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问题:金黄利胆胶囊中獐牙菜苦苷的检测使用的是哪款液相色谱柱?答案:Diamonsil C18(2) 250 x 4.6 mm,5 μm (Cat#:99603)【活动奖励】幸运奖(2钻石币):抽奖软件,当天随机抽取3个回答正确的版友ID号(最后一个ID号,截止至下午3:00),每人奖励2个钻石币吕梁山(ID:shih20j07)ZHAOGUANGXI(ID:ZHAOGUANGXI)zengzhengce163(ID:zengzhengce163)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601151528_581980_1610895_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601151528_581981_1610895_3.png积分奖励:所有回答正确的版友奖励10个积分(幸运奖获得者除外)。【注意事项】同样的答案,每人只能发一次PS:该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”,回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容,无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除,即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================金黄利胆胶囊中獐牙菜苦苷的检测 样品制备制备方法1. 对照品:取獐牙菜苦苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液,即得。2. 供试品:取装量差异项下的本品内容物,研细,取0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。分析条件色谱柱Diamonsil C18(2) 250 x 4.6 mm,5 μm (Cat#:99603) 流动相A:甲醇 B: 0.02%磷酸溶液 梯度流速1.0 mL/min 柱温30 ℃ 检测器UV 240 nm 进样量10 μL 色谱图对照品(流动相溶解)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601150925_581904_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 31.716 1364094 29201 10895.002 0.945 -- *药典要求理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于4000供试品(流动相溶解)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601150925_581905_1610895_3.jpg 峰号 保留时间 min 峰面积 μV*s 峰高 μV 理论塔板数* N USP拖尾因子 分离度 1 31.988 685087 9880 4897.795 0.919 -- *药典要求理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于4000
摘要:目的:研究獐牙菜总苷的高效液相色谱指纹图谱,http://www.39kf.com/Txt2Img/iuy87612.png科学评价及有效控制其工艺和质量提供可靠方法http://www.39kf.com/Txt2Img/ju.png方法:利用HPLC-DAD方法,梯度洗脱,测定了10批獐牙菜总苷样品。色谱条件为: Kromusil C18分析柱(250mm×4.6 mm D, 5μm) ;柱温40℃;流动相A为10%甲醇-水,流动相B为80%甲醇-水,流动相A梯度洗脱(100%→0%),分析时间32 min, 0-15min A∶B从100%∶0→0∶100% , 15-32min保持在0% A;流速为1.0mL/min;检测波长为260nm。结果: 10批獐牙菜总苷样品得到的色谱指纹图谱有16http://www.39kf.com/Txt2Img/503.png共有峰,分为3个部分:保留时间0 - 10min,出现1个峰;保留时间10-15 min,出现9个峰,主要特征峰1-7号峰均在此区域,保留时间15-30 min出现5个峰。通过与对照品的保留时间、紫外光谱及LC/MS所得分子量信息, 1 - 7号峰分别鉴定为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、异荭草苷当药黄素、异当药黄素、獐牙菜山酮苷;时间15-30 min,出现6个峰。通过峰面积及含量测定结果,确定最强峰为1号峰。相同色谱条件下测定了不同工艺提取的獐牙菜提取物及獐牙菜药材的HPLC图谱,其结果与獐牙菜总苷有很好的相关性。结论 獐牙菜总苷的指纹图谱特征性及专属性强,可结合含量测定用于全面控制獐牙菜总苷的质量,确保每批产品的均http://www.39kf.com/Txt2Img/2008-9-13.png性。关键词: 獐牙菜; 总苷; 高效液相色谱; 指纹图谱
