圆环打孔取样机

有时候测试的时候会发现中心透射束周围有一个圆环。如果是衍射环的话，应该在最中央吧？[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309151524354095_578_2953379_3.jpg!w690x517.jpg[/img]

我们的电镜偶尔拍衍射时会在透射斑周围出现多余的圆环，见附图。圆环与透射斑和物相的衍射环不同心，换不同样品时都会出现，可以肯定不是样品本生的环，因此怀疑是电镜原因造成的。不知道大家是否遇到过这种情况，请各位帮忙分析一下，都有什么原因可能造成这种现象。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/09/200909132339_170937_1744209_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/09/200909132340_170938_1744209_3.jpg[/img]

[color=black]猪圆环病毒荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法的模块化构建及实践[/color][color=black]1 前言[/color][color=black]猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）在分类学上属圆环病毒科圆环病毒属，为已知的最小的动物病毒之一。病毒粒子直径14~17nm，呈20面体对称结构，无囊膜，含有共价闭合的单股环状负链DNA，基因组大小约为1.76kb。[/color][color=black]PCV对外界理化因子的抵抗力相当强，即便在PH3的酸性环境及72℃的高温环境中也能存活一段时间，氯仿作用不失活，无血凝活性。现已知PCV有两个血清型，即PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒，PCV2为致病性的病毒，是断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS）、皮炎与肾病综合征(Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome,PDNS)的主要病原。猪对PCV2具有较强的易感性，感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪。[/color][color=black]在病猪鼻黏膜、支气管、肺脏、扁桃体、肾脏、脾脏和小肠中有PCV2粒子存在。胸腺、脾、肠系膜、支气管等处的淋巴组织中均有该病毒，其中肺脏及淋巴结中检出率较高。表明PCV2严重侵害猪的免疫系统：病毒与巨噬细胞/单核细胞、组织细胞和胸腺巨噬细胞相伴随，导致患猪体况下降，形成免疫抑制。因此，有必要对猪圆环病毒进行检测，对感染PCV2的商品猪进行疫苗免疫，对PCV2长期阳性的种猪予以淘汰。[/color][color=black]2 模块化检测方法思路[/color][color=black]总体思路是：将动物疫病荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测分为三个模块，核酸提取采用DNA/RNA共提试剂，核酸扩增采用预混液+引物探针方式，质控品利用抗原或商品化疫苗自制。具体思路如下：[/color][color=black]——核酸提取采用DNA/RNA共提试剂；[/color][color=black]——引物探针严格按照标准方法，委托生物工程公司合成；[/color][color=black]——反应体系中其他成分，采购商品化q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]预混液；[/color][color=black]——质控品：阳性对照采用商品化疫苗，测定结果后按一定比例稀释，保存备用。[/color][color=black]——反应体系：设为20μL，其中包含：预混液（2×）10μL、ROX 0.4μL为固定量，引物探针加入量根据检测标准中的终浓度予以换算，加灭菌水补足18μL，RNA模板为2μL；[/color][color=black]——反应条件首先按照标准中的条件开展摸索，如达到预期效果则予以固定；如效果不佳则参照预混液及引物探针推荐条件进行适当调整。[/color][color=black]3 材料和方法[/color][color=black]3.1 病毒[/color][color=black]猪圆环病毒疫苗。[/color][color=black]3.2 试剂[/color][color=black]DNA/RNA共提试剂盒：FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit试剂盒，南京诺维赞生产；[/color][color=black]q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]预混液：AceQ Universal U+ Probe Master Mix V2，南京诺维赞生产。[/color][color=black]3.3 引物探针[/color][color=black]按照GB/T 35901-2018 《猪圆环病毒2型荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》提供的序列，委托上海生工合成，引物稀释成10μmol/L、探针稀释成5μmol/L，分装成小包装冷冻保存备用。具体序列如下：[/color][color=black]正向引物：5’-GGAGTCTGGTGACCGTTGC-3’[/color][color=black]反向引物：5’-CCAATCACGCTTCTGCATTTT-3’[/color][color=black]探 针：5’-FAM-CCGCTCACTTTCAAAAGTTCAGCCA-BHQ1 -3’[/color][color=black]3.4 反应体系[/color][color=black]根据GB/T 35901-2018 《猪圆环病毒2型荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》所载反应体系，按照终浓度一致原则予以转化。具体转换方法：[/color][color=black]——反应体系总体积设定为20μL；[/color][color=black]——将标准中反应体系的10×[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Buffer、MgCl2、dNTPs、Taq酶等成分转换为q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]预混液10μL（推荐量）；[/color][color=black]——因使用ABI7500荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪，故在体系中加入ROX 0.4μL；[/color][color=black]——标准中正向引物、反向引物、探针的终浓度分别为0.2μmol/L、0.2μmol/L和0.12μmol/L，故在修改后的体系中加入量为0.4μL、0.4μL和0.48μL；[/color][color=black]——总DNA加入量修改为2μL（根据经验该加入量已经足够）；[/color][color=black]——根据上述各成分用量，补充体积的无核酸酶水修改为6.32μL。[/color][table][tr][td][color=black]标准方法[/color][/td][td][/td][td][/td][td][color=black]修改方法[/color][/td][td][/td][/tr][tr][td][color=black]10Χ [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] Buffer[/color][/td][td][align=center][color=black]5.0[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]2Χ q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]预混液[/color][/td][td][align=center][color=black]10[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]Taq酶(5U/μL)[/color][/td][td][align=center][color=black]2.0[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]ROX[/color][/td][td][align=center][color=black]0.4[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]dNTPs(100mmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]1.5[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]正向引物(10μmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]0.4[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]MgCl2[/color][/td][td][align=center][color=black]0.25[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]反向引物(10μmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]0.4[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]正向引物(10μmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]1.0[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]探针(5μmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]0.48[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]反向引物(10μmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]1.0[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]无核酸酶水[/color][/td][td][align=center][color=black]6.32[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]探针(10μmol/L)[/color][/td][td][align=center][color=black]0.6[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]总DNA[/color][/td][td][align=center][color=black]2.0[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]无核酸酶水[/color][/td][td][align=center][color=black]26.95[/color][/align][/td][td][/td][td][color=black]总体积[/color][/td][td][align=center][color=black]20[/color][/align][/td][/tr][tr][td][color=black]内参质粒[/color][/td][td][align=center][color=black]0.2[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][color=black]总DNA[/color][/td][td][align=center][color=black]10[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][tr][td][color=black]总体积[/color][/td][td][align=center][color=black]50[/color][/align][/td][td][/td][td][/td][td][/td][/tr][/table][color=black]3.5 反应条件[/color][color=black]参照GB/T 35901-2018 《猪圆环病毒2型荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》推荐的扩增程序，结合ABI7500荧光采集时间不能少于34s的要求，进行预试验。扩增程序如下：[/color][color=black]50℃2min →95℃2min →（95℃15s → 60℃34s）*40[/color][color=black]如扩增结果理想，则不做修改直接采纳，否则进行适当调整。[/color][color=black]4 试验结果[/color][color=black]对猪圆环病毒疫苗（SH株）进行核酸检测，结果较理想。扩增曲线如下：[/color][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009251444312083_9380_1627156_3.jpg[/img][/align][color=black]5 阳性质控的制备[/color][color=black]根据GB/T 35901-2018 《猪圆环病毒2型荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测方法》规定，阳性对照应Ct≤30。对猪圆环病毒疫苗（SH株）适当稀释后进行再次检测，结果如下：[/color][table][tr][td][align=center][color=black]稀释倍数[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1:10^0[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1:10^1[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1:10^2[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]1:10^3[/color][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=black]PCV-2疫苗[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]20.99[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]25.17[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]30.68[/color][/align][/td][td][align=center][color=black]34.80[/color][/align][/td][/tr][/table][color=black]经综合判定，最后采用猪圆环病毒疫苗（SH株）作1: 10^1稀释，分装为200μL/管作为阳性质控，Ct值约25，-70℃冻存备用。[/color][color=black]6 讨论[/color][color=black]6.1 检测工作更加方便高效[/color][color=black]一是在核酸提取环节采用了DNA/RNA共提试剂，待检样品经一次提取核酸，除可应用于圆环病毒、非洲猪瘟等DNA病毒项目检测外，还可应用于口蹄疫、蓝耳病等RNA病毒项目检测；[/color][color=black]二是由于实验室储备了足够量的q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]预混液，在开展检测时，不必担心部分检测量较少的项目由于试剂组分不足而罢工事件的发生；[/color][color=black]三是由于q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]预混液适用于多数DNA病毒项目的检测，在检测任务发生重大变化时，可以方便地调整检测项目，不必担心试剂不足或浪费情况的发生。[/color][color=black]6.2 阳性质控品制备方便[/color][color=black]猪圆环病毒疫苗是较常用的动物免疫用疫苗，只需对疫苗进行含量测定，进行一定比例的稀释即可作为实验室内部的阳性质控品。[/color][color=black]6.3 适用性有待进一步验证[/color][color=black]尽管在构建新方法时，对适用性进行了验证，但对于其他毒株，尤其是较新型的变异株是否有效，尚有待进一步观察和验证。[/color][color=black]6.4 严格依法依规操作[/color][color=black]如果有关法律法规或上级有关部门出台政策，要求采用获批准的成品试剂盒用于检测，则实验室必须及时停止自建方法的使用。[/color]

