生物大分子相互作用仪

今天有个学生测试两个膜蛋白之间有无相互作用。目前测试分子相互作用方法技术有很多，但是很多都是很复杂和麻烦了，分子相互作用也是很热门的技术。但是有些时候可以比较简单的，采用动态光散射测试生物大分子粒径。这个很好理解，目前我们这台仪器是动态光散射，根据布朗运动，利用分子运动快慢判断其粒径大小。分子越小，布朗运动越快，分子越大，运动越慢。首先分别测试出A和B两个膜蛋白的粒径，然后将两者混合，再测试粒径。如果粒径是A+B的话说明这两个有相互作用。缺点：1：动态光散射只是能够简单定性判断一下，A和B有没有相互作用，不能够精确计算其相互作用的解离常数，可提供的数据参数少。2：不适合做小分子。其能够识别范围都是1nm以上的，小化合物分子无法测试3：对样品纯度和准确性要求较高，无法测试复杂混合样品优点：简单快速！！！与目前其他测试技术相比的明显优势，且基本没有额外的消耗成本。纯粹简单的光学原理，测试非常快，30min～60min就可以完全测试结束，而且技术简单易理解。

大家好，我想在这和大家一起探讨一个问题： 首先，我们见到了很多有关用CE方法求两者（如小分子和大分子）相互作用结合常数的文献，无论是大分子进样还是小分子进样，都可用一种电渗流标记物（中性内标）与分析物的表观电泳淌度进行数据计算，最后求得结合常数。在这里大分子的有效电泳淌度是通过其表观电泳淌度和内标物的电泳淌度求出的。 那我想问一下，要是分析物是多种大分子的混合物，小分子在一定程度上都和它们相互作用，那么在这同一个体系中，大分子混合物进样，体系中也加入一种内标物。那么还能否在这一个体系中求出多种大分子分析物的表观电泳淌度呢？ 对于多组分体系，我们经常见的是用CZE方法对其进行分离，我没见过上述描述的这种情况。在这方面文献看得不是很多，希望有看过懂得这方面的“老师”指教，我在这先谢各位了。

ICPMS跟HPLC和CE联用，用于研究体内痕量重金属元素与生物分子（如白蛋白，金属硫蛋白）的相互作用。这种联用过程中遇到最大的问题是什么？仪器的选型、使用过程中的问题等等。。。。。感谢中。。。。。。

[b][url=http://www.f-lab.cn/biosensors/mx96.html]生物分子相互作用分析仪[/url][/b]是采用[b]阵列成像SPR[/b]技术的[b]生物分子相互作用传感仪[/b]器和[b]成像SPR仪[/b],是全球领先的多重[b]生物分子相互作用分析[/b]的[b]SPR成像系统[/b]。生物分子相互作用分析仪mx96可监测传感器表面上高达96个配点，使用生物分子相互作用分析仪mx96温度控制96位微孔板自动进样，样品在芯片系列注射，每次注产生96个相互作用。它是可以无人执行的从96孔板在一个完整的运行多达10000个传感由此产生以及包括控制的任务。生物分子相互作用分析仪具有样品注射的来回流动，只有100µ L的样品也能检测由生物分子相互作用分析仪与CFM标准生物传感器相结合，可以从较低的吞吐量机转换成更高的吞吐量阵列系统。对于多路复用非常重要的应用程序，阵列可能非常强大，因为随着实验规模的增大，在其他平台上的采样消耗和仪器运行时间可以迅速扩展。例如，数组可以两两竞争96单克隆抗体的-几乎10000个人相互作用-只使用200每个单抗µ L和一个24小时运行的几天到几个月持续运行的平台。[img=生物分子相互作用分析仪]http://www.f-lab.cn/Upload/MX96.jpg[/img]生物分子相互作用分析仪：[url]http://www.f-lab.cn/biosensors/mx96.html[/url]

