三碘代甲状腺素钠盐

碘是人体必需的矿物质，用以生产甲状腺激素(T3和T4)，从而调控人体的新陈代谢。碘对于甲状腺而言是必不可少的，缺碘会使T3和T4的合成量减少，地方性缺碘常常导致甲状腺肿成为地方性疾病，严重缺碘地区的人还会患先天性甲减。　　在科学史上，碘的发现源于一个“无心插柳”的意外：科学家在操作中倒多了硫酸，一团紫色的蒸汽便因此冉冉升起……　　有趣的是，碘在甲状腺的治疗史上经历了辉煌、衰落、质疑与正名，是与甲状腺演绎了一场精彩的“爱恨情仇”。　医生正在检查甲状腺的健康情况，图源自familydoctor.org　　甲宝玉(西湖欧米) | 撰文　　碘的意外发现之旅　　甲状腺是人体非常重要的一个器官，碘元素是人体必需的微量元素，是合成甲状腺激素的主要的“原料”。碘的多少与甲状腺疾病的关系十分密切：摄入太多容易引起甲亢，摄入不足容易引起甲减。　　有趣的是，历史上有关碘的发现，完全是一场美丽的意外。　　1811年，法国化学家伯纳德库尔图瓦(Bernard Courtois)正在提取制造火药硝石需要的钠盐——碳酸钠(Na2CO3)，它可以从海藻中被分离出来。　　伯纳德库尔图瓦(Bernard Courtois)，图源自gw.geneanet.org　　当他将海藻灰溶液和硝酸钠混合，正准备进行下一步的蒸发时，不慎将硫酸倒多了，过量的硫酸让海藻灰溶液呈现出了一副奇异的现象：一团紫色的蒸汽冉冉升起，看起来十分美丽，但味道却十分呛鼻。　　碘可以升华成为紫色的气体 图源：wikipedia　　随后，库尔图瓦发现这种紫色蒸汽遇冷后变成了紫黑色的颗粒状固体。　　库尔图瓦被这一颗颗神秘的紫色颗粒物吸引住了，他怀疑这是一种未知的新元素。但当时的他没有经济条件去开展试验，于是他把样本交给了他的几位物理学和化学家朋友。这些科学家在经历了几番对这个神秘物质的研究和讨论后，终于确定这是新的元素——碘。1813年11月29日，他们正式宣告了碘元素的诞生。　　至此，碘走到了世人眼前，关于碘的研究和应用也逐渐拉开帷幕。　　海绵治甲肿是碘在起作用?　　虽然碘是19世纪才正式被发现和命名的，但有关碘的传说，早在公元前就流传开了。　　早在公元前1600年起，中国古人就已经知道通过食用烧焦的海绵和海藻来治疗甲状腺肿。在西方，公元前40年时阿尔卑斯山附近的居民也会使用烧焦的海藻来治疗甲状腺肿。　　所以不难看出，虽然那个时候碘的身份还未被揭晓，但是它早已默默地在人们的食谱/药谱中初露头角了。　　直到19世纪碘元素被正式发现后，人们才开始真正探索它来自哪里，以及它与甲状腺之间的关系。　　19世纪初期，瑞士流行着一种很常见、但病因不明的疾病——甲状腺肿。民众对于这种疾病充满了未知和恐惧。当时，日内瓦医学博士让弗朗索瓦科因特(Jean-François Coindet)第一个意识到了碘可以成功治疗甲状腺肿。　　为了证明自己的猜想，科因特选择用海绵来进行检测，发现海绵里面确实含有碘成分。后来他放弃了使用海绵、海藻等产品，直接使用碘来治疗甲状腺肿，在当地的患者群体中取得了较好的疗效。　　1820年，科因特在瑞士发表了演讲，提出碘本身可能就是烧焦的海绵中能治疗甲状腺肿的活性成分。　　这个发现一石惊起千层浪，他的论文迅速在欧洲各地被转载，包括伦敦医学杂志也翻译转载了他的研究。用碘来治疗甲状腺疾病的方法就这样被推广开来。　　从此，碘正式进入了医学史。　　碘：都怪哥太红，人红是非多　　世事难料的是，碘的一夜成名，也给它带来了许多是非——碘能治疗甲状腺疾病的功能逐渐被“神化”了。　　由于碘对于甲状腺肿的治疗效果很好，并且当时人们不需要处方就能买到碘，因此有一些胆大的日内瓦人推断：如果少量碘是好的，那么大量碘就更好了，多多益善。　　有了这样的想法，一些当地人就开始在脖子上挂一小瓶碘酒，一有冲动就喝一小口。结果，让科因特懊恼的事出现了——一部分经常喝碘酒的人逐渐出现了体重下降、心悸及震颤、食欲持续增加等症状。　　