液相色谱计量

一、前言 液相色谱仪广泛应用于环境保护、食品安全、医疗卫生、科学研究等诸多领域。为了仪器检测的准确可靠，仪器本身首先要测量准确，因此需要对液相色谱仪进行计量检定。上一版本的液相色谱仪计量检定规程距今已有十多年，随着科学的发展，液相色谱仪的检测范围和检测精度也在不断更新，对其进行更准确、更全面、更科学地计量检定，保证其本身的量值准确，是一项非常重要的任务。 新版液相色谱仪计量检定规程JJG 705-2014于今年8月14日起正式实施，实施后取代了原有的JJG 705-2002版本。新版计量检定规程的发布和实施，不仅对计量检定工作者提出新的要求，同时作为仪器的使用者也需要及时更新信息，了解与之相关的新标准、新方法。虽然新版本在“引言”部分对新旧版本计量检定规程中的变化进行了说明，但是仔细阅读和比较两种的内容，在细节方面还是有许多未提及的变化。本文通过简单的对比将两者的区别进行一一列举。二、新旧版本的区别比较版本：JJG 705-2014（简称14版）和JJG 705-2002（简称02版）1、起草单位http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241541_519803_1669358_3.jpg 注：2005年，中国计量科学研究院与原国家标准物质研究中心合并，成立了新的中国计量科学研究院2、引言http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241543_519804_1669358_3.jpg14版增加“引言”部分，在“引言”中阐述了新版本编写的基础和依据、与02版相比新规程主要技术内容的变化、以及历次版本发布情况。3、目录http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241545_519805_1669358_3.jpg注：通过“引言”和“目录”，可以从整体上掌握新旧版本变化4、范围http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241546_519807_1669358_3.jpg14版在“范围”中将“液相色谱仪样机试验和定型鉴定中有关计量性能试验可参照本规程进行”去掉，这是否也意味着新的检定规程将不适用于液相色谱仪样机试验和定型鉴定中有关计量性能试验。5、 引用文件http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241548_519808_1669358_3.jpg14版在正文第二条列出引用文件：JJG 537-2006 荧光分光光度计；02版本在荧光检测器的波长示值误差和重复性检定项目中列出了“参照JJG 538-1988 荧光光度计检定规程”6、 概述概述部分变化不大，仅仅是对个别用词的改变，例如进样系统、分离系统、检测系统等分别代替了进样器、色谱柱（柱温箱）和检测器。7、计量性能要求7.1 输液系统输液系统中，对本两个版本，泵流速设定值、流动相收集时间和允许误差都发生了变化，新版本给出了一个宽泛的空间，可以自由选择JJG 705-2014 液相色谱仪检定规程http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241550_519810_1669358_3.jpgJJG 705-2002 液相色谱仪检定规程http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241552_519814_1669358_3.jpg14版本给出了温度稳定性的考察周期，较02版本更为严谨7.3、检测器[align=cente

本人现在在做液相色谱的计量检定相关实验，按照国标，已经完成一部分了，可是现在碰到一些问题，希望做过这方面的有经验的人士给予提点和帮助，先谢谢各位了！首先是关于梯度误差，按照国标要求，已经执行了梯度程序，也得到了比较好的梯度图，可是至于数据，不知道该怎么处理，Lm说是各段输出信号值平均值的平均值，按照国标中的公式算，不对啊，梯度误差都在百分之几十？？？希望做过这方面的给予提点。下图附件就是梯度图。然后就是关于波长示值误差和线性范围这两块，不知道怎么做，如果按照国标那么做，根本就做不出来啊················差点忘了说，我所检定的液相是岛津LC20的。。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109161352_317068_2271280_3.jpg

本人现在在做液相色谱的计量检定相关实验，按照国标，已经完成一部分了，可是现在碰到一些问题，希望做过这方面的有经验的人士给予提点和帮助，先谢谢各位了！首先是关于波长示值误差，岛津的仪器怎么分别测每个波长下色谱图的峰高啊，就算从每个不同的通道里看到色谱图，也不知道怎么求示值误差啊？然后就是线性范围这块，不知道怎么做，如果按照国标那么做，根本就做不出来啊················差点忘了说，我所检定的液相是岛津LC20的。。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191653_632235_2271280_3.jpg

