荧光蛋白观测镜

大肠杆菌中带有绿色荧光蛋白的基因，想要拍照的话，是用油镜还是多大倍数的物镜？显微镜是奥林巴斯的，软件是MIE。高手指教一下，谢啦

绿色荧光蛋白等电点是多少？

生物、化学是一家。[em0814]Kary Mullis因为发明PCR技术而获得了1993年的诺贝尔化学奖，但谁都知道PCR的意义在于分子生物领域；15年后Roger Y. Tsien因为绿色荧光蛋白GFP的发现而获得了化学奖，不过GFP还是因为其分子标记能力而在生命科学领域有着广泛的研究和应用。本帖应景请大家谈谈GFP，形式自由，可以发收集的研究进展等资料，也可以谈谈自己对GFP的研究或了解，或者说说感想也行。还是老原则：质优者额外加分。

生物标记三部曲：绿色荧光蛋白(GFP)、辣根过氧化物酶(HRP)和小型单线态氧制造者(MiniSOG)【towersimper注：本文为译文，每篇都有部分改动，仅用作研究之用，不得用作商业开发，转载请标明翻译者towersimper，第一篇来自Sowmya Swaminathan, Nature Cell Biology, "GFP: the green revolution", doi:10.1038/ncb1953, October 1, 2009；第二篇来自Andy, brainslab.wordpress.com,"Horseradish peroxidase as marker for anatomical em", April 3, 2011； 第三篇来自Andy, brainslab.wordpress.com, "MiniSOG, a light and electron microscopy fusable marker", April 16, 2011】 第一篇：绿色荧光蛋白: 绿色革命http://bbs.bioon.net/bbs/data/attachment/album/201107/23/1829154rjsutzjgu2tw4hf.jpg来自秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的两个触觉感受器神经元的细胞体(cell body)用编码β-微管蛋白的基因表达的绿色荧光蛋白标记，图片来自doi:10.1126/science.8303295.1994年，Chalfie等人在Science杂志发表一篇报道，表明来自维多利亚水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)，在没有任何A. Victoria的辅助因子存在下，能在活着的细菌和线虫细胞中用作蛋白定位和表达的标记。这种显示GFP作为体内研究蛋白的工具基本上改变了细胞生物学家能够解决的问题的性质和范围。1962年，Shimomura和他的同事们在A. victoria生物发光蛋白水母素(aequorin)的纯化过程中偶然间第一次发现了GFP。1974年，Morise和他的同事们在随后的纯化、晶体形成和从水母素到GFP能量转移的体外重建过程中，为GFP的荧光性质提供启迪，而且证实GFP接受来自水母素的能量转移后发射绿光。在此之后许多年，在外源系统中GFP是否需要水母素和可能来自水母的其他因子发出荧光，这仍然是一个公开的问题。1992年，也就是在GFP发现后的30年，Prasher等人克隆了编码GFP的基因，就为实验上评估它用作蛋白质的体内标记铺平道路。而在两年后，Chalfie等人证实当GFP在细菌和线虫细胞中表达时，它能够发出荧光。在线虫中，GFP是在一个表达β-微管蛋白的基因启动子的控制下表达的。它在线虫特异性神经元中的时空表达模拟了内源性β-微管蛋白基因的表达，因而证明GFP能够作为一种可靠的标记以便监控基因表达模式。此后不久，Roger Tsien的实验室对天然GFP进行改造使之变得更加明亮和耐光，以及在一个与常规显微镜过滤器装置相匹配的波长下激发，因而增加了它的实际适应性。GFP技术的下一个突破便是开发GFP变异体产生蓝色、青色和黄色荧光蛋白，因而能够使得影像实验在细胞和有机体中采用多种标记的蛋白。绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。而EGFP是增强型的GFP (enhanced GFP)，发生了双氨基酸取代，亮氨酸(Leu)取代GFP上第64位苯丙氨酸(Phe)，苏氨酸(Thr)取代了GFP上的第65位丝氨酸(Ser)，与GFP相比，具有更强更稳定的绿色荧光。黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)其序列与GFP基本相同，不同之处就是把第203位Thr以Tyr取代，这样的GFP不发出绿色荧光，而发出较长波长的黄色荧光。青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)与此类似，也是GFP第66位Tyr(酪氨酸)被Thr(色氨酸)所取代的结果，发青色荧光。由此可见，GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似，只有1-2个氨基酸残基的变化。

第一篇来自Sowmya Swaminathan, Nature Cell Biology, "GFP: the green revolution", doi:10.1038/ncb1953, October 1, 2009；第二篇来自Andy, brainslab.wordpress.com,"Horseradish peroxidase as marker for anatomical em", April 3, 2011；第三篇来自Andy, brainslab.wordpress.com, "MiniSOG, a light and electron microscopy fusable marker", April 16, 2011第一篇：绿色荧光蛋白: 绿色革命http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131175417948693.jpg来自秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的两个触觉感受器神经元的细胞体(cell body)用编码β-微管蛋白的基因表达的绿色荧光蛋白标记，图片来自doi:10.1126/science.8303295.1994年，Chalfie等人在Science杂志发表一篇报道，表明来自维多利亚水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)，在没有任何A. Victoria的辅助因子存在下，能在活着的细菌和线虫细胞中用作蛋白定位和表达的标记。这种显示GFP作为体内研究蛋白的工具基本上改变了细胞生物学家能够解决的问题的性质和范围。1962年，Shimomura和他的同事们在A. victoria生物发光蛋白水母素(aequorin)的纯化过程中偶然间第一次发现了GFP。1974年，Morise和他的同事们在随后的纯化、晶体形成和从水母素到GFP能量转移的体外重建过程中，为GFP的荧光性质提供启迪，而且证实GFP接受来自水母素的能量转移后发射绿光。在此之后许多年，在外源系统中GFP是否需要水母素和可能来自水母的其他因子发出荧光，这仍然是一个公开的问题。1992年，也就是在GFP发现后的30年，Prasher等人克隆了编码GFP的基因，就为实验上评估它用作蛋白质的体内标记铺平道路。而在两年后，Chalfie等人证实当GFP在细菌和线虫细胞中表达时，它能够发出荧光。在线虫中，GFP是在一个表达β-微管蛋白的基因启动子的控制下表达的。它在线虫特异性神经元中的时空表达模拟了内源性β-微管蛋白基因的表达，因而证明GFP能够作为一种可靠的标记以便监控基因表达模式。此后不久，Roger Tsien的实验室对天然GFP进行改造使之变得更加明亮和耐光，以及在一个与常规显微镜过滤器装置相匹配的波长下激发，因而增加了它的实际适应性。GFP技术的下一个突破便是开发GFP变异体产生蓝色、青色和黄色荧光蛋白，因而能够使得影像实验在细胞和有机体中采用多种标记的蛋白。绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。而EGFP是增强型的GFP (enhanced GFP)，发生了双氨基酸取代，亮氨酸(Leu)取代GFP上第64位苯丙氨酸(Phe)，苏氨酸(Thr)取代了GFP上的第65位丝氨酸(Ser)，与GFP相比，具有更强更稳定的绿色荧光。黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)其序列与GFP基本相同，不同之处就是把第203位Thr以Tyr取代，这样的GFP不发出绿色荧光，而发出较长波长的黄色荧光。青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)与此类似，也是GFP第66位Tyr(酪氨酸)被Thr(色氨酸)所取代的结果，发青色荧光。由此可见，GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似，只有1-2个氨基酸残基的变化。在GFP发现后的将近半个世纪以来，因为发现和开发绿色荧光蛋白，2008年诺贝尔化学奖被授予给Osamu Shimomura, Martin Chalfie和Roger Tsien，来表彰这次发现给后世带来的巨大影响。参考文献：Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. W. & Prasher, D. C. Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science 263, 802–805 (1994).Shimomura, O., Johnson, F. H. & Saiga, Y., Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan Aequorea. J. Cell. Comp. Physiol. 59, 223–239 (1962).Morise, H., Shimomura, O., Johnson, F. H. & Winant, J. Intermolecular energy transfer in the bioluminescent system of Aequorea. Biochemistry 13, 2656–2662 (1974).Prasher, D. C., Eckenrode, V. K., Ward, W. W., Prendergast, F. G. & Cormier, M. J. Primary structure of the Aequorea victoria green-fluorescent protein. Gene 111, 229–233 (1992).Tsien, R. Y. The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67, 509–544 (1998).第二篇：辣根过氧化物酶作为解剖学电子显微镜(anatomical electron microscopy)的标记要绘制诸如视网膜的大容量组织中的突触联系(synaptic connection) James R. Anderson等人于2009年就已经主张应当将分子表达谱(molecular profiling)与电子显微镜图片相关联。如今，这里给出一个例子来说明分子表达谱仪(molecular profiler)如何得到很好的利用。Jianli Li等人采用电穿孔技术产生将携带有靶向到细胞膜的辣根过氧化物酶(membrane-targeted horseradish peroxidase, mHRP)基因的表达构建物导入神经元。辣根过氧化物酶发射可放大的波长为428nm的荧光。这些研究人员就使用它作为解剖学上的标记，与蝌蚪神经元的连续切片电子显微镜图片(serial section electron microscopy, SCEM)在空间上相互关联。辣根过氧化物酶的优势之一在于它在包括线粒体/小泡(vesicle)在内的细胞膜上均匀分布。它也有助于鉴定长轴突(axon)/小直径的树突(dendrite)。但是另一方面，不同于其他的标记，它不得不在动物仍然活着的时候通过电穿孔技术导入细胞才有效果。下面是一系列电子显微镜图片，其中远侧树突分支(distal dendritic branch)，蓝色显示；带有轴突末端(axon terminal, 用粉红色显示)的突触，用白色箭头符号指示：http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131175420478195.jpg比例尺=1微米当从向右观看这一系列图片时，你能够看到树突如何缩减，而研究人员能够在他们的微回路(microcircuit)模型中重构这些图片。