第二年，也就是1821年，科因特报告了这些不寻常的病症。虽然我们现在知道这些病人是因为过量补充碘导致他们患上了甲亢，但当时这种疾病还未被发现和定性，所以在那时，碘的名声开始逐渐变差，有一部分人认为它是有毒的。　　但这样的质疑声很快就被碘的光芒掩盖，来自各地的科学家纷纷开始推荐用碘来预防和治疗甲状腺疾病。　　1825年，法国化学家让巴蒂斯特布辛戈(Jean Baptiste Boussingault)从安第斯山脉的天然盐中检测出了碘，他建议用碘盐来预防和治疗地方性甲状腺肿，这是碘第一次在天然的盐中被发现。　　到了1829年，法国医生让纪尧姆奥古斯特卢戈尔(Jean Guillaume Auguste Lugol)建议使用碘化钾制成的碘水溶液来治疗颈部淋巴硬化(颈部出现肿块)。　　此后的几十年中，不断涌现出科学家和医生论证碘对于甲状腺肿有预防和治疗作用，碘的“身价”也因此越来越高。直至1895年，德国化学家欧根鲍曼(Eugen Baumann)在甲状腺中检测到高浓度碘的存在，并指出动物的甲状腺提取物能治疗人们的甲减正是因为提取物中含碘。　　至此，碘被证明了在甲状腺中是天然存在的成分，是治疗甲状腺疾病的“天然良方”。　　也是从这个时候开始，碘的作用进一步被疯狂地夸大。在随后的很多年里，碘成了民众眼中的神药，几乎是临床上的每种疾病都要试一试，看能不能用碘解决问题。　　碘的“万能性”直到20世纪初才被公开质疑。　　质疑后的正名　　对“碘”的神奇性最有力的公开质疑，来自一名著名的瑞士外科医生西奥多科赫(Theodor Kocher)。　　西奥多科赫(Theodor Kocher)，图源自wiki　　在科赫的从医生涯中，他是非常典型的“手术派”医生。1883年，他报告了执刀的前100例甲状腺切除术 1906年增加到3000例 1909年，他描述了其在4250例甲状腺肿手术方面的经验，死亡率低至0.5%。同年11月，科赫因其在甲状腺生理学、病理学和外科手术方面的工作而被授予诺贝尔生理学或医学奖。　　就是这样一位手术派医生，在19世纪凭借精湛的医术将外科手术的死亡率拉低了许多——当时外科手术死亡率为75%，而他操刀的手术死亡率仅为0.5%，主张用手术治疗甲状腺疾病的他，公开表明碘无法治疗甲亢。　　也是因为科赫有获得诺奖的经历，当时许多临床医生在得知他的观点后，放弃了用碘，转而用手术来治疗甲亢。　　颁发给科赫的诺贝尔奖证书　　19世纪晚期时，科赫发现，完全切除甲状腺可能导致由甲状腺激素缺乏引起的克汀病症(当时他称为“甲状腺恶病质”)。　　当时，科赫精湛的手术技巧让刀下的甲状腺被切除得非常干净，而他在随访病人的过程中也发现他们出现了身体机能衰退的现象，这些积累对后人认识甲状腺的生长、发育和代谢是至关重要的。　　总的来说，在发现碘的第一个世纪中，碘不仅被用在甲状腺疾病方面，甚至还用在了许多其他广泛的临床疾病上(比如瘫痪、腹泻、淋巴结核等)。直至1917年至1924年，食盐碘化才作为一项控制甲状腺肿的公共措施在美国施行。　　据医学博士盖伊E亚伯拉罕(Guy E. Abraham)在综述中的介绍，食盐碘化能显著降低补充人群单纯性甲状腺肿的发病率。学者认为，适量补碘可以预防克汀病、地方性甲状腺肿和甲状腺功能减退症。　　我国从1995年开始实施全民补碘计划，到2005年已经成功消除了地方性碘缺乏病。随着食盐加碘在全球的普及，碘缺乏症在许多国家都已经成为了过去式。　　现在，碘更多是作为一种人体定期补充的元素，碘的同位素也在医疗领域发光发热。从19世纪初开始，碘与甲状腺的“不解之缘”延续至今，从未结束。　　