荧光定量梯度仪

谁能告诉我梯度PCR、温度梯度PCR、实时荧光定量PCR的区别？他们是什么样的概念？主要用途是什么？目前那些厂家做的比较好？谢谢！[em17]

[color=#333333]梯度洗脱能用归一化法定量吗？改变流动相比例后，峰面积也跟着在变，归一化法应该用不起来吧！[/color][color=#333333][/color]

在基因扩增仪的几种类型中，荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。 　　实验者要购买一款合适的荧光定量PCR，需要考虑各方面的因素，首先要分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种各样的宣传资料。 　　面对各种不同性能的产品，我们该如何选择呢? 　　首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区： 　　误区一：荧光定量PCR仪无需梯度功能 　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。 　　引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。 　　梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 　　不单是退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。 　　使用有梯度功能的荧光定量PCR可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程，简化了摸索 PCR反应条件的繁琐实验，既节省实验时间提高效率，又节省实验成本。 　　误区二：仪器通道越多越好 　　随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。 　　从最初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。 　　在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。 　　所以，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。 　　有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。 　　在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。 　　考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重PCR并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。 　　当我们看清误区，在选择一款最适合自己需求的荧光定量PCR仪时，我们又该关注些什么呢?

[color=#333333]梯度洗脱能用归一化法定量吗？改变流动相比例后，峰面积也跟着在变，归一化法应该用不起来吧！[/color]

[color=#333333]梯度洗脱能用归一化法定量吗？改变流动相比例后，峰面积也跟着在变，归一化法应该用不起来吧！[/color]

梯度洗脱是液相的一个很重要环节，国产液相这方面好像还不行。有几个方面，死体积大，滞后时间长，脉动大，定性、定量、谱图重复性普遍不好。总的来说国产液相与进口液相相比，梯度实验有实验时间长，效果差，准确度低等劣势

荧光分光光度计测Vc含量，走标线前两个有梯度，第三到第八个点都是同一个值，求解！

从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品，如ABI的7500和7900，罗氏Lightcycler2.0，Lightcycler480，Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上，另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较，在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一，科研工作者更不应该迷信品牌，依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。 进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌，在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富，收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品，采用96孔Peltier半导体加热，5通道，12bit CCD检测，而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500，所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好，另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多，只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家，引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域，目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较，很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96，产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热，5通道，16bit CCD检测，也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样，而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些，号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少，了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易（上海）有限公司进行试用，新公司都注重是售后服务，大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司，也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多，处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热，5通道，PMT检测器，但是没有梯度功能，用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙，噪音比较大，而且边缘的孔做实验的效果不太好，但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在，但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇　　现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断，国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场，平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的，再加上国内厂商的经营和财力等问题，所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距，所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出，他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力，只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中，随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中，相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日（Bioer）提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司，和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场，虽然近年来随着其他国产品牌的冲击，市场占有率已经严重下降，但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道，48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低，但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪，TL988设计比较灵活，可选36孔与96孔加热模块，但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道，但不足之处是还是使用单激发虑光片，激发光特异性不好，导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户，科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN®实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器，在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型，不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器，在科研系统用户比较少。小节：目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领，尤其是在科研, CDC和血站等系统，国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择，“选对的，不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。

实验室有液相色谱，用的是荧光检测器，老师在考虑要装梯度洗脱，但是目前只有一个泵，型号是岛津LC-20AD，还需要配置哪些配件才能使用梯度洗脱呢？一定要两个泵吗？？？之前有一个工程师说可以装四元低压梯度阀就可以了，请教各位有没有比较好的方案~求助！谢谢！

想买台荧光定量PCR仪器 要满足以下要求：光学模块：激光光源：6个带滤光片的LED光源，6通道激发半导体加热模块: 温度均一性：±0.4°C （10秒钟达到90°C 时）；经过矫正后适用于HRM高 分辨溶解曲线功能 具备温度梯度功能，可以方便的优化单重、多重反应条件，温度梯度范围：30-100°C，不低于室温30°C；大家帮忙推荐下，要进口的！

