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欢迎批评指正!应用吸附搅拌磁子和AromaOffice2D数据处理软件分析大红袍茶挥发性香气成分[url=https://bbs.instrument.com.cn/topic/7875190]应用吸附搅拌磁子和AromaOffice2D数据处理软件分析大红袍茶挥发性香气成分_[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url](GCMS)仪器社区_仪器信息网论坛 (instrument.com.cn)[/url]
应用吸附搅拌磁子和AromaOffice2D数据处理软件分析大红袍茶挥发性香气成分大红袍,产于福建武夷山,属乌龙茶,品质优异。是中国非常有名特种茶。本文采用吸附搅拌磁子(SBSE)提取大红袍茶叶的香气香味成分,大体积冷却进样口CIS,热脱附TD3.5和气相色谱质谱法分析鉴定大红袍成分;利用AromaOffice2D风味物质数据库软件处理GCMS数据。此软件包含解卷积拆分共流出色谱峰和保留指数校正以及化合物的气味风味信息。1试验部分1.1 仪器与装置美国安捷伦7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪,德国哲斯泰(Gerstel)的MPS Robotic Pro多功能自动进样系统,德国哲斯泰(Gerstel)的CIS4大体积冷阱分流/不分流进样口和TD3.5热脱附。吸附搅拌子(PDMS, 0.10mmX10mm,Gerstel)。1.2样品和标样样品:富硒大红袍茶叶(福建武夷山)。香气香味化合物标准品均来自Sigma-Aldrich等主要试剂公司,少数为实验室内部精制标样。C6-C30正构烷混合标准物和氯化钠来自安谱公司。1.3GC/MS条件1.3.1 色谱条件:色谱柱:安捷伦HP-Innowax (30m×0. 25 mm ( i.d.)×0.25μm)惰性毛细管柱;升温程序: 40℃保持2 min,以5 ℃/min升至250℃,保持20 min;载气(He, 纯度99.999%以上)流速1.8mL/min;进样口:CIS-PTV大体积冷进样口,温度-30℃-250℃, 15℃/S;分流比11:1。TD3.5+:25-230℃, 100℃/min, 不分流,传输线温度:260℃MSD和ODP分流比为1:11.3.2质谱条件:电子轰击(EI)离子源;电子能量70eV;传输线温度250℃;离子源温度230℃;四级杆温度150℃。SCAN扫描范围:29-400。EMV: 1158V。1.4数据处理软件:AromaOffice2D 风味物质数据库软件(哲斯泰Gerstel, K.K)1.4样品的提取处理及分析方法样品的提取处理:取1g大红袍茶叶,加50ml沸水冲泡。放凉后,取6g茶水于20ml顶空瓶,加入1.8g氯化钠,放入磁力吸附搅拌子,提取1小时。用超纯水冲洗干净,用干净的无尘纸巾吸干,放入TD3.5+热脱附的小管,运行序列,进行热脱附。在分析样品前,和样品分析完全相同的条件下,用0.05%的C6-C30的正构烷标样注射到GCMS,获得正构烷的保留时间,用于软件计算保留指数。2 结果与讨论2.1 实验结果下面为富硒大红袍茶水的总离子色谱TIC图:https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/10/202110071206202600_320_1615838_3.png图1 富硒大红袍茶水的总离子色谱TIC图2.2数据处理:MS鉴定未知物最常用的办法就是未知物的质谱与质谱数据库中标准谱图进行对比。基于相似度,检索功能可提供一个按相似系数由高到低的匹配列表。相似度越大,检索的正确的可能性就越高。天然香气香味样品往往含有大量的异构体。对于异构体,同系物和结构特征相似的化合物,由于其质谱图非常相似,谱库检索结果匹配度,排列次序都很接近,检索给出的顺序也不一定正确。但它们的保留时间可能会不同,但保留时间只能在特定色谱条件下不变,而保留指数在固定相相同下有可比性。虽然在相同的柱子上和相同的色谱条件下,两个不同的化合物的保留指数有可能相同。但两个化合物同时具有相同的保留指数(或保留时间)和相同的质谱图的不可能性极小。所以在谱库检索的基础上,用保留指数来确认结果。是一种很重要的手段。AromaOffice2D风味物质数据库软件有来着十万条以上的参考文献的上万条化合物的保留指数和气味信息,可以进行快速方便检索。例如通过名称,CAS号码,化合物化学式,关键词等来检索不同色谱柱RI值和气味(或风味)信息,相关来源文献等。也可以同时应用保留指数(RI)和质谱(MS)来快速方便的鉴定香气香味化合物。软件可以嵌合在安捷伦的MS化学工作站或Masshunter的未知物分析上面进行质谱谱库检索和自动计算保留指数值,并对比保留指数。并可以给出化合物的香气描述。还可以进行解卷积处理。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/10/202110071206205964_4707_1615838_3.png图2 嵌入MS工作站AromaOffice 2D的1D模式的菜单软件可以对单个色谱峰进行检索。可以对TIC进行气味化合物总体鉴定。在完成集成即质谱匹配后,所有峰的候选化合物的保留指数值(RI)及CAS号码也被导入软件,并与AromaOffice2D数据库已经有的平均RI进行对比。显示匹配条目数,RI相差数值,以及所鉴定化合物的气味特征。示例如下:https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/10/202110071206208313_6478_1615838_3.png图3 Aroma Search检索结果示例表头注释:No色谱峰编号,RT保留时间,TIC上面计算的RI,Area峰面积,Area%峰面积百分比,Cnt AromaOffice匹配的条目数,RI-Ave平均保留指数,RI-Diff实际测定保留指数和AromaOffice数据库保留指数的差值,Hit匹配度,CASNo CAS号码,Formula分子式,Character气味特征,Name(MS Library)数据库化合物名称,Name(Aroma-DB) AromaOffice库的化合物名称。可以根据保留指数差异和质谱匹配度来进一步筛选确认。可以把检索结果导入excel,进一步对比匹配度和保留指数来确认化合物。下表为经过核对的鉴定结果。表 AromaOffice2D鉴定结果少部分匹配度较低是因为本底干扰,正向匹配度虽然低一些,但反向匹配度很好,确认之后保留结果。从上表看出,鉴定了159种风味化合物。含量最高的化合物是jasminlactone。含量最多化合物有2-methylbutanal,methyl heptenone,linalool oxide,heptadienal,Hotrienol,N-methyl-formyl-pyrrole,phenylethyl alcohol,Benzylcynanide,delta-undecalactone,jasminlactone,dihydro actinidiolide,methyl jasminate,Indole等。头香Dimethyl sulfide。Indole和Skatole的味道很强。吡咯和吡嗪类化合物烘培的香气很浓。各种萜烯,醛类,醇类,酮类,酯类,内酯,酚类,含氮化合物吡咯和吡嗪等,在此不一一例举讨论。对于样品基质复杂,其香气成分测定需要一种简单快速,无溶剂或少许溶剂的提取富集技术。和一般LLC,SDE,SPE,SAFE等样品提取制备方法相比,搅拌棒吸附萃取(SBSE)是一种无溶剂的用于萃取和浓缩痕量有机物的技术。其灵敏度高,重现性好,样品用量少,操作简单快速,非常适合茶水风味化合物的测定。在茶水中适当加入氯化钠有助于更多极性化合物的提取,对比不加氯化钠处理,加入氯化钠峰会多一些,高一些。如果使用顺序搅拌子的结果会更好一些。
在薄层色谱定性时,对照品、供试品和对照药材在相同的问题显相同颜色的斑点即可。对照品和对照药材定性有何区别?为什么两个要同时做呢?