快速蛋白系统

求购一台粗蛋白快速测定仪，用于饲料厂检测原料，要求快速，结果准确（跟凯斯定氮仪结果比对）。

[font=宋体][font=宋体]无细胞蛋白表达系统（[/font][font=Calibri]Cell-Free Protein Expression System[/font][font=宋体]）是一种基于原核和真核细胞提取物构建的体外蛋白表达系统。它具有许多优点，例如可以在短时间内生产大量的蛋白质，同时避免了细胞内的复杂调控机制和翻译后修饰等繁琐过程。因此，无细胞蛋白表达系统在生物制药、生物材料、生物燃料等领域具有广泛的应用前景。本文将详细介绍无细胞蛋白表达系统的优缺点。[/font][/font][font=宋体][b]一、无细胞蛋白表达系统的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]高效性：无细胞蛋白表达系统具有高表达效率的优点，这是由于体外体系中不存在靶蛋白累积所需的细胞分裂和细胞复杂代谢反应。此外，由于无细胞蛋白表达系统不受到细胞毒性和免疫反应的限制，可以实现大规模的蛋白质表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]灵活性：无细胞蛋白表达系统可以使用一系列不同的原核和真核细胞提取物作为反应体系，例如[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]、小麦胚芽和人类细胞等。这意味着可以根据不同的实验目的和需求进行合理的选择，以适应多样化的研究需要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]易操作性：无细胞蛋白表达系统非常容易操作。与传统的细胞表达系统相比，无细胞蛋白表达系统不需要细胞培养、生长和繁殖。此外，无细胞蛋白表达系统可以快速进行，通常只需要数小时至几天即可完成目标蛋白的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]简单纯化：由于无细胞蛋白表达系统可以避免有机溶剂和离子交换剂等复杂的步骤，从而使目标蛋白的纯化工作更加简便和迅速。例如，可以使用亲和柱、凝胶过滤和电泳分析等方法来快速分离和纯化蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、无细胞蛋白表达系统的缺点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]成本较高：尽管无细胞蛋白表达系统可以大规模进行蛋白质表达，但是所需的原核和真核细胞提取物通常需要较高的成本。此外，涉及到的一些试剂和设备也比较昂贵，使得无细胞蛋白表达系统在应用过程中存在一定的经济压力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]表达限制：由于无细胞蛋白表达系统缺乏复杂的代谢反应和细胞分化机制，因此它不适用于某些特定类型的蛋白。例如，它无法表达复杂的膜蛋白和困难的药物蛋白等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]不稳定性：无细胞蛋白表达系统通常具有一定的稳定性问题。由于缺乏细胞膜的保护，无细胞蛋白表达体系会更容易受到外部条件的影响，如温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]、离子浓度等，从而导致蛋白质的不稳定性、聚集和降解等现象。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]不适合复杂蛋白结构：无细胞蛋白表达系统对于复杂蛋白结构的模拟效果不佳。例如，膜蛋白、多肽和糖蛋白等复杂蛋白质可能会被无细胞蛋白表达系统无法很好地复制，从而限制了其应用范围。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达系统具有高效、灵活、易操作、简单纯化等优点，但同时也存在着成本较高、表达限制、不稳定性和不适合复杂蛋白结构等缺点。在实际应用中，需要根据具体的研究目的和需求进行选择，并结合其他技术手段来弥补其不足之处。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service][b]无细胞蛋白表达服务[/b][/url]，服务优势：[/font][font=宋体]①快速、高效 ②高成功率 ③一致性 ④高难度抗体表达[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以咨询，具体[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service[/font][/font]

对于乳制品中蛋白质及非蛋白氮的检测方法，国家在2008年发布了GB/T 21704-2008《乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定》和NY/T1678-2008《乳与乳制品中蛋白质的测定 双缩脲比色法》，但GB/T 21704-2008是采用滴定的方法，NY/T1678-2008是双缩脲比色法，检测时间比较长，均无法实现乳制品中蛋白及非蛋白氮的快速检测，造成在鲜奶收购中检测速度慢，运奶车等待时间比较长的现象，是否有一种方法或仪器可快速定量的检测上述物质呢，最好分析时间控制在15分钟以内。

蛋白分析系统在我们选择蛋白分析工具的时候，通常是根据不同的蛋白来选择不同的分析手段，如凝胶电泳、化学荧光染色、质谱等等。但是目前已经研制出的蛋白分析工具的种类繁多，从这一方面也在一定程度上反映了蛋白分析的复杂性。以下是一些近期推出的蛋白分析系统，希望能帮助您轻松完成研究工作。

FPLC简介 FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与高效液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。FPLC是专门用来分离蛋白质、多肽及多核苷酸的系统，是HPLC近年来的一项重要革新，它不但保持了HPLC的快速、高分辨率等特性，而且还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。因此在近年来在分离蛋白质、多肽及寡核苷酸等方面得到了广泛应用随着HPLC的发展，出现了两种新型填料：薄壳型填料和双扩散灌流型填料，它们对大分子物质的分离具有独特的优越性，从而使FPLC的应用领域得以拓展。其可应用于蛋白、有机化合物的分离纯化，能定量测定蛋白的含量和和确定蛋白的分子量，因此可应用于生物学领域和化学领域的研究。 The Pharmacia fast protein liquid chromatography (FPLC) system is used for methods developmnent and the purification of large quantities of various biomolecules (i.e., protein and DNA). The system includes two pumps capable of continuous flow to the purification columns (vary by user) , a peristaltic pump may be used for column equilibration, a UV monitor to detect biomolecules on the column, a mixer to produce elution gradients, motor valves may be used to assist with sample injection, column selection or flow reversal, and a controller with an integration function for computerized operation of various programs directing flow to the pumps and controlling the motor valves. A chart recorder is the typical mode of 'run' documentation.

