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语音报数菌落计

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  • 【菌落总数】

    一、菌落总数介绍:  菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。  菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定,即在需氧情况下,37℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。  菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。二、检验方法  菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。  基本操作一般包括:样品的稀释--倾注平皿--培养48小时--计数报告。  国内外菌落总数测定方法基本一致,从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同,只是在某些具体要求方面稍有差别,如有的国家在样品稀释和倾注培养进,对吸管内液体的流速,稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。  检验方法参见:  GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》  SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》三、说明(一)样品的处理和稀释:  1.操作方法:以无菌操作取检样25g(或25ml),放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振要或研磨制成1:10的均匀稀释液。  固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min,制成1:10的均匀稀释液。  用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混合均匀,制成1:100的稀释液。  另取1ml灭菌吸管,按上项操作顺序,制10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。  2.无菌操作:操作中必须有“无菌操作”的概念,所用玻璃器皿必须是完全灭菌的,不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装,应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。  操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟,每个平板不得超过15个菌落。  3.采样的代表性:如系固体样品,取样时不应集中一点,宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨,液体样品须经过振摇,以获得均匀稀释液。  4.样品稀释误差:为减少样品稀释误差,在连续递次稀释时,每一稀释液应充分振摇,使其均匀,同时每一稀释度应更换一支吸管。  在进行连续稀释时,应将吸管内液体沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入稀释液内,以免吸管外部粘附的检液溶于其内。  为减少稀释误差,SN标准采用取10mL稀释液,注入90mL缓冲液中。  5.稀释液:样品稀释液主要是灭菌生理盐水,有的采用磷酸盐缓冲液(或0.1%蛋白胨水),后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品(如酱油)进行稀释,可以采用灭菌蒸馏水。(二)倾注培养  1.操作方法:根据标准要求或对污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在制10倍递增稀释的同时,以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做两个平皿。  将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml,并转动平皿,混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。  待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h,取出计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每克(每毫升)样品所含菌落总数。  2.倾注用培养基应在46℃水浴内保温,温度过高会影响细菌生长,过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴,应以皮肤感受较热而不烫为宜。  倾注培养基的量规定不一,从12~20ml不等,一般以15ml较为适宜,平板过厚可影响观察,太薄又易于干裂。倾注时,培基底部如有沉淀物,应将底部弃去,以免与菌落混淆而影响计数观察。  3.为使菌落能在平板上均匀分布,检液加入平皿后,应尽快倾注培养基并旋转混匀,可正反两个方向旋转,检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过[

  • 菌落总数测定的几项说明

    1.菌落总数的测定:是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后,每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20%),因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数,厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长,有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制,因此所得结果,只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。2.鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个,成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在,因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块,也可以来源于单个细胞,因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数,而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units,CFU)报告之。3.每种细菌都有它一定的生理特性,培养时,应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求,才能分别将各种细菌都培养出来。因此,要得到较全面的细菌菌落总数,应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上,并培养在不同条件下,如温度,氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定,都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的,因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

  • 菌落总数测定

    一固体样品作菌落总数测定,其中10-1平板菌落数多不可计,10-2平板菌落数为271,10-3平板菌落数为60,则该样品菌落总数( )个/g。 A、27000 B、27100 C、60000 D、43550

  • 针尖的菌落

    空白菌落总数总是有针尖大小的菌落,是怎么回事?但是倒不加生理盐水,只加培养基是没有菌落的

  • 菌落总数的快速测定方法

    菌落总数的快速测定方法1 适用范围:可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理:将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑(TTC)显色剂等加载在试纸片,经加样、培养后,细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑,通过计数报告结果。3 操作方法3.1样品处理:无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇(均质)做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推,做出1:1000等稀释度的稀释液,每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种:一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上,揭开上面的透明薄膜,用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的纸片上,轻轻将上盖膜放下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。4 结果判断与计数:4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(10个~100个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时,按实有数报告。大于100时,用二位有效数字,二位有效数字后面的数字,以四舍五入方法计算,并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1通常选择菌落在10个~100个之间的纸片进行计数,乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL,cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2若有两个稀释度的菌落数在10个~100个之内,两者的比值小于2,则取其平均数,若大于2,则采用稀释度小者报告(见下表中例次2和例次3)。4.2.3若三个稀释度的菌落数都有在10个~100个之内时,应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。4.2.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时,应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的最小值,或采用均大于数量标准的最大值(见下表中例次5和例次6)。 例次稀释度两稀释 度之比选定计数 稀释度报告方式 (个/g或 个/mL)10-110-210-31 2 3 4 5 6158 208 265 98 8 295

