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现在正在做一个中药颗粒质量标准起草,其中薄荷的薄层色谱鉴别,对照品是薄荷脑,为什么对照品总是很拖尾,跑成一大片,而不是一个斑点呢,操作方法就是按照10版药典做的。现在样品做不出来我不太着急,奇怪的是为什么对照品都跑成一大片了呢?取本品粉末30g,加石油醚(60~90℃)100ml,密塞,振摇数分钟,放置30分钟,滤过,滤液挥至1m1,作为供试品溶液。另取薄荷对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。再取薄荷脑对照品,加石油醚(60~90℃)制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液10~20μl、对照药材溶液和对照品溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯(19:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以香草醛硫酸试液-乙醇(1:4)的混合溶液,在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。方法上应该是没错的,但是结果就是不理想,急急急!
[align=right][b]SGLC-GC-003[/b][/align][b]摘要:[/b]本文建立了薄荷脑含量测定的检测方法。结果表明,采用色谱柱SH-WAX (0.25um*0.25mm*30m)分析薄荷脑含量,理论板数按薄荷脑峰计算为17174,满足《中国药典》要求。此方法可为薄荷脑含量测定提供参考。[b]关键词:[/b]薄荷脑 SH-WAX[b]1. 实验部分1.1 实验仪器及耗材[/b]GC-FID[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]-氢火焰离子化检测器;色谱柱:SH-WAX (0.25 um*0.25 mm*30 m;P/N:221-75893-30);SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34002-01);SHIMSEN Pipet[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。[b]1.2 分析条件UHPLC 条件[/b]色谱柱:SH-WAX (0.25 um*0.25 mm*30 m)柱温:120 ℃载气:氮气进样口: 250 ℃,分流比10:1检测器:250 ℃进样量:1 μL[b]2.结果及讨论2.1 色谱图[/b]按照上述色谱条件(1.2)进行采集,色谱图如下:[b]对照品溶液[/b][img=薄荷脑含量测定]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-GC-003_1.png[/img][font=arial, &][size=12px][/size][/font][b]3. 结论[/b]参考《中国药典》中色谱条件,并对其条件进行优化,最终建立了薄荷脑含量测定的检测方法。结果表明,采用色谱柱SH-WAX (0.25 um*0.25 mm*30 m)分析薄荷脑含量,理论板数按薄荷脑峰计算为17174,满足《中国药典》要求。此方法可为薄荷脑含量测定提供参考。
止咳枇杷颗粒由枇杷叶、桑白皮、白前、百部、桔梗、薄荷脑、蔗糖等制成,具有清肺、止咳、化痰的功效,用于咳嗽多痰、支气管炎等。现行的部颁标准中药成方剂第二册WS3—B—0212—90质量标准中收载了该制剂,只作了定性鉴别,无定量检测方法。本文应用毛细管[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法测定止咳枇杷颗粒中薄荷脑的含量,为止咳枇杷颗粒的质量控制提供依据。1 仪器与材料GC2010[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url](日本岛津) GCsolution [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]工作站 SPL毛细管柱进样口 Wax10毛细管柱(Supel co公司)(0.32 mm×30 m×0.25 μm)。止咳枇杷颗粒(广州奇星药业有限公司),薄荷脑对照品(072800005,中国药品生物制品检定所) 水杨酸甲酯(110707200609,内标用,中国药品生物制品检定所),其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱: Wax10毛细管柱(0.32 mm×30 m×0.25 μm),柱温为110 ℃,进样口温度为250 ℃,检测器温度为250 ℃ FID检测器。载气为高纯度氮气,流速:1.0 ml/min,进样量为1 μL。薄荷脑、水杨酸甲酯(内标)的理论塔板数不低于5000。色谱图见图1。A.薄荷脑对照品 B.样品 C.阴性样品图1 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]图(略)Figure 1 Gas chromatograms2.2 样品测定方法2.2.1 内标溶液的制备 精密称取水杨酸甲酯适量,置500 mL量瓶中,用无水乙醇配制成0.223 9 mg/mL的溶液,摇匀,即得。