[font=宋体]在现代生命科学研究中，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白表达技术[/b][/url]扮演着至关重要的角色。通过将外源基因导入宿主细胞，并使其表达特定蛋白，我们能够获取大量高纯度的重组蛋白，为疾病治疗、药物研发和生物工程等领域提供了强有力的支持。本文将介绍重组蛋白表达的原理、表达系统、生产步骤以及应用前景。[/font][font=宋体][b]一、重组蛋白表达的原理[/b][/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白表达是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术，将目标基因（外源基因）导入宿主细胞中，并通过宿主细胞的生物机制使其表达出特定蛋白。其主要步骤包括：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]基因克隆：将目标基因经过[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增后，与表达载体连接，形成重组质粒。[/font][/font][font=宋体]转染或转化：将重组质粒导入宿主细胞中，可以使用化学方法、电穿孔或者嗜热菌等方式进行转染或转化。[/font][font=宋体]表达蛋白：重组质粒进入宿主细胞后，融合到宿主细胞的染色体中，随后遵循细胞的转录和翻译机制，表达出目标蛋白。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、常见的重组蛋白表达系统[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌表达系统：大肠杆菌是常用的重组蛋白表达宿主细胞之一。其优点在于生长快速、易于培养，并且能够产生大量的蛋白。此外，大肠杆菌的遗传工具和代谢途径也被广泛研究，提供了便利。[/font][font=宋体]酵母表达系统：酵母表达系统包括酿酒酵母和毕赤酵母。这些酵母细胞具有真核细胞的特点，能够进行正确的蛋白折叠和修饰。同时，酵母细胞也可以进行大规模培养和高表达，适用于一些复杂蛋白的表达。[/font][font=宋体]昆虫细胞表达系统：昆虫细胞表达系统常用于大规模蛋白表达。昆虫细胞具有真核细胞的优势，能够对蛋白进行正确的折叠和修饰，适合于表达大量需求复杂结构的重组蛋白。[/font][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统：哺乳动物细胞的表达系统可用于高效表达复杂蛋白和进行蛋白质研究。哺乳动物细胞具有真核细胞特点，能够进行正确的蛋白质修饰和折叠，并且在一些特殊情况下需要考虑到人类蛋白的免疫原性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、重组蛋白生产步骤[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞中有两个蛋白生产阶段：转录和翻译，被称为分子生物学的中心法则。换言之，转录和翻译步骤属于重组蛋白表达步骤。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service[/font][font=宋体]，例如义翘神州[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、重组蛋白表达技术的应用前景[/b][/font][font=宋体]药物研发：重组蛋白表达技术被广泛应用于药物研发领域，用于生产重组蛋白药物。这些药物包括多肽类、蛋白类和抗体类药物，如生长因子、抗体药物和血液制剂等。通过重组蛋白表达技术，我们可以获得高效纯度的药物，满足临床上的需求。[/font][font=宋体]生物工程：重组蛋白表达技术被广泛应用于生物工程领域，用于生产特定的蛋白产品。这些产品可以应用于食品、化妆品、工业发酵等领域，如酶制剂、生物染料和生物材料等。[/font][font=宋体]疾病治疗：通过重组蛋白表达技术，我们能够合成特定的蛋白，用于疾病的治疗和诊断。例如，利用重组抗体技术，可以开发出用于癌症治疗和免疫治疗的抗体药物。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

饲料粗蛋白的快速测定1 实验意义 饲料是畜牧养殖生产中的重要生产资料，饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标，对饲料质量进行监管检测十分必要。本文开发了饲料粗蛋白的快速测定方法，比常用的国标法、凯氏定氮法以及强碱蒸馏法更加方便、快捷。采用双氧水—硫酸法是消解饲料样品，减少了消化时间。在我公司饲料快速检测仪特定波长下进行比色测定，根据溶液吸光度（颜色深度）与浓度呈正比关系，转换出粗蛋白含量，，无需滴定，适合实际检测使用。2 测定原理 浓硫酸和30%浓度的双氧水都是强氧化剂。饲料中的有机物接触到浓硫酸便会被脱水炭化，但是在高温条件下，往未被硫酸氧化完全的饲料中加入30%的双氧水，会使饲料中的有机物彻底氧化、分解，放出CO2、SO2，而释放出的氨气则和硫酸结合生成硫酸铵。NH-4+-N在碱性条件下与纳氏试剂络合生成黄色络合物，在特定波长下进行比色测定，氮含量和溶液吸光度（颜色深度）呈线性关系。3 操作步骤 取样品0.2±0.0002g于100ml三角瓶中，后各加入2ml浓硫酸摇匀，管口放一只弯颈小漏斗，三角瓶内放3-4颗玻璃珠，放在电炉上加热，使瓶内液体保持微沸，硫酸大量冒烟，消化液呈酱油色时，将三角瓶取下冷却至不烫手，向管内加入30%双氧水30-40滴，加热消化。反复多次，直至管内溶液澄清透明为止。消化结束后冷却，分别过滤转移至100ml容量瓶中，加水定容至刻度。再各从中吸取2ml定容至另一100ml容量瓶，为待测液。显色后测定吸光度。4 回收率试验 用该方法进行了添加实验和测试结果与常规的比对试验，结果表明，方法回收率在90%—110%之间，与常规测试结果绝对差值符合《GB/T18823-2002饲料检测结果判定的允许误差》标准要求，有关的数据如下：4.1 样品添加实验数据： 样品量mg添加量mg添加后mg回收率%4.4510.4615.76108.134.3310.8015.68105.097.5511.4418.9699.747.21 11.1918.1797.9411.83 11.4423.2599.9111.6311.4423.0699.914.2 速测结果与常规测试结果比对数据： 测试方法样品1样品2样品3速测法蛋白含量41.2%40.5%47.3%常规法蛋白含量40%41%46%绝对误差（%）1.20.51.35 结论 [size=

[font=宋体]蛋白表达系统指宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因顺利的实现在宿主中表达。[b]蛋白表达体系通常由以下几部分组成：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]宿主：用来表达的生物体，可以为细菌（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌）、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种宿主生物本身的特性多种多样，因此采用的表达体系也不相同[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]载体：载体的选择需要根据宿主而定，根据宿主不同，分为原核（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌）表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中还有外源基因片段，外源基因通过载体介导，可以在宿主中表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]辅助成分：有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分，比如：昆虫[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杆状病毒表达系统中的杆状病毒。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白表达的三个主要系统是细菌表达系统（例如乳酸乳球菌和大肠杆菌）、酵母和杆状病毒以及哺乳动物细胞介导的蛋白表达。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]应用：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]表达后的蛋白常应用于：[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）作为抗原制备抗体；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）参与细胞实验与动物实验；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）测定蛋白酶活；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）研究蛋白相互作用；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）研究蛋白结晶结构；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]）免疫组化实验；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]）药物蛋白研究、生产等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]影响蛋白表达的因素有：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白本身的特性：蛋白分子量大小、蛋白来源[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]物种、是否为毒性蛋白，蛋白翻译后修饰程度、蛋白自身结构的复杂程度[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]宿主的选择：宿主本身的特性、蛋白表达需求等都影响着蛋白表达[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]蛋白需求量：蛋白应用范围对应的需求量不同，所以要根据需求量确定表达系统[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]质粒载体的选择：载体是携带外源基因的工具，要根据系统选择合适的载体才能使蛋白更好的表达[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]融合标签的选择：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]蛋白表达系统的优化：重组蛋白的表达往往不像理论那样一帆风顺，在实际的表达过程中有可能产生各种各样的问题，因此表达系统的优化很重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]如何选择合适的表达系统[/font][/b][font=宋体]没有一个表达系统是完美的，要针对每个重组蛋白来评估哪种系统最有效。每个蛋白表达系统的生产速度、成本、糖基化和折叠等特性都各不相同，且跨度很大。如下图：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]蛋白表达系统[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems[/font][/font]

