大容量梯度仪

甲醇/水做梯度分析时为何比乙腈/水漂移大？

0即样品顺离心力方向沉降σ〈 S时 V〈 0即样品逆离心力方向上浮σ=S时 V=0即样品停止沉降或上浮，"稳定"在这一位置用这个公式可以很好地解释在速率一区带离心法或等密度离心法中单一样品的沉降（或上浮）行为。二、 转头的选择：1、离心转头分类：转头类别 使用的离心机 发明时间、发明者或推广商固定角式转头 低、高、超速 1943年，（英）Pickels甩平转头 低、高、超速 1951年，（德）Kahler垂直管转头 高、超速 1974-1975年，（美）Dupont公司区带转头 低、高、超速 1964-1965年，（英）Anderson、（英）MSE公司近垂直管转头 超速 1989年，（日）Hitachi Koki、（美）Beckman公司连续离心转头 低、高、超速 1965年，（英）MSE公司其他特种转头：分析转头，土壤脱水转头，细胞浮选转头，管式转头，血球比测定转头，细胞清洗转头等等。2、 各种转头用于密度梯度离心的比较：（I） 各种转头用于速率一区带（R-z）离心的优缺点分析：固定角式转头：壁部放应影响很大，用于R-z离心回、收率低，纯度也受影响一般知用于差分离心和等密度离心，离心时间向较短。是各其离心机的最高速转头。甩平转头：细长离心管用于R-z离心可以获得较高纯度和高分辨率，且容易控制离心时间，壁部入在很少。25000rpm~30000rpm的甩平转头最适用于亚细胞器的离心分离，而40000~42000rpm的甩平转头适合用于核酸、蛋白、病毒草类物质内流的分离。离心时间较长。垂直管转头：沉降距离最短，因而离心分离时间也是短。最大半径前几乎没有壁部放位，最大本径后右一定壁部效位，垂直剖面积较大，因而离心后纯样品区带的容量也较大。但在有沉殿的密度梯度离心中，沉淀和浮动区带方向转换之间存在干扰，可能影响纯样品区带的纯度。大部份R-z离心没有沉殿，垂直管转头很适合做R-z离心。近垂直管转头：管轴线与旋转主轴之间倾角7度~9度（角式转头20度~45度）沉降距离比垂直转头稍大，离心时间比角式，甩平转头都要短。由于右了倾角，沉殿可沿管壁滑向低部，因此基本上清除了沉殿与浮动区带转换之间的干扰，适合做R-z离心，特别适合做生物大分子（如质粒DNA）的自形成梯度等密度离心。区带转头：没有壁部入应特别适合做大容量的病毒，亚细胞器，生物大分子的R-z离心，可用于研究，中试和少批量生产。分离纯度高，量大，但操作要求高，转头及整体价格昂贵。连续流离心转头：工作原理的区带转头相似，可连续工作，分离量大，分离统纯度高，可用于各种生物体的差分，R-z等密度离心。近年来高速连续流转头常用于大量发酵液（大肠样菌、酝母菌）菌体的沉殿。（II） 各种转头用于等密度离心内优缺点分析：固定角式转头：主要用于差分离心的角式转头，在速离心机上可以很好地用于等密度离心，尤其是DNA平衡等密度离心，自形成梯度，用快速密封管或厚壁管，常用的单管的容量为10~15ml,常用转速40000~60000rpm，离心时间较短，分离纯度也较高。甩平转头：用作等密度离心时，壁部效应对分离效果影响较少，梯度变换在甩平时自然过渡因而很适合做等密度离心实验，优点是回收率高，分辨能力强。缺点是沉降距离长，最高转速较低（由于结构层固此类转头最主转速一般在60000rpm以下）因而，离心时间很长，对某些长离心管，10~15ml容量的转头最高转速在40000~41000rpm，用作自形成CSCL梯度的质粒DNA离心往往需要50~70小时。垂直管转头：适合作等密度离心，沉降距离最短，在没有沉殿或沉殿非常坚实的情况下，对于现代可自由选择加速、减速时间的离心机，梯度转换得很好。这类转头转进很高（目前最高转速可达100000rpm，70000xg）离心时间最短，分离纯度高，样品容量较大（垂直剖面积最大）。近垂直转头：九十年代以后开始使用的新型转头，用作生物大分子（DNA，RNA，蛋白质等）的平衡等密度离心最佳，目前这类转头的最高转速已达90000rpm近650000xg），离心时间相比垂直转头稍长。区带转头：非常适合做大容量样品的等密度离心。连续流离心转头：高、低速连续流转头一般不用作密度梯度离心超速连续流转头适合做大容量样品的等密度