参考文献　　1. Thyroid History Timeline | American Thyroid Association　　2. It's Elemental - The Element Iodine (jlab.org)　　3. Discovery and Early Uses of Iodine | Journal of Chemical Education (acs.org)　　4. https://www.thyroid.org/wp-content/uploads/timeline/sawin-discoverers-thyroid-landmarks-coindet.pdf　　5. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3509517/　　6. https://www.eurothyroid.com/about/met/coindet.html　　7. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2868208/　8.https://web.archive.org/web/20130718164615/http://www.jameslindlibrary.org/illustrating/articles/towards-endocrinology-theodor-kochers-1883-account-of-the-un　　9. Abraham, G.E., The history of iodine in medicine. Part 1: From Discovery to Essentiality. The Original Internist, 13(1):29-36, 2006.　　10. https://www.optimox.com/content/Iodine%20Research%20Resources/IOD16.pdf　　11. https://www.eurothyroid.com/about/met/kocher.html　　12. Kocher_ABEM_2009.pdf (thyroid.org)

甲状腺疾病古已有之，有关甲状腺肿的研究也由来已久，我们熟知的埃及艳后——集美貌与智慧于一身的女子克娄巴特拉(Cleopatra)便是甲状腺疾病患者“大军”中的一位。达芬奇画作《持康乃馨的圣母》(Madonna of the Carnation)(局部)中，人物的颈部有甲状腺肿　　由于古代的医学技术并不发达，在很久以前，人们对甲状腺是否异常的认知，大多停留在“肿不肿”的层面上。在西方医学史上，人们对于甲状腺肿的认知可追溯到公元前，此后，在漫长的摸索中才逐渐理清了甲状腺疾病的特征。　　除了认知上的提升外，还有一个有趣的问题是：在外科手术出现之前，人们是怎么来治疗甲状腺肿的?今天我们通过回溯甲状腺相关研究在历史上主要的“里程碑”事件，一起了解前人对甲状腺的认识、相关疾病的诊断以及治疗的发展历程。　　“未知是我们最强大的敌人”。在一种疾病没被发现之前，人们很难去诊断它、治疗它。　　人们对甲状腺疾病的认知就是在这样的境况中逐步发展起来的。从公元前2700年到近现代，人类一直试图揭晓甲状腺的身世之谜，直至几个世纪之前，人们对甲状腺仍一知半解，是在黑暗中摸索着前行。　　初识，它还不叫甲状腺　　从四千多年前至今，全世界的人们对甲状腺这个能触摸到的颈部小器官一直非常好奇。翻阅历史长河，它一直是人们研究的对象。　　最早认识和研究甲状腺的是我国古人，据美国甲状腺协会(ATA)报道，早在公元前2700年时我国古人就已经知道了“甲状腺肿大”的概念。公元前1600年起，我国古人会食用烧焦的海绵和海藻来治疗甲状腺肿。　　Thyroid History Timeline 图源自美国甲状腺协会　　印度对甲状腺的认识也相对较早。公元前1400年，在印度的阿育吠陀(Ayurvedic)医学系统中，就出现了对甲状腺肿的描述，公元前300年，印度教圣典《阿育吠陀》中也讨论了甲状腺肿，并将其称之为“galaganda”，这个词甚至到了今天依然在使用。　　