AKTA蛋白纯化系统是当前重组蛋白表达与纯化服务中经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。

[font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用[/font][font=Calibri]DNA(RNA)[/font][font=宋体]重组技术表达的蛋白重组。蛋白表达是将目的基因通过电转化或者热激等手段转入合适的宿主中，利用宿主的特定生理、生化和遗传特点进行目标蛋白大量表达及纯化的生物技术。目前，较为主流的表达宿主有大肠杆菌（[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]）、毕赤酵母（[/font][font=Calibri]P.pastoris[/font][font=宋体]）、昆虫[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杆状病毒（[/font][font=Calibri]Bac-to-Bac[/font][font=宋体]系统）以及哺乳动物细胞系（[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]）等。鉴于目标蛋白的应用场景和自身理化性质的差异，选择合适的表达宿主尤为关键。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]大肠杆菌（[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]）：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]表达系统：原核[/font][font=宋体]优势：经济、快速、高产量、应用广泛[/font][font=宋体]劣势：包涵体；无翻译后修饰；大分子蛋白表达困难[/font][font=宋体]推荐表达：细菌类蛋白；抗原类蛋白；细胞因子；酶类[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]酵母细胞：[/font][/b][font=宋体]表达系统：真核[/font][font=宋体]优势：经济、快速、高产量；部分翻译修饰[/font][font=宋体]劣势：非人源糖基化；高甘露糖修饰[/font][font=宋体]推荐表达：细胞因子；少分子量蛋白；酶类[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞：[/font][/font][/b][font=宋体]表达系统：真核[/font][font=宋体]优势：基因容量大；可溶蛋白；适合毒性蛋白；类似哺乳动物系统；翻译后修饰[/font][font=宋体]劣势：周期长；成本高；缺少部分糖基化[/font][font=宋体]推荐表达：细胞质蛋白；毒性蛋白；跨膜蛋白；分泌蛋白；激酶；[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]哺乳动物细胞[/font][font=宋体]表达[/font][font=宋体]：[/font][/b][font=宋体]表达系统：真核[/font][font=宋体]优势：可溶蛋白；更低内毒素；更好的活性；更好的翻译后修饰；可瞬时转染与稳定转染表达[/font][font=宋体]劣势：周期长；成本高；[/font][font=宋体]推荐表达：分泌蛋白；跨膜蛋白；重组抗体；抗体等[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有原核细胞表达平台、哺乳动物瞬时表达平台、杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫蛋白表达平台，同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]原核（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]E. coli[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]）蛋白表达服务[/b][/url]……可实现重组蛋白和重组抗体的高通量和高产量表达，可为客户提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-antibody-production-service][b]重组表达服务[/b][/url]及一站式定制需求。详情可以关注 大肠杆菌蛋白表达平台：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/e-coli-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font]

朊蛋白与免疫系统相互作用的新发现http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011123113381385.jpg　　12月29日，据《每日科学》报道，痒病是一种神经退行性疾病，它可以作为其他由蛋白积累致组织畸形(蛋白质病)疾病的模型，如阿尔兹海默氏病和帕金森氏病。有关这些基因的许多问题仍然悬而未决。在一个新的博士论文研究中，发现了数个与阮蛋白(PrPSc，与疾病的发展有关)摄取相关的因子以及朊蛋白是如何与肠道内的免疫细胞相互作用。　　羊瘙痒病属于一组被称为"传染性海绵状脑病(TSE)"的疾病，因为它们可以在动物个体之间传播，并导致大脑产生海绵状、退行性改变。这些疾病不仅折磨羊，还折磨牛(牛海绵状脑病，又称疯牛病，BSE)、鹿(鹿慢性消耗性疾病，又称疯鹿病，CWD)以及人类(克雅氏病CJD)。它们在一定程度上也可以在物种见传播，在20世纪90年代，超过200人经由食物感染而患上了克雅氏病。　　传染性海绵状脑病(TSE)，或者称阮病毒疾病，被认为是感染了一种能致病的蛋白质变体--朊蛋白，它是机体细胞的正常组成部分，在脑中含量最为丰富。一般而言，阮病毒疾病可能是传染的、遗传的或偶发/自发的。当正常的朊蛋白突变成致病的变种，疾病便发生了，变种朊蛋白在空间结构上与健康的朊蛋白不同。由于变种的朊蛋白具有不同的空间结构，机体细胞很难降解它，因此它就一直在积累。　　因为朊蛋白(PrPSc)是在疾病早期在肠道系统的淋巴组织中被发现，推测它是经由肠胃道传染。在兽医学家Caroline Piercey Akesson博士研究杂交仪期间，研究了朊蛋白在肠道内的吸收，从而对疾病发展的早期阶段所发生的过程有了新的了解。与早先的推测相反，她通过免疫电镜证明阮蛋白不是直接从肠道转运到肠道相关的的淋巴组织。相反，她发现朊蛋白自由地穿过或穿进肠道淋巴组织之外的淋巴细胞。　　树突状细胞据推测发挥着"看门人"的作用，它决定机体能容忍什么以及当面对外来物时该策划哪一种免疫防御反应。Akeeson的目标之一就是树突细胞与朊蛋白摄取之间的相互作用。首先，需要了解正常的羊肠道内树突状细胞的特点;其次，去调查哪一类型的细胞与阮病毒的摄取有关。　　她的研究结果表明，不是树突状细胞，而是巨噬细胞负责朊蛋白的摄取。Akesson的研究揭示，朊蛋白利用了肠道中大分子物质摄取的正常生理通道，这可能对机体的免疫监视系统有显著影响。一个可能的后果就是免疫耐受被激活，从而阻碍了肠道对所吸收的朊蛋白的正常免疫反应。　　今后的研究能够揭示免疫细胞是如何运输朊蛋白及机体是如何处理朊蛋白，这将具有非常重要的意义，不仅是为了提供更多的关于痒病的知识，还为研究人类和其他动物中神经退行性蛋白质病提供重要见解。　　Caroline Piercey Akesson于12月20日在挪威兽医科学系进行了博士论文答辩，论文的题目是：研究阮病毒的摄取及其与羊肠道中免疫细胞的早期相互作用。

