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关键词:单细胞凝胶电泳目的:为便于各室单细胞凝胶电泳试验结果的可比性背景知识:略原理:在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离受到限制,因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。主体内容:操作步骤见下文主要参考文献:略操作步骤:1. 分离制备单细胞悬液:(1) 体外培养的细胞株:用胰酶消化,吹打成单细胞悬液(2) 体内脏器细胞:处死动物,取出脏器,于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。2. 胶板制备:(1) 取20~50μl于56℃水浴中保温的0.5%普通熔点琼脂糖,铺于磨沙载玻片上,形成底胶。(2) 取100~150μl 0.5%普通熔点琼脂糖加在底胶上,再于其上加盖玻片,4℃冷凝10分钟。(3) 取下盖片,取50~100μl于37℃水浴中保温的1.0%的低熔点琼脂糖与50~100μl细胞悬液(105个细胞/ml)混匀,立即铺片,加上盖玻片,4℃冷凝10分钟。(4) 去掉盖玻片,取70~100μl于37℃水浴中保温的0.5%的低熔点琼脂糖铺片,加盖玻片,4℃冷凝。3. 细胞裂解与电泳:(1) 将制备好的胶板去掉盖玻片后,浸于4℃预冷的细胞裂解液中,4℃裂解1小时。(2) 取出胶板,放入电泳槽中,浸泡在电泳液中解旋20分钟。(3) 4℃电泳20分钟(25V,300mA)。4. 中和与染色:(1) 电泳结束,将胶板浸泡于中和液中,每次15分钟,共中和两次,注意更换中和液。(2) 取出胶板,置于染色架上,滴加5μg/ml的PI,暗处染色20分钟。(3) 蒸馏水脱色15分钟。5. 镜检和分析:(1) 在荧光显微镜下观察,绿光激发吸收滤片590nm。必要时照相记录。(2) 记数观察的细胞,记录彗星细胞出现的频率,用目镜测微尺测头长与全长,计算核DNA迁移距离。* * * * *使用两层凝胶法,经裂解、DNA解旋、电泳和中和得到湿琼脂糖凝胶片。将湿琼脂糖凝胶片置于冰冷无水乙醇中脱水10分钟,后置于空气中自发干燥。每人制备2张琼脂糖凝胶片。全部操作在采血后8小时内完成,操作过程中注意避光。脱水干燥的琼脂糖凝胶片装于含有干燥剂的载片盒中运回实验室。使用50μl 30μM的溴乙锭溶液染色、照相。使用单细胞凝胶电泳软件分析所有照片,每人随机测量100个以上细胞的尾长和olive尾矩,以尾长和olive尾矩的算术均数代表个体DNA损伤情况。
健宝灵片________________________________________拼音名:Jianbaoling Pian英文名:书页号:Z12-156 标准编号:WS3-B-2406-97 【处方】银耳 10g 山药 40g 茯苓 40g山楂清膏 80g 赖氨酸 50g 【制法】 以上五味,取银耳、山药、茯苓粉碎成细粉,加入赖氨酸、枸橼酸4g、氯化钠2g及适量蔗糖粉,混匀,再加入山楂清膏,混匀,制成颗粒,置80℃以下干燥,加入适量桔子香精及润滑剂,压制成1000片,即得。 【性状】 本品为淡灰褐色的异型片;气香,味酸甜,易吸嘲。 【鉴别】 (1)取本品,置显微镜下观察:淀粉粒呈三角状卵形、矩圆形,脐点短缝状或人字形;不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化,菌丝无色或淡棕色,多分枝状,顶端膨大成圆形,无色或淡绿色。 (2)取本品1片,研细,加水5ml,搅拌,滤过,滤液作为供试品溶液。另取赖氨酸的盐酸盐对照品,加水使溶解,制成每1ml含10mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸-醋酸钠缓冲液(pH6.0)为展开剂,展开,取出晾干,喷以1%茚三酮丙酮溶液,热风吹干。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。 【检查】 应符合片剂项下有关的各项规定(附录Ⅰ D)。 【功能与主治】 健脾益胃,促进生长,增强抵抗力。用于食欲不振,发育不良,病后体弱。 【用法与用量】 口服或研碎后用开水冲服,六个月至二岁,一次2~3片;二岁至五岁,一次3~4片;五岁至十岁,一次4~5片;十岁以上,一次5~7片;一日3次。 【贮藏】 密封,置阴凉处。 注:山楂清膏的制法 取山楂加水煎煮二次,每次3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.25(90~95℃),即得。