对于西方世界来说，直到古希腊时期，人类才对甲状腺肿有一些介绍。在当时的著作中有所提及，但在学术上这方面还颇具争议。　　举个例子，西方医学始祖、有“医学之父”美称的希腊医生希波克拉底(Hippocrates)曾在他的著作《腺体》(de Glándulas)中表示，“当颈部腺体自身患病时，它们会变成结核并产生甲状腺肿(struma)......”。有意思的是，“struma”这个术语在欧洲一些国家如奥地利、意大利，至今仍然被用作甲状腺肿的医学术语。　　希波克拉底(Hippocrates，前460年——前370年)　　然而，1984年时，英国医学教授弗兰克默克(Frank Merk)在他的综述性论文《地方性甲状腺肿和克汀病的历史及影像学》(History and Iconography of Endemic Goiter and Cretinism)中指出，希波克拉底的著作或这一时期的任何其他人都没有提到甲状腺肿。　　在亚历山大学派(公元前331-156年)的时代，人们简单地认为甲状腺肿只是一种颈部畸形，并且当时的人大多认为这是饮用雪水导致的。　　喝了雪水会导致甲状腺肿?这个观点看似荒谬，当时却有许多医生前往阿尔卑斯山调查甲状腺肿的情况。据美国甲状腺协会的资料，约公元前40年，罗马时期的医生普林尼(Pliny)、维特鲁威(Vitruvius)和尤维纳尔(Juvenal)都描述了阿尔卑斯山甲状腺肿的流行情况，在当地常常会使用烧焦的海藻来进行治疗。　　图源自https://www.thyroid.org　　到这一时期，世界各国的人们对甲状腺都有了朴素的认识，甲状腺被认为是一种畸形的肿大，有关甲状腺的概念、生理学知识和后续种种疾病的认知，都还未被揭露出来。　　甲状腺切除术的出现　　公元前156年至公元576年的这段时间，西方以及阿拉伯地区有关甲状腺的研究处于相对“停滞”阶段。　　直到拜占庭时期(公元330-1453年)，这两个地区才涌现了几位医生，在甲状腺发展史上添上了浓墨重彩的几笔。　　据现有资料介绍，大约550年时，拜占庭时代著名的医生埃蒂奥斯(Aetios)描述了颈部的甲状腺肿大，。更重要的是，他发现了伴有眼球突出症状的甲状腺肿，并将它视为了动脉瘤，而眼突在现在多被视为甲亢的症状。　　961年，甲状腺切除术横空出世——拜占庭医生阿布卡西姆(Abul Kasim)首次描述了甲状腺切除术可以用来治疗甲状腺肿。据美国甲状腺协会介绍，卡西姆还对甲状腺进行了穿刺活检，当然这同我们现代医学上的穿刺活检不一样。　　990年，波斯医生阿里伊布阿巴斯(Ali Ibu Abbas)在他的著作中谈到了甲状腺肿的手术。11世纪时，另一名医生阿尔布卡西斯(Albucasis，1013-1106)成功地为一名患有所谓的喉咙“象皮病”的患者进行了手术，实际上这是一名甲状腺肿患者，这也意味着实际上他可能是第一位经历了甲状腺手术的患者。　　直到12世纪，《班贝格手术》(Bamberg Surgery)一书问世，书中详细描述了手术切除甲状腺肿的过程，一如我们现在的外科手术。　　《班贝格手术》(Bamberg Surgery)封面，图源自耶鲁大学图书馆　　很难想象，在那样一个医疗系统不发达的年代，甲状腺切除术就已经被发明并记载了下来。　　到了1110年，一位名叫尤尔扎尼(Jurzani)的波斯医生将眼球突出与甲状腺肿联系了起来，他发现眼突可能是甲状腺疾病的一种病症(后来我们知道这是甲亢的症状之一)。　　图源自https://www.thyroid.org　　1170年，安条克公国外科医生罗杰奥法萨莱诺(Roger of Salermo)使用海绵和海藻的灰烬作为甲状腺肿的保守治疗方法。但他认为，如果病情严重，在有必要的情况下可以通过手术来切除腺体。　　