北京易斯威特生物医学科技有限公司产品介绍 铁蛋白（FER）检测试剂盒 （胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测FER的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的铁蛋白，适用于急性贫血，肝脏损伤等相关疾病的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.血清铁蛋白是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物。是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标。血清铁蛋白测定在临床上常用于缺铁性贫血的诊断。简单 便捷 快速 灵敏 环保 肌红蛋白/肌酸激酶/心肌肌钙蛋白I，心梗三项检测试剂盒（胶体金法）1.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的肌红蛋白，肌酸激酶，心肌肌钙蛋白I检测，用于临床快速诊断急性心肌梗塞（AMI）.2.最快速准确的辅助诊断方法。3.肌红蛋白：是心肌梗死的标志物，增高表示冠状动脉堵塞引起心肌严重缺血造成心肌梗死；4.肌钙蛋白：是一种心肌蛋白，升高见于心肌损伤，多见于心肌梗死，也见于心肌炎和心肺复苏后患者，特异性较高，阳性的话一般可确诊心肌损伤，阴性的话不能排除，因为肌钙蛋白的升高出现在心肌梗塞3-6小时之后，之前可能出现阴性。肌酸激酶敏感性较高，特异性较低，升高也出现在心梗3-8小时之后。5.肌酸激酶：主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在，是参与体内的能量代谢的一种酶。在临床上主要用于诊断心肌梗塞。心肌梗塞患者发病后2－4小时，血液中此酶活动即开始升高。比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 简单 便捷 快速 灵敏 环保 C反应蛋白（CRP）检测试剂盒（胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测CRP的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的C反应蛋白，适用于感染，炎性疾病，组织损伤，手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断简单 便捷 快速 灵敏 环保

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[font=宋体][font=宋体]重组蛋白（[/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体]）是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因（[/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]），连接到适合的表达载体，导入到特定的宿主细胞，利用宿主细胞的遗传系统，表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]：原核表达系统：最常用的大肠杆菌蛋白表达，真核表达系统如酵母，哺乳动物细胞蛋白表达（常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]）及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生，产生的重组蛋白作为生物制药的产物，在医学中作用显著。利用基因工程技术，可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例：其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后，将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品，因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前，重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分，常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时，蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外，每个表达系统都有其独特的优势和挑战，这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议，以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]

我想测一下鱼糜的蛋白质含量，由于时间紧促，觉得凯氏定氮太麻烦，想用一种快速的方法测其蛋白质含量，有人知道有什么快捷的方法吗？谢谢～～

pET系统是有史以来在 E.coli中克隆表达重组蛋白的功能最强大的系统。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=113071]pET系统[/url]

[font=宋体][b]什么是重组蛋白？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连，这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念，融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。融合蛋白又称标签（[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]），常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结：在生物制药领域，重组蛋白具有较高的活性和纯度，更易吸收，安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务，例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息，详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

现在，在实验研究基础上，借助多方面的生物信息学方法，可以快速高通量的预测和进行蛋白质鉴定蛋白翻译后修饰。分泌蛋白和膜相关蛋白附着于细胞膜上的或将被排泄出去的蛋白质是由细胞内质网膜上附着的核糖体合成。附着有核糖体的内质网被称为糙面型内质网。这类蛋白质都含有一个N-末端（或氨基端），我们称之为信号序列或信号肽。这个信号肽通常情况下含有13-36个主要疏水性残基，同时它含有多蛋白复合物，我们称之为信号识别粒子(SRP)。这种信号肽在通过内质网膜之后会被去除。信号肽的去除过程是在信号肽酶催化作用下完成的。含有一个信号肽的蛋白质被称为前蛋白，有别于原蛋白。然而，某些用于分泌的蛋白在分泌之后会进一步被蛋白水解，因此包含有原蛋白的序列。这类蛋白质被称为前原蛋白。蛋白水解性裂解许多蛋白质在翻译之后会经历水解性裂解过程。其中最为简单的形式是去除起始蛋氨酸。许多蛋白质合成了不活跃的前体细胞，这些细胞只能在合适的生理条件下通过限制性蛋白水解过程产生活性。在凝血过程中使用到的胰腺酶和酶类就是后者的例证。多肽去除时产生活性的不活跃的前体蛋白，我们称之为原蛋白。前原蛋白的翻译后加工过程的一个复杂的例子就是脑垂体分泌合成的前阿黑皮素原的裂解过程（有关前阿黑皮素原的讨论，见肽类激素页）。这类前原蛋白经过复杂的裂解，根据合成的前阿黑皮素原的细胞定位而不同，其路径也有所不同。另一个前原蛋白的例子就是胰岛素。由于胰岛素是由胰腺分泌的，因此它有一个前肽。随着含24个氨基酸的信号肽的裂解，这类蛋白也折叠成了胰岛素原。胰岛素原进一步分裂，产生活跃的胰岛素，它包含两个肽链，由二硫键进行连接。但仍有其他的蛋白（酶类）被合成为非活跃的前体细胞，被称为酶原。酶原在蛋白水解性裂解时会产生活性，在凝血串联蛋白质链的若干蛋白质中都会发生这种现象。甲基化作用蛋白翻译后的甲基化过程主要发生在氮原子和氧原子上。活性甲基供体是活性腺苷甲硫胺酸(SAM)。最常见的甲基化作用发生在赖氨酸残基的ε-amine上。脱氧核糖核酸组蛋白中赖氨酸残基的甲基化作用可调节核染色质结构，因此可调节其转录活性。赖氨酸原本被认为是一种常设共价标记，可提供长期信号，甚至包括转录记忆时的组蛋白依赖机制。然而，最近的临床研究表明赖氨酸甲基化作用与其他共价修饰体相似，作用时间短，并能通过反脱甲基化活动进行动态调节。最近的组学研究发现表明，赖氨酸残基的甲基化作用不仅发生在核染色质层面，而且还通过修订转录因子影响基因表达。组氨酸的咪唑环，精氨酸的胍基部分以及谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组酰胺（R-group amides ）上，都发现了额外的氮甲基化作用。谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组羧化物也会发生氧甲基化作用并形成甲基酯。蛋白可能在半胱氨酸的R[