[font=宋体][font=宋体]蛋白标签（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）又称为标签蛋白，是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]体外重组技术，将目的蛋白与其融合表达形成的一种多肽或蛋白。这种标签有助于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等操作。随着技术的不断进步，研究人员已经成功开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。然而，由于不同的蛋白标签具有各自的特性，因此在质粒构建过程中常常会遇到多种问题。今天，我们将深入探讨蛋白标签的各个方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白标签类型[/b][/font][font=宋体]蛋白标签主要分为三类，适用于不同的应用场景：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 [/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。最常用的表位标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②亲和标签一般较长，可增加蛋白溶解度，广泛应用于重组蛋白的纯化，如[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）、红色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]RFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。例如，[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是一种由六个组氨酸残基组成的融合标签，可以插入目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，这使得[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]标签可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，从而对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，蛋白标签在重组蛋白生产中扮演着重要的角色，它们不仅提高了生产效率，还为蛋白的检测、纯化和示踪提供了便利。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]有：[/font][font=Calibri]His-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production][b]Myc-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]……义翘神州不仅可提供重组蛋白表达定制服务，也可提供对应标签抗体产品及融合蛋白标签切除常用工具酶，如[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]蛋白酶、[/font][font=Calibri]3C[/font][font=宋体]蛋白酶等。下图是具体蛋白标签的序列和大小介绍，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

[font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]fc[/font][font=宋体]融合蛋白？[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由免疫球蛋白（如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合，可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能，同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用，增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如，普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短，只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟，这限制了其在体内的持续作用时间。然而，通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合，重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍，从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外，延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率，减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白有哪些？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由至少两个结构域组成的蛋白，这些结构域由被连接起来的独立基因编码，因此能够作为一个单元被转录和翻译，产生单克隆多肽。现在几乎所有的重组蛋白都是利用融合结构域制备，也被称为[/font][font=宋体]“标签”（参阅重组蛋白标签的完整列表）。因此，融合蛋白又称融合标签蛋白或嵌合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大体上有两种类型的融合蛋白：第一种是由两个蛋白或蛋白亚单位端对端融合，通常由一个[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]连接，第二种是来自两个供体的氨基酸穿插在融合蛋白产物中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白应用：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白最重要的三个用途是：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]作为克隆基因纯化的辅助手段[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]作为报告的表达水平[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]作为组织化学标签，使蛋白质在细胞、组织或生物体中的位置可视化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白在纯化中可以通过亲和层析简单方便地纯化，如葡萄球菌蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](gst)[/font][font=宋体]、麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri](mbp)[/font][font=宋体]和纤维素结合蛋白。 重组融合蛋白最常用作报告构建体的融合伙伴，包括 β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合蛋白中，最多的一类称为荧光蛋白，如绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。 绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP) [/font][font=宋体]等荧光蛋白能够直接观察动态细胞内过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）是一种荧光蛋白，最初是从水母维多利亚发光管中分离出来的。 与荧光素酶不同，[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]具有不需要任何底物、荧光素以及 [/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]O2 [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]Mg2+ [/font][font=宋体]的优势。 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]在被蓝光或紫外线激发时会发出绿光，在许多情况下可用于活的、完整的细胞和生物体，从而确保 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]作为自发荧光蛋白的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白标签[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合标签中，既有短序列（如[/font] [font=Calibri]PolyHis[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PolyArg[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Streptag [/font][font=宋体]等），也有大蛋白（[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP [/font][font=宋体]等）。 在许多情况下，短序列不会影响分子的三级结构及其生物学特性，而大融合分子更常用于增强所需蛋白质的溶解度。 与短序列标签不同，需要从重组构建体中去除大的融合标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多融合标签，既包含经过充分验证的标签，也包含最近开发的具有各种特性和不同优缺点的标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font]

