同,也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙,即使它们的大小有差别,也不会有好的分离效果。因此,一定的分子筛有它一定的使用范围。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903190826_139315_1608025_3.jpg[/img]凝胶色谱法原理 在凝胶色谱中会有三种情况,一是分子很小,能进入分子筛全部的内孔隙;二是分子很大,完全不能进入凝胶的任何内孔隙;三是分子大小适中,能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开,但每种凝胶分离范围之外的分子,在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同,但同属于凝胶分离范围内各种分子,在凝胶床中的分布情况是不同的:分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内,而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内,这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短,分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床,这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外,凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小排队,凝胶表现分子筛效应。
凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography、GPC)) http://chemlab.gzhu.edu.cn/gzhugfz/fenxishouduan/4.jpg 1964年,由J.C.Moore首先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离和鉴定,而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。(聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开) 1.基本原理1.1.分离原理:让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱,柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙(较大)和粒子内的通孔(较小)。当聚合物溶液流经色谱柱时,较大的分子被排除在粒子的小孔之外,只能从粒子间的间隙通过,速率较快;而较小的分子可以进入粒子中的小孔,通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱,分子根据相对分子质量被分开,相对分子质量大的在前面(即淋洗时间短),相对分子质量小的在后面(即淋洗时间长)。自试样进柱到被淋洗出来,所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后,溶质的淋出体积与其分子量有关,分子量愈大,其淋出体积愈小。(1) 体积排除 (2) 限性扩散 (3) 流动分离 1.2.校正原理:用已知相对分子质量的单分散标准聚合物预先做一条淋洗体积或淋洗时间和相对分子质量对应关系曲线,该线称为“校正曲线”。聚合物中几乎找不到单分散的标准样,一般用窄分布的试样代替。在相同的测试条件下,做一系列的GPC标准谱图,对应不同相对分子质量样品的保留时间,以lgM对t作图,所得曲线即为“校正曲线”。通过校正曲线,就能从GPC谱图上计算各种所需相对分子质量与相对分子质量分布的信息。聚合物中能够制得标准样的聚合物种类并不多,没有标准样的聚合物就不可能有校正曲线,使用GPC方法也不可能得到聚合物的相对分子质量和相对分子质量分布。对于这种可以使用普适校正原理。1.2.1.普适校正原理:由于GPC对聚合物的分离是基于分子流体力学体积,即对于相同的分子流体力学体积,在同一个保留时间流出,即流体力学体积相同。两种柔性链的流体力学体积相同: 1M1=2M2k1M1α1+1=k1M2α2+1 两边取对数:lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2即如果已知标准样和被测高聚物的k、α值,就可以由已知相对分子质量的标准样品M1标定待测样品的相对分子质量M2。 2.实验部分直接法:在测定淋出液浓度的同时测定其粘度或光散射,从而求出其分子量。间接法:用一组分子量不等的、单分散的试样为标准样品,分别测定它们的淋出体积和分子量,则可确定二者之间的关系。2.1.仪器:GPC仪的组成:泵系统、(自动)进样系统、凝胶色谱柱、检测系统和数据采集与处理系统。1.1.泵系统:包括一个溶剂储存器、一套脱气装置和一个高压泵。它的工作是使流动相(溶剂)以恒定的流速流入色谱柱。泵的工作状况好坏直接影响着最终数据的准确性。越是精密的仪器,要求泵的工作状态越稳定。要求流量的误差应该低于0.01mL/min。 2.1.2.色谱柱:GPC仪分离的核心部件。是在一根不锈钢空心细管中加入孔径不同的微粒作为填料。每根色谱柱都有一定的相对分子质量分离范围和渗透极限,色谱柱有使用的上限和下限。色谱柱的使用上限是当聚合物最小的分子的尺寸比色谱柱中最大的凝胶的尺寸还大,这时高聚物进入不了凝胶颗粒孔径,全部从凝胶颗粒外部流过,这就没有达到分离不同相对分子质量的高聚物的目的。而且还有堵塞凝胶孔的可能,影响色谱柱的分离效果,降低其使用寿命。色谱柱的使用下限就是当聚合物中最大尺寸的分子链比凝胶孔的最小孔径还要小,这时也没有达到分离不同相对分子质量的目的。