2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取薄荷脑66.83 mg,置50 mL量瓶中,加内标溶液溶解并定容,作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5 mL,置20 mL量瓶中,加内标溶液溶解并定容,摇匀,作为对照品溶液。2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量,研细,精密称取本品5 g,置具塞锥形瓶中,精密加入内标溶液20 mL,超声20 min,取上清液用滤膜过滤,取续滤液,即得。2.2.4 测定方法 分别精密吸取对照品和供试液各1 μL,注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url],测定薄荷脑对照品和水杨酸甲酯峰面积,计算校正因子,按内标法计算即得。2.3 方法学考察2.3.1 线性关系考察 精密吸取上述薄荷脑对照品储备液适量,用内标溶液制成薄荷脑质量浓度分别为0.668 3、0.528 3、0.325 1、0.261 2、0.103 9、0.051 7 mg/mL的系列溶液(内标溶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量浓度为0.223 9 mg/mL),分别吸取上述溶液1 μL注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url],记录色谱图,以薄荷脑质量浓度为横坐标,以薄荷脑峰面积与内标峰面积之比为纵坐标,进行线性回归,得回归方程:Y=0.7134X+0.00005,r=1.000 0(n=6),结果表明薄荷脑在0.051 7~0.668 3 mg/mL范围内线性关系良好。2.3.2 稳定性试验 取同一份供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、24 h进样测定,结果薄荷脑平均质量分数为0.1010%,RSD为0.30%(n=6),表明供试品溶液在24 h内稳定。2.3.3 精密度试验 取同一份供试品溶液,重复进样6次,结果供试品中薄荷脑平均质量分数为0.1009%,RSD为0.30%(n=6)。2.3.4 加样回收率试验 取已知含量的样品6份,每份约2.5 g,精密称定,分别精密加入上述对照品储备液适量,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,依次测定,测得平均回收率为101.1%,RSD为2.0%,见表1。2.3.5 重复性试验 取同一批号的止咳枇杷颗粒6份,按“2.2”测定方法测定含量,6份样品的薄荷脑含量的RSD为1.8%,表明本方法重复性较好。2.4 样品测定取3批样品,按照“2.2.3”项的方法制备供试品溶液,按“2.1”项色谱条件下进行测定,3批样品的质量分数分别为0.1089%、0.1125%、0.1250%。表1 止咳枇杷颗粒加样回收率试验(略)Table 1 Recovery of Zhike Pipa granule3 讨论3.1 色谱条件的选择参考文献[1],采用柱温:150 ℃、FID检测器温度:190 ℃、进样口温度:190 ℃的条件,薄荷脑峰与杂质峰分不开。参照部颁标准[4]改为柱温:110 ℃、FID检测器温度:250 ℃、进样口温度:250 ℃,薄荷脑峰和杂质峰分离良好。3.2 提取溶剂的选择参考文献[1~3]选用无水乙醇为提取溶剂,水杨酸甲酯为内标物。3.3 提取方法的选择比较了无水乙醇加热回流提取和超声提取2种方法对薄荷脑的提取效果,结果表明加入20 mL内标溶液回流0.5 h与加入20 mL内标溶液超声提取效果基本一致,薄荷脑质量分数分别为0.1002%和0.0972%,RSD为2.0%。考虑到超声20 min提取方法方便、快捷,为节约时间和成本,采用超声20 min的方法作为提取方法。3.4 色谱柱的选择比较Wax10毛细管柱和AT1毛细管柱的分离效果,结果Wax10毛细管柱[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]的峰形和出峰时间比较适中,而AT1不理想。【参考文献】[1] 张雪,邵燕虹,张慧敏.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法测定苍耳子鼻炎胶囊中薄荷脑和龙脑的报告[J].医学综述,2008,14(20):7913-7914.[2] 杨敏,刘吉金.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法测定蜜炼川贝枇杷膏中薄荷脑和苯甲醛的含量[J].中国实验方剂学杂志,2008,14(8):32-42.[3] 陈月英,莫云燕,林子夏,等.毛细管[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法测定止痒灵中的苯酚和薄荷脑[J].广东药学院学报,2007,23(2):245-246.[4] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方剂第二册[M].北京:化学工业出版社,2002:216.