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实验过程中参照标准进行,往往不能按照标准重复出来,根据药典标准要求对茜草含量进行分析,发现流动相的比例不太适应本实验室,对其进行方法摸索。1材料茜草药材(送检样);甲醇(分析纯),浓盐酸,三乙胺,磷酸;[color=#333333]大叶茜草素,羟基茜草素[/color][color=#333333]对照品(均购自中检院)[/color]。[color=#333333]2 [/color][color=#333333]仪器与设备[/color][color=#333333]岛津液相[/color][color=#333333]LC-20AT[/color][color=#333333](带紫外检测器及自动进样器);色谱柱安捷伦[/color][color=#333333]Zorbax SB C18(250mm*4.6μm*5μm)[/color][color=#333333];超声波清洗仪([/color]昆山市超声仪器有限公司[color=#333333]);[/color]DZKW-S-6型电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗器械仪器有限公司)。3 实验过程(按照2015年版中国药典一部 茜草项下含量测定操作) 取本品粉末(过二号筛)约0. 5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇100ml,密塞,称定重量,放置过夜,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液50ml,蒸干,残渣加甲醇-25%盐酸(4 : 1)混合溶液20ml溶解,置水浴中加热水解3 0分钟,立即冷却,加入三乙胺3ml,混匀,转移至25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。以甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(25 : 50 :25)为流动相;检测波长为250nm。4 流动相条件[color=#333333](1)[/color]按照药典流动相条件[color=#333333]甲醇:乙腈:0.2%磷酸溶液(25:50:25),发现样品10min之前杂质较多,羟基茜草素受杂质干扰严重,调有机相比例但是依然不能完全分开,我们更换色谱柱,效果不佳。[/color][align=center][color=#333333][img=,690,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907181039432269_1092_3920249_3.png!w690x174.jpg[/img][/color][/align][align=center][color=#333333]药典标准流动相比例等度条件下的标准品色谱图[/color][/align][align=center][color=#333333][img=,690,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907181041183621_4282_3920249_3.png!w690x174.jpg[/img][/color][/align][align=center][color=#333333][color=#333333]药典标准流动相比例等度条件下的样品色谱图[/color][/color][/align][color=#333333](2)[/color][color=#333333]配成单相混合溶液也是羟基茜草素分离度不好。[/color][color=#333333](3)[/color][color=#333333]本实验室液相二元泵的多一些,我们为了减少流动相配比误差,将流动相条件改为两相走梯度洗脱,发现茜草中两种有效成分可以得到很好的分离,并且不受其他物质的干扰。乙腈与0.2%磷酸水梯度0min-40min [color=#333333]乙腈[/color]40%升至80%,40min-50min 80%乙腈。[/color][align=center][color=#333333][img=,690,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907181051229011_3007_3920249_3.png!w690x174.jpg[/img][/color][/align][align=center][color=#333333]乙腈和0.2%磷酸水梯度洗脱标样色谱图[/color][/align][align=center][color=#333333][img=,690,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907181051448461_9667_3920249_3.png!w690x174.jpg[/img][/color][/align][color=#333333][/color][align=center]乙腈和0.2%磷酸水梯度洗脱样品色谱图[/align][align=left] 检测中药的过程中发现大部分药材基质比较复杂,完全按照药典的比例不一定能有效分离,做研究的过程中,会对条件进行优化,以保证数据的准确性与可靠性![/align]
请问茜草含量方法中药典规定下的水浴水解具体怎么操作?是要回流吗?[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208281116087303_9982_5361118_3.png[/img]
[size=16px][font=Arial, &][color=#333333]目的[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 考察茜草炭炮制过程中饮片色度值与超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法(UPLC)特征图谱的相关性。 [/color][/font][font=Arial, &][color=#333333]方法[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 采用UPLC建立茜草及茜草炭的特征图谱,并采用分光测色仪测定其色度值:明暗度值(L*)、红绿色值(a*)、黄蓝色值(b*),对茜草炭炮制过程中饮片色度值与特征图谱进行相关性分析。 [/color][/font][font=Arial, &][color=#333333]结果[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 随着炮制时间的延长,茜草炭较茜草饮片特征图谱的相似度逐渐降低 异茜草素、6-羟基甲基异茜草素单位峰面积先增大后减小,其余共有峰单位峰面积均呈减小趋势 L*、a*、b*值整体上逐渐减小,而△E*逐渐增大。L*、a*、b*值分别与羟基茜草素、6-羟基甲基异茜草素、茜草素呈极显著正相关。主成分分析共提取2个主成分,累积方差贡献率为88.292%。聚类分析结果显示,炮制0~6 min的样品聚为一类,炮制8~34 min的样品聚为二类。正交偏最小二乘法判别分析结果显示,6-羟基甲基异茜草素、异茜草素、a*、b*是茜草炭饮片炮制过程中发生质量变化的主要指标。 [/color][/font][font=Arial, &][color=#333333]结论[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 不同炮制时间茜草炭饮片的色度值与UPLC特征图谱密切相关,可为茜草炭饮片炮制的在线监控和质量评价提供较全面的判断依据。[/color][/font][/size]