[size=14px] [/size] [size=14px]獐牙菜苷是一种从金银花(Lonicerae japonicae flos)中提取的具有生物活性的天然环烯醚萜,在各种心血管疾病中表现出强大的抗炎和抗氧化活性。已有研究表明獐牙菜苷可抑制NLRP3炎症小体减轻心肌缺血再灌注损伤,也有研究报道獐牙菜苷能够通过防止钙超负荷和降低活性氧ROS水平来保护心肌细胞免受乌头碱诱导的伤害。然而獐牙菜苷作用的具体机制仍然未知,其在解决压力超负荷引起的心脏重塑方面的有效性仍有待探索。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]1、獐牙菜苷改善Ang II诱导的TAC小鼠心肌细胞肥大表型和心脏功能[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]作者前期研究已经发现獐牙菜苷对心脏肥大的保护作用(J. Ethnopharmacol. 2021)。为了验证这种保护作用,作者研究了獐牙菜苷对多种心肌细胞的影响,发现獐牙菜苷显著降低AngII刺激的ANP和BNP基因表达,以及心肌细胞横截面积,进一步研究发现獐牙菜苷显著增强小鼠的心脏功能。此外,心肌组织RNA测序发现獐牙菜苷干预的差异表达基因富集在含胶原蛋白的细胞外基质、钙信号和细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路,表明獐牙菜苷主要通过调节心脏纤维化和炎症机制来增强心力衰竭小鼠的心脏功能。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]2、獐牙菜苷抑制 Ang II 诱导的心肌细胞炎[/size] [size=14px]症反应[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]有研究报道AngII可诱导心肌细胞肥大同时激活NF-κB/NLRP3。作者检测发现獐牙菜苷处理后,NF-κB和NLRP3的表达显著降低,且ROS和MDA浓度显著降低,IL-6、IL-1β和IL-18等细胞因子显著降低。这些结果表明,獐牙菜苷治疗抑制了Ang II在心肌细胞中诱导的炎症反应。图片[/size] [size=14px]3、獐牙菜苷抑制Ang II诱导的CaMKIIδ/NF-κB/NLRP3相关的炎症反应[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]有研究报道心肌细胞NF-κB/NLRP3机制的激活与CaMKⅡδ相关。作者发现在Ang II刺激下,心肌细胞中CaMKⅡδ基因上调,而獐牙菜苷处理后, CaMKⅡδ基因和蛋白水平降低。此外,獐牙菜苷处理抑制Ang II导致的caspase-1、NLRP3和p20的高水平表达,抑制NF-κB转位入核,从而抑制炎症小体活化。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]4、獐牙菜苷抑制NF-κB/NLRP3依赖于CaMKIIδ[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]接着作者利用siRNA降低心肌细胞中CaMKⅡδ的水平,发现在CaMKⅡδ 沉默的细胞中,獐牙菜苷对NLRP3炎症小体激活的抑制作用被抵消,NF-κB p65 核质比水平被抵消,抗炎作用被抵消。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]5、CaMKⅡδ作为獐牙菜苷的直接结合蛋白[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]为了进一步验证獐牙菜苷与CaMKIIδ之间直接互作的可能性,作者进行了分子对接、细胞热位移分析和SPR。结果均显示獐牙菜苷与CaMKIIδ直接结合,且獐牙菜苷与CaMKIIδ的 ASP157、LYS43形成氢键。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]6、獐牙菜苷调节CaMKIIδ/NF-κB/NLRP3抑制TAC/AngII小鼠心肌炎[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]接着作者构建TAC小鼠模型和皮下渗透微型泵持续输注AngⅡ小鼠模型。此外,还通过尾静脉注射AAV-CaMKⅡδ在小鼠心肌中诱导CaMKⅡδ的高表达。TAC/AngⅡ小鼠显示IL-6、IL-1β和IL-18增加,而獐牙菜苷可将这些水平恢复正常。在小鼠心肌中高CaMKIIδ表达后,獐牙菜苷对TAC/Ang II诱导的IL-6、IL-1β和IL-18升高的抑制作用并没有增强。此外,獐牙菜苷降低了心脏组织中NF-κB p65的核质比水平,并且在 CaMKⅡδ 高表达条件下不能进一步阻断,表明獐牙菜苷能抑制CaMKⅡδ/NF-κB/NLRP3的活化,从而减轻TAC/AngⅡ引起的炎症反应,降低心脏成纤维细胞的活化。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]7、獐牙菜苷改善小鼠TAC诱导的心脏重塑[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]最后作者确定了獐牙菜苷对心脏重塑的影响。发现獐牙菜苷降低了TAC小鼠的心脏重量/体重,降低心脏组织中ANP和BNP的mRNA水平,减轻了TAC小鼠的肥大性变化并减少了心室重塑面积,降低心肌细胞损伤标志物cTnT水平,降低α-SMA和胶原蛋白I水平,这些发现表明獐牙菜苷在心肌重塑中的保护作用。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]总结[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]研究发现獐牙菜苷通过抑制炎症来减少心肌纤维化,最终改善压力超负荷引起的心力衰竭。机制上,獐牙菜苷可以直接与心肌细胞中的CaMKIIδ结合,从而抑制ROS介导的 NF-κB/NLRP3 通路,降低 IL-1β、IL-18 和 IL-6 的水平,獐牙菜苷有望成为一种靶向 CaMKIIδ的药物,用于治疗心力衰竭。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]图片[/size]