铁蛋白，C反应蛋白，心肌三项检测试剂北京易斯威特生物医学科技有限公司产品介绍 铁蛋白（FER）检测试剂盒 （胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测FER的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的铁蛋白，适用于急性贫血，肝脏损伤等相关疾病的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.血清铁蛋白是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物。是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标。血清铁蛋白测定在临床上常用于缺铁性贫血的诊断。简单 便捷 快速 灵敏 环保 肌红蛋白/肌酸激酶/心肌肌钙蛋白I，心梗三项检测试剂盒（胶体金法）1.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的肌红蛋白，肌酸激酶，心肌肌钙蛋白I检测，用于临床快速诊断急性心肌梗塞（AMI）.2.最快速准确的辅助诊断方法。3.肌红蛋白：是心肌梗死的标志物，增高表示冠状动脉堵塞引起心肌严重缺血造成心肌梗死；4.肌钙蛋白：是一种心肌蛋白，升高见于心肌损伤，多见于心肌梗死，也见于心肌炎和心肺复苏后患者，特异性较高，阳性的话一般可确诊心肌损伤，阴性的话不能排除，因为肌钙蛋白的升高出现在心肌梗塞3-6小时之后，之前可能出现阴性。肌酸激酶敏感性较高，特异性较低，升高也出现在心梗3-8小时之后。5.肌酸激酶：主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在，是参与体内的能量代谢的一种酶。在临床上主要用于诊断心肌梗塞。心肌梗塞患者发病后2－4小时，血液中此酶活动即开始升高。比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 简单 便捷 快速 灵敏 环保 C反应蛋白（CRP）检测试剂盒（胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测CRP的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的C反应蛋白，适用于感染，炎性疾病，组织损伤，手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断简单 便捷 快速 灵敏 环保

[b][font=宋体]整合蛋白和跨膜蛋白定义：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]整合蛋白和跨膜蛋白是两类重要的蛋白质，它们在细胞分子水平上起着重要的作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]整合蛋白，也称为内在蛋白或跨膜蛋白，部分或全部镶嵌在细胞膜中或内外两侧，以非极性氨基酸与脂双分子层的非极性疏水区相互作用而结合在质膜上。它们是生物膜的基本结构成分，许多具重要生理功能的膜蛋白均属整合蛋白，如膜结合的酶类、载体蛋白、通道蛋白、膜受体等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]跨膜蛋白，是可以跨越细胞膜的蛋白，它在细胞的信号传递系统中担当着重要的角色。跨膜蛋白在结构上可以分为单次跨膜、多次跨膜、多亚基跨膜等，它们具有能够跨越细胞膜的能力。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]整合蛋白和跨膜蛋白在位置、结构和功能上存在显著的差异[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①位置：整合蛋白主要存在于细胞质内，细胞核或其他非细胞膜结构中，它们容易在细胞中自由移动。而跨膜蛋白则嵌入细胞膜中，一部分位于细胞膜的胞外侧，另一部分位于细胞膜的胞内侧，形成了一个穿过细胞膜的通道。[/font][font=宋体][font=宋体]②结构：整合蛋白的结构通常由两个独立的部分组成，一个是靠近细胞膜的膜结合区域（[/font][font=Calibri]TM[/font][font=宋体]），另一个是靠近细胞骨架的非膜结合区域（[/font][font=Calibri]N-TM[/font][font=宋体]）。当接受到外界的信号时，整合蛋白的[/font][font=Calibri]TM[/font][font=宋体]区域会被激活，把来自外界的信号转化为细胞内可以识别的信号，直接参与细胞信号传导系统中。[/font][/font][font=宋体]③功能：整合蛋白主要是用来从外界传达信号到细胞内，充当细胞与外界信号的桥梁。而跨膜蛋白则在细胞的信号传递系统中担当着重要的角色。[/font][font=宋体]总的来说，整合蛋白和跨膜蛋白在位置、结构和功能上存在显著的差异，这些差异使得它们在生物体中扮演着不同的角色。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白表达与制备服务[/b][/url]，制备流程图：基因合成[/font][font=宋体]→载体构建→细胞转化[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]转染→蛋白表达→细胞收集→细胞破碎→膜脂提取→膜脂增溶→蛋白纯化→质量检测，同时义翘拥有[/font][/font][b][font=宋体]三大跨膜蛋白制备平台[/font][/b][font=宋体]，可以为客户提供全面的多次跨膜蛋白产品和服务。同时，为基础研究和药物研发提供更加优质的原材料。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]正确折叠的膜蛋白在细胞膜上表达，类病毒颗粒[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]通过出芽的方式包裹上携带有靶标蛋白的细胞膜，形成包膜的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]。它是由病毒的衣壳蛋白通过自组装而形成的纳米级颗粒（直径约[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]300[/font][font=宋体]纳米），不含病毒核酸，不能进行自主复制，生产操作过程中较为安全。产生的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]蛋白可直接像可溶蛋白一样进行包被进行[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州已成功开发[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台，它可以将完整天然构象的膜蛋白展示在类病毒颗粒表面，这种方法不仅可以保留膜蛋白的完整结构，同时也能够真实地模拟其在细胞膜上的位置和构象。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]去垢剂技术平台[/font][/b][font=宋体][font=宋体]由于存在疏水结构域，跨膜蛋白与膜的结合非常紧密，需要用去垢剂（[/font][font=Calibri]detergent[/font][font=宋体]）才能从膜上洗涤下来，[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]作为一种两亲性分子，疏水尾部包裹目的蛋白的疏水区域，亲水头部位于与溶液接触的界面。微团的形成是膜蛋白增溶的基础，当去垢剂浓度高于[/font][font=Calibri]CMC[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Critical micelle concentration[/font][font=宋体]，临界胶束浓度）时会形成微团，增溶后，去垢剂将蛋白周围的磷脂置换，从而实现收集目标膜蛋白的目的，后续再进行蛋白纯化，最终蛋白呈现在含有[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]的溶液中。义翘神州成功搭建了去垢剂技术平台，利用该平台可有效提高跨膜蛋白的产量和纯度。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]结构稳定，与天然的生物膜非常相似，使得[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]能够很好地应用于膜蛋白的研究。目前[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]平台有[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]种方式，一种是基于苯乙烯马来酸酐共聚物（[/font][font=Calibri]SMA[/font][font=宋体]）组装的[/font][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台，如下图（左）所示，它可以直接从细胞膜上提取膜蛋白，使其变为可溶性蛋白，组装完成的蛋白样品很稳定，更能维持蛋白的天然构象。另一种是基于膜骨架蛋白（[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]）的[/font][font=Calibri]MSP-Nanodisc[/font][font=宋体]平台（下图右），它需要先将膜蛋白利用去垢剂制备出来，然后再加入磷脂分子和[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]进行组装。通过调整磷脂、[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]和待组装膜蛋白三者的比例，可以使得待组装膜蛋白在[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]中呈不同聚集状态。义翘神州已成功搭建了[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台，利用跨膜蛋白与磷脂结合能够维持其良好活性的特性，制备出稳定的产品，满足动物免疫、抗体筛选、[/font][font=Calibri]cell-based assays[/font][font=宋体]等场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白（[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白）是指在基因水平上将目的基因同免疫球蛋白部分片段基因相连，并在真核或原核表达系统中表达的重组蛋白。抗体融合蛋白具有抗体的特性及融合功能蛋白的活性，可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化及抗体和抗原的定量分析等，特别可用于免疫导向药物的制备。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同，可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白与单链抗体（[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]）融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白结构：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白研究表明，抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）形成的抗原结合部位十分接近，有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成，如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合，可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响，从而降低抗体与抗原的结合能力。因此，通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合，形成抗体融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合，可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同，可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白作用原理：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区，可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性，通过这种特性的引导，将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位，进而发挥一定的生物效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分，利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白制备：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法，但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大，随着基因工程技术的发展，该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其制备原理为：将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列（[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]）进行链接，然后将链接产物亚克隆至载体中，并用原核或者真核表达系统进行表达。制备抗体融合蛋白过程中，一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri](Linker)[/font][font=宋体]的长度，[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短，可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，又涉及免疫原性的问题。抗体融合蛋白与双特异性抗体抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白，若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白，即可得到双特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]结构：[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]型[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备方法：杂交瘤技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]基因重组[/font][/font][font=宋体][font=宋体]表达系统：真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理：特异性识别抗原，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段引起[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADCP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]结构：具有多种结构[/font][font=宋体]制备方法：基因重组[/font][font=宋体][font=宋体]表达系统：真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理：功能蛋白与靶分子间的受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体的相互作用[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以参考：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=Calibri] [/font]

