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[align=center][font='times new roman'][size=18px]淫羊藿[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]淫羊藿苷[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]测定[/size][/font][/align][font='tahoma'][size=14px]小记:[/size][/font][font='tahoma'][size=14px] 2015[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]年版和[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]2020[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]版药典,[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]淫羊藿[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]药材中[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]的[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]指标成分[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]测定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]有了变化,[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]2015[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]版药典测定淫羊藿苷,[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]2020[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]版药典测定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]朝藿定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]A[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]、朝藿定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]B[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]、朝藿定[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]C[/size][/font][font='tahoma'][size=14px]和淫羊藿苷的总量[/size][/font][font='tahoma'][size=14px][color=#000000]。[/color][/size][/font][align=center][img=,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301615124194_7779_1858223_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']材料与试剂[/font][font='times new roman']乙腈(色谱级[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']上海安谱[/font][font='times new roman'])、[/font][font='times new roman']乙醇[/font][font='times new roman'](分析纯[/font][font='times new roman'],北京化工厂[/font][font='times new roman'])、[/font][font='times new roman']淫羊藿苷[/font][font='times new roman']标准品[/font][font='times new roman'](购自中检院)、[/font][font='times new roman']淫羊藿[/font][font='times new roman']药材[/font][font='times new roman']样品(送检样品)。[/font][font='times new roman']2 [/font][font='times new roman']色谱条件[/font][font='times new roman']LC-20AT[/font][font='times new roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url](日本岛津),色谱柱:[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Eclipse XDB [/font][font='times new roman']C18(250mm*4.6μm*5μm)[/font][font='times new roman'](安捷伦),流动相:以乙腈[/font][font='times new roman']-[/font][font='times new roman']水[/font][font='times new roman']梯度[/font][font='times new roman']洗脱[/font][font='times new roman']([/font][font='times new roman']10:90[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman'];柱温[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']0[/font][font='times new roman'] [/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']检测波长为[/font][font='times new roman']270[/font][font='times new roman']nm[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']溶液制备[/font][font='times new roman'](按照中国药典[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']020[/font][font='times new roman']年版一部[/font][font='times new roman']淫羊藿项下[/font][font='times new roman']测定)[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']对照品溶液的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每[/font][font='times new roman']1m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman']含[/font][font='times new roman']40[/font][font='times new roman']μ[/font][font='times new roman']g[/font][font='times new roman']的溶液,即得。