最近翻查发现存有多个品牌的空心阴极灯，平时都没留意过，一比较之下发现不同灯之间差异还是挺大的，尤其是阴阳极结构。论坛也有不少阴极灯的讨论，但大多都是关于型号规格和操作的，说到阴阳极结构的很少。对于阴阳极结构的不同我也有一些疑问，特发出来请求版友解答。以Cd灯为例，现有Cd灯有三种：T家、A家和国产。T家灯正常使用中，A家和国产灯是新的。[img=图1,412,567]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811080142117622_6519_2926961_3.jpg!w412x567.jpg[/img]如图1，国产Cd灯，环状阳极。貌似这种结构是PE首创，但是我没使用过PE的仪器和阴极灯，希望有PE用户版友可以确证或解释一下差异。[img=,690,600]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811080150167691_6992_2926961_3.jpg!w690x600.jpg[/img]如图2，T家Cd灯，这是窗口视图，也是环状阳极。[img=,690,543]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811080152212506_9239_2926961_3.jpg!w690x543.jpg[/img]如图3，A家Cd灯，窗口视图，A家的阳极是棒状且只有一根。因此，三个品牌阴极灯最大的差异在于阳极，对比一番之后便有了下面三个疑问：疑问1：如图1的国产灯，标示3处的金属小圆环是什么？具有什么作用？疑问2：国产灯和T家都是环状阳极，且在阴极筒上方，那么电场方向应该是与阴极筒平行。A家的阳极在阴极筒一侧，电场方向则应该是垂直于阴极筒。平行方向的电场相较于垂直电场其激发效率不是更低吗？为什么会这样设计？疑问3：在点亮Cd灯之后，我发现国产灯和T家灯的辉光都是集中在阴极筒内，外面是没有辉光的。而A家灯除了辉光在阴极筒内，在阴阳极之间的间隙（如图3标示10处）也有辉光，且不断闪烁，在阴阳极的末端之间还会形成一道桥状辉光（无论是新的Cd灯还是使用中的Pb灯都有这种现象）。这是一个设计缺陷吗？对实际使用有什么影响？

如下图所示，九个圆环杂乱地堆放着，如果把最上面的圆环拉起来，会有几个相互连接在一起的圆环被拉起来呢？ A.5个 B.6个 C.7个[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2005/12/200512131722_11640_1638240_3.jpg[/img]

根据国标：纸板环压强度是指将一定尺寸的试样，插在试样座内形成圆环形，在上下压板之间施压，试样被压溃前所能承受的最大力。环压强度表征纸板边缘承受压力的性能，是箱纸板和瓦楞原纸重要的强度指标。纸板环压强度影响瓦楞纸板的边压强度，而瓦楞纸板的边压强度将对纸箱的整体抗压强度产生重要影响。 将一定尺寸的试样插入圆形托盘内，使试样侧边形成圆环形，然后放人压缩仪的压板上进行电动匀速压缩，当试样压溃时所显示的数值，即为环压强度。该标准试样规格应为：长(纵向)152mm±0.2mm，宽12．7mm±0.1mm，取10片进行检测，其中5片正面朝外进行检测，另外5片反面朝外装入环形托盘中分别进行检测，之后，将这10片检测的结果，求出一个平均值供作换算用。为了提高检测的精确度，应注意认真检测好定量指标，因为定量检测数值的大小，与环压指数换算后的结果有直接的影响。所以，定量的检测试样应有一定的代表性，最好从纸筒横向不同部位取10个试样用于检测，求其平均值，这样检测相对较准确一点。如果10个试样都取纸筒某一纵向部位，检测数值往往缺乏代表性，因为纸筒的横向厚薄误差比纵向误差相对要大些。此外，试样厚度检测的准确性，也与环压强度的检测结果相关。因为试样的厚度不同，检测环压强度所采用的托盘芯直径也不同。所以，厚度检测同样应采用测试不同部位的几个点，求其平均值，作为最后检验结果。厚度指标检测得准确，试样放进托盘中的间隙比较合适，可较好地保证环压强度检测的准确性。这就要求必须严格按照试样的厚度，选择相应的托盘规格(直径)。原纸的紧度、定量如何，很大程度上影响着其环压强度。环压强度好的纸，其环压指数相应也就高；只有先测出环压强度值，才能求出环压指数值。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669192_3133226_3.jpg环压强度和环压指数的换算公式： ①环压强度：R=F／152。式中：R表示环压强度，单位kN／m；F是试样压溃时读取的力值，单位N；152是试样的长度，单位mm。 ②环压指数：Rd=1000R／W。式中：Rd表示环压指数，单位N·m／g；R表示环压强度，单位KN／m：W是试样的定量，单位g／m2。检测仪器为：微电脑压缩强度测试仪检测仪器为：环压试验中心盘检测仪器为：环压取样器主要技术参数：容量：50-3000N试样尺寸：152(±0.5)mm×12.7(±0.1)mm试样厚度范围：0.1-1.0mm精度:±1%壓板直径120mm測試速度:12.5mm/min单位:kg/N/Lb

[img=,690,103]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/06/202206101844430053_4147_3138643_3.png!w690x103.jpg[/img]看到林业的标准有些恼火呀，在LY/T 1215-1999，提到环刀取样器的上、下底盖和带网眼的底盖，一共是三个底盖吗？为啥我们买的只有两个盖？上底盖下底盖哪个是上哪个是下，看的糊里糊涂的，是我理解不到位还是标准说的有问题