  • 菌落无检出

    最近试做了几个样,全部无菌落,已恒温控制了培养基的温度为48度,甚至试做了一个没有添加防腐剂的样品,还是无菌落,有没有可能是因为刚灭完菌的培养皿和生理盐水温度太高烫死了,摸着都烫手,培养基应该没变质,在保质期内,在无菌落的皿上按手印培养后有菌落生成

  • 菌落弥漫的问题

    做菌落总数测定的时候,所有培养基都多覆盖了一层培养基,空白组没长菌,12个平板但是大部分接种的培养基菌落表面还是长了菌,很多几乎是全部覆盖了,但是也有2个表面没长弥漫性菌落的 是怎么回事

  • HE培养基上的红色菌落

    在做沙门氏菌时,在HE培养基上长出桔红色菌落,培养基也变成红色了,做革兰氏染色为阳性菌,请问这是什么菌?各位大神有知道的么?

  • 菌落形态大全

    细菌:湿润,粘稠,易挑起放线菌:干燥,多皱,难挑起,菌落较小,多有色素酵母菌:湿润,粘稠,易挑起,表面光华,比细菌的菌落大而厚霉菌:菌丝细长,菌落疏松,成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状,无固定大小,多有光泽,不易挑起细菌:一般形成较小的圆形菌落,颜色有白色、黄色等,表面光滑或不光滑放线菌:菌落背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。酵母菌:菌落为淡黄色,光滑,半透明,比细菌菌落大。霉菌:菌落大型,肉眼可见许多毛状物,棕色、青色等,可见黑色的分生孢子群。转

  • 菌落总数的检验讨论

    菌落总数的检验讨论

    [align=center][font=宋体]菌落总数的检验讨论[/font][/align][align=center][font=宋体] [/font][/align][font=宋体][font=宋体]概念理解[/font] [/font][font=宋体]1、菌落总数英译实为需氧菌平板计数,并不表示实际样品中的所有细菌总数。由于倾注平板法的局限,会有一部分细菌在该实验条件下不生长,故计数结果要比实际值低。 [/font][font=宋体]2、菌落总数并不能区分其中细菌的种类。实际上是把检样中的致病菌、非致病菌、酵母 菌、霉菌都计算在内的微生物杂菌总数。 [/font][font=宋体]3、菌落总数的卫生学意义:用于判定样品受污染的程度、微生物生长存活动态,对样品进行综合卫生评价。反映食品被细菌污染的程度 预测食品耐放程度和时间 估测食品腐败 状况。[/font][font=宋体]菌落:[/font][i][font=宋体]Colony[/font][/i][font=宋体][font=宋体],单个微生物在适固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度;形成肉眼可见有一定细菌群落。[/font] [font=宋体]CFU: [/font][/font][i][font=宋体]Colony Forming Units[/font][/i][font=宋体][font=宋体],菌落形成单位[/font] [/font][font=宋体][font=宋体]鉴于食品的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在,因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块,也可以来源于单个细胞,因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数,而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位([/font][font=宋体]colony forming units,CFU)报告。 [/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]4.检验步骤直接上图[/font][img=,690,443]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308011004578351_4999_6113937_3.png!w690x443.jpg[/img][font=宋体] [/font][font=宋体]5.培养温度: [/font][font=宋体]? 一般食品:36℃±1℃,培养48h ±2h [/font][font=宋体]? 水产品: 30℃±1℃,培养72h ±3h[/font][font=宋体][font=宋体]注意呀:未加工水产品受到海洋和陆地细菌的污染,[/font] [font=宋体]水产品的培养温度,由于其生活环境水温较低,检验时应采用[/font][font=宋体]30℃±1℃。水产品定义见GB 2760或GB2762 [/font][/font][font=宋体]此处并非指水产制品[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]6.[/font][font=宋体]操作注意事项:[/font][font=宋体][font=宋体]每个样品从开始稀释到倾注平皿所用的时间不得超过[/font][font=宋体]15min,主要为 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]防止细菌增殖和产生片状菌落。(因肠杆菌科繁殖一代所需的时间为[/font] [/font][font=宋体]20min,故选择在15min内) [/font][font=宋体]? 样液与琼脂应充分混合,避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。平皿内 [/font][font=宋体][font=宋体]琼脂凝固后,不要长时间放置,然后倒置培养,可避免菌落蔓延生长。[/font] [/font][font=宋体]? 检样过程中应用稀释剂做空白对照,用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。应为吸取1mL空白稀释液加入到两个无菌平皿内,可表示为空白对照平皿结果0/0。[/font][font=宋体][color=#000090] [/color][/font][font=宋体][font=宋体]选取菌落数在[/font][font=宋体]30~300CFU之间,无蔓延生长的平板计数 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]低于[/font][font=宋体]30的记录具体菌落数,大于300的 可记录为多不可计,每个稀释度采用两个平行的均数。 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]有较大片状菌落生长者不宜采用,若片状小于平板一半时且余部均匀分布,则以半个平板菌落数[/font][font=宋体]2倍报告 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]无明显界限链状菌落每条单链视为一个菌落[/font] [font=宋体](可采用覆盖方式减少菌落蔓延,如对水产、蜂蜜样品时)[/font][/font][font=宋体] [/font]