[/font][align=center][img=,553,117]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301616274223_9282_1858223_3.jpg!w553x117.jpg[/img][/align][align=center]淫羊藿苷标准品色谱图[font='times new roman'] [/font][/align][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']样品[/font][font='times new roman']溶液的制备[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']取本品叶片,粉碎过三号筛,取约[/font][font='times new roman']0.2g[/font][font='times new roman'],精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇[/font][font='times new roman']20m[/font][font='times new roman']L[/font][font='times new roman'],称定重量,超声处理(功率[/font][font='times new roman']400W[/font][font='times new roman'],频率[/font][font='times new roman']50kHz[/font][font='times new roman'])[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']小时,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。[/font][font='times new roman']对照品溶液的制备[/font][font='times new roman'].[/font][align=center][img=,564,127]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301616471936_1416_1858223_3.jpg!w564x127.jpg[/img][/align][font='times new roman'][/font][align=center][font='times new roman']淫羊藿[/font][font='times new roman']样品中[/font][font='times new roman']淫羊藿苷[/font][font='times new roman']色谱图[/font][/align][font='times new roman']结论:客户送检样品[/font][font='times new roman']只要求检测淫羊藿苷,淫羊藿[/font][font='times new roman']中[/font][font='times new roman']淫羊藿苷[/font][font='times new roman']含量为[/font][font='times new roman']0.[/font][font='times new roman']61[/font][font='times new roman']%[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']注:[/font][font='times new roman']①[/font][font='times new roman']淫羊藿为叶子类药材,提取溶液中杂质较多,梯度洗脱让淫羊藿苷与其他杂质有效分离,在按照标准梯度洗脱完,用大比例有机相进行冲洗色谱柱,以免影响下一针样品分离。[/font]
性状及微性状鉴别 对同一品种不同产地的淫羊藿干燥叶分别进行3次取样并观察。将样品表面清理干净,选取所需部位备用,在叶片基部徒手制作主脉的横剖面。将叶片与主脉横剖面分别放置于拍摄台上,使用单反相机和微距镜头,并结合景深扩展技术,收集实验样品同一位置、不同景深影像数据(每个位置30~50张图片),再使用Helicon Focus Pro7.7.0专业版聚焦堆叠软件得到高清全息彩色图像数据。 显微鉴别 表皮制片 取完整叶片参照2020年版《中国药典》四部通则2001显微鉴别法,采取定位取材、徒手切片法获取观察切片,于显微镜下观察,并用相机收集图像数据。 横切面制片 分别选取淫羊藿叶片的上、中、下3部分,用剪刀分割成小块,于酒精乙酸福尔马林混合液(FAA)固定液中固定48h后漂洗,体积分数1%番红(体积分数50%乙醇配制)染色,乙醇和二甲苯进行脱水透化,经二甲苯溶液透明后浸蜡包埋;蜡块用纯水浸泡后切片,郝氏粘贴剂贴片,50℃下保存2d,用二甲苯进行脱蜡处理;体积分数0.5%固绿染液(体积分数95%乙醇配制)染色,中性树胶封片。分别置于显微镜下,采用正常光明场和偏振光暗场对比观察法,并收集图像数据。 粉末制片 样品粉碎过筛,参照2020年版《中国药典》四部通则2001显微鉴别法制片,于显微镜下观察,并收集显微图像数据。 样品测量 将样品置于显微物镜下,用相机收集清晰的完整叶片图像,利用ImageJ的角度测量工具测量叶边缘刺的角度;选取叶上表皮细胞制片,用目镜测微尺测量叶上表皮细胞波状深度占比(上表皮细胞边缘两波峰中间点至波谷的距离,除以两波峰中间点经过波谷延伸至另一边细胞边缘的距离);选取有乳突的淫羊藿叶下表皮制片,用相机收集清晰的显微图片,利用Adobe Photoshop截取像素大小相同的区域,将图片导入ImageJ,调整阈值,去除背景后,利用Analyze Particles插件自动分析,得到乳突密度(淫羊藿叶下表皮单位面积内乳突面积/淫羊藿叶下表皮单位面积×100%);以上数据,不同品种均随机选取测量20次。
淫羊藿为小檗科植物,主要功效为补肾阳,强筋骨,祛风湿。因此,淫羊藿甙在补肾壮阳的保健食品中常是主要的功能因子。关于淫羊藿甙的测定,保健食品方面尚无检验方法,药典对其甙类的检测是薄层色谱法,需铺板,试样萃取,减压蒸馏浓缩,最后用分光光度法测定,既繁琐误差又大。所以本文利用高效液相色谱法对保健食品中淫羊藿甙的测定进行了研究。1 材料与方法1.1 仪器: Shimadzu LC-6A高效液相色谱系统;SPD-6AV紫外检测器;C-R2A数据处理系统;C18柱(4.6 mm×200 nm, 5u),CSF-3A超声波发生器。1.2 试剂: 标准溶液:精密称取淫羊藿甙标准品5.0 mg,用甲醇(优级纯)溶解并定容为10.0 mL,此溶液浓度为0.5 mg/mL。该溶液用甲醇稀释5倍,即为0.1 mg/mL的标准使用液。2 仪器条件 流动相:甲醇+水(55+45);流速0.8 mL/min;检测波长270 nm,0.02AUFS。柱温40℃,流动相过0.45 nm滤膜。3 测定方法3.1 试样处理[6]:取粉碎的固体试样4.0 g,加入70%乙醇40 mL,超声30 min后过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣,收集滤液,定容至50 mL,为试样处理液。3.2 测定:取上述试样处理液1 mL,用70%乙醇稀释至5 mL,过0.45μm滤膜,进样5μL,在上述仪器条件下分析,测定峰面积。 取标准使用液5μL,在同一色谱条件下分析,以相对保留时间定性,峰面积定量。3.3 计算x=(h1×C×V×5×100)/(h2×m) x试样中淫羊藿甙的含量,mg/100 g;h1试样峰高或峰面积;C标准溶液浓度,mg/mL;V试样定容体积,mL;h2标准溶液峰高或峰面积;m试样量,g。