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我用香草醛-盐酸法测定葡萄枝条中的原花青素,具体方法如下:(1)试剂配制A:1%香草醛溶液(称取1.000g香草醛溶于甲醇液中,最后定容到100mL);B:8%的盐酸液(取8mL浓盐酸溶于甲醇中,定容至100mL)。显色剂:A∶B=1∶1,现用现配。(2)标准曲线绘制配制原花青素标准溶液,浓度为1.2mg/mL(精密称取儿茶素标准品0•120 0 g,用pbs缓冲溶液溶解,用甲醇定容至100 ml,配制成浓度为1 mg/ml的标准溶液。)。分别取1、2、3、4、5mL,然后定容至10mL。再各取1mL(另取1ml甲醇液为空白液),分别加入5mL显色剂,摇匀,避光,在(30±1)℃恒温水浴中保持30min。取出,在500nm波长下,用分光光度计测定其吸光值,绘制标准曲线图。这里有一个问题,我没看到有显色出现啊,应该是显什么色的?溶液标准品是应该直接用甲醇溶解,甲醇定容还是用蒸馏水溶解,甲醇定容呢????求大神解答!!!
[align=center]软胶囊中花青素(以原花青素计)的测定方法验证[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]食品事业部:任乐[/align]一、目的:对用《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中“保健食品中原花青素的测定”方法测定“软胶囊”中花青素的含量进行方法适用性验证 。二、验证内容:方法适用性验证包括检出限、线性范围、重复性、回收率、方法专属性。三、验证方法:1 范围 本标准适用于软胶囊中花青素(以原花青素计)的含量测定。2 原理原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。3 试剂实验室用水为双蒸馏水,所用试剂为分析纯级。3.1 甲醇 分析纯。3.2 正丁醇 分析纯。3.3 盐酸 分析纯3.4 硫酸铁铵 NH[sub]4[/sub]Fe(SO[sub]4[/sub])[sub]2[/sub]12H[sub]2[/sub]O溶液:用浓度为2mol/L盐酸配制成2%(w/v)的溶液。3.5 原花青素标准品 来源:上海源叶生物科技有限公司 批号:YA0429YA14。4 仪器和设备4.1超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司 型号:KQ5200B4.2电子天平:沈阳龙腾电子有限公司 型号:JM-B10002 精度:0.0001g4.3分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司 型号:TU-1901或同等程度仪器 以上仪器符合检测要求。5 试样处理样品提取:挤出软胶囊内容物,搅拌均匀,称取50-100mg胶囊内容物置于小烧杯中,用20mL甲醇分数次搅拌,将原花青素洗入50mL容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。6 测定标准曲线绘制:称取原花青素标准品10.27mg溶于甲醇置于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,该原花青素储备液的浓度为1027.0μg/mL。分别吸取原花青素储备液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后,取6mL置于具塞锥瓶中,再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和1.0mL试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热 40min后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546nm波长处测吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量。7 公式试样花青素(以原花青素计)含量按下式进行计算。[img=,171,41]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807091807458441_5182_2904018_3.png!w171x41.jpg[/img]式中:X—样品中花青素(以原花青素计)的含量,g/100g;A—样品测定液中原花青素的含量,μg;m—样品质量,mg;V-待测样液总体积,mL。计算结果保留三位有效数字四、验证数据1 线性范围以原花青素含量(C)为横坐标,吸光度值(A)为纵坐标,绘制标准曲线,进行线性回归,得回归方程:A=0.0038c+0.0035 R[sup]2[/sup]为0.9996。[table][tr][td][align=center]原花青素含量(μg)[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]10.27[/align][/td][td][align=center]25.68[/align][/td][td][align=center]51.35[/align][/td][td][align=center]102.7[/align][/td][td][align=center]154.05[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]A[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.043[/align][/td][td][align=center]0.096[/align][/td][td][align=center]0.205[/align][/td][td][align=center]0.392[/align][/td][td][align=center]0.580[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,605,363]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807091808184673_197_2904018_3.png!w605x363.jpg[/img] [/align]以上结果表明原花青素在0-154.05μg范围内,吸光值与原花青素含量线性良好,符合要求。2 检出限以零点为参比,同时在546nm处对标准曲线零管进行20次测定,计算标准偏差,以3倍标准偏差值相对应的含量即位检出限。经计算的得出,当称量为100mg时,其检出限为21.5mg/kg,符合软胶囊对浓度的要求。3 重复性称取6份试样按照上述处理方法进行试样处理,分别吸取适量样液进行比色,求得样液中花青素量。[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]样品花青素(以原花青素计)含量g/100g[/align][/td][td][align=center]2.193[/align][/td][td][align=center]2.162[/align][/td][td][align=center]2.148[/align][/td][td][align=center]2.135[/align][/td][td][align=center]2.169[/align][/td][td][align=center]2.187[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]平均值g/100g[/align][/td][td=6,1][align=center]2.17[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]相对标准偏差%[/align][/td][td=6,1][align=center]1.0[/align][/td][/tr][/table]由上表可知,试样中花青素(以原花青素计)测定的重复性均值为2.17g/100g,RSD值为1.0%,符合规定。4 准确度在进行重复性试验基础上,同时进行加标试验,加标量分别为1.74g/100g,2.17g/100g,2.60g/100g结果见下表:[table][tr][td][align=center]测定编号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标后实际含量g/100g[/align][/td][td][align=center]3.81[/align][/td][td][align=center]3.89[/align][/td][td][align=center]4.32[/align][/td][td][align=center]4.27[/align][/td][td][align=center]4.59[/align][/td][td][align=center]4.62[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]理论加标量g/100g[/align][/td][td][align=center]1.74[/align][/td][td][align=center]1.74[/align][/td][td][align=center]2.17[/align][/td][td][align=center]2.17[/align][/td][td][align=center]2.60[/align][/td][td][align=center]2.60[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标样品含量g/100g[/align][/td][td][align=center]1.64[/align][/td][td][align=center]1.72[/align][/td][td][align=center]2.15[/align][/td][td][align=center]2.10[/align][/td][td][align=center]2.42[/align][/td][td][align=center]2.45[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]加标回收率%[/align][/td][td][align=center]94.3[/align][/td][td][align=center]98.8[/align][/td][td][align=center]99.1[/align][/td][td][align=center]96.8[/align][/td][td][align=center]93.1[/align][/td][td][align=center]94.2[/align][/td][/tr][/table]由上表可以看出软胶囊中花青素(以原花青素计)测定的加标回收范围在92%-105%,符合规定。5 专属性[align=center]配制2个浓度梯度的原花青素标准溶液,1个样品处理液,1个试剂空白,按照上述处理方法进行处理,经过全波长分别扫描原花青素标准溶液,样品,试剂空白,如图所示可以看到原花青素标准品在546nm附近出现最大吸收峰,且样品在此波长处无干扰,故其专属性符合要求。[img=,690,542]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807091808523293_727_2904018_3.png!w690x542.jpg[/img][/align]综上所述:从检出限、线性范围、重复性、准确度、方法专属性测试结果可知,均符合方法要求,本实验方法符合软胶囊花青素(以原花青素计)的测定。
[color=#444444]花青素的测定都有哪些方法,我查了下文献目前好像都是用的紫外分光光度计和液相色谱,但是标准只有植物源性食品中花青素的测定(用的液相),也有标液,想知道这个标准是不是所有的植物还有果实都适用?如果用紫外分光光度计,测出来的值准不准确?还有没有其他的测花青素好的方法。[/color]