  • 生活饮用水菌落计数

    一般我们做液体样品的菌落总数检测,菌落在平板上都很细小,有时一眼看上去根本没有,非常仔细看才能看到很小的小点点在培养够48h的情况下,这样的算不算到有效菌落的统计里?如果要计数的话,很难判断是菌落还是别的什么,而且即使用菌落计数器数也很伤眼睛如果不计数的话,多培养几天后有些菌落会长大一点点,感觉的确是菌落那这些细小的点点算不算到菌落总数里呢

  • 菌落总数的检测

    员工手部的菌落总数可不可以直接在培养基上涂抹呀?以前是用棉球檫拭后稀释培养,我现在想用倒好的培养基直接用手涂抹来检测菌落总数,不知道可不可以!做过的培养可以指教一下!谢谢

  • 菌落是不是都是圆形的?

    微生物小白又要提问了,菌落(colony forming units)是微生物培养后,由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落,简称CFU。通常用个数表示。 那么在培养皿上刚开始显示出的菌落的形状,是不是都是圆形的呢? 因为看书看到微生物有杆状、纺锤状、葫芦状。所以看到两个圆珠状的东西联接在一起,犹豫这是一个菌落呢还是两个菌落呢? 如果菌落刚开始的形状都是圆形的,那么就好奇多问一句:为何都是圆形呢??

  • 菌落总数计数

    请问各位同行,菌落总数检测,10的负2结果为菌落蔓延,10的负3结果 15 28,最后的报告是要以负2 还是负3的为准。。。。。

  • 【讨论】菌落总数的习题

    一、填空(1)菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养(48)小时后,所得(1)mL水样所含菌落的总数。(2)若所有稀释度的平板上均无菌落生长,则以(未检出)报告之。第二题,大家是报告0还是未检出?

  • 菌落总数的测试

    测试菌落总数测试的时候可不可以把温度调高,是否可以提早出结果呢?

  • 菌落总数:是不是消毒过度了啊?

    [font=SimSun, STSong, &]之前每次做菌落总数空白实验都长菌,然后买了些消毒剂,在室内消毒,恒温箱超净工作台都消了,结果今天一看没有菌落[/font][font=SimSun, STSong, &]怎么回事啊[/font]

  • 【讨论】水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时,为什么菌落总数报告方式不同?

    [size=4][font=黑体]我们都知道:菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内,所含能于某种固体培养基上,在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时,为什么菌落总数报告方式不同?水质:若所有稀释度的平板上均无菌落生长,则以(未检出)报告之。食品:若所有稀释度均无菌落生长,则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

  • 关于菌落总数与商业无菌

    [font=SimSun, STSong, &]请问一下,做商业无菌中的染色镜检可以看到个别菌落,但做菌落总数后平板并不长菌,这是为啥[/font]

  • 乳酸菌和菌落总数的检测

    固体饮料里面有添加了乳酸菌,在检测固体饮料的菌落总数的时候,按照菌落总数的检测方法会把乳酸菌也给检测出来了吗? 这样的话其菌落总数一定会超标 ,没有可以执行的标准

  • 水分和菌落总数

    水分和菌落总数有直接关系么?比如固体粉末水分7%以下,菌落还是会很多么?

  • 废水中菌落总数和粪大肠菌群

    请教,制衣厂臭氧处理废水菌落总数和粪大肠菌群有直接关联吗,是不是菌落总数包括总大肠菌群,总大肠菌群包括粪大肠菌群?处理前,粪大肠菌群的数据和菌落总数数据比较,是20%,处理后,占1.7%,数据合理吗谢谢大家

  • 废水微生物细菌总数与菌落总数的问题?

    今天出报告时遇到一个这样的问题,我用1000-2018做细菌总数,但地下水的标准钟又叫菌落总数,我想问这个是不是相同的,是不是只是叫法不同而已,我看地下水上的方法也是平皿计数法,那我测出来的是叫细菌总数还是菌落总数呢?我们资质附表中只有细菌总数,客户指明要测菌落总数,那我能不能出这个报告呢?