[font=宋体][b][font=宋体]抗绿色荧光蛋白[/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]抗体，小鼠单克隆[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Green fluorescent protein[/font][font=宋体]，绿色荧光蛋白）标签含有 [/font][font=Calibri]238 [/font][font=宋体]个氨基酸，分子量约为 [/font][font=Calibri]26.9 KDa[/font][font=宋体]，最先是 [/font][font=Calibri]1962 [/font][font=宋体]年下村修等在维多利亚多管发光水母（[/font][font=Calibri]Aequorea victoria[/font][font=宋体]）中发现的。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]标签在紫外线的照射下会发出绿色的荧光，而且与靶蛋白融合后不会显著地影响天然蛋白质的组装和功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凭借[/font] [font=Calibri]10 [/font][font=宋体]多年在蛋白表达和抗体制备领域的技术积淀，义翘神州自主研发了多款抗 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]标签抗体。高品质的抗 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]标签抗体可用于检测 [/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色荧光蛋白），满足多种应用的需求，包括蛋白印迹（[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]或免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]特异性：单克隆抗绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）识别[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]27 kDa[/font][font=宋体]）标记的融合蛋白。抗体与原核表达载体表达的融合蛋白反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫原：[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标记的融合蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生化[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]生理作用：[/font][font=Calibri]GFP ([/font][font=宋体]绿色荧光蛋白[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]是一种用于检查基因表达和蛋白定位的报告分子。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]用紫外线[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蓝光激发时会发出绿光。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]荧光保持稳定，可在活细胞中进行无创检测。[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]被认为是监测几种活细胞或生物体动态过程的工具。当在真核细胞或原核细胞中表达并被蓝光或紫外光照射时，[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]产生明亮的绿色荧光。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]外形：[/font][font=Calibri]0.01 M [/font][font=宋体]磷酸盐缓冲液 [/font][font=Calibri](pH 7.4)[/font][font=宋体]，含 [/font][font=Calibri]15 mM [/font][font=宋体]叠氮化钠[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]储存及稳定性：如需连续使用，请在[/font][font=Calibri]2-8[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]下储存，最长一个月。若需延长储存时间，可将溶液分装并冷冻。不建议反复冻融。如果长期储存时出现轻微浑浊，请在使用前通过离心澄清溶液。若工作稀释样品在[/font][font=Calibri]12[/font][font=宋体]小时内未使用完，则应丢弃。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]该如何选择表达克隆的标签[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白表达技术[/b][/url]现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以关注义翘神州：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

请教用荧光胺定量蛋白时有什么应该注意的地方？线性范围大概多少？

[b]LUYOR-3415RG双波长荧光蛋白激发光源[/b][url=http://www.luyor.net/upload/201812/1545624161.png][img=LUYOR-3415RG双波长荧光蛋白激发光源,380,350]http://www.luyor.net/upload/201812/1545624161.png[/img][/url][list][/list][b]详细描述[url=http://www.luyor.net/product/product165.html]LUYOR-3415RG[/url]双波长[url=http://www.luyor.net/product/product166.html]荧光蛋白激发光源[/url][/b] 美国LUYOR公司实验室仪器事业部致力于研究和开发荧光观测装备，其产品系列有 LUYOR-3415RG双荧光蛋白观测灯，[url=http://www.luyor.net/product/product168.html]LUYOR-3430[/url]、LUYOR-3260单荧光蛋白观测手电筒。荧光是各种各样细胞生物学、神经系统学及其他领域研究中的一种强大和广泛使用的工具。LUYOR的LUYOR-3415RG和LUYOR-3430、LUYOR-3260除了可用于筛选转基因生物外，还可以用于样本的预筛选、辅助解剖、用于珊瑚研究等，下面就列举一些实例：1. 有时候，研究者们需要对小鼠的伏隔核进行穿孔，以便进一步生化分析。如果能观测到共转染的荧光，就能很容易找到正确的穿孔部位。研究者们就是用LUYOR-3430、LUYOR-3260单荧光蛋白观测手电筒来观测荧光，从而找到正确穿孔位置的。2.研究者从小鼠大脑中提取[url=http://www.luyor.net/product/product166.html]GFP[/url]标记的背纹体。他们把这比喻成：从一个大一点的燕麦片中分离出一块小的燕麦片，这是很困难的。但是他们用的LUYOR-3415RG或LUYOR-3430、LUYOR-3260单荧光蛋白观测手电筒（激发光和眼镜组合），他们很容易看到大脑中的目标区域，从而让解剖更准确精确。3.用LUYOR-3415RG 双荧光蛋白观测灯和LUYOR-3430、LUYOR-3260单荧光蛋白观测手电筒，可以很快的检测样本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin标记）成功。4.用于结核分枝杆菌重组株的筛选 [img=IMG_8449.png,650,583]http://www.luyor.net/upload/201812/watermark/1545623271829953.png[/img]在结核分枝杆菌中成功构建了高效同源重组系统,利用该系统构建了rv1364c、pstP跨膜区、pstP胞外区三个突变株,得到双交换突变株的效率为25％ -62.5％,从双交换突变株得到无痕缺失突变株的效率为100％.通过gfp作为荧光标记基因,利用LUYOR-3421蓝光激发光设备和滤光眼镜,可以对平板上的基因缺失株直接进行快速判定。