想做小分子和蛋白的结合，看文献非共价相互作用常用Q-TOF，我们这边有一太Bruker的MALDI不知道能不能做呢？如果做应该咋做呢？还有，MALDI测大分子量的蛋白漂的很严重，如果我蛋白有二聚体，但是不是很能确定，想通过质谱验证一下，但是担心经gel fitration纯化后的二聚的蛋白在质谱中也会被打断测不到，因为我现在想知道蛋白活性中心究竟是二聚的形式还是单体形式，希望能看到二聚和单体的蛋白和那些cofactors的作用，不知道能不能实现啊？

BIA是英语“Biomolecular Interaction Analysis” 的缩写，BIA提供了实时观察生物分子间相互作用的技术。通过它能观察两种分子结合的特异性，能知道两种分子的结合有多强，还能了解生物分子的结合过程共有多少个协同者和参与者。BIA可以让得到用其他技术方法难以得到的结果，因为它可以实时反映分子结合过程中每一秒变化的情况。无需借助标记物进行分析使BIA广泛应用于各类生物体系的测定，从各类小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。一、 动力学常数的测定BIA可以用来分析不同抗体与抗原的结合与解离常数，相对与以前其它检测抗体效价的方法，BIA不仅快速，可以准确定量，和可以让你看到整个结合和解离的动态过程。二、浓度的测量三、分子相互作用模式的研究我们想知道两分子之间相互作用的比例，结合位点，抗原决定族的位点，都可以用BIA来完成。研究突变后活力大小的变化，研究复合物形成次序等等。四、蛋白质功能分析复合物的组装可以看成研究蛋白功能的一个例子。也可以设计其它的一些实验，只要前后芯片表面的质量有变化就可以利用BIA技术来检测。详情请见:[URL=http://biotech.ustc.edu.cn/html/yiqijieshao/2006/0727/2.html]http://biotech.ustc.edu.cn/html/yiqijieshao/2006/0727/2.html[/URL]

为探究生物进程的分子机制，需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用。研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下：一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中，人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能，丰富了酵母双杂交系统的功能。此外，酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。二、噬茵体展示技术在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单克隆抗体的DNA序列，当噬菌体生长时，表面就表达出相应的单抗，再将噬菌体过柱，柱上若含目的蛋白，就会与相应抗体特异性结合，这被称为噬菌体展示技术。此技术也主要用于研究蛋白质之间的相互作用，不仅有高通量及简便的特点，还具有直接得到基因、高选择性的筛选复杂混合物、在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性等优点。目前，用优化的噬菌体展示技术，已经展示了人和鼠的两种特殊细胞系的cDNA文库，并分离出了人上皮生长因子信号传导途径中的信号分子。三、等离子共振技术表面等离子共振技术（SurfacePlasmonResonance，SPR）已成为蛋白质相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一种纳米级的薄膜吸附上“诱饵蛋白”，当待测蛋白与诱饵蛋白结合后，薄膜的共振性质会发生改变，通过检测便可知这两种蛋白的结合情况。SPR技术的优点是不需标记物或染料，反应过程可实时监控。测定快速且安全，还可用于检测蛋白一核酸及其它生物大分子之间的相互作用。四、荧光能量转移技术荧光共振能量转移（FRET）广泛用于研究分子间的距离及其相互作用;与荧光显微镜结合，可定量获取有关生物活体内蛋白质、脂类、DNA和RNA的时空信息。随着绿色荧光蛋白（GFP）的发展，FRET荧光显微镜有可能实时测量活体细胞内分子的动态性质。提出了一种定量测量FRET效率以及供体与受体间距离的简单方法，仅需使用一组滤光片和测量一个比值，利用供体和受体的发射谱消除光谱间的串扰。该方法简单快速，可实时定量测量FRET的效率和供体与受体间的距离，尤其适用于基于GFP的供体受体对。五、抗体与蛋白质阵列技术蛋白芯片技术的出现给蛋白质组学研究带来新的思路。蛋白质组学研究中一个主要的内容就是研究在不同生理状态下蛋白水平的量变，微型化，集成化，高通量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工具，他也是芯片中发展最快的芯片，而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯片有的已经在向临床应用上发展，比如肿瘤标志物抗体芯片等，还有很多已经应用再眼就的各个领域里。六、免疫共沉淀技术免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术，其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)，若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA\|Pansobin”，因为SPA\|Pansobin比较大，这样复合物在离心时就被分离出来。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物四组分又被分开。然后经Westernblotting法，用抗体检测目的蛋白是什么，是否为预测蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的，符合体内实际情况，得到的蛋白可信度高。但这种方法有两个缺陷：一是两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；二是必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。七、pull-down技术蛋白质相互作用的类型有牢固型相互作用和暂时型相互作用两种。牢固型相互作用以多亚基蛋白复合体常见，最好通过免疫共沉淀（Co-IP）、Pull-down技术或Far-western法研究。Pull-down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白（生物素-、PolyHis-或GST-），从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系，从体外传路或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。