  • 【讨论】菌落总数计数方法的理解

    在菌落总数的计数中有这样的描述:如果所有的稀释度的菌落数均30,则按最低稀释倍数的结果报告.现在有这样的一个结果:0,0[10-1];0,0[10-2];2,1[10-3];3,0[10-4];那么我最后报告的结果应是多少呢?

  • 请问有谁用过菌落计数仪?

    我们想买一台菌落计数仪,查了一下,有SC-2010型系列全自动彩色菌落计数仪和SCAN-500型自动影像分析菌落计数仪以及手动菌落计数器等.有没有谁用过这些仪器?感觉如何?价格大概多少呢?谢谢.

  • 【资料】-出口食品平板菌落计数

    出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1 主题内容与适用范围  本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。  本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2 设备和材料2.1 工作台:超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2 恒温培养箱:36±1℃。2.3 恒温水浴箱:45±1℃。2.4 均质器。 2.5 振荡器。2.6 吸管:1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7 平皿:直径为90 mm。2.8 稀释瓶:广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9 玻璃珠:直径为5mm左右。 2.10 天平:感量0.1g。3 培养基和试剂 3.1 平板计数琼脂。3.2 75%乙醇。3.3 稀释剂:磷酸盐缓冲稀释液。4 操作程序 4.1 样品制备 4.1.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2 制备样品匀液4.1.2.1 固体或半固体食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1~2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2 干燥或干粉食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2~4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2 稀释样品匀液 4.2.1 用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2 分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3 平板接种4.3.1 对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2 分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3 分别加12~15mL平板计数琼脂(已放45+1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4 培养   待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15%。4.5 菌落计数和记录4.5.1 培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25~250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0~4℃,但不得超过24 h。 4.5.2 如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3 如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4 当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25~250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5 当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6 如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7 同一稀释度的两个平板中,一个有25~250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8 两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25~250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9 某稀释度的两个平板都有25~250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25~250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致;第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落;第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50%,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25%,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数(下表,样品10)。  当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5%之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10%之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6 计算和记录数字  适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。  记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5 结果报告   报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。              平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 <100 (<1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1 平板计数琼脂   胰蛋白胨      5.0g   酵母浸膏      2.5g   葡萄糖       1.0g   琼 脂       15.0g   蒸馏水       1000mL   将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2 磷酸盐缓冲稀释液 贮存液:     磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g   蒸馏水       500mL   用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液:用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明:  本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。  本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草    本标准主要起草人李志培、邓明义。  本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施

  • 菌落计数器的选购标准

    全自动菌落计数器因其计数准确、自动化程度高、可留存样品信息、使用方便,一般可在数秒内统计出样品菌落数、性价比高等优点,而受到众多企业、医院、科研院所的喜爱,但是由于全自动菌落计数器的科技含量较高,如果选型出现问题,对日后的检验、科研工作会带来很大不便,所以最好的办法就是在挑选时一定要挑选一台满足使用需求的菌落计数器,那如何选购一款优质的菌落计数器呢?   一、根据实际使用需求来确定CCD传感器的档次   很多用户偏向于选择像素高的菌落计数器,却没考虑到检验和科研的实际应用需求,所以用户在选购前就要确定好自己要买多少像素的CCD传感器。   二、看图像采集通道功能,指标越多越好   所谓"图像采集通道",就是菌落计数器对于样品信息的获取能力,也就是标志着菌落计数器开始计数统计前的初始信息是否真实可靠。如果图像采集通道功能过于单一,那当后期计数时时会很容易出现误判,所以"图像采集通道"指标越多越好。指标响应时间越小,则标志着该菌落计数器获取样品信息的能力越强。   三、看最小菌落分辨率为多少   一般入门级菌落计数器最小菌落分辨率多半有0.1mm左右的效果,中等机型有0.05mm的水准,若实际比较入门、高阶机型的图档显示能力,拥有高分辨率的计数器,在菌落较小时效果会更明显。   四、看有没有数据及报表管理功能   在选购菌落计数器时一定要选有具有数据及报表管理功能的设备,于由微生物的不可复检性,对于以往检验数据的管理和回溯极为重要,不然在实际开展工作时繁杂的统计数据和报表管理会耗尽科研人员的精力。   五、不要指标高的,就要效果好的   现在有些菌落计数器在给用户介绍时,会宣传他们的产品有多少多少功能,多高多高的指标,实际上等真正买回家,根本用不到这么多功能,最重要的还是要统计菌落的实际效果好不好,不能为了过多的功能而买一个效果不是很好的设备。而统计效果的好坏关键在于算法是否合理。   六、看使用是否方便   全自动菌落计数器的一个主要优点在于它降低了人工统计菌落的工作量,减轻了工作人员的工作强度,但由于菌落形态和样品状态的不确定性,市面上大多数菌落计数器都较为强调通过人工干预来提高准确度。用户在选购设备时应注意操作是否简便、是否符合工作人员的操作习惯和操作思路。一般来说,需要的人工干预越小,使用越简便。

  • 菌落总数能力验证,真的简单吗?

