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糖肽是什么包含一个叫做聚糖的碳水化合物的多肽(氨基酸分子)被称为糖肽(Glycopeptides)。由于聚糖在所有生物体细胞中无所不在,并且糖肽有保持健康和防止疾病作用,糖生物学领域出现了分子等方面的研究。【合肥国肽生物】此外,还开发出治疗某些感染类型的糖肽类抗生素。糖肽是通过肽合成过程生产出来的。在此过程中,聚糖绑定多肽,并与其它聚糖结合氨基酸联系在一起,直到产生一个链。新产生的多肽随后通过糖基化绑定蛋白质和脂质。这一酶催化过程让糖肽影响细胞之间的生化沟通。因此,这些多肽在生物体生命过程中有很重要的生物学作用。细胞产生皮肤和有机组织,并有抵御疾病,帮助身体保持体内平衡等作用。糖生物学试图确定糖肽的分子结构,并进一步探索这些多肽在与人体其它相关细胞和分子中的功能。通过确定糖肽结构,进一步了解它们的机制,糖生物学领域工作者能生产出有助于促进健康和延长寿命的治疗方法。例如,糖肽包含一种特质-在癌细胞扩散前必须被分解;因此,了解糖肽结构能让科学家创造一种防止糖肽变质和抑制癌细胞扩散的方法。糖肽抗生素是一种专门开发出来用于抵御特定类型细菌(对青霉素等常见治疗形式抵抗)的抗生素。例如,万古霉素就是一种常见的糖肽类抗生素,可用于治疗肠道发炎。这种疾病通常是由肠道有害细菌导致,而万古霉素能杀死这些细菌。不过,从糖肽提取的抗生素没有抵御病毒感染的功效。这些药物通常通过静脉注射,或口服药片治疗肠道感染。由于糖肽类药物一般被视为抵抗菌株的最后治疗手段,在病人开始感觉好转的情况下也应坚持完整个疗程。否则,再次感染会加剧,并且更难治疗。糖肽抗生素并非没有副作用。如果大剂量给予,这种药会导致皮疹,或通过呼吸道肌肉收紧而干扰呼吸。糖肽连键的主要类型有两种:一,N-糖肽键,是指β-构型的N-乙酰葡糖胺异头碳与天冬酰胺的γ-酰胺N原子共价连接而成的N-糖苷键。二,O-糖肽键,是指单糖的异头碳与羟基氨基酸的羟基O原子共价结合而成的O-糖苷键。我们主要提供:多肽合成、定制多肽、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目录肽、偶联蛋白(KLH、BSA、OVA等)、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。合肥国肽生物官网:http://www.bankpeptide.com欢迎咨询服务热线:17718122172;17718122684;17730030476;17718122397多肽及蛋白质的人工合成多肽及蛋白质的人工合成,指以氨基酸为原料,用化学方法合成多肽或蛋白质。以氨基酸为原料,用化学方法合成多肽或蛋白质。其目的是:①确证天然多肽或蛋白质的结构;②生产天然的、在生物体内含量极微但有医疗或其他生物效用的多肽;③改变部分结构,研究其结构与功能的关系,并设计更有效的药物。
最近想测寡糖的分子量,由于有强负电荷,所以用多肽与寡糖结合形成糖肽后测糖肽以及多肽的分子量,以此来测寡糖的分子量,结果,在MODLI-TOF MS中只打出了多肽的分子量,没有糖肽的,请问,该怎么让寡糖和多肽结合?现在用HPLC的方法已经初步证明我的寡糖和多肽没有结合上。
[align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]富集[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GlcNAc[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖肽新[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]平台[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]研究基础[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]在基于化学酶促反应[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可逆羟胺富集[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GlcNAc[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖肽的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]方法开发方面,已经初步建立了新的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]一[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]步法标记富集[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GlcNAc[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖肽新[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]平台,具体阐述如下:[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]基于化学酶促反应标记[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可逆羟胺富集的原理,设计了整体实验流程,将简单或复杂的样本进行提蛋白、酶解、切糖、转糖等前处理步骤,用羟胺材料进行可逆富集,将洗脱样品进行质谱检测分析。(图一)[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050370377_6805_6198277_3.png[/img][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']. [/font][font='times new roman']转接[/font][font='times new roman']Gal-ketone[/font][font='times new roman']羟胺材料富集[/font][font='times new roman']O-[/font][font='times new roman']GlcNAc[/font][font='times new roman']糖肽实验流程[/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在羟胺材料制备及表征方面,与郭志谋老师合作,在硅胶材料上键和上烯丙基羟胺小分子,合成羟胺材料,巯基硅胶碳含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5.32%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],氮含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.1%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SOA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]填料碳含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6.33%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],氮含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.41%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。表结果为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5um[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硅胶的比表面积为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]337m[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/g[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],键和密度为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.85umol/m[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。(图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])[/color][/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050377926_4692_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050375916_3943_6198277_3.png[/img][align=center]图2. [color=#000000]羟胺材料的制备与表征[/color][/align][align=center][/align][size=16px]在标肽层次进行[/size][size=16px]UDP-[/size][size=16px]糖的筛选、转糖、富集、释放可行性的考察,本研究通过合成更高效的[/size][size=16px]UDP-[/size][size=16px]糖,提高转糖效率。