[b][url=http://www.luyor.net/product/product_66_1.html]激发光源[/url]激发出绿色荧光时，用黄色滤光镜观测，可检测含绿色荧光蛋白（GFP）的生物；激发光源激发红色荧光时，用红色滤光镜观测，可检测含红色荧光蛋白（DsRed）的生物。LUYOR-3415RG双荧光蛋白观察灯的用途：[/b]用于检测、筛选转绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（DsRed）基因的植物、动物及微生物，如水稻、玉米、斑马鱼、小鼠、细：菌、真菌等等。。。。[b]LUYOR-3415RG双荧光蛋白观察灯的产品优势：[/b]1． 大功率输出，无需暗室，也可轻松激发荧光。2．检测效率高，黑暗中检测一目了然3．LED寿命50000h，且系统稳定，可长时间使用4．直接检测，而无需用底物显色，所以安全，对被检测对象无伤害[img=IMG_8467.JPG,700,467]http://www.luyor.net/upload/201812/watermark/1545623290131337.jpg[/img][b]LUYOR-3415RG双荧光蛋白观察灯的选型:[/b]标准的[b]LUOYR-3415RG双荧光蛋白观测光源[/b]，只有RB-Royal Blue和GR-Green两种荧光激发装置，也就是说标准的[b]LUOYR-3415RG[/b]只能用于观测绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白。现在，您可以选择以下任何两种荧光装置，组装成您专属的LUOYR-3215双荧光蛋白观测光源啦。[table=100%][tr][td]光源后缀代号[/td][td]Wxcitation激发光[/td][td]Emission发射光[/td][td]可观测荧光[/td][/tr][tr][td]RB[/td][td]440nm[/td][td]500nm[/td][td]GFP,fluorescein[/td][/tr][tr][td]CY[/td][td]510nm[/td][td]550nm[/td][td]YFP,Venus,Lucifer Yellow[/td][/tr][tr][td]GR[/td][td]540nm[/td][td]600nm[/td][td]DsRed,dTomato[/td][/tr][tr][td]VI[/td][td]400nm[/td][td]460nm[/td][td]CFP,BFP...[/td][/tr][tr][td]UV[/td][td]360nm[/td][td]415nm[/td][td]DAPI[/td][/tr][/table][img=双波长荧光蛋白激发光源,634,439]http://www.luyor.net/upload/201511/watermark/1448267335335389.jpg[/img][b]1. LUOYR-3415R用于观测绿色荧光蛋白[/b]GFP：绿色荧光； fluorescein荧光素[b]2. LUOYR-3415C用于观测黄色荧光蛋白[/b]YFP：黄色荧光蛋白； Venus：金色； Lucifer Yellow：荧光黄[b]3. LUOYR-3415G用于观测红色荧光蛋白[/b]DsRed：红色荧光蛋白； dTomato：番茄红[b]4. LUOYR-3415V用于观测紫色荧光蛋白[/b]CFP：青色荧光蛋白； BFP：碱性胎儿蛋白[b]5. LUOYR-3415UV用于观测紫外光[/b]DAPI：蓝色荧光[b]6. LUOYR-3415L用于观测增强型绿色荧光蛋白[/b]egfp，mgfp：增强型荧光蛋白[b]LUYOR-3415荧光蛋白激发光源的物理技术参数：[/b][list=1][*]波长：可任意选择2种波长：365nm，400nm， 450nm， 485nm，520nm[*]质量：净重0.9kg，毛重：4kg，尺寸：180x200mm（长x高），头部直径120mm。[*]功率：单波长15w，总功率27w。[*]输入电压：交流100-260v，频率50/60Hz。[*]包装箱尺寸：400x300x150mm（长x宽x高）[*]距灯150mm处照射直径为180mm。[/list][b]LUYOR-3415荧光蛋白激发光源的标准配置：[/b]luv-50观察眼镜，luv-60观察眼镜，说明书，合格证，保修卡，铝合金手提箱。[b]LUYOR-3415荧光蛋白激发光源的主要产品应用：[/b][list=1][*]检测转绿色荧光蛋白（GFP）基因、红色荧光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥[*]检测转GFP、DsRed基因动物：小鼠、兔子、猴子等；[*]检测转GFP、DsRed基因微生物：细菌、真菌、酵母等；[*]检测GFP、DsRed基因组织特异性表达；[/list][img=IMG_8465.JPG,700,467]http://www.luyor.net/upload/201812/watermark/1545623309916878.jpg[/img] [b]荧光蛋白知识常见问题解答[/b][url]http://www.luyor.net/answer/answer149.html[/url][b]绿色荧光蛋白激发波长和红色荧光蛋白激发波长[/b][url]http://www.luyor.net/app/app148.html[/url][b]LUYOR-3415RG双波长荧光蛋白激发光源[/b][url=http://www.luyor.net/product/product165.html][color=#0066cc]http://www.luyor.net/product/product165.html[/color][/url][b]LUYOR-3260绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白激发led光源[/b][url=http://www.luyor.net/product/product166.html][color=#0066cc]http://www.luyor.net/product/product166.html[/color][/url][b]LUYOR-3421生物观察灯/蓝光手电筒[/b][url=http://www.luyor.net/product/LUYOR-3421.html][color=#0066cc]http://www.luyor.net/product/LUYOR-3421.html[/color][/url]2019年荧光蛋白激发光源产品样本（pdf文档）[img]http://www.luyor.net/app/app/ueditor/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif[/img][url=http://www.luyor.net/upload/file/201812/1545701086648488.pdf]2019实验室激发光源.pdf[/url][img=,700,757]http://www.luyor.net/upload/201906/watermark/1561825635620044.jpg[/img]上图为用LUYOR-3145RG照射黄芪根系中的dsred荧光蛋白的表达，图片由北京大学医学部提供。[img=,700,431]http://www.luyor.net/upload/201906/watermark/1561825635426014.jpg[/img]上图为用LUYOR-3145RG照射杨树愈伤组织中的gfp荧光蛋白的表达，图片由浙江农林大学提供。[img=,700,525]http://www.luyor.net/upload/201906/watermark/1561825635100707.jpg[/img]上图为LUYOR-3415RG照射烟草叶片中的GFP瞬时表达，图片由四川农业大学提供。[img=11111.jpg,700,525]http://www.luyor.net/upload/201907/watermark/1562419113435911.jpg[/img]上图为用LUYOR-3145RG照射大豆根系中的gfp荧光蛋白的表达，图片由华中农业大学提供。如果您是用于筛选玉米、小麦、水稻、拟南芥等种子，需要长时间工作，建议购买下面这款支架，它能解脱您的双手，满足您长时间筛选。 [img=3415zj.jpg,569,572]http://www.luyor.net/upload/201907/watermark/1561968081129792.jpg[/img][b][b][b][b][b][b][b][b][b][/b][/b][/b][/b][/b][/b][/b][/b][/b]美国路阳生产的激发光源主要有紫外激发光源、蓝光激发光源、绿光激发光源，主要用于自荧光物体、绿色荧光蛋白（GFP)、红色荧光蛋白（RFP)等生物的荧光蛋白的荧光激发，也可以用作荧光显微镜光源使用。美国路阳提供海底生物观察的水下荧光激发光源。