    菌落总数能力验证,真的简单吗?

    [font=宋体][size=16px]菌落总数的测定方法,看似非常简单,但由于食品种类繁多,食品中可能存在的微生物菌群较多,要在同等条件下把所有的细菌培养出来,反应样品的真实情况,实属不易。[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]菌总计数容易会出现哪些问题呢?[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]1、在营养成分单一、保存条件苛刻的食品(水、水产品等)中,微生物复苏、生长缓慢,培养48h计数时容易遗漏[/size][/font][font=宋体][size=16px]2、一些食品处理后,仍存在类似菌落的颗粒状杂质,很难判断是菌落还是杂质[/size][/font][font=宋体][size=16px]3、一些食品容易污染变形杆菌等运动性较强的蔓延菌,培养后无法计数。[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]关键是,能力验证是考察实验室检验能力的外部质量活动,组织方提供试验样本,在菌落总数项目上,一般会考虑增加上述难度。[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]防止蔓延的方法有哪些?[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]No.1 增加覆盖一层琼脂培养基[/size][/font][font=宋体][size=16px]蔓延菌大多为需氧菌,覆盖一层琼脂的目的是隔绝空气,降低需氧菌生长速度。[/size][/font][font=宋体][size=16px]No.2 添加TTC[/size][/font][font=宋体][size=16px]TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑),不仅可以使菌落产生红色,便于辨识,也可部分地抑制大片蔓延菌落的形成。[/size][/font][font=宋体][size=16px]No.3 陶瓦盖代替平皿盖[/size][/font][font=宋体][size=16px]用陶瓦盖代替平皿盖,可有效去除培养基表面水分,阻止细菌移动,有效抑制蔓延。倾注培养基凝固后,用陶瓦盖(干热灭菌)代替平皿盖,正置放入培养箱培养。[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]以上三种方法哪种最好呢?[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]方法:我们分别采用PCA直接倾注法、覆盖一层培养基法、TTC法、用陶瓦盖代替平皿盖法对同一样本进行菌落总数计数。其中,TTC培养基冷却至56℃左右加0.5%的TTC溶液(1mL/100mL)。陶瓦盖法平皿正置放入培养箱培养。[/size][/font][font=宋体][size=16px]从6小时开始观察菌落生长情况并计数,以后每隔12小时观察1次。[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]结果[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][font=宋体][size=16px]PCA直接倾注法菌落生长相对较快,培养24h,菌落数已达到峰值,其他方法平板培养36h或48h后,达到峰值。[/size][/font][font=宋体][size=16px]添加TTC的平板菌落生长相对比较缓慢,且培养到最后,菌落依然比较小,但总体检出数值较高。其原因是TTC平板能将部分细小菌落,或生长于琼脂内部、颜色与平板颜色相近,肉眼不易观察的菌落计出。[/size][/font][img=,690,813]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070918314989_1061_1954597_3.png!w690x813.jpg[/img][img=,690,785]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070918517051_3470_1954597_3.png!w690x785.jpg[/img][font=宋体][size=16px]单因素方差分析,P>0.05(95%置信度),四种试验计数结果并无显著差异。按照微生物能力验证的数据统计分析原则,当Z≤2时方为满意结果。因此虽然方法之间数据差异不大,但有必要提高检验技术,将结果控制在最准确的数值范围之内,才能保证在能力验证评价中取得满意结果。[/size][/font][font=宋体][size=16px] [/size][/font][b][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888][b]文章来源:[/b][/color][/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888]网络,Lab PTP 能力验证平台[/color][/size][/font][b][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888][b]封面图片来源:[/b][/color][/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888]创可贴[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888]会员,能力验证小编整理。[/color][/size][/font][b][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888][b]提醒:[/b][/color][/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=14px][color=#888888]文章、视频、图片等所有内容,仅用于学习交流,若有侵权内容及其他涉法内容,请及时联系删除或修改。 特此声明![/color][/size][/font]

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