所以在使用凝胶色谱仪测定相对分子质量时,必须首先选择好与聚合物相对分子质量范围相配的色谱柱。2.1.3.填料(根据所使用的溶剂选择填料,对填料最基本的要求是填料不能被溶剂溶解):交联聚苯乙烯凝胶(适用于有机溶剂,可耐高温)、交联聚乙酸乙烯酯凝胶(最高100℃,适用于乙醇、丙酮一类极性溶剂)多孔硅球(适用于水和有机溶剂)、多孔玻璃、多孔氧化铝(适用于水和有机溶剂) 2.1.4.柱子:玻璃、不锈钢2.1.5.检测系统:通用型检测器:适用于所有高聚物和有机化合物的检测。有示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器。2.1.6.示差折光仪检测器:溶剂的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的区别。2.1.7.紫外吸收检测器:在溶质的特征吸波长附近溶剂没有强烈的吸收。2.1.8.选择型检测器:适用于对该检测器有特殊响应的高聚物和有机化合物。有紫外、红外、荧光、电导检测器等。2.2.操作:2.2.1.溶剂的选择: 能溶解多种聚合物;不能腐蚀仪器部件;与检测器相匹配。2.2.2.把激光光散射与凝胶色谱仪联用,在得到浓度谱图的同时,还可得到散射光强对淋出体积的谱图,从而计算出分子量分布曲线和整个试样的各种平均分子量2.2.3.激光光散射实验中必须对样品严格除尘,溶液中的灰尘会产生强烈的光散射,严重干扰聚合物溶液光散射的测量。溶液除尘是光散射成败的关键。首先是溶剂除尘,配置测试样品的溶剂应进行精馏,并经过0.2μm超滤膜过滤后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超滤膜过滤。另外,测试中所用的器械,如:注射器等,使用前要用洗液浸泡,清水强力冲洗
本单位有一台GPC,目前在做农残的净化方法研究吗,但是我们买的美国J2的凝胶色谱净化系统,净化效果比较差,询问工程师说,我们的凝胶柱配备的是快速柱,净化效果比较差,因此想询问各位高手,推荐几款凝胶色谱柱给我们,我们是用来净化辣椒酱,酱油之类的复杂基体。谢谢
[B][center]凝胶渗透色谱(GPC/SEC)技术(一) [/center][/B] 一、 凝胶渗透色谱的概述 1. 凝胶渗透色谱的简单回顾凝胶渗透色谱[GPC(Gel Permeation Chromatography)][也称作体积排斥色谱(Size Exclusion Chromatography)]是三十年前才发展起来的一种新型液相色谱,是色谱中较新的分离技术之一。利用多孔性物质按分子体积大小进行分离,在六十年前就已有报道。Mc Bain用人造沸石成功地分离了气体和低分子量的有机化合物,1953年Wheaton和Bauman用离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质。1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。而对于有机溶剂体系的凝胶渗透色谱来说,首先需要解决的是制备出适用于有机溶剂的凝胶。二十世纪60年代J.C.Moore在总结了前人经验的基础上,结合大网状结构离子交换树脂制备的经验,将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料,同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪,制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪,从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。2. 凝胶渗透色谱的应用三十多年来,凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现(目前其理论塔板数已超过10000/米)以及计算机的普及,凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来,随着各种高分子材料的问世,人们对高分子科学的不断探索,高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要,成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如:常见的聚苯乙烯塑料制品,其分子量为十几万,如果聚苯乙烯的分子量低至几千,就不能成型;相反,当分子量大到几百万,甚至几千万,它又难以加工,失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。另外,除了快速测定分子量及其分布以外,凝胶渗透色谱还广泛用于研究高聚物的支化度,共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器(如:LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等),凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。凝胶渗透色谱作为一门新兴的科学,随着各种新型检测器的出现(如UV、FT-IR、LS、Viscometer等),它的应用范围也逐步从生物化学、高分子化学、无机化学等向其它领域渗透,成为化学领域内必不可少的分析手段。
[color=#444444]我们现在在分析水溶性样品的凝胶色谱柱(分析聚乙二醇类样品),用得是shodex的为型号OHpak SB-802.5和OHpak SB-803 HQ的凝胶色谱在,我们想自制相当的液相柱,请问可以自制吗?填料和空柱哪能买到呐?[/color]