[align=center][b][/b][/align][align=center][b]Multifocal two-photon laser scanning microscopy combined with photo-activatable GFP for [i]in vivo [/i]monitoring of intracellular protein dynamics in real time[/b][/align][b]摘要[/b]使用[color=#ff0000]Lavision Biotec[/color]公司[b]多焦点双光子激光扫描显微镜[color=#ff0000]Trim Scope[/color][/b]来进行局部和选择性的蛋白激活以及细胞内蛋白动态的的量化调查。局部激活使用光激活绿色荧光蛋白(pa-GFP)和光学双光子激发来实现，以调查实时原位的细胞内动态。这个过程对于深入理解和建模活细胞内的调控和代谢过程极其重要。作为范例，既包含了一个核输入信号又包含了一个核输出信号的拟南芥MYB转录因子LHY/CCA1-like 1 (LCL1)被定量化调查。我们使用了由质粒编码的光激活绿色荧光蛋白(pa-GFP)融合蛋白和一个红色荧光转染标记联合转染的烟草BY-2原生质体，并pa-GFPLCL1在核内光激活后的快速向核外输出。作为对照，一个LCL1核输出阴性突变体仍然被束缚在核内。我们确定了由激活pa-GFP-LCL1的双向核运输和pa-GFP的扩散分别导致的核内荧光下降的51s和125s的平均时间常数。[b]材料与方法[/b][i]并行的64焦点双光子激光扫描显微镜[/i]Pa-GFP的激活和荧光的原位检测，通过基于根据蛋白动态监测需求改进的商业化系统([color=#ff0000]TriM Scope, LaVision Biotec[/color] Martini et al., 2005 Nielsen et al., 2001)多焦点2光子LSM检测(Fig. 1). 64焦点2光子LSM (Martini et al., 2006)包括一个倒置光学显微镜和一个可以产生从760nm到960nm的100fs激光脉冲的由固态激光器泵浦的锁模飞秒Ti:Sa激光器。用于激活和成像循环的波长选则通过一个允许5s内转换波长的ahome-built screw motorization来实现。激光扫描单元([color=#ff0000]TriM Scope, LaVision BioTec[/color]) 包括一个内置的预啁啾部分以补偿激光脉冲的色散，一个光束分光器部分和振镜扫描器。通过选择一组10个100%反光镜和50%分光镜，激发的NIR激光束在样品中被分为1, 2, 4,……, 64个激发焦点。这些数目可调的焦点在显微镜物镜(UPLAO60XW3/IR, NAD1.2 Olympus)的焦平面上被激光扫描单元中的2个扫描镜扫描。整个激活和测量过程在一个温度可控环境中在293±1K下进行。因为在保持每个焦点的能量沉积低于样品的退化极限的同时，多个焦点产生了相对高的双光子诱导荧光产额，成像可以30ms的时间分辨率进行。图像用一个背照明的EMCCD相机(IXON DV887ECS-UVB, Andor Technology)以non-descanned方式获取。激发的NIR激光束被引导通过一个分光镜 (2光子-Beamsplitter, Chroma)到物镜的后光圈上。为了成像深度和光谱荧光切片，倒置显微镜采用了机械聚焦驱动(MFD, Marzhauser)和一个程序控制滤波轮([color=#ff0000]LaVision-BioTec)[/color]。数据获取和实验控制由 TriM Scope的软件包Imspector(LaVision-BioTec)执行。操作和处理5维的数据列，包括光谱和时间数据轴，使用软件包Imspector ([color=#ff0000]LaVision-BioTec)[/color]，ImageJ (Rasband, 1997) 或 Imaris (Bitplane)。[img=,657,421]http://qd-china.com/uploads/bio-product/81.jpg[/img]Fig. 1.多焦点双光子激光扫描显微镜的原理图(1) Tsunami Ti:Sa 激光器(波长可调)由固态Millenia X 激光器泵浦 (均来自 Spectra Physics), (2) 多焦点激光扫描单元 (TriM-scope, LaVision BioTec), (3) 分光镜 (2光子-Beamsplitter, Chroma), (4) 短波通过滤波轮 (2光子-Emitter, Chroma), (5) 物镜 (UPLAO60XW3/IR, NA D 1.2 Olympus), (6) 样品中可选择数目的荧光焦点, (7) 倒置光学显微镜(IX 71, Olympus), (8) 滤波轮 (滤波轮, LaVision BioTec)装备带通滤波片 D 605/55 (Chroma)用于检测 Ds-Red 和 HQ525/50 结合 HQ510/20 (均来自 Chroma)以检测 pa-GFP, (9) 背照式 EMCCD-camera (IXON DV887ECS-UVB, Andor Technology) 在NDD光路中, (10) 荧光灯 (HBO 50, Zeiss), (11) 带通激发滤波轮 D 540/25 (Chroma) 用于 Ds-Red 或带通激发滤波轮HQ 480/20 (Chroma) 用于 pa-GFP.[b]结果[img=,380,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/82.jpg[/img][/b]Fig. 2.含有核输入输出信号的拟南芥转录因子LCL1 (分别为NLS, NES). 由质粒编码GFP融合蛋白转染的烟草BY-2原生质体。通过单光子共聚焦激光扫描显微镜分析的GFP融合蛋白稳定态定位。(a) GFP-LCL1 揭示的核与细胞质间的分区。(b) 使用核输出抑制剂leptomycin B (LMB)孵育后，由于功能性NLS的存在，GFP-LCL1的稳定态分区剧烈转化为几乎完全分布于核中。 (c,d) 对照，LMB对单独的GFP没有影响。 (e) GFPLCL1(NESm)中，它的NES的点突变造成的LCL1的核输出活性削弱同样导致了GFP融合蛋白在核内的聚集。(f) 与(e)中同一个原生质体的透射光与GFP荧光成像的叠加标尺为10um (g) 作为对照的 GFP-NLS 在核内的增加。 (h) 同一原生质体的GFP-NLS绿色荧光蛋白和作为转染标记的Pra1-DsRed (At2g38360)红色荧光蛋白的叠加。[img=,700,109]http://qd-china.com/uploads/bio-product/83.jpg[/img]Fig. 3. pa-GFP 在一个活原生质体内的自由动态扩散。选出的5幅表达pa-GFP的烟草BY-2原生质体的单光子透射荧光图像。(a)实验开始，未激活 (b) pa-GFP的双光子激活期间 (c-e) 双光子激活后，所示时间点。(a)核内（红虚线）的pa-GFP在双光子激发前平均荧光很难被检测到。使用4个平行焦点(10mW at 800 nm 每焦点)的持续3s的飞秒激光对一个7X8um的区域进行pa-GFP 2光子激发开始 (b) 激发后很短时间内检测到一个强的荧光信号(c-e) pa-GFP从核内向细胞质的扩散被监测，直到两组分间达到平衡。荧光强度标尺显示在每幅图的左边。[img=,707,514]http://qd-china.com/uploads/bio-product/84.jpg[/img]Fig. 4.在核内被光激活后，pa-GFP从核内向细胞质扩散的量化分析。在激活前，核内（ROI）平均的1光子荧光强度非常低（平均强度～300）.在26s和29s间的时间点，由飞秒激光激活诱导的荧光增强在图上进行了监测。 与光激活前相比，平均荧光强度是之前的大约5倍，伴随着ROI内的荧光降低。在第一个地方，监测到的细胞核内荧光下降是由于激活的pa-GFP向细胞质内的扩散。后来，光漂白变得显著。双指数拟合非常近似地拟合了整个荧光下降过程（红线）。以此方式计算出这个实验中175s的扩算时间常数。[img=,705,375]http://qd-china.com/uploads/bio-product/85.jpg[/img]Fig. 5. 烟草BY-2原生质体中At2g38360-DsRed的定位和平行双光子荧光显微镜对pa-GFP的3D监测（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 双光子荧光下降的量化分析，给出了一个123s的扩散时间常数。Figs. 3 and 4中的数据源于两个不同的实验，解释了荧光值的绝对差异（不同的表达水平）和统计分析。 (b) At2g38360-DsRed作为转染标记在核中pa-GFP激活前的荧光 (c) At2g38360-DsRed和pa-GFP数据采集后400 s的3D荧光图像，清楚显示了荧光团从细胞核向细胞质的扩散。[img=,697,603]http://qd-china.com/uploads/bio-product/86.jpg[/img]Fig. 6.在核内光激活前后,烟草BY-2原生质体内活跃转运的pa-GFP-LCL1的3D动态监测和量化分析。(a) 在pa-GFP-LCL1双光子激发后核内的单光子荧光表明双光子激活荧光增强 (b) pa-GFP被双光子激活后双指数曲线拟合（红线）的荧光下降量化分析。计算得出的由于主动运输导致的核内pa-GFP-LCL1荧光下降的一个20s的时间常数(c,d) At2g38360-DsRed（转染标记）和pa-GFP-LCL1的双色双光子荧光3D成像 (c)核内光激活前 (d)数据获取后。[img=,691,345]http://qd-china.com/uploads/bio-product/87.jpg[/img]Fig. 7. 烟草BY-2原生质体的核输出阴性突变pa-GFP-LCL1(NESm)光激活前后的3D动态监测和量化分析。(a) pa-GFP-LCL1(NESm)被双光子激活后的单光子荧光显示了双光子激活荧光增强和激活后核内荧光极其缓慢的下降，反映了pa-GFPLCL1(NESm)的核限制 (b,c) At2g38360-DsRed (转染标记) 和 pa-GFP-LCL1(NESm) 的双光子荧光3D图像 (b) 光激活前的核内 pa-GFP (c) 数据获取后300s的时间点。