牛奶蛋白质分析仪可以用于检测乳蛋白制品。以下是详细解释和相关信息：　　功能与应用：牛奶蛋白质分析仪是一种专门用于分析牛奶及其制品中蛋白质含量的仪器。它基于先进的生化分析技术，如比色法、光谱法或电化学法等，能够准确、快速地检测样品中的蛋白质含量。　　乳蛋白制品的检测：乳蛋白制品，如奶粉、酸奶、奶酪等，其蛋白质含量是产品质量和营养价值的重要指标。牛奶蛋白质分析仪可以有效地检测这些乳蛋白制品中的蛋白质含量，为生产厂家提供准确的质量控制手段。　　优点与特点：　　准确性高：牛奶蛋白质分析仪具有高灵敏度和高准确性，能够确保测量结果的可靠性。　　快速便捷：该仪器操作简单，使用方便，可以快速得出测量结果，提高检测效率。　　适用范围广：除了牛奶及其制品外，还可以用于其他含蛋白质样品的检测，如豆类制品、肉制品等。　　在乳品工业中的重要性：随着乳品市场的不断扩大和消费者对乳制品质量要求的提高，牛奶蛋白质分析仪在乳品工业中的重要性日益凸显。它可以帮助乳品企业提高产品质量、降低生产成本，同时为消费者提供更加安全、健康的乳制品。　　综上所述，牛奶蛋白质分析仪是一种功能强大、应用广泛的检测仪器，完全可以用于检测乳蛋白制品中的蛋白质含量。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405271615421543_8284_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

[font=宋体]重组蛋白的表达（尤其是使用细菌载体和宿主）是一项成熟的技术。难点在于如何将其以活化形式分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白的纯化是生物学研究中的重要技术。为了研究蛋白的特定功能和结构，研究人员必须将重组蛋白从生物体中分离并纯化。蛋白纯化方法主要利用不同重组蛋白之间的相似性和差异性。可以根据蛋白之间的相似性去除非蛋白物质，然后根据蛋白之间的差异分离纯化目标重组蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是一种可以提高重组蛋白的溶解度、简化蛋白纯化的简单有效的工具，并通过简单的方法跟踪蛋白表达和纯化过程。此外，蛋白标签是追踪活细胞中蛋白和进程的一种有效工具，可以通过显微镜直接跟踪或者通过[/font][font=Calibri]Western blot[/font][font=宋体]、免疫沉淀或免疫染色间接进行跟踪。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化的原理：[/b][/font][font=宋体]不同的重组蛋白具有不同的氨基酸序列和空间结构，导致其物理、化学和生物学特性存在差异。我们也可以根据目标蛋白与其他蛋白和裂解液的性质差异设计合理的蛋白纯化方案。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大多数的纯化方案需要不止一步才能达到理想的纯度水平。该过程中的每一步都会造成一定的产品损失，假设每一步的获得率为[/font][font=Calibri]80%[/font][font=宋体]。因此，建议尽可能减少纯化步骤。起始原料的选择是纯化过程设计的关键。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在背景信息、检测方法和样品规格都已到位的情况下，可以考虑采用三阶段纯化策略。纯化分为捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段，每个阶段都有特定的目标。捕获阶段的目标是分离、浓缩和稳定目标产物。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification]蛋白纯化[/url]操作步骤：[/b][/font][font=宋体]理想情况下，最终的纯化过程包括样品制备，其中包括在需要时进行萃取和澄清，然后进行上述捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段的纯化。步骤的数量始终取决于所需的纯度和蛋白的预期用途。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同表达系统的蛋白纯化服务，有细菌系统蛋白纯化、哺乳动物瞬时系统蛋白纯化、杆状病毒系统蛋白纯化。详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification[/font][/font]