[b]凝胶色谱的应用[/b]:1、[b]分子量的测定[/b]根据凝胶色谱的原理,样品物质在凝胶色谱柱中的洗脱性质与该物质的分子大小有关。因此选用不同的凝胶色谱柱后,能方便地测定物质的分子量。用此法测定分子量时,可以在各种PH值、离子强度和温度条件下进行。所测定的物质可以是天然状态,也可以是变性后的。实际应用中,可先选用一系列已知分子量的标准样品在同一色谱条件下进行色谱分离分析,并以保留体积(或保留时间)对分子量的对数作图,在一定分子量范围内得到一直线(标准曲线),而后根据待测定物在同一条件下的保留体积(或保留时间),从标准曲线上查得/计算出其分子量。目前用本法测定分子量的应用范围非常广泛。[u]高分子物质的分子量及其分布的测定[/u]:特别是近年来,随着各种高分子材料的问世,人们对高分子科学的不断探索,高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要,成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如:常见的聚苯乙烯塑料制品,其分子量为十几万,如果聚苯乙烯的分子量低至几千,就不能成型;相反,当分子量大到几百万,甚至几千万,它又难以加工,失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。同样,除了快速测定分子量及其分布以外,凝胶渗透色谱还广泛被用于研究高聚物的支化度,共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器(如:LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等),凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。[u]蛋白质分子量的测定[/u]:现代蛋白质药物的研究中,凝胶色谱法测定分子量是蛋白质分子量的快速测定方法之一。一般选用标准分子量蛋白质(如:铁蛋白、醛缩酶、牛血清白蛋白、卵清蛋白、胃蛋白酶、核糖核酸酶,这就是一组分子量从300KD到14KD的标准品)。
如题,大家的凝胶色谱有实时显示流量吗?假设设定1.0ml/min,误差相差多少?我觉得流量对标准曲线的建立有很大关系。我的凝胶色谱没有显示实际流量是多少,我发现有时会流量变很小,这是怎么回事?单向阀有问题?
凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术,是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要[url=http://baike.baidu.com/view/435064.htm]有机溶剂[/url],对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称[url=http://baike.baidu.com/view/1395520.htm]分子排阻色谱法[/url]。凝胶色谱法主要用于[url=http://baike.baidu.com/view/328669.htm]高聚物[/url]的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物,又可分为凝胶过滤色谱(GFC)和[url=http://baike.baidu.com/view/1966792.htm]凝胶渗透色谱[/url](GPC)。 GFC一般用于分离水溶性的大分子,如[url=http://baike.baidu.com/view/728282.htm]多糖类[/url]化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有 机溶剂中可溶的高聚物 ([url=http://baike.baidu.com/view/237319.htm]聚苯乙烯[/url]、聚氯已烯、[url=http://baike.baidu.com/view/11277.htm]聚乙烯[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/591731.htm]聚甲基丙烯酸甲酯[/url]等)相对分子质量分布分析及分离,常用的[url=http://baike.baidu.com/view/65842.htm]凝胶[/url]为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布,同时根据所用凝胶填料不同,可分离油溶性和水溶 性物质,分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来,凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质,不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被[url=http://baike.baidu.com/view/24503.htm]生物化学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/2461.htm]分子生物学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/264316.htm]生物工程学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/2011973.htm]分子免疫学[/url]以及[url=http://baike.baidu.com/view/7490.htm]医学[/url]等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。
5009.19第一法做有机氯净化是用凝胶色谱净化,我们没有全自动凝胶渗透色谱系统,选择手动的话问题就来了,Bio-Beads S-X3聚苯乙烯凝胶100g大概三千块钱,按标准要求装一个要多少克凝胶?装的凝胶色谱柱过完一个样还可以继续过另外的样品吗?自己装的凝胶色谱柱可以用多久?麻烦做过的前辈给点指导····
哪位高手能告诉我装凝胶色谱柱的匀浆液用什么好吗?