我的cdna样品浓度都是用900ng 的RNA反转录做成的20ul的溶液，那么请问我在加入cdna样品时应该加入多少体积的量？我看到SYBR Premix ex taq(perfecct real time)编号drr041a的试剂盒里面说20ul的荧光定量体系cdna模板加入2ul，但是没有注明浓度是多少，只是说dna模板添加量在100ng以下，而且说反转录反应液作为dna模板时添加量不要超过pcr反应总体积的10%，我用的荧光定量pcr反应总体积是20ul，那么cdna的体积应该不大于2ul了，但是浓度应该多少为好呢？还有引物浓度我该用多少为好呢，试剂盒上20ul的荧光定量体系是10uM的加入0.4ul。我的实际浓度和体积可能跟试剂盒上的不一样，但是我该怎么按照自己的900ng 的RNA反转录做成的20ul的溶液来改动试剂盒上的数据呢？如果做浓度梯度来确定cdna浓度和引物浓度，该怎么浓度梯度为好呢？我是用900ng的RNA来反转录做成20ul体系，然后不稀释直接取2ul来荧光定量PCR（20ul体系），即我用于荧光定量PCR的cdna模板含量是90ng

梯度洗脱装置分两种：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度。但在使用中，梯度洗脱也有许多与等度洗脱不同的地方需要注意。那么，本周讨论话题就是：[color=#DC143C][size=4]梯度洗脱时应注意哪些事项？？[/size][/color]希望大家就自己的经验说一说。[color=#DC143C]小结：[/color]1、注意各溶剂间的互溶性。2、对溶剂的纯度要求更高（影响重现性）。3、注意梯度变化时系统压力的变化，防止超出限度。4、梯度结束后，用初始流动相冲洗，使柱子平衡一段时间（再生），使系统回复到初始状态。（梯度周期）5、低压梯度要注意脱气，混合后容易产生气泡。6、容易出现鬼峰，应作空白试验。7、梯度选择时尽量几相之间相变化要小,否则不易平衡。8、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。9、要注意水相中盐的浓度，防止在有机相提升过程中盐的析出。

中国心 品牌不是唯一，高性价比的荧光定量PCR仪选购指南从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品，如ABI的7500和7900，罗氏的Lightcycler2.0，Lightcycler480，Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上，另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较，在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一，科研工作者更不应该迷信品牌，依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌，在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富，收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品，采用96孔Peltier半导体加热，5通道，12bit CCD检测，而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500，所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好，另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多，只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家，引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域，目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较，很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96，产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热，5通道，16bit CCD检测，也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样，而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些，号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少，了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易（上海）有限公司进行试用，新公司都注重是售后服务，大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司，也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多，处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热，5通道，PMT检测器，但是没有梯度功能，用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙，噪音比较大，而且边缘的孔做实验的效果不太好，但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在，但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断，国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场，平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的，再加上国内厂商的经营和财力等问题，所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距，所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出，他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力，只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中，随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中，相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日（Bioer）提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司，和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场，虽然近年来随着其他国产品牌的冲击，市场占有率已经严重下降，但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道，48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低，但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪，TL988设计比较灵活，可选36孔与96孔加热模块，但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道，但不足之处是还是使用单激发虑光片，激发光特异性不好，导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户，科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器，在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型，不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器，在科研系统用户比较少。小节： 目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领，尤其是在科研, CDC和血站等系统，国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择，“选对的，不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。