版友问题：各位大侠好，我想咨询安捷伦1100 液相梯度准确度误差偏大的问题。前段时间公司内部做了3Q验证，发现一台液相的BC，AC，CD泵的梯度准确度误差偏大，到了5%左右，BD,AD 泵的梯度误差还算好，这是因为C泵有什么问题吗，如果要改善的话，怎么去做呢。新手上路，请多关照。谢谢

梯度淋洗就是梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。 如果您是一个物质或者样品基质不是特别复杂，可以用等度洗脱。如果是多组分或者样品杂质较多，可以使用梯度洗脱。这样能够缩短分析时间、改善峰形。一般是先用高水相过渡到高有机相，但具体如何改变，还要看你的物质的出峰时间、分离度、峰形、响应等等。比如说，两个峰不能很好的分开，那么可能需要把这两个峰之前的时间放长些，又比如说如果某个物质在高有机相时响应较好，就尽量将其放在有机相比例高的时候出峰。 梯度的建立方法其实就是方法开发过程。首先根据样品类型选择色谱柱，流动相的选择要麻烦些，LC/MS一般使用反相分离，有机一般是甲醇或乙腈，乙腈的洗脱能力强；水相要考虑PH和缓冲盐，PH一般根据分析物PKa来调，大于或小于PKa2个单位，分析物是酸性是小于，硷则反之，一般使用甲酸、乙酸和氨水；LC/MS的缓冲盐要选择可以气化的，建议甲酸或乙酸氨，使用缓冲盐可以有效的改善色谱表现。建议有机相也要调PH。

梯度测试：25L梯度泵，启动运行后，谱图实时流量运行比例都可以，但是每一个台阶都不在要求范围内，台阶比例20%，第一台阶设定20%，谱图显示计算后40%左右，第二台阶在计算后在70%，第三台阶80%，第四台阶92%，一个比一个误差大，是丙酮没有搅拌均匀吗？已经对丙酮进行长时间搅拌，不停的搅拌，结果还是不行吗？求高手

梯度洗脱对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。梯度洗脱特点：提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。梯度洗脱的形式线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大，直线斜率越大。指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。折线形： 选择适当的A,B溶剂强度：A溶剂为低强度；　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-10之间。初步分离　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。梯度形式选择经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；　 可选择线形梯度，或凹形梯度。② 前半部分离良好，后半部峰重叠；　 可选择凸形梯度。③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。　 可选择折线梯度。

那位大侠有pH值梯度方面的资料阿？大谢！

公司高效液相升级，要做梯度洗脱，我想请问一下浙大的N3000工作站可不可以做梯度洗脱。就是说这个工作站能不能控制泵，也就是控制流速。各位高手帮帮忙，小弟不胜感激！！！！！

梯度洗脱是液相的一个很重要环节，国产液相这方面好像还不行。有几个方面，死体积大，滞后时间长，脉动大，定性、定量、谱图重复性普遍不好。总的来说国产液相与进口液相相比，梯度实验有实验时间长，效果差，准确度低等劣势

请教 高压梯度和低压梯度应用场合有什么不同？ 具体地说，某一项分析如果采用高压梯度，是不是一定也可以采用低压梯度呢？ 或者仅仅是经济条件方面不同呢？双泵的高压梯度和低压梯度仪器配置，资金相差大约有多少？

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。 梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。 两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。 在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视： ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 ③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。 ④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

近日，以减小梯度延迟体积与实现混合性能最优化为目的，岛津公司推出了用于超快速液相色谱仪Nexera系列的MR40μL、MR100μL、MR180μLII梯度混合器系列。今后该产品线包括MR20μL、MR40μL、MR100μL、MR180μLII这4种产品。此次发售的超快速液相色谱仪用混合器增加了容量的变化，同时在MR100μL、MR180μLII上采用了新设计的混合方式，即使在流动相中含有紫外吸収较大的酸时，也可以获得稳定的基线。http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120514/634725830246477500.jpg这个梯度混合器能为我们带来什么样的便利呢？敞开你的想象，大胆的来吧！