[align=center][b]我与凝胶色谱的故事[/b][/align][align=right][/align][b]阴差阳错,走入色谱仪器[/b]2005年2月的一天,春节刚过。我便乘坐T290次火车只身前往首都北京------我谋生的第一份工作地。记得到达北京西站之后,当时还在读研的同学张*亮接待了我。在大运村的学生宿舍度过了一个不眠之夜,叙旧有之,最终的是走上工作的岗位的激动之情难以自控。迈入社会,以后的路怎么走?我是被学校的教导员推荐到北京这家公司的,公司虽然不是很大,是一家中外合资的高新科技企业做HPLC液相色谱仪……我所学的是教育专业,本来的志向是教书育人……懵懵懂懂的就走上了工作岗位。我的第一个手机,还是用我同学的学生证作为担保买了电卡,从此有了属于我的手机号码:15881963923。怎么进的公司,怎么做的自我介绍,怎么办的入职手续……这些我都忘记了。第二天我便在海淀区的某栋大厦上开始了第一份工作。鉴于工作需要,了解公司的工作流程,首先,在每个部门轮岗。期间,在市场部做过英文资料的翻译,在研发部,做原理的认识,学习;在生产部做仪器设备的组装调试。在忙碌了20多天之后,我拿到了人生的第一份工资:820块。[b]初识HPLC液相色谱,GPC凝胶色谱[/b]定岗之后,我成了一名所谓的工程师。其实主要的工作就是组装和测试色谱泵的工作。一开始很不适应,觉得大材小用了。我是抱着教书树人的抱负走出学校,结果却做了一个流水工人……思想波动很大。最后,我决定还是静下心来做事情。年轻人有理想是好的,但是重要的还是用热诚和冲劲去认识和了解你的职业和行业。慢慢地,我认识到什么是HPLC,高效液相的产生以及商业化其实也不过是短短五、六十年的光景,是很有发展前途的行业。[align=center][img=,690,522]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808270945430228_8391_1608025_3.png!w690x522.jpg[/img]心情图[/align][align=left]在两年时间里,了解熟悉了每个组成部分的原理,结构以及仪器的应用发展。逐渐从生产线走向了客户现场,在第一现场往往会遇到意想不到的问题,需要随机应变。[b]蜜蜂八种黄酮检测试验[/b]2007年左右在蜂蜜出口中,加入了八种黄酮含量的测试。当时,日本的标准是全球最高的。中国企业都需要购买进口设备,来满足分析的需求。由于市场的需求,我们开始接触到这个行业。在新郑附近的产蜂蜜基地,我们和当地农户。开始摸索试验。由于实验室条件很差,时间和紧张。我和另外一名同事披着大裳,在严寒的冬天坚持做了4天3夜的试验。终于在凌晨5点左右做出了重复结果。我们小心的呵护着柱温箱,生怕温度变化影响洗脱梯度,我们试过很多种色谱柱,寻找了最佳分离效果;我们不停的变换着流动相比例来寻求最佳效果;我们不辞辛苦去北京林业研究所追寻实验条件。但是,一个行业标准需要付出很大努力……最终,试验结果终于出来了。满心欢喜!就像在学校实验室做出重大发现一样的高兴。虽然,我没有真正意义上的试验导师。但是,最终的结果并不好。由于种种原因,用户最终还是选择了某日本品牌,匹配当时的行业标准HB。[/align][align=center][img=,690,250]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271109336762_3661_1608025_3.jpg!w690x250.jpg[/img] 北京林业研究所 八种黄铜之4,图片来自网络[b]分析与制备中的GPC/SEC凝胶色谱[/b]公司的一楼试验车间,同事们在紧张的等待试验结果。这是某天然提纯项目在我们新的DAC设备上的最后测试。结果试验成功了。大家欢欣鼓舞,公司在天然多糖和蛋白提纯设备上迈出了一大步,订单纷纷踏来。对于,我们来说,加班也不可避免。其中,我比较感兴趣的是在每一步除试,放大,中试,再放大,分离制备产品,收集前后,都要测试纯度。这就要用到凝胶色谱。这也是我第一次接触到这个名词。从HPLC到PHPLC再到GPC,这是一个顺其自然的过程。我们现有的设备也很简单。自己搭了一台泵,一个手动7725i进样阀,一个简陋的柱温箱,一个多糖分离的色谱柱,和一个简单的折光分光检测器。软件是在某软件的基础上改进的。有了这些,简简单单的组成了一套设备。