羧基特比萘芬

大家好，本周为大家分享一篇发表在Anal. Chem.上的文章，Alkynyl -Enrichable Carboxyl-Selective Crosslinkers to Increase the Crosslinking Coverage for Deciphering Protein Structures，该文章的通讯作者是中国科学院大连化学物理研究所的赵群和张丽华研究员。化学交联结合质谱技术 (CXMS) 的交联覆盖范围对于决定其破译蛋白质的结构的能力具有重要意义。目前，交联质谱技术中最常用的交联剂的类型为针对赖氨酸侧链的N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯基交联剂。然而，此种交联剂存在一定的局限性，尤其是对于含有赖氨酸数目较少的蛋白质；其他类型的氨基酸残基，如羧基等，也可以进行交联反应，以补充赖氨酸残基的局限性并提高 CXMS 的交联覆盖率，然而，羧基的低固有化学反应活性损害了羧基选择性交联剂在复杂样品中的应用。鉴于此，本文开发了三种具有不同反应基团（如酰肼、氨基和氨氧基）的富含炔基的羧基选择性交联剂，以此提高针对酸性残基的交联效率并实现复杂样品的深入交联分析。文章要点：（1）本工作系统地评估了三种交联剂的交联效率，给出了氨基功能化交联剂 BAP 的最佳反应性。此外，结合BAP交联剂于高效的交联富集策略对大肠杆菌裂解物进行交联分析。在 ≤1% 的错误发现率 (FDR) 下，共鉴定出 392 种蛋白质中涉及到的 1291 个 D/E-D/E 交联。（2） 研究结果显示，BAP 与赖氨酸靶向交联剂具有明显的结构互补性，这提高了CXMS 进行蛋白质结构解析的能力。本工作是羧基选择性交联剂首次实现全细胞裂解物的全蛋白质组交联分析。总的来说，这项工作不仅扩展了一个针对酸性残基的十分具有前途的 CXMS 工具包，同时还为提高羧基选择性交联剂的性能提供了有价值的指导。图1 三种交联剂BHP、BAP和BOP的化学性质。(A) 三功能交联剂的化学结构：两个反应性基团用红色表示，一个可修饰的手柄用橙色表示。三种交联剂的Cα原子之间的最大距离约束利用软件Chem3D 19.0计算得出。(B) 利用软件pLink 2.0分析三种交联剂与蛋白质进行交联质谱实验的MS/MS谱。(C) 三种交联剂的反应效率直方图。(D) 酰胺化反应的机理。图2 三种交联剂BHP、BAP和BOP在BSA蛋白质、六蛋白混合物和E. coli 70S ribosome结构分析中的性能。(A) 三种交联剂与BSA的反应中鉴定出的交联的维恩图。(B) 交联的Cα−Cα 距离分布的直方图，通过映射到BSA的晶体结构来验证。(C) BSA中交联残基分布的二维 (2D) 热图。颜色插入表示交联的距离分布。(D) 六蛋白混合物的环形二维交联图。黑线表示蛋白质内的交联，红线表示蛋白质间的交联。(E) 将交联映射到TXN2 (UniProtID：Q99757，PDB：1W4V)、CA2 (UniProtID：P00921，PDB：6SKS)和E. coli 70S ribosome (PDB：5KCS)的X射线晶体结构上，由BAP（红线）和BSP（黄线）鉴定。图3 基于BAP的交联平台，用于大肠杆菌裂解液的全蛋白质组分析，包括蛋白质复合物交联、点击化学、链霉亲和素富集、分馏和LC-MS/MS分析。图4 通过BAP对大肠杆菌裂解液的全蛋白质组分析。(A)富集前后鉴定的谱图数目的比较。黑色和红色分别对应于常规肽和交联肽的谱图。(B)将由BAP（红线）和BSP（黄线）鉴定的交联映射到蛋白质的X射线晶体结构上。(C)将交联映射到由BAP专门鉴定的蛋白质的X射线晶体结构上。 (D)使用Xplor-NIH软件包对hns (UniProtID：P0ACFID) 和grcA (UniProt ID：P68066) 的AF2预测结构进行细化。用BAP和BSP鉴定出的交联分别用红色和黄色标记。