[align=center][b][size=15px]梯度的缩放[/size][/b][/align][size=15px]问题：我在150 mm x 4.6 mm色谱柱上开发了一个洗脱方法。但是有两个相邻杂质峰分离不好，我希望用250 mm 柱长的色谱柱来解决这个问题。但是，当我使用250 mm 的长柱时，得到的结果却不尽人意：这两个相邻杂质峰的分离度更差，而且其他的杂质峰洗脱顺序也发生了一定变化。但是色谱柱的生产商告诉我这两种长度的色谱柱的填料是一样的。为什么会出现这种问题呢？[/size][size=15px]回答：如果15 cm和25 cm色谱柱中的填料确实相同，那使用更长的色谱柱，各杂质峰应该得到相同的分离，且具有更高的分离度。但您测试时，其他的杂峰的洗脱顺序发生变化，说明两个色谱柱中的填充剂不相同。但是因制造商坚持认为两根色谱柱的填料来自同一批次，并且由于您已经使用15厘米色谱柱已有一段时间，因此您这个问题，要怀疑在您的方法开发过程中该15cm的色谱柱在已经老化，已不能代表该型号色谱柱填料。这种情况并不少见，并且通常是色谱工作者感到严重挫败的原因。因此，我始终建议进行方法开发及方法验证时使用新的色谱柱。[/size][size=15px]问题：我还有另外的相同填料的15cm的色谱柱，当我运行相同的梯度时，在另外一根相同填料15cm的色谱柱上各峰的出峰情况与我已使用的这一根一致。这说明我使用得这根色谱柱并没有老化，不是吗？[/size][size=15px]回答：确实有这个可能。不过您说您使用的是梯度方法，这使问题变得复杂化。你如何将这个梯度方法从短柱上转移至长柱上的？[/size][size=15px]问：我没有把梯度方法进行缩放，而是在短柱及长柱上用了相同的梯度程序、相同的流速及相同的运行时间。[/size][size=15px]答：这很可能就是原因所在。当在不同的色谱柱上使用梯度方法时，梯度体积应与色谱柱体积成比例地缩放，以使具有相同洗脱结果。当然，与等度色谱法一样，这会增加色谱柱的分析时间。由于系统死体积，还会发生一些其他复杂情况。在下文中，我将更详细地讨论梯度方法的缩放比例。[/size][size=15px]为了能够在不同色谱柱之间获得相同的梯度分布，应与色谱柱体积成正比地改变梯度体积。如果想在15 cm的色谱柱与25 cm的色谱柱上获得相同的洗脱结果，在两根色谱柱具有相同的内径前提下，使用较长的色谱柱时，您的梯度体积应大25/15 = 5/3。如果在两色谱柱上都保持相同的流速，则梯度持续时间和其他梯度事件时间应相应增加5/3。[/size][size=15px]当更改色谱柱直径时，也要遵循与色谱柱体积成比例地缩小或放大梯度体积的规则。如果要将梯度从150 mm x4.6 mm的色谱柱缩放到150 mm x 3 mm的色谱柱，则应将梯度体积减小2.35倍。通常，这将是必然的选择，因为无论如何您都正在减少与柱体积成正比的流速。在这种情况下，您可以使梯度曲线保持恒定并获得（与更换柱子之前）相同的结果。[/size][size=15px]到现在为止，所有计算都假定您使用的仪器的死体积可以忽略不计和/或对分离没有影响。通常，这种计算方式适用于在梯度后期洗脱的保留良好的化合物。但是，对于前期洗脱的化合物而言，并不一定是这种情况。在常用的单泵梯度系统中，梯度是在泵的低压侧产生的，而在较旧的系统中，会明显的延迟梯度到达色谱柱前端的（时间）。此梯度方法中这一段的死体积，可能会影响前期洗脱化合物的洗脱模式。更改色谱柱尺寸时，梯度方法的死体积与色谱柱体积的比率应保持恒定。不幸的是，当想要将梯度从较大体积的色谱柱缩放到较小体积的色谱柱时，这种计算方式的转化可能存在较严重问题。幸运的是，您希望将梯度从体积较小的柱子放到体积较大的柱子上，从而简化了这种情况。[/size][size=15px]为了调整梯度的延迟（使前后一致），首针需要测量仪器的死体积。最好在没有色谱柱的情况下，测定少量的具有紫外吸收的化合物（例如用甲醇作为溶剂的1％丙酮），以1 ml / min的流速从甲醇到甲醇运行一个阶梯梯度，以达到最佳效果。测量梯度程序从开始变化到变化至终浓度一半的时间，再成倍调整流速运行，通过对比流速调整前后的时间的变化就可以计算出仪器的死时间。在使用体积较小的色谱柱时，由于这个死体积会使我们设定的梯度程序上延迟到达柱前端，因此，我们需要以相同的比率（死体积/柱体积）在较大的色谱柱上进行推迟梯度，以得到完全相同的梯度曲线。例如，如果使用150 mm x 4.6 mm色谱柱时系统的死体积为1 ml，则对于250 mm x 4.6 mm色谱柱应为1.66 ml。因此，在充分考虑了150 mm色谱柱和250 mm色谱柱上获得的实际梯度分布差异后，我们需要为250 mm色谱柱的梯度程序在开始阶段先加上0.66 ml的等度运行。完成此操作后，两根色谱柱均获得相同的洗脱曲线。[/size]