我们在这台设备上经历了很多,有成功也有失败……[/align][align=center][img=,449,605]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271056049009_2558_1608025_3.jpg!w449x605.jpg[/img][/align][align=left][b]驰骋在凝胶色谱路上[/b]1,分离净化凝胶色谱随着时间的推移,我从最传统的GPC色谱接触,只能做简单的相对分子量QC开始。慢慢地读了一些关于色谱以及凝胶色谱的一些书籍。这些特别感谢化学工业出版社出版的一系列色谱技术丛书,一共13本。我能接触到的只有4-5本。不过就是这些让我学到了很多。在08年有一次机会。我专门开始做GPC维修工作。对凝胶色谱有了进一步认识和提高。我主要负责两种设备GPC设备。一种是分离净化,应用于样品的前处理。样品前处理是一件非常重要,同时也非常复杂繁琐的一件事情。处理不好往往对后续试验造成影响,要么对分析仪器造成影响,要么对试验结果产生影响。甚至产生假的数据,假阳性或者假阴性。GPC尤其对痕量微量检测有很大帮助,在农残方面比较有名的秦皇岛商检单位就用到了这一分离净化技术。做维修应用等技术工作往往都是枯燥的无味的,来不得半点虚假。如果做不到位,仪器不会工作,数据不会撒谎。这些要求我一定要细心和谨慎判断问题以及解决问题。GPC分离净化往往涉及到回收率问题。而回收率又和分离色谱柱,进样系统,回收系统有很大关系。记得有一个用户,因为氮气量不足导致了回收浓缩设备问题,也破费了一些周折,才得以解决:原因是连接氮气的管路和氮气调节阀之间微漏造成了浓缩体积增大,回收时间增加温度过高而影响了回收率。在08-09年的三聚氰胺测试中,分离GPC扮演了非常重要的角色。面粉中的13种添加物之一测试 馏分收集及浓缩装置2,分析测试凝胶色谱另一种就是我们更加熟悉的GPC/SEC体积排阻色谱。它是化学物理材料合成以及天然高分子生物分子结构研究的利器。目前商品化的主要有三种类型。第一种是我前面提到的传统校正分子量,结构简单。但是越来越有数据不足,信息少的缺点;第二种是带有在线黏度检测器的凝胶色谱,具有较好的分析机构构型的功能;第三种就是在前面两种检测器基础上添加了光散射检测器。在原理上解决了分子量准确性的问题,而且操作越来越方便。光散射的加入,使色谱有了飞跃发展。光散射的种类也非常多。有信噪比准确性能高的小角度光散射,也有应用于药物研究的多角度光散射。得到的有用信息更多更详实……[/align][align=left][img=,690,245]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271108346983_8221_1608025_3.jpg!w690x245.jpg[/img]市场上的GPC/SEC产品,图片来源于网络多检测器联用越来越多的被应用到实验室中,对于我来说需要了解的东西也很多。目前,正在做的是HPLC/GPC/SEC与DLS联用的试验连接。[b]努力前行,做一名合格的小学生[/b]我与凝胶色谱相识相处也有十几年的光景。这些年来,我越来越发现自己的只是储备不够,需要加强学习。在色谱行业从业者中,我不过是一名小学生,是GPC/SEC激励着我,给我学习的动力,敢于学习新知识畅游于书的海洋;给我游历祖国的机会,每次出差在完成工作之余,我都在感慨中华地大物博;给我结实新朋友的契机,工作上遇到的每一位都是我的老师……是它陪伴我,虽然仪器不会说话,它却默默地陪我度过了最美的青春十年。[/align][align=center][img=,690,401]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271110435272_9524_1608025_3.jpg!w690x401.jpg[/img][/align][align=center]祖国大好河山[/align]说到色谱感谢崔*臣,沈*刚两位老师把我领进门,说道凝胶色谱感谢王*、顾*粮两位前辈的指导,说道光散射感谢*辉博士的指导学习……还有我最好的行业伙伴们庞*辉,忘不了学习英语时的青涩,忘不了关于结构讨论的激烈,忘不了试验成功的喜悦……最后感谢仪器信息网有这么一次活动,可以让我静下心来,回顾过去的自己。我只不过是最普通的”三无人员”的一个,努力做一名合格的小学生,道阻且长,不畏风雨;道阻且跻,一往直前;道阻且右,淡然处之……
[color=#ff483f][size=5]凝胶色谱相关理论 征集1.什么是凝胶色谱?2.什么情况下用凝胶色谱?3.凝胶色谱和一般的HPLC有什么区别?4.凝胶色谱的优点及缺点?5.你用什么牌子的凝胶色谱?6.你所在实验室有几台凝胶色谱,一般HPLC又有几台?[color=#6eb5ff]请跟帖,我会给大家加分![/color][/size][/color]