13世纪，阿拉贡医生阿纳杜斯-德-维拉诺瓦(Arnaldus de Villanova)宣称，海洋里的海绵可用于治疗年轻人新发的甲状腺肿。　　到了14世纪，各国的一些医生，包括中国的名医忽思慧和意大利的维拉诺瓦(A. Villanova)，开始用海绵、海藻和软体动物等海产品来治疗甲状腺肿，有时还会把它们和硝石或锑相混合。　　在同一时期，法国的外科医生盖伊德乔利亚克(Guy de Chaliac，1300-1370)在报告中指出，“甲状腺肿经常被认为是一种局部的遗传性疾病”，他还建议手术切除甲状腺。　　在上述历史中，许多医生和科学家的观点可能有相悖之处。这可能是由于当时甲状腺的生理学(解剖学)结构还未被发现，由此只能在“疑云密布”之下根据自己的经验来判断甲状腺该如何治疗。　　这种蒙眼过河的情形，直到16世纪才有了转机。　　甲状腺之谜逐步被揭开，各种疾病无所遁形　　1500年，知名画家列奥纳多达芬奇(Leonardo da Vinci)绘制了甲状腺的生理学结构，他被认为是世界上第一个识别和绘制出甲状腺生理结构的人。　　达芬奇的画作《蒙娜丽莎》(Mona Lisa)闻名天下，有趣的是，画中的蒙娜丽莎也疑似有甲状腺肿(参见：蒙娜丽莎的微笑：是开心，还是生病了?)。实际上，达芬奇在许多画作中都描绘了甲状腺肿的人物形象，首图中的女性亦然。　　1543年，著名解剖学家、医生安德烈亚斯维萨里(Andreas Vesalius)进一步在书中详细地描述了甲状腺的解剖学结构，并提供了插图。　　安德烈亚斯维萨里(Andreas Vesalius)提供的插图 图源自www.thyroid.org　　随后，1563年，解剖学家巴托洛缪斯尤斯塔修斯(B. Eustachius)首次使用术语“峡部”来表示连接腺体两个叶的部分，这个词沿用至今。　　甲状腺峡部(Isthmus of thyroid)位置示意图 图源：wikipedia.org　　在揭开了甲状腺解剖学的结构之谜后，各路科学家开始在这个领域齐发力，不断地探索甲状腺的功能、甲状腺疾病以及对应的症状。　　1656年，著名英国解剖学家托马斯沃顿(Thomas Wharton)发现了甲状腺以及身体其他腺体确切的解剖结构。　　沃顿也首次揭露了腺体的功能——他认为大部分腺体的主要功能是分泌某种物质，其中颈部的这个腺体是负责保持甲状腺软骨的温度，并润滑颈部，为颈部提供圆润的美感。最终，沃顿以古希腊盾牌的形状将这个腺体命名为“甲状腺”。　　1754年，医学家发现甲状腺异常会导致克汀病，也俗称为“白痴症”。当时的医学文献中首次使用了“克汀”(cretin)一词，“cretin”一词源自拉丁语“christianus”(克汀病)。这种疾病在1602年被菲利克斯普拉特(Felix Platter)发现。　　19世纪初，巴黎发生了一件特别的事——1811年，法国化学家伯纳德库尔图瓦(Bernard Courtois)在实验室做实验时，无意中在被硫酸烧焦的海藻里发现了碘。碘是合成甲状腺激素必不可少的重要“原料”，也可以用来预防和治疗甲状腺疾病。这是甲状腺科学史上里程碑式的发现。　　第一个使用碘作为甲状腺肿补救措施的人是瑞士医生让弗朗索瓦科迪恩特(Jean Francois Coindet)，他总结碘的缺乏会导致甲状腺肿，于是从1820年开始用碘治疗甲状腺肿。　　紧接着，越来越多的医生开始细致描绘甲状腺肿相关的病症。1848年，德国医生卡尔阿道夫冯巴塞多(C. von Basedow)，描述了眼球突出性甲状腺肿，也就是后来我们所熟知的巴塞杜氏病。　　罗伯特格雷夫斯(Robert Graves)　　1896年，终于有科学家证明了碘是作为甲状腺的天然成分存在于甲状腺中的——发现这件事的人是德国化学家欧根鲍曼(Eugen Baumann)。　　