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[size=3][font=Times New Roman]三部药典新增甘氨酸含量测定的实验,有哪位大侠做过这个实验,教下经验?方法如下;[/font][/size][size=3][font=宋体]本法系依据过量的[/font][color=black][font=宋体]6-[/font][/color][color=black][font=宋体]氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯([/font][/color][font=宋体]AQC[/font][font=宋体])在一定条件下和氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),用[/font][font=宋体]高效液相色谱法测定[/font][font=宋体]衍生产物,根据衍生产物的含量计算甘氨酸含量。[/font][/size][size=3][font=宋体]照[/font][font=宋体]高效液相色谱法(附录[/font][font=Times New Roman]III B[/font][font=宋体])测定[/font][/size][size=3][font=宋体]色谱条件和系统适应性试验[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]用十八烷基硅烷键合硅胶为基质的[/font][font=Times New Roman]C18[/font][font=宋体]反相色谱柱,颗粒度[/font][font=Times New Roman]4μm[/font][font=宋体],内径[/font][font=Times New Roman]3.9mm,[/font][font=宋体]柱长[/font][font=Times New Roman]150mm[/font][font=宋体];柱温为[/font][font=Times New Roman]37[/font][font=宋体]℃[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]以[/font][font=Times New Roman]140mmol/L[/font][font=宋体]乙酸钠、[/font][font=Times New Roman]17mmol/L[/font][font=宋体]三乙胺[/font][font=Times New Roman]pH 5.65[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]1μg/mlEDTA[/font][font=宋体]二钠盐[/font][font=宋体]为流动相[/font][font=Times New Roman]A[/font][font=宋体]液,以[/font][font=Times New Roman]100%[/font][font=宋体]乙腈为流动相[/font][font=Times New Roman]B[/font][font=宋体]液,以纯水为流动相[/font][font=Times New Roman]C[/font][font=宋体]液[/font][font=Times New Roman],[/font][font=宋体]流速为每分钟[/font][font=Times New Roman]1.0ml[/font][font=宋体],梯度洗脱[/font][font=Times New Roman]32[/font][font=宋体]分钟(见梯度表),检测波长为[/font][font=Times New Roman]248nm[/font][font=宋体]。甘氨酸与相邻色谱峰之间分离度应≥[/font][font=Times New Roman]1.5[/font][font=宋体];拖尾因子([/font][font=Times New Roman]T[/font][font=宋体])为[/font][font=Times New Roman]0.95[/font][font=宋体]~[/font][font=Times New Roman]1.40[/font][font=宋体]之间[/font][font=Times New Roman]([/font][font=宋体]甘氨酸和[/font][font=宋体]α[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]氨基丁酸峰[/font][font=Times New Roman])[/font][font=宋体]。重复性[/font][font=Times New Roman]RSD[/font][font=宋体]≤[/font][font=Times New Roman]2.0%[/font][font=宋体]([/font][font=宋体]甘氨酸对照品[/font][font=宋体]峰面积测量值)。[/font][/size][size=3][font=宋体]内标溶液[/font][font=宋体]的制备[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]精密称取α[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]氨基丁酸[/font][font=宋体]对照品[/font][font=Times New Roman] 4.0g, [/font][font=宋体]加超纯水至[/font][font=Times New Roman]100ml[/font][font=宋体]定容。[/font][/size][size=3][font=宋体]对照品溶液的制备[/font][font=Times New Roman] (1)[/font][font=宋体]精密称取甘氨酸标准[/font][font=Times New Roman] 2.5g[/font][font=宋体]加超纯水至[/font][font=Times New Roman]100ml[/font][font=宋体]定容。[/font][font=Times New Roman](2)[size=3] [/size][/font][font=宋体]精密量取[/font][font=Times New Roman](1)[/font][font=宋体]项氨基酸标准溶液[/font][font=Times New Roman]1.0ml[/font][font=宋体],加[/font][font=Times New Roman]9.0ml 1.5%[/font][font=宋体]磺基水扬酸,混匀静置[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]小时以上[/font][font=Times New Roman]3000rpm[/font][font=宋体]离心[/font][font=Times New Roman]10[/font][font=宋体]分钟,留取上清备用。①[/font][font=宋体]分别精密量取[/font][font=宋体]上清液[/font][font=Times New Roman]50[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]100[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]125[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]150[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]200[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体],置[/font][font=Times New Roman]10ml[/font][font=宋体]容量瓶中,用纯水定容。[/font][font=宋体]②分别精密量取①项中各甘氨酸标准溶液[/font][font=Times New Roman]0.1 ml[/font][font=宋体],加[/font][font=Times New Roman]0.4ml[/font][font=宋体]纯水,加内标[/font][font=Times New Roman]0.02ml[/font][font=宋体]混匀备用。精密量取[/font][font=Times New Roman](2)[/font][font=宋体]②项甘氨酸标准溶液[/font][font=Times New Roman]10μl[/font][font=宋体]放入衍生管中加[/font][font=Times New Roman]70μl[/font][font=宋体]硼酸缓冲液[/font][font=Times New Roman](pH8[/font][font=宋体]~[/font][font=Times New Roman]10)[/font][font=宋体]涡旋混和并[/font][font=宋体]加入[/font][font=Times New Roman]20μl AQC[/font][font=宋体]衍生剂[/font][font=宋体]涡旋混和[/font][font=Times New Roman]15[/font][font=宋体]秒,[/font][font=宋体]备用。[/font][/size]
求HPLC检测N6_三氟乙酰基_L_赖氨酸 含量的方法,标准方法里面要用到0.25%KH2PO4,但我们实验室暂时没有,所以我就用了醋酸先代替调了一下PH到3~4,结果我的C18柱子堵的厉害,基线飘个不停.
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