叶酸免疫亲和柱
IAC-SEP® 叶酸免疫亲和柱 (产品编号:IAC322) 使用对象IAC-SEP® 叶酸亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸,它采用了柱状琼脂糖凝胶作为固相载体,琼脂糖凝胶与叶酸抗体偶联形成免疫吸附剂,装柱制成免疫亲和柱。它能够特异性的纯化样品中的叶酸。叶酸亲和柱广泛地应用于饮料、牛奶和谷物等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。 原理叶酸免疫亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸,将样品与提取液混合、提取、过滤,然后将滤液通过免疫亲和柱。此时,叶酸物质键合在亲和柱中的抗体上。用蒸馏水将免疫亲合柱上的杂质除去。用洗脱液通过分离柱,将叶酸从抗体上分离下来。最后,将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。储存条件该亲和柱保存在2-8 °C条件下,绝对不能冷冻,保质期为18个月。建议在室温(18-30°C)下使用。实验溶液制备 pH7.4 PBS溶液:8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl 加990mL纯水溶解,加纯水至1升。 10%抗坏血酸钠:称取10g L-抗坏血酸钠100mL容量瓶中,加水溶解混匀。 洗脱液(30%乙腈+0.2%三氟乙酸): 准确量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中,然后再加入0.2mL 三氟乙酸,最后用纯水定容至100mL。 所需其他试剂:胰酶(sigma P1750) 液相色谱条件色谱柱: Agilent-C18,4.6×150mm(5um)流动相:0.1%三氟乙酸:乙腈=85:15(v/v)流速:0.5 mL/min检测器:紫外检测器,280nm进样体积:50uL 分析步骤1) 样品提取及稀释:婴儿配方食品、婴儿即食食品、牛奶、奶粉、谷物、能量棒等样品的操作步骤:称取 1-10g样品(根据需要的检测范围确定称量多少),置于250 mL锥形瓶中。将50mL pH7.4 PBS溶液加入到锥形瓶中,混匀。加入4g 胰酶,摇床震荡10分钟。加入6mL 10%抗坏血酸钠,摇床震荡5分钟。将锥形瓶置于37℃的水浴摇床震荡2 h。然后将锥形瓶置于100℃的水浴中静置20min。取出锥形瓶冷却至室温;用pH7.4 PBS溶液定容至100mL,摇匀。将提取液4000 RPM离心10 min。准确移取吸取上层液10 mL,备用。2) 样品的净化 叶酸免疫亲和柱的柱容量(最大吸附叶酸)为450ng,当样品中叶酸超过测定范围时,请适当减小上柱体积,使其在检测范围内,计算出准确含量。将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。将上述样品提取液注入(或分次注入)玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约2mL/min(1-2滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱,直至液面下降到亲和柱管体(未完全流干)。以2-3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL洗脱液(30%乙腈+0.2%三氟乙酸)洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min(1滴/秒),收集洗脱液于玻璃试管中,然后再加入1.0mL纯水洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min(1滴/秒),收集全部洗脱液于同一玻璃试管中,混匀。供HPLC或LC-MS分析。 注意事项1) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤,如需更改要和本公司技术部联系,确认更改是否合理。2) 操作步骤中,样品过柱,淋洗,洗脱时,一定要控制好流速,不能太快,否则会使检测结果偏低。3) 试验中使用的玻璃仪器等,一定要清洗干净,尤其是用次氯酸等处理过的仪器。 需要准备的设备及试剂(中检维康提供)C/N编号物品21022Clover六位泵流操作架(配有1台空气泵,6个10mL针筒)IAC322叶酸免疫亲和柱(25支/盒)叶酸标准品31955美国vicam微纤维滤纸(1.5um,100张/盒)31240折叠式槽纹滤纸(100张/盒),或中速定性滤纸36010一次性塑料烧杯(25/包)34000一次性测试管(250支/包)36020塑料漏斗(10 个/包)35016色谱纯级的甲醇(4升/瓶)C546150-UCloversil C18 反相色谱柱4.6*150mm(5um)C546250-UCloversil C18 反相色谱柱4.6*250mm(5um)