推荐厂家
暂无
暂无
面包制作中添加了酵母,出厂检验还是以7099的微生物标准执行或不执行,酵母属不属于7099中的未熟制的发酵配料,要是按7099执行,出厂检验菌落总数不合格,大概率就是酵母在熟制过程中未杀死了是不是
维权声明:本文为gl19860312原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。 本实验室主要工作就是:微生物发酵与代谢调控 、蛋白的分离纯化 、生物材料的研发与生产( 化妆品 、面膜、人工血管 、人工骨................)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012061858_264950_2019107_3.jpg啤酒酵母细胞自溶技术破壁研究摘要:研究了PH、温度、食盐浓度三个因素对啤酒酵母细胞破壁的影响,确定出最佳的自溶法破壁条件 。进而为分离啤酒废酵母中的有效活性成分奠定了基础。关键词:啤酒酵母;破壁;自溶The Research of Autolysis on the Beer Yeast Cells wallAbstract:This paper researched the condition of autolysis on the waste yeast cells wall with three factors (pH 、Temperature 、Salt density) and determined the best condition based on autolysis. And build basis for separating the activity forms from beer waste yeasts.Key words: The beer yeast; Breaking Cells wall; Autolysis引言啤酒酵母(S.csrsviside)属于真菌门酵母属,多数为单细胞微生物,细胞呈圆形或卵圆形,革兰氏染色呈阳性G+。啤酒酵母细胞是由细胞壁、细胞膜、液泡、颗粒和线粒体等部分组成,细胞年幼的时候细胞壁很薄,所以不明显;细胞年老时,细胞壁较厚。啤酒酵母细胞内不但含有丰富的蛋白质、维生素、葡聚糖及甘露聚糖等营养及保健成分,可作为食用单细胞蛋白,此外还含有辅酶I、细胞色素,卵磷脂、RNA,,这些物质或其降解产物及衍生物如氨基酸制剂和核苷酸及核酸制剂等在生物化学、医药及保健食品中最有重要的作用。由于啤酒废酵母价格便宜,因此可利用啤酒废酵母来提取、制备这些物质。啤酒废酵母(waste brewer's yeast)是啤酒生产的副产物,是指啤酒酿造后沉降的酵母泥,主要是由大量的弱细胞和死细胞组成。在啤酒生产过程中,每生产 100吨啤酒大约有1-1.5吨废酵母 (以干重计)产生。传统的处理方法,是弃置不用或作为饲料处理,直接排放到河流湖泊中,将造成环境污染,同时也是对财富的浪费;因其具有坚韧的细胞壁和特有的酵母臭,适口性差,不易消化和吸收,故烘干作为饲料用的经济效益不高。充分利用啤酒废酵母可以有效地减轻污染,实现资源的二次转化,也可产生巨大的经济效益,如开发酵母抽提物。 为了增加酵母抽提物产量国内外同行做出不同努力,开展了有些研究。目前关于啤酒酵母破壁的研究很多,大体可归纳为:化学破壁(酸解、碱解)、物理破壁(液体剪 切、固体剪切等)、生物破壁(酶解、自溶)。其中,化学破壁不仅会造成一些营养成分的破坏,而且为有效成分的提取增加困难;物理破壁虽然方法简单、成本低,能完好保存营养成分,但其破壁效果较差;生物破壁中的酶解法会增加提取成本,故均不能大规模广泛的应用。而采用自溶法进行细胞破壁是一种简便易行的操作过程,通过确定啤酒酵母细胞最适合的自溶条件,可以建立一套利用酵母细胞生产酵母抽提物的工艺和方法,旨在为啤酒酵母的综合利用寻求一种新的方法,为工业化生产提供理论基础和实践指导。1.4实验方法 工艺流程 啤酒废酵母(保藏)—— 活化、两次斜面培养—— 接种、平板划线——摇瓶培养——取对数期的酵母细胞——做稀释梯度——做影响因素(温度、食盐浓度、pH并固定时间60分钟)的实验-——做正交试验——镜检(血球计数法)——计算啤酒酵母细胞的破碎率——得到自溶的最佳工艺参数1.5啤酒废酵母自溶条件的确定酵母自溶的实质是酵母细胞内的蛋白质在自身蛋白酶的作用下,降解为游离的氨基酸,那么,一切影响酶促反应的因素均影响酵母细胞的自溶,如自溶温度、食盐浓度、pH值、自溶时间等。自溶法是以存在酶活性的新鲜活酵母为原料,利用酵母细胞本身的酶系,在一定条件下,将酵母体内的糖类物质、蛋白质和核酸分解为还原糖、氨基酸、肤类、核昔酸等小分子物质并从酵母细胞内抽提出来的一种方法。利用自溶法生产的酵母抽提物,蛋白质分解率高,游离氨基酸含量高,风味好,成本较低,但呈味核昔酸含量低.目前,欧美及我国所生产的酵母抽提物绝大部分都是采用这种方法。[font=仿宋_GB2
随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成,基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运作与蛋白质之间的互相作用密不可分,例如:DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、修饰和定位以及信息传导等重要的生物过程均涉及到蛋白质复合体的作用。能够发现和验证在生物体中相互作用的蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质是认识它们生物学功能的第一步。 酵母双杂交技术作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台,在近几年来得到了广泛运用。酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明,酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作,也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此,它在许多的研究领域中有着广泛的应用。本文就酵母双杂交的技术平台和应用加以介绍。 