(图[/size][size=16px]3[/size][size=16px])我们分别选用了文献中报道过的[/size][size=16px][color=#0d0d0d]UDP-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GalNAz[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d], UDP-GalNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]以及本研究中的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]UDP-GalNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]在[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]标肽中进行[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]转糖活性验证。并对合成的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]UDP-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖[/color][/size][size=16px]对[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]转接[/size][size=16px]Gal-ketone[/size][size=16px]反应条件进行了优化,目前[/size][size=16px]30[/size][size=16px]℃条件下[/size][size=16px]5-6[/size][size=16px]小时即可达到很高的反应效率,一般转接[/size][size=16px]Gal[/size][size=16px]或者[/size][size=16px]GalNAc[/size][size=16px]实验需要[/size][size=16px]4[/size][size=16px]℃条件下反应[/size][size=16px]20[/size][size=16px]小时,相比之下转[/size][size=16px]糖时间[/size][size=16px]大幅缩短,大大提高了转糖效率。使用烯丙基羟胺材料对[/size][size=16px]转糖标肽[/size][size=16px]([/size][size=16px]P2[/size][size=16px]:[/size][size=16px]NNLEES*(O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])LLKLE[/size][size=16px])进行富集,在只有[/size][size=16px]转糖标肽[/size][size=16px]和未转[/size][size=16px]糖标肽存在[/size][size=16px]的情况下,富集反应[/size][size=16px]4[/size][size=16px]小时即可反应完全。释放条件优化方面,目前[/size][size=16px]500mM[/size][size=16px]甲氧羟胺[/size][size=16px]/50mM[/size][size=16px]醋酸钠[/size][size=16px]/1%[/size][size=16px]苯胺可以达到很好的释放效果。[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050381242_5784_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050382643_4962_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050380296_3640_6198277_3.png[/img] [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050385796_7032_6198277_3.png[/img][align=center]图3. [color=#000000]标肽层次对方法可行性的验证[/color][/align][size=16px]对标肽层次转化效率以及选择性进行分析,测试了三条带有[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]修饰的肽段([/size][size=16px]SGP1[/size][size=16px]:[/size][size=16px]NNLEES([/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])LLKLE[/size][size=16px];[/size][size=16px]SGP2[/size][size=16px]:[/size][size=16px]SVES([/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])GSVDVK[/size][size=16px];[/size][size=16px]SGP3[/size][size=16px]:[/size][size=16px]TAPTS([/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])TIAPG[/size][size=16px])转接酮糖后与烯丙基羟胺、甲氧羟胺的反应活性。同时运用[/size][size=16px]BSA[/size][size=16px]干扰实验在标肽层次对结果表明在糖肽:[/size][size=16px]BSA=1:1000[/size][size=16px]的条件下也可以将糖肽很好的富集出来,并且特异性较高。(图[/size][size=16px]4[/size][size=16px])[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050387145_4550_6198277_3.png[/img][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050388174_307_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050385643_7722_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050386865_1760_6198277_3.png[/img][/align][align=center]图4. [color=#000000]标肽层次对转化效率及特异性考察[/color][/align][size=16px]进而使用[/size][size=16px]HeLa[/size][size=16px]细胞核[/size][size=16px]肽[/size][size=16px]进行转糖富集实验条件优化,用[/size][size=16px]Tip[/size][size=16px]洗涤材料并在一定程度上减少材料用量可以降低非特异性吸附,目前实验结果在[/size][size=16px]pH=5.0[/size][size=16px]条件[/size][size=16px]下,[/size][size=16px]400[/size][size=16px]微克肽段对应[/size][size=16px]2mg[/size][size=16px]富集材料的效果最好,使用这个条件对[/size][size=16px]HeLa[/size][size=16px]细胞全[/size][size=16px]肽进行[/size][size=16px]富集,[/size][size=16px]400[/size][size=16px]微克[/size][size=16px]HeLa[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]全肽可富集[/size][size=16px]到[/size][size=16px]1080[/size][size=16px]个[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]肽段,氨基酸顺序大于[/size][size=16px]3[/size][size=16px]的[/size][size=16px]844[/size][size=16px]处潜在修饰位点中只有[/size][size=16px]31[/size][size=16px]处位于[/size][size=16px]NXS/T[/size][size=16px]序列,与天冬酰胺在蛋白质中的频率基本相符,提示本方法不引入此类假阳性干扰。对鉴定到的[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]修饰糖肽进行[/size][size=16px]GO[/size][size=16px]分析,对蛋白参与的生物学过程、细胞定位及分子功能进行研究。(图[/size][size=16px]5[/size][size=16px])[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050388174_307_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050393157_229_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050394166_1500_6198277_3.png[/img][align=center]图5. [color=#000000]Hela[/color][color=#000000]细胞[/color]全肽O-GlcNAc糖基化水平及GO分析[/align][size=16px]以上工作在简单标肽样品及复杂样品:[/size][size=16px]Hela[/size][size=16px]细胞核肽及细胞[/size][size=16px]全肽样品层次均证实了方法的可行性,实现了对[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]糖肽的一步标记,一步富集,通过优化转糖、富集步骤,大大提高了[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]糖肽的鉴定数量,为该方法应用于后续对[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]水平调控相分离的研究提供了可靠的技术支持。[/size]