[b][font=宋体][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白全称[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]，全称为增强型绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Enhanced Green Fluorescent Protein[/font][font=宋体]），是一种在生物科学研究中广泛应用的荧光报告蛋白。它是由普通绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）进行突变和优化得到的，相较于原始的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]具有更高的荧光亮度和更稳定的性质。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白大小[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白的大小为[/font][font=Calibri]238[/font][font=宋体]个氨基酸，分子量约为[/font][font=Calibri]27kDa[/font][font=宋体]。这个分子量相对较小，使其在融合蛋白、抗体标记等生物分子标记领域中具有广泛的应用价值。同时，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的相对分子量较小也意味着它对其他蛋白质的负担较小，这有助于保持标记蛋白质的天然状态和功能。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白序列[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以下是[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白的氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]MVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMEEEEDVMKDVEEETPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDP[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过分析[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基酸序列，我们可以发现其中包含一些重要的结构域和功能位点。例如，在[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基端，有一个由数个甘氨酸和丝氨酸组成的“环状结构”，这个结构对于荧光发射起着关键作用。在羧基端，我们还可以看到一个“多肽区”，这个区域对于荧光亮度和稳定性也有重要影响。此外，在[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基酸序列中还包含多个突变位点，这些位点使得[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]相较于原始的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]具有更高的荧光亮度和更稳定的性质。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]四、总结[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]是一种重要的荧光报告蛋白，通过对其全称、大小和序列的深入了解，我们可以更好地理解其性质和应用。在实际的生物科学研究中，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]已被广泛应用于细胞生物学、分子生物学、生物医学等多个领域，为科研工作者提供了强有力的工具，有助于推动生命科学研究的进步。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以查看义翘神州网：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中，免疫分析方法被广泛应用，包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）和免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应，通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内，产生免疫反应后分离抗体，进而进行检测。尽管应用广泛，但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体，操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合，两者实现共同表达。通过对融合标签的检测，我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合，广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究，已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作，降低了成本，而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]），可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]），对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]－甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移（[/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体]）获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色萤光蛋白）是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[b]LUYOR-3260绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白激发led光源[/b][url=http://www.luyor.net/upload/201511/1448268008.jpg][img=LUYOR-3260绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白激发led光源,380,350]http://www.luyor.net/upload/201511/1448268008.jpg[/img][/url][list][/list][b]详细描述[b]LUYOR-3260绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白激发led光源[/b][/b]LUYOR-3260单[url=http://www.luyor.net/news/news189.html]荧光蛋白观测镜[/url]（[url=http://www.luyor.net/product/product166.html]GFP[/url]）可检测绿色荧光蛋白，便于野外作业。检测效率高，能夜间在田间寻找阳性目标，一目了然。操作方便，小巧、灵活、便于携带，开机后不需热机，可直接检测且系统稳定，可长时间持续作业。安全性强，无需化学底物显色，直接进行观测，不损坏被检测对象的细胞。[img=1557025871108354.jpg,692,386]http://www.luyor.net/upload/201905/watermark/1557025871108354.jpg[/img][b][b]GFP, EGFP，DNA蓝光手电筒|Protein Fluorescence 荧光蛋白激发灯[/b][/b]在生命科学科研中，GFP荧光蛋白被广泛应用，大家以前普遍使用荧光显微镜观察，但荧光显微镜观察需要采样，有时甚至要把植物叶片采集下来才能观察，这样给培养的植株带来了损坏，美国路阳根据广大科研人员的需求，研发了便携式[url=http://www.luyor.net/product/product166.html]荧光蛋白激发光源[/url]。采样锂电池供电，方便携带，能够方便带到试验田里面直接观察GFP表达位置，路阳的荧光观察眼罩有效低隔绝了紫外、蓝光发出的有害光谱，仅让GFP发出的荧光透过，让GFP荧光清晰呈现。配有单反相机专用拍照滤镜，能把观察到荧光效果拍照存储。LUYOR-3260系列便携式绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白激发led光源，采用多颗大功率led光源，手电筒式设计，电池供电，照射面积大，光斑均匀，能够激发绿色荧光蛋白(GFP)，红色荧光蛋白的荧光（dsred），被用于研究所、高校等生物研究部门。[img=Ilovversusgfp.jpg,881,414]http://www.luyor.net/upload/201711/watermark/1510121921113655.jpg[/img]转基因生物观察光源除了可用于筛选转基因生物外，还可以用于样本的预筛选、辅助解剖、用于珊瑚研究等，[url=http://www.luyor.net/product/product168.html]LUYOR-3430[/url][url=http://www.luyor.net/product/product_66_1.html]激发光源[/url]（手电筒状）和滤光镜（荧光观察眼镜）,激发光源照射含绿色荧光蛋白（GFP）生物，可激发出绿色荧光，滤光镜挡住所有反射光，只允许绿色荧光通过；激发光源激发红色荧光时，用红色滤光镜观测，可检测含红色荧光蛋白（DsRed）的生物。用于检测、筛选转绿色荧光蛋白（GFP）基因的植物、动物及微生物，如水稻、玉米、斑马鱼、小鼠、细菌、真菌等，小巧、携带方便的荧光检测装置，无需底物显色，就可轻松检测转基因生物。LUYOR-3260系列GFP激发光源的光谱图： [img=20140708_230032.png]http://www.luyor.net/upload/201511/watermark/1448267823668584.png[/img][b][url=http://www.luyor.net/product/product166.html]LUYOR-3260RB[/url]转基因生物观察光源产品优势：[/b]1. 小巧、携带方便，便于野外检测2. 检测效率高，黑暗中检测一目了然3. LED寿命10000h，且系统稳定，可用于长时间（4h）使用4. 直接检测，而无需用底物显色，所以安全，对被检测对象无伤害[b]LUYOR-3260荧光激发光源提供的激发波段有：[/b][list][*][b]LUYOR-3260UV激发光源[/b]： 用于观察DAPI, Hoechst[*][b]LUYOR-3260VI激发光源[/b]：用于观察CFP, …[*][b]LUYOR-3260RB激发光源[/b]：用于观察 荧光蛋白（GFP）, FITC, 钙黄素calcein,荧光黄 lucifer yellow, 叶绿素（chlorophyll）[*][b]LUYOR-3260LB激发光源[/b]：用于观察增强型绿色荧光蛋白（eGFP，mGFP，emgfp）,[*][b]LUYOR-3260CY激发光源[/b]：用于观察YFP, Venus, others[*][b]LUYOR-3260GR激发光源[/b]：用于观察 DsRed, TdTomato, RFP, others[/list][img=,800,533]http://www.luyor.net/upload/201905/watermark/1557972002272606.jpg[/img]上图为带有绿色荧光蛋白的种子。 [b]LUYOR-3260荧光蛋白激发光源的应用：[/b]1、 野外、实验室原位测定GFP(绿色荧光蛋白)。2、 应用于转基因作物研究。3、 区别可遗传性改良生物体和不可遗传的改良生物体。4、 用于基因表达的研究。5、 用于Rhodamine（红色荧光染料）、叶绿素、荧光素的研究。[img=gfpplant_tobacco.jpg,360,276]http://www.luyor.net/upload/201905/watermark/1557972078327170.jpg[/img]带有绿色荧光蛋白的烟草苗 [b]LUYOR-3260荧光蛋白激发光源的[/b]标准配置： LUYOR-3260荧光蛋白激发光源主机一只、观察眼镜一副、大容量充电电池组一只、110-260v交流充电器一只、铝合金手提箱一只。[b] [b]LUYOR-3260荧光蛋白激发光源的选配件[/b]：[/b]荧光拍照滤镜、滤镜转换卡 [b]LUYOR-3260荧光蛋白激发光源的技术参数[/b]：光源：9颗3w led电池电压和容量：12v，2600mha手电筒尺寸：头部直径70mm，尾部直径45mm，长度25mm充电器：110-260v，交流适配，美规插头。照射面积：30cm处，照射光斑直径大约150mm可选配滤镜尺寸：62mm充电时间：2-6小时。充满电连续工作时间：2-4小时[b]路阳GFP激发光源的典型用户：[/b]1.中国农业大学2.北京农业大学3.南京农业大学4.中山大学5.中国农业科学院果树研究所6.中国农业科学院水稻研究所7.西北农林大学8.华中农业大学9.福建农林大学10.山东农业大学。。。。。。 LUYOR-3260便携式激发光源的介绍：[url]http://www.luyor.net/product/product166.html[/url][table][tr][td] [/td][/tr][/table]