NMR能区分分子间相互作用和分子内相互作用么？能否举个例子？

生物大分子分离【分享】[~144928~]

Biacore是基于表面等离子体共振（SPR）技术来实时跟踪生物分子间相互作用的技术，广泛应用于蛋白-蛋白、蛋白-小分子、蛋白-核酸、抗原-抗体等各种生物分子之间的相互作用测试，是被公认的检测分子互作的有效方法。本

朊蛋白与免疫系统相互作用的新发现http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011123113381385.jpg　　12月29日，据《每日科学》报道，痒病是一种神经退行性疾病，它可以作为其他由蛋白积累致组织畸形(蛋白质病)疾病的模型，如阿尔兹海默氏病和帕金森氏病。有关这些基因的许多问题仍然悬而未决。在一个新的博士论文研究中，发现了数个与阮蛋白(PrPSc，与疾病的发展有关)摄取相关的因子以及朊蛋白是如何与肠道内的免疫细胞相互作用。　　羊瘙痒病属于一组被称为"传染性海绵状脑病(TSE)"的疾病，因为它们可以在动物个体之间传播，并导致大脑产生海绵状、退行性改变。这些疾病不仅折磨羊，还折磨牛(牛海绵状脑病，又称疯牛病，BSE)、鹿(鹿慢性消耗性疾病，又称疯鹿病，CWD)以及人类(克雅氏病CJD)。它们在一定程度上也可以在物种见传播，在20世纪90年代，超过200人经由食物感染而患上了克雅氏病。　　传染性海绵状脑病(TSE)，或者称阮病毒疾病，被认为是感染了一种能致病的蛋白质变体--朊蛋白，它是机体细胞的正常组成部分，在脑中含量最为丰富。一般而言，阮病毒疾病可能是传染的、遗传的或偶发/自发的。当正常的朊蛋白突变成致病的变种，疾病便发生了，变种朊蛋白在空间结构上与健康的朊蛋白不同。由于变种的朊蛋白具有不同的空间结构，机体细胞很难降解它，因此它就一直在积累。　　因为朊蛋白(PrPSc)是在疾病早期在肠道系统的淋巴组织中被发现，推测它是经由肠胃道传染。在兽医学家Caroline Piercey Akesson博士研究杂交仪期间，研究了朊蛋白在肠道内的吸收，从而对疾病发展的早期阶段所发生的过程有了新的了解。与早先的推测相反，她通过免疫电镜证明阮蛋白不是直接从肠道转运到肠道相关的的淋巴组织。相反，她发现朊蛋白自由地穿过或穿进肠道淋巴组织之外的淋巴细胞。　　树突状细胞据推测发挥着"看门人"的作用，它决定机体能容忍什么以及当面对外来物时该策划哪一种免疫防御反应。Akeeson的目标之一就是树突细胞与朊蛋白摄取之间的相互作用。首先，需要了解正常的羊肠道内树突状细胞的特点;其次，去调查哪一类型的细胞与阮病毒的摄取有关。　　她的研究结果表明，不是树突状细胞，而是巨噬细胞负责朊蛋白的摄取。Akesson的研究揭示，朊蛋白利用了肠道中大分子物质摄取的正常生理通道，这可能对机体的免疫监视系统有显著影响。一个可能的后果就是免疫耐受被激活，从而阻碍了肠道对所吸收的朊蛋白的正常免疫反应。　　今后的研究能够揭示免疫细胞是如何运输朊蛋白及机体是如何处理朊蛋白，这将具有非常重要的意义，不仅是为了提供更多的关于痒病的知识，还为研究人类和其他动物中神经退行性蛋白质病提供重要见解。　　Caroline Piercey Akesson于12月20日在挪威兽医科学系进行了博士论文答辩，论文的题目是：研究阮病毒的摄取及其与羊肠道中免疫细胞的早期相互作用。