梯度滞后体积是指从溶剂配比完成点到色谱柱头的系统体积，也可称为延缓体积，相当于在梯度运行之前运行一段等度条件。滞后体积的差异是造成梯度重现性差和方法传递困难的根源之一。传统色谱系统滞后体积一般在0.5-5.0mL，如果滞后体积为2.5 ml，流动相流速为1.0ml/min时，实际梯度会比设置值晚2.5min响应，一般影响不大；但对于微柱色谱，如果流速为0.1ml/min，实际梯度会比设置值晚25min响应，这是不能接受的，因此选用滞后体积小的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是比较适合开展梯度实验的。滞后体积比文献文章里的大或小，都会使方法不能重现，这也是很多网友抱怨同样的色谱条件方法不能重现的重要原因之一。

[b][font=宋体][back=white]解答：[/back][/font][/b][font=宋体]梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（内梯度）和高压梯度（外梯度）。[/font][font=宋体][back=white]（[/back][/font][back=white]1[/back][font=宋体][back=white]）[/back][/font][font=宋体]低压梯度：[/font][font=宋体]流动相在低压下混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱，因此对硬件的要求较低，其梯度的实现主要由电磁阀的开关来进行控制，只需一台泵、一台容积组织器和一台动态混合器，即可配置成四元梯度系统。优点是成本较低，系统的故障率较低，维护较为方便，此外，由于流动相是在常压下混合，不存在流动相的压缩，故而梯度准确度较好。缺点是精度比高压梯度略差。[/font][font=宋体][back=white]（[/back][/font][back=white]2[/back][font=宋体][back=white]）[/back][/font][font=宋体]高压梯度：[/font][font=宋体]流动相的混合是在高压下进行，所以该系统在硬件上需多台同样的输液泵的组合，而后经动态混合器进行混合，并有专用的软件模块进行控制。优点是梯度精度较高，但缺点是成本较高，硬件较多；而流动相的可压缩性和流动相混合时的热力学体积的变化，可能影响输入到色谱柱的流动相的组成，所以，梯度的准确度会出现偏差，另外，高压梯度洗脱过程中为保证流速稳定必须使用恒流泵，否则很难获得很好的重复性结果。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）从硬件价格上看，高压比低压贵不少。两者最大的区别还是在流动相可能出现的气泡上。在同样的两种流动相混合时，高压混合所产生的气泡几率要比低压混合时少。在四元低压梯度系统中，在线脱气机在混合前先脱气，使气体远远低于其在溶剂中的饱和溶解度，混合后一般也不会达到其在混合溶剂中的最大溶解度，所以一般不会有气泡产生。混合后脱气是不可行的，因为混合后脱气，会在一定程度上改变混合比例（各种溶剂的饱和蒸气压不同决定）。另外，混合前脱气能提高流量精度，这点更有意义。而高压梯度是泵后混合，此时气体在溶剂中的溶解度会增大（溶解度随压力增大而增大），所以一般也不会有气体溢出而产生气泡了。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

各位前辈，请教个梯度的问题。流动相B甲醇；A 10mmol/L的磷酸二氢甲缓冲液（用磷酸调至2）设置梯度：0：A 80% ；B 20% 3：A 80% ；B 20% 8：A 20% ；B 80% 10：A 20% ；B 80% 10.1：A 80% ；B 20% 12：A 80% ；B 20%就是这么个梯度，我的疑问是：缓冲盐遇到大浓度的有机相不会在色谱柱中析出吗，这个梯度没问题吗（来源于某一检测方法）；水相带缓冲盐的与有机相混合的梯度应该怎样设置，有哪些注意事项呢？谢谢各位大神了！