假如青霉素及其降解产物与乳清蛋白结合形成了复合物那么我用荧光光谱对其研究的话 是否可行？

传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。 目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。1 图象分析技术（Image analysis）“满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉，每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失，都可能在生理和病理状态下产生，必须依靠计算机为基础的数据处理，进行定量分析。 在一系列高质量的2-DE凝胶产生（低背景染色，高度的重复性）的前提下，图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。 首先，采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD（charge coupled device）照相机；激光密度仪（laser densitometers）和Phospho或Fluoroimagers，对图象进行数字化。 并成为以象素（pixels）为基础的空间和网格。 其次，在图象灰度水平上过滤和变形，进行图象加工，以进行斑点检测。 利用Laplacian，Gaussian，DOG（difference of Gaussians） opreator使有意义的区域与背景分离，精确限定斑点的强度、面积、周长和方向。图象分析检测的斑点须与肉眼观测的斑点一致。 在这一原则下，多数系统以控制斑点的重心或最高峰来分析，边缘检测的软件可精确描述斑点外观，并进行边缘检测和邻近分析，以增加精确度。 通过阈值分析、边缘检测、销蚀和扩大斑点检测的基本工具还可恢复共迁移的斑点边界。 以PC机为基础的软件Phoretix-2D正挑战古老的Unix为基础的2-D分析软件包。 第三，一旦2-DE图象上的斑点被检测，许多图象需要分析比较、增加、消减或均值化。 由于在2-DE中出现100%的重复性是很困难的，由此凝胶间的蛋白质的配比对于图象分析系统是一个挑战。 IPG技术的出现已使斑点配比变得容易。 因此，较大程度的相似性可通过斑点配比向量算法在长度和平行度观测。 用来配比的著名软件系统包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，计算机方法如相似性、聚类分析、等级分类和主要因素分析已被采用，而神经网络、子波变换和实用分析在未来可被采用。 配比通常由一个人操作，其手工设定大约50个突出的斑点作为“路标”，进行交叉配比。 之后，扩展至整个胶。例如：精确的PI和MW（分子量）的估计通过参考图上20个或更多的已知蛋白所组成的标准曲线来计算未知蛋白的PI和MW。 在凝胶图象分析系统依据已知蛋白质的pI值产生PI网络，使得凝胶上其它蛋白的PI按此分配。 所估计的精确度大大依赖于所建网格的结构及标本的类型。 已知的未被修饰的大蛋白应该作为标志，变性的修饰的蛋白的PI估计约在±0。25个单位。 同理，已知蛋白的理论分子量可以从数据库中计算，利用产生的表观分子量的网格来估计蛋白的分子量。 未被修饰的小蛋白的错误率大约30%，而翻译后蛋白的出入更大。 故需联合其他的技术完成鉴定。

纳米材料与结合蛋白的纳米材料，1.在荧光光度分析上会有什么不同[em01] ？2.蛋白的包覆会影响纳米材料的荧光峰吗？3.纳米材料的结合对蛋白的荧光峰会有影响吗？谢谢

传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。 目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。1 图象分析技术（Image analysis）“满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉，每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失，都可能在生理和病理状态下产生，必须依靠计算机为基础的数据处理，进行定量分析。 在一系列高质量的2-DE凝胶产生（低背景染色，高度的重复性）的前提下，图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。 首先，采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD（charge coupled device）照相机；激光密度仪（laser densitometers）和Phospho或Fluoroimagers，对图象进行数字化。 并成为以象素（pixels）为基础的空间和网格。 其次，在图象灰度水平上过滤和变形，进行图象加工，以进行斑点检测。 利用Laplacian，Gaussian，DOG（difference of Gaussians） opreator使有意义的区域与背景分离，精确限定斑点的强度、面积、周长和方向。图象分析检测的斑点须与肉眼观测的斑点一致。 在这一原则下，多数系统以控制斑点的重心或最高峰来分析，边缘检测的软件可精确描述斑点外观，并进行边缘检测和邻近分析，以增加精确度。 通过阈值分析、边缘检测、销蚀和扩大斑点检测的基本工具还可恢复共迁移的斑点边界。 以PC机为基础的软件Phoretix-2D正挑战古老的Unix为基础的2-D分析软件包。 第三，一旦2-DE图象上的斑点被检测，许多图象需要分析比较、增加、消减或均值化。 由于在2-DE中出现100%的重复性是很困难的，由此凝胶间的蛋白质的配比对于图象分析系统是一个挑战。 IPG技术的出现已使斑点配比变得容易。 因此，较大程度的相似性可通过斑点配比向量算法在长度和平行度观测。 用来配比的著名软件系统包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，计算机方法如相似性、聚类分析、等级分类和主要因素分析已被采用，而神经网络、子波变换和实用分析在未来可被采用。 配比通常由一个人操作，其手工设定大约50个突出的斑点作为“路标”，进行交叉配比。 之后，扩展至整个胶。例如：精确的PI和MW（分子量）的估计通过参考图上20个或更多的已知蛋白所组成的标准曲线来计算未知蛋白的PI和MW。 在凝胶图象分析系统依据已知蛋白质的pI值产生PI网络，使得凝胶上其它蛋白的PI按此分配。 所估计的精确度大大依赖于所建网格的结构及标本的类型。 已知的未被修饰的大蛋白应该作为标志，变性的修饰的蛋白的PI估计约在±0。25个单位。 同理，已知蛋白的理论分子量可以从数据库中计算，利用产生的表观分子量的网格来估计蛋白的分子量。 未被修饰的小蛋白的错误率大约30%，而翻译后蛋白的出入更大。 故需联合其他的技术完成鉴定。2 微量测序（microsequencing）蛋白质的微量测序已成为蛋白质分析和鉴定的基石，可以提供足够的信息。 尽管氨基酸组分分析和肽质指纹谱（PMF）可鉴定由2-DE分离的蛋白，但最普通的N-末端Edman降解仍然是进行鉴定的主要技术。 目前已实现蛋白质微量测序的自动化。 首先使经凝胶分离的蛋白质直接印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上，染色、切割，然后直接置于测序仪中，可用于subpicomole水平的蛋白质的鉴定。 但有几点需注意：Edman降解很缓慢，序列以每40 min 1个氨基酸的速率产生；与质谱相比，Edman降解消耗大；试剂昂贵，每个氨基酸花费