酵母双杂交系统的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子,例如酵母转录因子GAL4在结构上是组件式的(modular),往往由两个或两个以上结构上可以分开,功能上相互独立的结构域(domain)构成,其中有DNA结合功能域(DNA binding domain,DNA-BD)和转录激活结构域(activation domain,DNA-AD)。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能,但不能激活转录,只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时,才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性,并可激活上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)的下游启动子,使启动子下游基因得到转录。 根据这个特性,将编码DNA-BD的基因与已知蛋白质Bait protein的基因构建在同一个表达载体上,在酵母中表达两者的融合蛋白BD-Bait protein。将编码AD的基因和cDNA文库的基因构建在AD-LIBRARY表达载体上。同时将上述两种载体转化改造后的酵母,这种改造后的酵母细胞的基因组中既不能产生GAL4,又不能合成LEU、TRP、HIS、ADE,因此,酵母在缺乏这些营养的培养基上无法正常生长。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时,功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1,从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD-LIBRARY载体提取分离出来,从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。在酵母双杂交的基础上,又发展出了 酵母单杂交、酵母三杂交和酵母的反向杂交技术。它们被分别用于核酸和文库蛋白之间的研究、三种不同蛋白之间的互作研究和两种蛋白相互作用的结构和位点。 基于酵母双杂交技术平台的特点,它已经被应用在许多研究工作当中。 1、利用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能 酵母双杂交技术已经成为发现新基因的主要途径。当我们将已知基因作为诱饵,在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白,从筛选到的阳性酵母菌株中可以分离得到AD-LIBRARY载体,并从载体中进一步克隆得到随机插入的cDNA片段,并对该片段的编码序列在GENEBANK中进行比较,研究与已知基因在生物学功能上的联系。另外,也可作为研究已知基因的新功能或多个筛选到的已知基因之间功能相关的主要方法。例如:Engelender等人以神经末端蛋白alpha-synuclein 蛋白为诱饵蛋白,利用酵母双杂交CLONTECH MATCHMARKER SYSTEM 3为操作平台,从成人脑cDNA文库中发现了与alpha-synuclein相互作用的新蛋白Synphilin-1,并证明了Synphilin-1与alpha-synuclein 之间的相互作用与帕金森病的发病有密切相关。为了研究两个蛋白之间的相互作用的结合位点,找到影响或抑制两个蛋白相互作用的因素,Michael等人又利用酵母双杂交技术和基因修饰证明了alpha-synuclein的1-65个氨基酸残基和Synphilin-1的349-555个氨基酸残基之间是相互作用的位点。研究它们之间的相互作用位点有利于基因治疗药物的开发。 2、利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用 利用酶联免疫(ELISA)、免疫共沉淀(CO-IP)技术都是利用抗原和抗体间的免疫反应,可以研究抗原和抗体之间的相互作用,但是,它们都是基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用。而在细胞体内的抗原和抗体的聚积反应则可以通过酵母双杂交进行检测。例如:来源于矮牵牛的黄烷酮醇还原酶DFR与其抗体scFv的反应中,抗体的单链的三个可变区A4、G4、H3与抗原之间作用有强弱的差异。Geert等利用酵母双杂交技术,将DFR作为诱饵蛋白,编码抗体的三个可变区的基因分别被克隆在AD-LIBRARY载体上,将BD-BAIT载体和每种AD-LIBRARY载体分别转化改造后的酵母菌株中,并检测报告基因在克隆的菌落中的表达活性,从而在活细胞的水平上检测抗原和抗体的免疫反应。 3、利用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药 物对蛋白质之间相互作用的影响 酵母双杂交的报告基因能否表达在于诱饵蛋白与靶蛋白之间的相互作用。对于能够引发疾病反应的蛋白互作可以采取药物干扰的方法,阻止它们的相互作用以达到治疗疾病的目的。例如:Dengue病毒能引起黄热病、肝炎等疾病,研究发现它的病毒RNA复制与依赖于RNA的RNA聚合酶(NS5)与拓扑异构酶NS3,以及细胞核转运受体BETA-importin的相互作用有关。研究人员通过酵母双杂交技术找到了这些蛋白之间相互作用的氨基酸序列。如果能找到相应的基因药物阻断这些蛋白之间的相互作用,就可以阻止RNA病毒的复制,从而达到治疗这种疾病的目的。 4、利用酵母双杂交建立基因组蛋白连锁图(Genome Protein Linkage Map)众多的蛋白质之间在许多重要的生命活动中都是彼此协调和控制的。基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。通过基因组的测序和序列分析发现了很多新的基因和EST序列,HUA等人利用酵母双杂交技术,将所有已知基因和EST序列为诱饵,在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白,从而找到基因之间的联系,建立基因组蛋白连锁图。对于认识一些重要的生命活动:如信号传导、代谢途径等有重要意义。