传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。 目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。1 图象分析技术（Image analysis）“满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉，每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失，都可能在生理和病理状态下产生，必须依靠计算机为基础的数据处理，进行定量分析。 在一系列高质量的2-DE凝胶产生（低背景染色，高度的重复性）的前提下，图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。 首先，采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD（charge coupled device）照相机；激光密度仪（laser densitometers）和Phospho或Fluoroimagers，对图象进行数字化。 并成为以象素（pixels）为基础的空间和网格。 其次，在图象灰度水平上过滤和变形，进行图象加工，以进行斑点检测。 利用Laplacian，Gaussian，DOG（difference of Gaussians） opreator使有意义的区域与背景分离，精确限定斑点的强度、面积、周长和方向。图象分析检测的斑点须与肉眼观测的斑点一致。 在这一原则下，多数系统以控制斑点的重心或最高峰来分析，边缘检测的软件可精确描述斑点外观，并进行边缘检测和邻近分析，以增加精确度。 通过阈值分析、边缘检测、销蚀和扩大斑点检测的基本工具还可恢复共迁移的斑点边界。 以PC机为基础的软件Phoretix-2D正挑战古老的Unix为基础的2-D分析软件包。 第三，一旦2-DE图象上的斑点被检测，许多图象需要分析比较、增加、消减或均值化。 由于在2-DE中出现100%的重复性是很困难的，由此凝胶间的蛋白质的配比对于图象分析系统是一个挑战。 IPG技术的出现已使斑点配比变得容易。 因此，较大程度的相似性可通过斑点配比向量算法在长度和平行度观测。 用来配比的著名软件系统包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，计算机方法如相似性、聚类分析、等级分类和主要因素分析已被采用，而神经网络、子波变换和实用分析在未来可被采用。 配比通常由一个人操作，其手工设定大约50个突出的斑点作为“路标”，进行交叉配比。 之后，扩展至整个胶。例如：精确的PI和MW（分子量）的估计通过参考图上20个或更多的已知蛋白所组成的标准曲线来计算未知蛋白的PI和MW。 在凝胶图象分析系统依据已知蛋白质的pI值产生PI网络，使得凝胶上其它蛋白的PI按此分配。 所估计的精确度大大依赖于所建网格的结构及标本的类型。 已知的未被修饰的大蛋白应该作为标志，变性的修饰的蛋白的PI估计约在±0。25个单位。 同理，已知蛋白的理论分子量可以从数据库中计算，利用产生的表观分子量的网格来估计蛋白的分子量。 未被修饰的小蛋白的错误率大约30%，而翻译后蛋白的出入更大。 故需联合其他的技术完成鉴定。

[font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中，免疫分析方法被广泛应用，包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）和免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应，通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内，产生免疫反应后分离抗体，进而进行检测。尽管应用广泛，但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体，操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合，两者实现共同表达。通过对融合标签的检测，我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合，广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究，已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作，降低了成本，而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]），可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]），对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]－甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移（[/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体]）获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色萤光蛋白）是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]无细胞蛋白表达是一种体外重组蛋白质表达技术也称为无细胞蛋白质合成技术（[/font][font=Calibri]CFPS[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]Cell-free protein synthesis[/font][font=宋体]），是指用含有蛋白合成必需的组分（核糖体，转运[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，氨酰合成酶，启动[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]延伸[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]终止因子，三磷酸鸟苷，[/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]Mg2+[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]K+[/font][font=宋体]）的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。无细胞蛋白表达技术适用于制备各种类型的蛋白质，包括难表达蛋白质、毒性蛋白质、复杂蛋白质等。在药物研究、生物制造和生命科学等领域中得到广泛关注和应用，无论是研究、开发还是商业化应用过程。目前无细胞蛋白表达主要应用于药物研发领域，例如抗体制备和生物药物生产等。随着人工智能技术的不断发展，无细胞蛋白表达技术可以与人工智能算法结合，构建计算机辅助的高通量生产系统，实现个性化、精准的生物医学治疗。除此之外，还能够应用于其他领域，例如基因工程、环境保护和农业生产等。随着无细胞蛋白表达技术的不断发展和人工智能技术的不断进步，我们可以看到更多的新领域和新应用出现，给生物科技行业带来更多的机遇和挑战。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]相较于传统的活细胞蛋白表达技术，无细胞蛋白表达技术具有以下几个显著的优势：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]更高的蛋白质表达量：传统的活细胞蛋白表达技术受限于细胞本身的多方面因素，其表达的蛋白质数量往往受到限制。而无细胞蛋白表达技术通过在体外底物浓度高的环境中进行合成反应，不但避免了传统活细胞表达所面临的方方面面的限制，还能够很好地控制反应体系，从而获得表达量更高的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]更快的表达速度：传统活细胞蛋白表达需要细胞生长并达到最佳密度才能进行蛋白质表达，这个过程往往需要数天时间。而无细胞蛋白表达技术通常只需要数小时就能够完成蛋白质的表达，这个速度明显快于传统活细胞表达技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]更精准的蛋白质合成：无细胞蛋白表达技术在体外进行蛋白质合成，能够精确控制底物浓度、反应温度、反应剂比例等参数，因此可以更加精准地合成定制的蛋白质，这对于研究和应用来讲具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]更灵活控制：在无细胞蛋白表达技术中，可以使用分离的组分体系进行蛋白质的合成，可以控制底物和反应剂的比例，也可以在适当的反应条件下进行自定义的修饰，如蛋白质标记、药效分析等。这些优点使得无细胞蛋白表达技术更加灵活、可控，适用于更广泛的应用领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达技术是一种飞速发展的新型生物技术，具有广阔的应用前景和潜力。该技术可以快速、高效、经济地合成蛋白质，可广泛应用于医疗、制药、农业、生物材料等多个领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]医疗领域：无细胞蛋白表达技术在医疗领域应用广泛，可以用于生产多种蛋白质药品，如单克隆抗体等。其中，单克隆抗体是一种重要的治疗药物，具有高度特异性和亲和力，可用于肿瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病等疾病的治疗。传统单克隆抗体生产方法需要花费大量时间和成本，而无细胞蛋白表达技术则可以在短时间内大规模合成单克隆抗体，从而大大缩短生产周期，并且可以降低成本。此外，无细胞蛋白表达技术也可以用于疫苗研发。比如疟疾疫苗研究开发昂贵又耗时，目前利用[/font][font=Calibri]WGE[/font][font=宋体]系统可加速疫苗研发，并建立高通量疟原虫抗体筛查系统。[/font][font=Calibri]Stark[/font][font=宋体]等利用大肠杆菌的便携式冻干裂解物再水化，[/font][font=Calibri]1h[/font][font=宋体]内合成高致病性病原体土拉弗朗西斯菌亚种的生物偶联疫苗，与工程菌生产的疫苗相比，其可引发更高水平的病原体特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]制药领域：是无细胞蛋白表达技术的一个重要应用领域。药物开发的成功率取决于药物分子对目标蛋白的亲和力，而目标蛋白对于专一的细胞表达系统和分类的组织或器官非常敏感。通过无细胞蛋白表达技术，研究人员可以在不依赖于细胞的情况下直接生产大量需要的蛋白质，为药物研发提供了更快更便捷的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]基础研究领域：利用无细胞蛋白质合成系统可以直接对表达产物进行核磁共振分析，目前已确定了数千个蛋白质的结构。可以通过合成蛋白质建立蛋白质阵列，解开基因产物的功能；应用核糖体展示和 [/font][font=Calibri]mRNA [/font][font=宋体]展示技术，更有利于实现高通量筛选，全面深入研究基因特征和功能。通过无细胞蛋白表达技术可以实现对大型蛋白质的生产和分析，同时也为基础研究打开了新的研究领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州无细胞合成服务正在活动中，活动时间[/font][font=Calibri]2023[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]月[/font][font=Calibri]23[/font][font=宋体]日[/font][font=Calibri]-12[/font][font=宋体]月[/font][font=Calibri]31[/font][font=宋体]日。有需求的可以咨询或者进入义翘神州网进行查看。更多详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service[/font][/font]

