产品介绍:PureCube Rho1D4 Agarose是针对Rho1D4标签膜蛋白的亲和层析产品,Rho1D4是一种含有9个氨基酸的长链亲和标记物(TETSQVAPA),可用于高特异性亲和蛋白纯化。库柏生物的PureCube Rho1D4琼脂糖纯化树脂是为FPLC蛋白的纯化测定而制造的。具有Rho1D4标签的膜蛋白可以通过PureCube Rho1D4 Agarose,利用Rho-tag高特异性来纯化,它在蛋白质产量和纯度方面甚至胜过更常用的Flag-Tag标记。本产品由通过Rho1D4抗体进行功能化40 μm琼脂糖微球组成。德国Cube Biotech研发团队拥有逾40年经验在膜蛋白的表达、纯化和结晶等研究经验,为您提供专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列高质量PureCube Rho1D4琼脂糖填料、磁珠和预装柱,以及具有较高流速XL琼脂糖同系列产品。产品优势:1)德国制造,欧美优质膜蛋白纯化产品供应商;2)膜蛋白纯化的理想解决方案,可以获得纯净且活性的膜蛋白;3)结合能力可高达3-4mg/mL;4)高度特异性纯化带有标签的重组膜蛋白;5)可重复再生使用;6)良好的流量分布和最小空隙体积;7)兼容常用的色谱仪器;8)配合Nanodisc使用,是目前非常有效的膜蛋白提取解决方案,数家科研院校正在使用;9)高性价比的膜蛋白纯化产品! 产品详解:对膜蛋白提取有高特异性和高产量每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验,以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用,辅以优化过的纯化操作步骤,能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化溶于Fos-Choline-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达,再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液,4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段,可以通过排阻层析的方法实现。 图1:用PureCube Rho1D4琼脂糖纯化CXCR4。大肠杆菌裂解液(TL)溶解在Fos-Choline-14中,溶解的组分(SF)与装有Rho1D4抗体的免疫亲和层析柱相结合。平衡组分中没有测得损失目标蛋白,经分光光度计测定,CXCR4在洗脱组分(E1-E4)中得浓度范围在0.6-1.0mg/mL。 蛋白表达系统纯度产率(所有回收蛋白)采取的纯化步骤hVN1R1G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%1mg/1g细胞Rho1D4 IAC+SECFPR3G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%2mg/6g细胞Rho1D4 IAC+SECTAAR5G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%1mg/9g细胞Rho1D4 IAC+SECOR131-2G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%2.9mg/10g细胞Rho1D4 IAC+centrifugationhOR17-4G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%7.5mg/2.5L培养物Rho1D4 IAC+SEChOR17-4G蛋白偶联受体无细胞小麦胚芽提取物70%*0.3mg/mL反应溶液*Rho1D4 IAC+SECCD81四次跨膜蛋白可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)>95%26μg/3×10^7个细胞Rho1D4 IACAE1溶质载体S.啤酒系BJ545793%2.5mg/18L培养物Rho1D4 IAC 表1:有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族,该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC:免疫亲和层析;SEC:排阻层析。在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体,当时通过将抗体偶联到Sepharose上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此,Rho1D4系统(标签,偶联抗体的亲和基质,洗脱肽)开始用于少量膜蛋白的纯化,包括G蛋白偶联受体(GPCR),ATP结合转运体,溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。 图2:假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端,它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端(或N端)加上Rho1D4标签(如图1)。一旦配有该序列,即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白,并随后通过添加过量Rho1D4多肽,产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白,用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究,如:配体结合的特性,蛋白与蛋白间的相互作用。*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的;产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。 技术参数:用途Rho1D4 (TETSQVAPA)标记蛋白的高特异性亲和纯化特异性与Rho1D4标记蛋白的亲和性特殊功能强烈推荐用于膜蛋白的纯化 结合力3-4 mg / ml 琼脂糖磁珠配体Rho1D4 抗体粒径大小40 μm螯合剂稳定性在含有10 mM DTT 和 1 mM EDTA的缓冲液中稳定 罐装量以 50?%悬浮液进行运送所需设备 裂解液 洗涤缓冲液 洗脱缓冲液 冰水浴 可用50?mL离心管的可预冷离心机 (最小转速 10,000 x g) 50?mL 离心管 微量移液枪和微量移液枪尖 一次性重力柱,带盖底出口,2ml pH计 回转摇床 SDS-PAGE缓冲液,试剂和设备 可选择:Western Blot试剂和设备 推荐流速和保存温度0.25-1.0mL/min,4℃相关产品:1. 所有PureCube系列琼脂糖产品均提供用于自动液相色谱系统(如:FPLC)的预装柱(提供1mL);2. 用于稀释样品或用于pull-down实验,我们推荐使用PureCube Rho1D4 Magbeads磁珠;3. Rho1D4抗体:这种抗体作为分离物质来生产PureCube的Rho1D4琼脂糖。也可以在Western Blot实验或者ELISA实验中检测rho-tagged蛋白;4. Rho1D4多肽:在洗脱缓冲液中,Rho1D4多肽竞争结合到亲和层析凝胶上然后释放标签蛋白,相对于改变洗脱液的pH值来说提供了更温和的洗脱环境。Cube Biotech 提供了一系列的Rho1D4肽段,这些肽段已经被PureCube Rho1D4琼脂糖验证;5. 配合Nanodisc产品使用,是有效的膜蛋白提取解决方案。6. Rho1D4多肽可以单独购买,也可以购买PureCube Rho1D4试剂盒套装。详情请参见订货信息以及公司官网。What our customers say:订购信息:33101PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml)33102PureCube Rho1D4 Agarose (5 ml)33103PureCube Rho1D4 Agarose (10 ml)33301PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml)33305PureCube Rho1D4 Cartridge (1x5 ml)33199Rho Starter Set 1: PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg)33299Rho Starter Set 2: PureCube Rho1D4 MagBeads (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg)33399Rho Starter Set 3: PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg)16201Rho1D4 peptide (5 mg)16203Rho1D4 peptide (25 mg)40020Rho1D4 Antibody (200 μg)
留言咨询