1910年，美国医生查尔斯梅奥(Charles H. Mayo)上校用术语“甲状腺功能亢进”定义了眼球突出和腺瘤性甲状腺肿以及中毒性腺瘤的临床状况，这就是我们熟悉的“甲亢”。值得一提的是，梅奥医生是后来鼎鼎有名的“梅奥诊所”的创始人之一。　　1914年，美国化学家爱德华卡尔文肯德尔(E.C. Kendall)首次成功地分离出了甲状腺素，这个名称是他从术语“甲状腺吲哚”中缩写创造出的名字。肯德尔是非常有名的化学家，他于1950年获得了诺贝尔生理或医学奖。　　甲状腺疾病治疗的发展史　　最后，我们再简要地来归纳一下甲状腺疾病的手术治疗。　　第一个已知的甲状腺切除术是由来自日内瓦的医生威廉法布里修斯(Wilhelm Fabricius)于1646年描述的。第一个有据可查的甲状腺肿瘤的部分切除术是在1789年由德索(P.S. Dessault)(1744-1795)完成的。　　1808年，法国解剖学家纪尧姆杜普伊特伦(Guillance Dupuytren)对甲状腺腺体肿瘤进行了全甲状腺切除术，1880年Ludwig Rehn进行了第一次成功的甲状腺切除术。　　至此，甲状腺切除术逐渐成熟。　　而关于甲状腺的治疗药物，从最初的海洋生物如海藻、海绵，到后来的19世纪，人们开始用碘治疗甲状腺疾病，如鲍曼当年使用稀硫酸煮沸了1000只羊的甲状腺，收集了沉淀物并命名为“碘甲状腺素”，这种提取物治疗甲状腺疾病也取得了很好的效果。　　当医疗技术逐步发达后，甲状腺素(T4)被肯德尔提取出来，人们也逐渐舍弃了使用动物甲状腺切片晒干后磨成的粉末来治疗甲状腺疾病。　　1973年时，默克公司上市了优甲乐药片，优甲乐是一种人为合成的甲状腺素，是甲状腺疾病的常规用药。近半个世纪过去了，这个药物一直沿用至今。　　现代医疗技术虽已十分发达，但这些来自中国古代、印度和西方的医生和科学家们为早期的甲状腺研究作出了不可磨灭的贡献，他们的研究方法和思考方式依然值得我们学习。甲宝玉(西湖欧米) | 撰文　　参考文献　　1. Vignette Thyroid Surgery: A Glimpse Into its History - PMC (nih.gov)　　2. Thyroidology over the ages - PMC (nih.gov)　　3. ThyroidHistory Timeline | American Thyroid Association　　4. http://www.hormones.gr/115/article/article.html　　5. WHO_MONO_44.pdf jsessionid=63818B20FEF4CAE68C0F767DC26B0F60　　6. History of disorders of thyroid dysfunction - PubMed (nih.gov)　　7. 25 History of disorders.pmd (who.int)

大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的培养操作与应用！ 一、背景 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞分离自甲状腺组织；甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体，属于内分泌器官。在哺乳动物身体中，它位于颈部甲状软骨下方，气管两旁。甲状腺表面有结缔组织被膜，表面结缔组织深入到腺实质，将实质分为许多不明显的小叶，小叶内有很多甲状腺滤泡和滤泡旁细胞。甲状腺控制使用能量的速度、制造蛋白质、调节机体对其他贺尔蒙的敏感性。 甲状腺依靠制造甲状腺素来调整这些反应，有T3和T4。这两者调控代谢、生长速率还有调解其他的身体系统。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲状腺也生产降钙素，调节体内钙的平衡。