国产与进口液相色谱仪测试比对报告1.比对目的 选取2010年药典二部及美国药典中典型方法及食品添加剂国标方法对某国产品牌上海伍丰EX1600高效液相色谱仪及其他品牌（以waters仪器为主）液相色谱仪的各项性能进行比较，明确国产仪器优化与改进方向。2.比对依据与原理1. JJG705-2002 液相色谱仪计量检定规程2. EX1600高效液相色谱仪及其他品牌高效液相色谱仪使用说明书3. EX1600高效液相色谱仪系统适用性测试方案及综合改善测试方案4. GB/T 19681—2005食品中苏丹红染料的检测方法--高效液相色谱法5. VensuilAA氨基酸分析方法6. 2010年药典二部及美国药典中双氢青蒿素、可可碱与茶碱、维生素A及阿托伐他汀钙等相关物质的测定方法。7. 需比对的性能指标选取原理：与《JJG705-2002 液相色谱仪计量检定规程》要求直接相关；与仪器关键部件的技术指标直接相关；与仪器测定结果重复性，即仪器稳定性直接相关。8. 样品选取原理：测定结果直接反应仪器的稳定性；属于常用或者经典方法，单标、混标体系均有所涉及；等度和梯度方法均有所涉及（反映梯度误差指标）；与检测器的基本波段（低、中、高波段）均相关的项目（反映全波段检测稳定性）。3.比对内容 高效液相色谱仪对样品的分离与测定结果好坏与仪器的稳定性及色谱柱的柱效相关，现使用同样的色谱柱进行EX1600高效液相色谱仪及其他品牌的色谱仪各项性能比对，就需要了解构成液相色谱的各个系统及整机的稳定性情况。就仪器各个系统的稳定性来讲，按照《液相色谱仪计量检定规程》测试方法，对流量准确度与重复性、噪声与漂移的测定结果能够从仪器方面直接反映输液系统及检测器的运行情况，明确指出这两个核心部件的优化与改进方向。而就整机稳定性来讲，还需要配合标准样品的测试，对其检出限、线性范围和梯度误差及定性定量重复性结果进行比较和评价，作为应用测试指标进一步反映仪器的稳定性好坏。将仪器性能指标与应用测试指标相结合，才能全面、客观地对仪器各项性能的稳定性进行评价与改进。现将主要测试内容列在下表：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311100229_476241_2369266_3.png 根据以上所列比对项目的比对内容，选择苏丹红ⅠⅡⅢⅣ、双氢青蒿素、阿托伐他汀钙、可可碱与茶碱、维生素A、氨基酸作为衡量输液系统、检测器、整机及软件性能综合指标优劣的标准测试样品，其特有的测定条件及测定结果可以综合反映色谱仪的稳定性，现将其优势测定条件与测定结果反映的综合指标列在下表并具体阐述如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311100231_476242_2369266_3.png 据食品国家标准、药典二部及美国药典中的典型方法，我们选取了近年来与食品、药品质量可控性、有效性及安全性密切相关的六类标准样品，依据其测试结果来衡量高效液相色谱仪各项性能稳定性。 苏丹红作为化工试剂，被不法商家非法添加入调味品中，是近年来食品安全领域的热点问题。苏丹红ⅠⅡⅢⅣ易致癌，是我国明文禁止的非食品添加剂。在相关食品国家标准中对其含量有具体的限量值，鉴于其实际测定中响应值低，我们对苏丹红的检测结果可直接体现高效液相色谱仪的噪声、漂移、检出限及线性范围（下限）等指标优劣。同时，苏丹红ⅠⅡⅢⅣ作为四元混标体系，国标方法规定苏丹红Ⅰ检测波长为478nm，苏丹红ⅡⅢⅣ检测波长为520nm，在检测过程中须转换波长，测定结果能够直接反映高波段、波长转换时的噪声与检出限；分离条件为梯度洗脱，可反映输液系统的梯度误差及双泵在梯度洗脱的稳定性。 双氢青蒿素作为单标体系，色谱测定条件为检测波长210nm，测定结果可直接反映检测器在低波段的稳定性及单泵运行情况。 阿伐他汀钙液相色谱检测波长为244nm，位于检测器优势波段的相对低波长处，流动相中含有高比例、洗脱能力较强的试剂四氢呋喃，可直接反映检测器优势波段噪声及单泵稳定性。 氨基酸混标体系共包含17种氨基酸组分，为复杂难分离体系，检测波长为254nm，测定时为梯度洗脱，测定结果可直接体现检测器优势波中段噪声及梯度洗脱时双泵运行稳定性。 可可碱与茶碱的二元混标体系，测定时检测波长为272nm，位于检测器优势波段的相对高波长处，可进行等度分离，测定结果直接反映了检测器优势波段稳定性及双泵在等度洗脱时的稳定性。 维生素A的高效液相色谱测定体系为正相色谱，流动相为正己烷：异丙醇[font=Tim