请问这类核磁一般要扫描测试多长时间呢？听说通常解出一个生物大分子的结构所需要时间是2个多月？这部分的时间大部分都花在解谱上么？

向大家请教个问题，做生物大分子如菌种代谢物（分子量约2万到3万）的核磁共振结构解析，是不是需要至少500MHz的磁场，做的过程中及解谱与化学上的核磁有些什么差异？多谢高手指点。

“生物大分子多维核磁共振”一书由夏佑林，吴季辉，刘琴及施蕴渝编著，中国科学技术大学出版社出版。该书介绍了多维核磁共振波谱学基本原理及其在结构生物学中的应用。全书分为13章，内容包括核磁共振基本理论，一维多脉冲实验，二维NMR基本原理，蛋白质结构测定，蛋白质的稳定同位素标记，三维四维NMR波谱，蛋白质折叠，酶反映机理研究，核酸和糖的结构测定，各种选择性实验，膜和膜蛋白的固态NMR研究以及核磁共振成像。该书参考了国内外一些核磁共振优秀教材的内容，并作了很好的归纳总结。

现在想了解一下有关核磁在生物大分子方面的应用文献，不知如何下手。哪位比较清楚，给个简要介绍（提纲就可以），我去查查有关方面的最新进展。

本人对X射线晶体学很陌生。请问：1. 当前X射线仪器主要又哪几种。2. 测定生物大分子（蛋白质）主要应用哪种仪器，是X射线衍射仪吗？

1064，532，266，213，193及飞秒与物质相互作用，哪几个可以归为一类？即有几种相互作用机理？

请问做生物大分子，如多肽和蛋白，一般浓度为多少比较合适？是否需要用H2O/D2O=90%:10%做溶剂？D2O不会把活泼H交换掉么？是否需要做与生理条件类似的缓冲溶液？二维COSY/TOCSY/NOESY或ROESY谱图怎么压水峰？一般做NOESY的时候混和时间取多少比较合适？

高分子间相互作用的特点和意义

生物大分子溶液的粘度测定怎么测，用那种粘度计?

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=154964]生物大分子的共振光散射光谱[/url]

大家都用什么类型的色谱柱来分离分析蛋白质、多肽等生物大分子物质？国内越来越多的人在该领域进行研究，我也希望在生物大分子物质分离纯化方面能够与大家进行交流，请各位多多指教。 我公司代理销售专门用于分离生物大分子的高质量的离子交换柱与体积排阻柱，如有需要资料，请留下联系方式或与我联系。赛分销售与技术中心，0755-26031977 谭先生，sepax@126.com。 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=9650]Sepax Proteomix离子交换色谱柱[/url][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/images/upfile/2005115103055.pdf]Sepax Nanofilm SEC 体积排阻色谱柱[/url]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=65325]生物大分子分离纯化的策略[/url]