从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品，如ABI的7500和7900，罗氏的Lightcycler2.0，Lightcycler480，Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上，另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较，在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一，科研工作者更不应该迷信品牌，依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌，在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富，收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品，采用96孔Peltier半导体加热，5通道，12bit CCD检测，而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500，所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好，另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多，只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家，引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域，目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较，很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96，产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热，5通道，16bit CCD检测，也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样，而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些，号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少，了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易（上海）有限公司进行试用，新公司都注重是售后服务，大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司，也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多，处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热，5通道，PMT检测器，但是没有梯度功能，用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙，噪音比较大，而且边缘的孔做实验的效果不太好，但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在，但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇 现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断，国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场，平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的，再加上国内厂商的经营和财力等问题，所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距，所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出，他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力，只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中，随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中，相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日（Bioer）提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司，和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场，虽然近年来随着其他国产品牌的冲击，市场占有率已经严重下降，但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道，48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低，但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪，TL988设计比较灵活，可选36孔与96孔加热模块，但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道，但不足之处是还是使用单激发虑光片，激发光特异性不好，导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户，科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器，在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型，不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器，在科研系统用户比较少。 小节： 目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领，尤其是在科研, CDC和血站等系统，国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择，“选对的，不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。中国心

请教 高压梯度和低压梯度应用场合有什么不同？ 具体地说，某一项分析如果采用高压梯度，是不是一定也可以采用低压梯度呢？ 或者仅仅是经济条件方面不同呢？双泵的高压梯度和低压梯度仪器配置，资金相差大约有多少？

问题: 有人做苯丙比没，用的是梯度不回复: 用乙腈水等度，我们90乙腈，等度，过柱子，荧光检测器，不需要的衍生，

液质联用精密度问题在做液质联用定量分析中药中多种成分时，以A：0.3%甲酸水，B：乙腈为流动相，采用梯度洗脱，洗脱程序：0-6min 20%-40% B，6-8min 40%-100% B，8-14 min 100% B，13 min内所定量成分能完全出峰，主要是香豆素和生物碱类，以前的液相条件在质谱上分离挺好，但20 min之后保留时间漂移较大，也曾用等度洗脱试，峰分不开，采用现在的梯度条件，保留时间基本稳定，做好线性关系后，精密度考察出现问题，采用多反应离子监测，每次所测含量呈不规律变化，有时高有时低，进样20多针相同浓度的混标液精密度依然很差，RSD能达到20多，有的成分含量前后能相差1倍，用的是Agilent1200的液相，6410 QQQ-MS色谱柱是2.1×150 mm，1.8u的，流速是0.3 ml/min，混标液是用部分甲醇和部分流动相溶的，仪器也是前段刚检过的，都pass了，不知什么原因，是每次离子化程度不一样吗，请各位高手指教。还有做精密度、重现性、回收率时，每次都要做一次线性关系吗

我做的是样品中的黄酮定性定量，试了许多文献的方法，只有芦丁出峰，但按理说应该还有槲皮素、山奈酚等等，一个是因为其他品种的样品有，另一个是总黄酮含量大小和芦丁含量大小不一致。在我尝试了浓缩、纯化、酸水解都不行之后，我开始摸索液相条件我看了社区的一些精华帖，选定了0-48min，5%-95%乙腈（另一个是1%乙酸），打算先测一下进样体积和流速的影响，结果发现在这个梯度下，无论怎么换别的，只有两分钟左右的溶剂峰，其余一个峰都没有。所以，我觉得可能得用分段的梯度，但是这个分段怎么分，每一段的流动相占比我不知道该怎么设置，于是就胡乱设置了一下。比如48min平分成六段，一段8分钟，让乙腈从5%开始往上升，升到100%，再走一个初始比例。我想问的是：1. 我上面的思路是对的吗？2. 大家知道梯度怎么分段设置吗？3. 有的方法混标跑的很好，槲皮素那些都能出峰，但是样品就是不出槲皮素的峰，这是不是说明我样品里就是没有这些东西？4. 我现在尝试分析别人的梯度，比如他们的槲皮素8分钟出峰，而梯度是0-10min，30-40%乙腈，这能不能说明，（40-30）/10*8+30=38，38%的乙腈可以洗脱槲皮素，我应该用38%左右的乙腈多走一会？