[align=center]【我爱学习】+液相色谱的校准过程[/align] 为了扩大做农残的项目，我们购买了液相色谱仪，主要是做蔬菜中氨基甲酸酯类，Agilent液相色谱仪1260，带两个检测器，VWD与FLD，有柱后衍生装置，仪器安装调试后要进行检定，我以为会是质检局上门检定，然后出据检定证书，可上门是H计量检测技术有限公司，填写的是校准记录。 因为仪器是新的，安装调试一天时间，很多功能都不会用，由安装工程师来计算基线噪音、基线漂移、打印图谱，计算检出限等，校准人员计算流量等，通过校准学到不少东西，比较了检定与校准的区别，分享给大家。[align=center][img=,394,401]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221303_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图1：安捷伦液相1260带衍生装置[/align][align=left][/align][align=left]一、检定规程[/align][align=left] 检定规程按液相色谱检定规程《JJG705-2014》进行。检定内容包括，基线噪音与基线漂移、定性重复性与定量重复性、泵流量的设定值误差与稳定性、梯度误差、柱箱温度设定值误差与柱箱温度稳定性、检测器性能等。那么校准做哪些内容呢？[/align][align=center][img=,397,396]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221304_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图2：检定项目一览表[/align]二、校准内容1、 VWD紫外可见光检测器1.1基线噪音与基线漂移 选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫外检测器的波长设定为254nm，检测灵敏度调到最灵敏档。开机预热，待仪器稳定后记录基线30min，选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线漂移用30min内基线集市起始点最大信号值（AU/30min）表示。[align=center][img=,553,720]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221305_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图3：软件上计算的基线噪音与基线漂移。[/align]1.2最小检测浓度[align=center][img=,552,663]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221305_02_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图4：萘-甲醇1.00╳10[sup]-7 [/sup]g/mL的色谱图[/align]1.3、定性定量重复性 将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，用100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫外可见光检测器设定为254nm，灵敏度选择适中，基线稳定后由进样系统注入一定体积的1.0×10[sup]-4[/sup]g/mL萘-甲醇溶液标准物质；连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按公式（9）计算相对标准偏差RSD[sub]6[/sub]。[align=center][img=,554,718]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221306_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图5：标准物质连续6次的图谱与RSD值。[/align]2、 FLD荧光检测器2.1基线噪音与基线漂移 选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，检测灵敏度调到最灵敏档，激发波长设定为290nm，发射波长设定为330nm，仪器预热稳定后，记录基线30min，选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式（7）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（FU）做单位表示，基线漂移用30min内基线偏离起始点最大信号值（FU/30min）表示。[align=center][img=,553,592]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221306_02_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图6：FLD检测器的噪声与漂移。[/align]2.2最小检测浓度[align=center][img=,553,634]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221307_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图7：萘-甲醇1.00╳10[sup]-8 [/sup]g/mL的色谱图[/align]2.3、定性定量重复性 将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，用100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫激发波长设定为290nm，发射波长设定为330nm，灵敏度选在中间档，基线稳定后由注入一定体积的1╳10[sup]-5[/sup]g/mL萘-甲醇标准溶液；连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按公式（9）计算相对标准偏差RSD[sub]6[/sub]。[align=center][img=,554,716]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221307_02_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图8：萘-甲醇1.00╳10[sup]-5 [/sup]g/mL的色谱图[/align]3、泵流量设定值误差Ss和流量稳定性S[sub]R[/sub] 设定流量值1.0mL/min，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集10min流出的流动相，在分析天平上称重，按公式（3）计算流量实测值Fm按公式（1）、公式（2）计算Ss和SR，每一设定流量，重复测量3次。[align=center][img=,463,461]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709221308_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=left]三、总结 从上述校准过程可以看出，校准与检定有一定区别，百度上说，[color=#333333]检定过程必须严格执行国家计量技术规范，带有强制性；检定结果要给出计量器具是否合格、能否投入使用的结论。而校准过程，用户可根据需要自主选择校准项目、校准单位和校准时间间隔。校准后只需给出初校准计量器具的示值与标准值之间的关系及可信度，不需要做出计量器具是否合格的结论。用户可自己选择计量器具能否投入使用。因此，计量校准比计量检定更灵活、应用也更广泛。[/color][color=#333333] 液相色谱仪的校准没有做梯度误差，波长示值误差和重复性，线性范围，我询问了校准人员，为何不是检定而是校准，校准人员回答强检范围内的仪器是检定，非强检范围是校准，液相色谱不在强检范围内，所以是校准。校准做的内容比检定的内容少，这样对吗？[/color][/align]