其中，甲状腺滤泡上皮细胞（也称为滤泡细胞或主要细胞）是在甲状腺细胞是负责生产和分泌甲状腺激素，甲状腺素（T4）和三碘甲状腺原氨酸（T3）。 二、培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类； 1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 用于RCCS模拟微重力影响大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性和分泌功能的研究： 釆用微重力细胞培养系统（the rotary cell culture system,RCCS）,研究模拟微重力对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性和相关分泌功能的影响,为航天员在失重环境中甲状腺应激和病理性改变的防治提供理论依据。 研究方法应用RCCS技术构建FRTL-5细胞模拟微重力培养系统。将大鼠甲状腺滤泡上皮细胞FRTL-5细胞株随机分为模拟微重力组（simulated microgravity group,SMG）和正常重力对照组（normal gravity group,NG）,分别于培养第6h、12 h、24 h、36 h取细胞及上清液,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,化学发光免疫分析法检测T3、T4、FT3、FT4,ELISA检测上清液中Tg和TPO水平 应用倒置相差显微镜观察培养第6 h、12 h、24 h、36 h后细胞表面形态 透射电镜观察培养12 h和36 h的细胞超微结构 激光共聚焦显微镜观察培养36 h的细胞微丝骨架荧光强度变化。 结果：（1）MTT结果显示,SMG组FRTL-5细胞经6 h、12 h、24 h、36 h培养后,各时相细胞增殖均较NG组受到明显抑制（P0.05）,其中24 h最为明显（P0.01） 36 h表现为两种情况,一是SMG组的细胞增殖恢复,二是NG组的细胞增殖速度快速提升。 （2）流式细胞仪测细胞周期显示,与NG相比,FRTL-5细胞微重力培养6 h、12 h、24 h、36 h后G1期细胞比例显著增高 除6 h外,S期细胞比例明显降低 而各时相的G2/M期细胞比例表现为模拟失重早期（6-12 h）降低,其中12 h出现低谷值,24 h一过性显著增高,36 h回落。研究结果提示,SMG组FRTL-5细胞培养6-12 h阶段DNA合成下降,24 h的DNA合成趋活跃,而36 h的DNA合成后期比例又呈现下降趋势并向NG组的比例靠近。 （3）化学发光免疫分析法检测结果显示,RCCS培养6 h组FRTL-5细胞上清液中FT3、T4和FT4水平显著降低（P（4）ELISA测细胞上清液结果显示,与NG相比,SMG组FRTL-5细胞Tg和TPO分泌均明显升高（P0.01）,表现为6 h即显著升高,随后呈下降趋势,24-36 h阶段又趋上升,其中SMG组的6 h与24 h以及24 h与36 h之间有显著差异（P0.01）。 （5）倒置相差显微镜观察结果显示,模拟失重环境下FRTL-5细胞形态发生显著变化,实验早期细胞逐渐趋于死亡状态,24 h后细胞数量又有所增长。 （6）透射电镜结果显示,模拟失重第12 h,36 h的FRTL-5细胞超微结构发生显著变化。 （7）模拟微重力培养36 h后,激光共聚焦显微镜观察荧光素FITC标记的FRTL-5细胞,发现细胞微丝骨架局部解聚,张力纤维减少,结构和排列紊乱,细胞伪足少见,细胞形状呈不规则。 微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！