求助各位大神：采用吉天AFS-921测定样品中的砷时，由于样品中砷含量较高，我通过参考文献，将标准标准曲线梯度倍数设定为2,4,6,8,10,12,14,16,20.（单位ug/l）。但设定以后在检测20ug/l的标液时，荧光光谱会显现出双峰形状，表现为样品浓度过高。我想了个解决办法：将待测样品稀释（原来赶酸后定容到25ml，现在定容到50ml），使样品检测出的荧光值在较低的标准曲线梯度范围内。求助各位看看，是我操作有误，还是机器检测上限的限制，我的改进方法可行吗？

二元高压梯度（双泵+在线混合器）与四元低压梯度（单泵+低压梯度阀+脱气机+混合器），对于上面两个配置，现在哪个实用性更好？哪个洗脱效果更好？一般首选哪个配置？ 顺便弱弱的问一下，如果我选二元高压梯度，对于像甲醇：水：冰醋酸（48：52：1）这种三种溶剂甚至四种的流动相该怎么去弄呢？它总共才二个溶剂通道吧。。。。

如题，请各位大神帮忙解答一下，高压梯度和低压梯度的优缺点各在哪里？高压梯度泵后混合可减少气泡的产生，但有人也说在检测器内（恢复常压后）可能会产生气泡。如果这样，是否高压梯度最好也配在线脱气？低压梯度的精度可以做到多少？对于串联泵来说，除了混合体积不够的原因外，比例阀切换频率如果和泵运行频率同步的话，是否也会造成基线不平（波浪形基线）？二元低压梯度最好的切换比例阀的方式是什么？按照时间周期或者是按照泵的运转周期？有没有熟悉waters或agilent的大神帮忙告知一下这两家是如何做的？感谢！

通常说的高压梯度和低压梯度到底有什么区别呢？一直很疑惑？

我公司年前新进一台手持式X荧光光谱仪，型号是布鲁克的S1 TURBO SD的，本来计划是用来做原辅材料分析的，我们所涉及的原辅材料主要有镁、铜、锌，以及Al50Cu，铝及铝合金成分添加剂和铝中间合金锭等。但在使用的过程中，发现所测数据几乎不能够使用，仅只能够能够用来大体判断合金的种类。设备承诺的是可以做定量分析的，不知为什么会这样，几十万的一台设备总不能就这样浪费了。也许是我们使用的有问题？所以恳请了解此型号设备的同志们，能不能提供一些此设备定量分析方面的信息，比如准确度、精确度、重复性等。还有使用方法、使用经验总结啊。 感谢了！

我用的是岛津LC-10ATVP色谱仪流动相A是磷酸二氢钾，含0.8%THF，PH5.8. 流动相B是甲醇和已腈的混合（3:1）。现在做三种氨基酸混标的标准曲线，但是出峰时间一张不是很稳定，第一个峰后段和第三个峰前段有干扰峰，我调整了十几次洗脱梯度了，改变不明显。第一次出峰时间在9min左右，第二次在14min左右，第三次在18min以后出峰.最初洗脱梯度设置：0-6 miin B% : 25%6-8 miin B% : 25%--42%8-11 miin B% : 42%-42%11-14 miin B% : 42%-50%14-18 miin B% : 50%-75%18min STOP荧光检测波长 ：激发波长：340nm，发射波长：455nm

称取0.1833g样品，烧灰后溶样定容到50ml容量瓶里，定性半定量K含量为78651ppm，定量时应该配多少的浓度梯度？是将原样直接稀释100倍，还是有其他什么办法？如果直接稀释，最后的结果是不是还要反算到样品的质量分数上去？而不能直接用仪器测出来的数据，小童刚接手学习icp请各位高手赐教勿喷，谢谢各位了！仪器是瓦里安的icp-oes

想做一个高压梯度泵梯度混合器的了解，请大家有二元高压梯度仪器的说说自己的仪器型号及梯度混合器的体积。

我采用梯度洗脱柱前衍生荧光法测定谷氨酸,第一次进样峰形正常,第二次进样发现有叉峰,各次间峰保留时间相同.我又用了等度洗脱的办法,等度洗脱时各次目标峰形都正常,请问为何?