Sepax Proteomix 离子交换柱是特别针对蛋白质、低聚核苷酸和多肽的分离而设计的，该柱具有分辨率高、柱效高以及回收率高的特点。填料基质是刚性、球形、高度交联的聚苯乙烯-二乙烯基苯（PS/DVB）颗粒。有多孔和无孔PS/DVB两种。多孔PS/DVB树脂颗粒大小有5、10um，孔径为300Å 和500Å 。无孔树脂颗粒大小有3、5、10um。PS/DVB树脂表面键合有高度亲水的中性聚合物薄层，其厚度可达纳米级。疏水的PS/DVB树脂表面完全被亲水涂层材料覆盖，可消除固定相与生物分子之间的非特异性相互作用，从而对生物分子分离具有很高的柱效和回收率。离子交换功能基团化学键合在亲水层顶端。独特的化学技术可合成紧密均匀的离子交换层。 更多产品信息请与我们联系，深圳赛分销售与技术中心0755-26031977谭先生sepax@126.com。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=9173]Sepax Proteomix 离子交换色谱柱[/url]

有机分子中，有时候远程相互作用会对氢的化学位移有比较大的影响，但有时候又可以忽略，什么情况下可以，什么情况下不可以了？

为了促进国际学术交流，研讨生物大分子核磁共振研究以及技术的最新进展，将于2009年6月25日到6月29日在中国科学技术大学生命科学学院召开“生物大分子核磁共振研讨会，2009”，会议由中国科学技术大学承办。会议将交流生物大分子核磁共振领域最新的研究方法和国际研究前沿及发展动态。报告内容包括， 应用液体，固体核磁共振方法研究生物大分子（包括水溶性蛋白及其复合物，核酸，膜蛋白）的三维结构和不同时间尺度下的动力学分析，应用核磁共振方法进行先导药物筛选，候选药物优化，及代谢组学分析等相关领域的理论，方法，技术及其在生物化学，细胞生物学，药理学等生物学领域应用的未公开发表过的研究工作。会议组委会已经成功邀请到美国国家科学院院士，美国国立卫生研究院研究员，著名核磁共振科学家Ad Bax博士作会议主题报告。近30位国际，国内知名华人核磁共振科学家（包括学术界，工业界）已经应邀出席研讨会并作学术报告。具体研讨会信息请见网站：http://bionmr.ustc.edu.cn/snbm2009 附件是第一轮通知，我们诚挚地欢迎您参加此次研讨会。并请将本通知传达给感兴趣的同行，同学！非常感谢！田长麟研讨会秘书长02/16/2009

将来能否将（三维）核磁的谱图信息直接高效的转化为生物大分子的三维结构？

生物大分子材料，主要是指：蛋白质类、多糖类、组织细胞、血液及其替代品等大分子量、大尺寸/大体积样品。蛋白质集聚体的研究，以及其它生物大分子材料的分离与分析，是非对称流动场AF4MT的重要应用领域。postnova公司的中温型流动场AF4MT，主要应用之一就是生物大分子材料，特别是利用其优异的半导体制冷的柱箱对场流分离通道盒进行低于室温、高于0摄氏度的精确控温，实现蛋白质样品的高效分离，取得了很好的应用效果。再结合多角激光散射检测器、静态/动态激光粒度仪和生物质谱仪等在线定性检测技术，可以获得生物大分子材料的大量构型信息。也可结合馏分收集器，将样品组分收集下来，再进行其它分析检测，如：MALDI-TOF、NMR、AMF等等。附件的文件，介绍了AF4MT 对蛋白质混合物的分离并结合光散射检测器对其进行分析。近年，postnova公司又推出了中空纤维流动场 Hollow Fiber Flow FFF，简称HF5，这项技术主要针对生物大分子材料，分离通道是一次性使用的，具有很好的分离效果。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=35757]生物大分子的液相色谱分离和制备 第二版[/url]