各位前辈，请教个梯度的问题。流动相B甲醇；A 10mmol/L的磷酸二氢甲缓冲液（用磷酸调至2）设置梯度：0：A 80% ；B 20% 3：A 80% ；B 20% 8：A 20% ；B 80% 10：A 20% ；B 80% 10.1：A 80% ；B 20% 12：A 80% ；B 20%就是这么个梯度，我的疑问是：缓冲盐遇到大浓度的有机相不会在色谱柱中析出吗，这个梯度没问题吗（来源于某一检测方法）；水相带缓冲盐的与有机相混合的梯度应该怎样设置，有哪些注意事项呢？谢谢各位大神了！

称取0.1833g样品，烧灰后溶样定容到50ml容量瓶里，定性半定量K含量为78651ppm，定量时应该配多少的浓度梯度？是将原样直接稀释100倍，还是有其他什么办法？如果直接稀释，最后的结果是不是还要反算到样品的质量分数上去？而不能直接用仪器测出来的数据，小童刚接手学习icp请各位高手赐教勿喷，谢谢各位了！仪器是瓦里安的icp-oes

[em07] 俺是新手，呵呵我是做合成反应过程监测的找的液相条件 出峰时间太早，想延后些 0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（三乙胺调节pH值为6.5）和乙腈如何设置梯度？谢谢！！

如题，想要配置90种的梯度到一个瓶子里，0.02,0.05,0.1,0.3,0.5这些梯度咋配啊，正常一般把100ug/ml的稀释为10或5的储备液再配，一次90种的话，从100ug/ml直接配么？每个吸0.01ml到10ml容量瓶，配成0.1然后再稀释，一次配这么多误差会不会大

二元高压梯度（双泵+在线混合器）与四元低压梯度（单泵+低压梯度阀+脱气机+混合器），对于上面两个配置，现在哪个实用性更好？哪个洗脱效果更好？一般首选哪个配置？ 顺便弱弱的问一下，如果我选二元高压梯度，对于像甲醇：水：冰醋酸（48：52：1）这种三种溶剂甚至四种的流动相该怎么去弄呢？它总共才二个溶剂通道吧。。。。

在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此必然带来一些特殊的问题，我们必须充分地重视。　　1、要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围后就不会互溶。　　例如：乙腈和1mol/L的醋酸铵(pH5.16)做梯度洗脱，　　乙腈含量超过70%时就会出现不溶，甲醇和已烷混合，甲醇含量高于30%时就会分层等。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。　　2、梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辩认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头上后会被强的溶剂洗脱出来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止溶剂混合时产生气泡。　　3、混合溶剂的粘度常随组成而变化，因此在梯度洗脱时常会出现压力变化，例如纯水或甲醇的粘度都比较小，但是当二者以相近的比例混合时粘度会增大很多，此时的柱压是纯水或甲醇为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力。　　4、每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始的状态。需让10～30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

如题，请各位大神帮忙解答一下，高压梯度和低压梯度的优缺点各在哪里？高压梯度泵后混合可减少气泡的产生，但有人也说在检测器内（恢复常压后）可能会产生气泡。如果这样，是否高压梯度最好也配在线脱气？低压梯度的精度可以做到多少？对于串联泵来说，除了混合体积不够的原因外，比例阀切换频率如果和泵运行频率同步的话，是否也会造成基线不平（波浪形基线）？二元低压梯度最好的切换比例阀的方式是什么？按照时间周期或者是按照泵的运转周期？有没有熟悉waters或agilent的大神帮忙告知一下这两家是如何做的？感谢！

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

通常说的高压梯度和低压梯度到底有什么区别呢？一直很疑惑？

各位朋友，建立梯度洗脱，从哪些方面分析才能把图走好?才能把梯度建立好?在这里谢谢大家的回答了。

是不是在超导体的外面三个方向都再加线圈，让它产生三个方向的梯度磁场，如果梯度大的话说明仪器产生的梯度变化大，所得到的结果就就应该显著。那么到底梯度磁场有多大呢？它不应该影响超导体的净磁场，但是太小又不能发挥作用，想知道对于被测样品，静磁场和梯度磁场的大小关系。