传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。 目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。1 图象分析技术（Image analysis）“满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉，每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失，都可能在生理和病理状态下产生，必须依靠计算机为基础的数据处理，进行定量分析。 在一系列高质量的2-DE凝胶产生（低背景染色，高度的重复性）的前提下，图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。 首先，采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD（charge coupled device）照相机；激光密度仪（laser densitometers）和Phospho或Fluoroimagers，对图象进行数字化。 并成为以象素（pixels）为基础的空间和网格。 其次，在图象灰度水平上过滤和变形，进行图象加工，以进行斑点检测。 利用Laplacian，Gaussian，DOG（difference of Gaussians） opreator使有意义的区域与背景分离，精确限定斑点的强度、面积、周长和方向。图象分析检测的斑点须与肉眼观测的斑点一致。 在这一原则下，多数系统以控制斑点的重心或最高峰来分析，边缘检测的软件可精确描述斑点外观，并进行边缘检测和邻近分析，以增加精确度。 通过阈值分析、边缘检测、销蚀和扩大斑点检测的基本工具还可恢复共迁移的斑点边界。 以PC机为基础的软件Phoretix-2D正挑战古老的Unix为基础的2-D分析软件包。 第三，一旦2-DE图象上的斑点被检测，许多图象需要分析比较、增加、消减或均值化。 由于在2-DE中出现100%的重复性是很困难的，由此凝胶间的蛋白质的配比对于图象分析系统是一个挑战。 IPG技术的出现已使斑点配比变得容易。 因此，较大程度的相似性可通过斑点配比向量算法在长度和平行度观测。 用来配比的著名软件系统包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，计算机方法如相似性、聚类分析、等级分类和主要因素分析已被采用，而神经网络、子波变换和实用分析在未来可被采用。 配比通常由一个人操作，其手工设定大约50个突出的斑点作为“路标”，进行交叉配比。 之后，扩展至整个胶。例如：精确的PI和MW（分子量）的估计通过参考图上20个或更多的已知蛋白所组成的标准曲线来计算未知蛋白的PI和MW。 在凝胶图象分析系统依据已知蛋白质的pI值产生PI网络，使得凝胶上其它蛋白的PI按此分配。 所估计的精确度大大依赖于所建网格的结构及标本的类型。 已知的未被修饰的大蛋白应该作为标志，变性的修饰的蛋白的PI估计约在±0。25个单位。 同理，已知蛋白的理论分子量可以从数据库中计算，利用产生的表观分子量的网格来估计蛋白的分子量。 未被修饰的小蛋白的错误率大约30%，而翻译后蛋白的出入更大。 故需联合其他的技术完成鉴定。2 微量测序（microsequencing）蛋白质的微量测序已成为蛋白质分析和鉴定的基石，可以提供足够的信息。 尽管氨基酸组分分析和肽质指纹谱（PMF）可鉴定由2-DE分离的蛋白，但最普通的N-末端Edman降解仍然是进行鉴定的主要技术。 目前已实现蛋白质微量测序的自动化。 首先使经凝胶分离的蛋白质直接印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上，染色、切割，然后直接置于测序仪中，可用于subpicomole水平的蛋白质的鉴定。 但有几点需注意：Edman降解很缓慢，序列以每40 min 1个氨基酸的速率产生；与质谱相比，Edman降解消耗大；试剂昂贵，每个氨基酸花费

“三聚氰胺毒奶”的阴影尚未从消费者的心中散去，“皮革毒奶”又开始威胁消费者的生命安全。在三聚氰胺成为严打对象后，又有不法企业为提高乳制品中的蛋白质含量，在乳制品中混入皮革水解蛋白，制造出“皮革毒奶”。 皮革水解蛋白就是利用已经废弃的皮革制品或动物毛发，水解之后制成粉状，因其氨基酸或者说蛋白含量较高，故人们称之为“皮革水解蛋白粉”。 “皮革水解蛋白粉”中含有的有毒物质被人体吸收、积累，可导致中毒，使关节疏松肿大，甚至造成儿童死亡。 为此，中国农业部2月12日下发2011年度生鲜乳制品质量安全监测计划，其中除要检测三聚氰胺外，还要检测“皮革水解蛋白”和碱类物质。据称，皮革水解蛋白的检测难度比三聚氰胺更大，因为它本来就是一种蛋白质。当前，国内多数参考1978年版《ISO：3496-1978肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定》使用分光光度法测定乳品。主要检测方法是检查牛奶中是否含有羟脯氨酸，这是动物胶原蛋白中的特有成分，在乳酪蛋白中则没有，所以一旦验出，则可认为含有皮革水解蛋白。 已经在消费者心中树立起“食品安全卫士”形象的岛津公司，长期关注中国的乳制品安全问题，为中国用户提供了一系列的乳制品检测解决方案。其中，岛津上海分析中心结合岛津独特的氨基酸分析系统和欧洲药典收录的氨基酸分析方法，率先开发出柱后衍生液相色谱分析乳制品中L(-) - 羟脯氨酸的检测方法。 该方法使用岛津氨基酸柱后衍生系统锂型分析柱建立了牛奶制品中24种氨基酸的高效液相色谱柱后衍生分析方法，柱后衍生及样品测定为全自动完成，消除了柱前衍生不同操作人员引入的人为误差，大大简化了样品前处理步骤，节约了时间，是一种可靠快速的检测方法。本方法可以直接用于检测牛奶中24种氨基酸。