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白是一种将抗体片段与功能蛋白融合表达的重组蛋白，具有抗体的特性和功能蛋白的活性。它可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化、抗体和抗原的定量分析以及免疫导向药物的制备等领域。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同，可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]与[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]）[/b][/url]融合蛋白。制备抗体融合蛋白的方法主要有化学交联法和基因工程技术，其中基因工程技术是目前主要的方法。在制备过程中，需要注意两蛋白间的接头序列的长度，以确保蛋白质的折叠和稳定性。抗体融合蛋白在免疫学、生物制药和医学等领域具有广泛的应用前景，为疾病的诊断、治疗和药物研发提供了新的工具和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体如何与蛋白融合[/font][font=Calibri]?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]双特异性抗体是一种特殊的抗体，具有两个不同的抗原结合位点。通过技术手段，可以将双特异性抗体与另一种蛋白质融合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①使用基因工程技术，将双特异性抗体的基因与目标蛋白质的基因进行融合，然后通过表达载体在细胞内表达融合蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②使用化学手段，将双特异性抗体与目标蛋白质进行化学偶联。这需要使用特定的化学偶联剂，将双特异性抗体的特定基团与目标蛋白质的特定基团连接起来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要注意的是，融合蛋白质的功能和性质取决于其组成成分的特性和比例，因此在融合过程中需要谨慎选择和设计组成成分，以确保融合蛋白质具有所需的功能和性质。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白具有广泛的应用，包括但不限于以下方面：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①免疫诊断：抗体融合蛋白可以用于检测抗原，如病毒、细菌、肿瘤标志物等。通过将抗体片段与荧光蛋白、酶等标记物结合，可以实现对抗原的高灵敏度检测。[/font][font=宋体]②免疫治疗：抗体融合蛋白可以用于治疗肿瘤、感染性疾病等。通过将抗体片段与细胞毒素、免疫调节因子等效应分子结合，可以实现对肿瘤细胞的靶向杀伤或调节免疫反应。[/font][font=宋体]③抗体纯化：抗体融合蛋白可以用于分离和纯化抗体。通过将抗体片段与亲和标签结合，可以利用亲和层析等技术实现对抗体的纯化和富集。[/font][font=宋体]抗体和抗原的定量分析：抗体融合蛋白可以用于定量分析抗体和抗原的浓度。通过将抗体片段与荧光染料等标记物结合，可以利用流式细胞术等技术实现对抗体和抗原的定量分析。[/font][font=宋体]④免疫导向药物的制备：抗体融合蛋白可以用于制备免疫导向药物，即将药物与抗体片段结合，利用抗体的特异性结合能力，将药物定向引导至病变部位，提高药物的疗效并降低副作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

人血清中血红蛋白的[color=red]分子荧光[/color]光谱法测定

蛋白分析系统在我们选择蛋白分析工具的时候，通常是根据不同的蛋白来选择不同的分析手段，如凝胶电泳、化学荧光染色、质谱等等。但是目前已经研制出的蛋白分析工具的种类繁多，从这一方面也在一定程度上反映了蛋白分析的复杂性。以下是一些近期推出的蛋白分析系统，希望能帮助您轻松完成研究工作。

荧光光谱研究阿司匹林键联金属卟啉与牛血清白蛋白的相互作用

[center]科学家开发出应用荧光光谱技术研究单个膜蛋白运动的新方法[/center][center]摘自：科技日报 [/center]加拿大和美国科学家联合研究小组开发出一种应用荧光光谱技术观察研究单个膜蛋白运动的新方法。膜蛋白的主要功能是控制细胞与其周边环境的离子交换。专家认为，该项研究成果有助于人们增强对离子通道的认识和了解。相关研究文章发表在最新出版的《美国国家科学院院报》上。　离子通道类似于一台小型纳米机器或纳米阀门，如果这些微小阀门运转失灵，将引发人体肌肉、中枢神经系统和心脏等发生各种遗传疾病。　与照相机的光圈原理相似，这些膜蛋白通过开启和关闭动作来控制细胞与其周边环境的离子交换运动，这种离子交换运动促成了沿着我们神经细胞的电信号的传输。这些细微阀门的尺寸大约是人眼瞳孔大小的百万分之一。加美科学家所采用的新技术可测量到单离子通道，并可研究离子通道内部不同部分之间如何进行信息沟通。　由加拿大蒙特利尔大学物理系教授里卡德.布朗克牵头的联合小组对基于4个同样的亚单元建立的钾离子通道进行了研究，这种钾离子通道形成了可以穿过膜的微细小孔，小孔能够打开和关闭以开通或阻断离子传导。　科学家使用新开发出的荧光光谱技术，区分出4个亚单元，首次实现了对4个亚单元的运动分别进行跟踪研究。他们发现，4个亚单元分子是协同发挥作用的，从而解释了为何在电生理学实验中没有在电流中发现中间级。该项研究成果解决了在该领域存在的长期争论：一个钾离子的4个亚单元究竟是各自独立发挥作用还是协同发挥作用。　布朗克博士表示，该项发现有助于增强人们对离子通道的认识和了解。其重要性在于，膜蛋白在人体中发挥着重要的作用，而且其基因突变会引发许多严重的遗传疾病，也因此它们是重要的药物标靶。

稀土离子铈(Ⅳ)[color=red]分子荧光[/color]光谱法测定血清白蛋白的含量

据外电报道，美国科学家罗伯特J. 勒夫科维兹(Robert J. Lefkowitz)与布莱恩·K·卡比尔卡(Brian K. Kobilka)因在G蛋白偶联受体方面的研究获得2012年诺贝尔化学奖。http://img.dxycdn.com/cms/upload/userfiles/image/2012/10/10/271542207_small.jpgRobert J. Lefkowitz教授http://img.dxycdn.com/cms/upload/userfiles/image/2012/10/10/449324824png_small.jpgBrian K. Kobilka教授新闻背景：近五年诺贝尔化学奖得主及其主要成就回顾2011年，以色列科学家达尼埃尔·谢赫特曼因发现准晶体而获奖。准晶体是一种介于晶体和非晶体之间的固体，准晶体的发现不仅改变了人们对固体物质结构的原有认识，由此带来的相关研究成果也广泛应用于材料学、生物学等多种有助于人类生产、生活的领域。 2010年，美国科学家理查德·赫克与日本科学家根岸荣一和铃木章因在有机合成领域中钯催化交叉偶联反应方面的卓越研究成果而获奖。这一成果广泛应用于制药、电子工业和先进材料等领域，可以使人类造出复杂的有机分子。 2009年，英国科学家文卡特拉曼·拉马克里希南、美国科学家托马斯·施泰茨和以色列科学家阿达·约纳特因对“核糖体的结构和功能”研究的贡献而获奖。 2008年，日本科学家下村修、美国科学家马丁·沙尔菲和美籍华裔科学家钱永健因在发现和研究绿色荧光蛋白方面作出贡献而获奖。 2007年，德国科学家格哈德·埃特尔因在表面化学研究领域作出开拓性贡献而获奖。

东北网12月25日电 记者日前从负责转基因克隆猪项目的东北农业大学生命科学学院了解到，去年出生的3头绿色荧光克隆猪都已怀孕，明年1月份，它们就要当上“妈妈”了。据该课题组的科研人员尹智介绍，一年多来，在课题组成员和专门饲养员的精心照顾下，3头小猪生长很快。目前发育良好，体重达标，并已经通过正常与普通公猪的交配怀了孕，预产期为明年的1月份左右。选择与普通公猪交配，这也是课题组今后一个研究的方向。由于3头小猪为转基因克隆猪，在与普通公猪交配生产后，课题组将要对它们所生的小猪进行观察，观察其是否具有绿色荧光的标记特征。然后，再从中选取具有绿色荧光特征的小猪进行交配试验。这项研究将在家猪的转基因育种、人类疾病医疗模型猪的建立以及生产为人类器官移植提供器官的特殊家猪等方面有广泛应用前景，也将为畜牧业发展和医学研究开辟新的天地。2006年12月22日，东北农业大学传出喜讯，我国首例3头绿色荧光蛋白转基因克隆猪降生，这也是继美国、韩国和日本之后，世界上第四例成功通过体细胞核移植方式克隆出的绿色荧光蛋白转基因猪。3头小猪是自然分娩产出的，出生时的体重分别为1270克、1130克、1230克。因为这3只克隆猪具有绿色荧光蛋白转基因，所以在紫外线光源的照射下，它们的口、蹄及舌头可以看到明显呈现出绿色的荧光。