在本工作中，作者开发并表征了三种新的可富集的羧基选择性交联剂，它们具有不同的反应基团酰肼、氨基和氨基氧基。其中，氨基功能化交联剂 BAP 对于所有不同复杂度的蛋白质样品均表现出最佳的交联反应活性和鉴定覆盖率。此外，BAP扩展到大肠杆菌裂解液的交联分析与高效的交联富集相结合。本工作首次使用羧基选择性交联剂，以实现全细胞裂解液的全蛋白质组范围内的交联分析。因此，以上所有结果表明，本工作开发的 BAP 是一个很有前途的工具包，可以提高蛋白质结构分析的交联覆盖率。此外，本项工作还可以为提高羧基选择性交联剂的性能提供有价值的指导。参考文献：Gao H, Zhao Q, Gong Z, et al. Alkynyl-Enrichable Carboxyl-Selective Crosslinkers to Increase the Crosslinking Coverage for Deciphering Protein Structures [published online ahead of print, 2022 Aug 29]. Anal Chem.2022 10.1021/acs.analchem.2c02205. doi:10.1021/acs.analchem.2c02205

VacCon2022第四届新型疫苗研发与产业化论坛中国，成都，2022年1月7-8日参会名单首发 | 新型疫苗顶级科研院所及领军企业悉数出席！2022年1月7-8日，VacCon第四届新型疫苗研发与产业化论坛将于成都再次升级起航，设置2大会场3大专题，特邀中科院、CDC、麻省大学医学院、中国医学科学院、四川大学华西医院、波士顿医学中心等科研机构，沃森、艾博、康希诺、君实、丹序、开拓、再生元等疫苗及药物研发领军企业领衔参会！聚焦新冠疫苗/中和抗体/小分子药物临床开发最新进展，带来下一代新型疫苗及药物立项及研发前瞻讨论，探索不同技术路径下——mRNA\重组蛋白\（腺）病毒载体疫苗在超越新冠领域的创新与工艺开发领先实践！【早鸟特惠12.10截止！】12月10日前注册享立减1000元早鸟特惠！更有定向企业/科研机构参会票等你来注册！HOT！企业主题演讲、产品展示、插页广告、晚宴赞助、吊绳&名卡、手提袋、瓶装水、椅套广告等多种赞助形式欢迎咨询：180 1793 9885（同微信）部分参会企业首次公开！众多顶级科研院所、疫苗及药物领域等领军企业领衔参会！（以下排名不分先后）中国疾控中心传染病所中国科学院成都生物制品研究所军事医学研究院美国麻省大学医学院清华大学艾滋病综合研究中心江苏省 CDC北京大学生命科学研究院长春生物制品研究所-疫苗研究室云南沃森生物技术股份有限公司NEB重庆大学石家庄四药有限公司中国科学院广州生物医药与健康研究院波士顿医学中心深圳赛诺菲巴斯德生物制品有限公司北京大学药学院丹纳赫生命科学United BioPharma, IncKactus Biosystems恺佧生物康希诺南京诺唯赞生物科技有限公司武汉瀚海新酶生物科技有限公司依生生物中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室中国科学院武汉病毒研究所/生物安全大科学研究中心擎科生物科技有限公司震旦鼎泰杭州中美华东制药有限公司丽珠生物Croda ChinaAVT艾伟拓（上海）医药科技有限公司成都生物上海兆维科技有限公司Roche君实生物翌圣生物科技(上海)股份有限公司丹序医药杭州高田生物医药有限公司开拓药业苏州艾特森制药设备有限公司NanMicr苏州纳微科技股份有限公司河南真实生物迈科康苏州英赛斯智能科技有限公司启辰生生物羽冠生物NEST无锡耐思生物科技有限公司艾棣维欣深信生物诺未科技（北京）有限公司昂瑞生物兰州理工大学中生复诺健中国医学科学院医学生物学研究所蓝鹊生物武汉汇研生物科技股份有限公司厚存纳米广州派真生物技术有限公司万泰生物遵义医科大学珠海校区斯微生物重庆博唯佰泰生物制药有限公司楚天源创苏州近岸蛋白质科技股份有限公司北京科兴中维元本生物国药中生高特佳投资集团成都三叶草北京师范大学珠海校区江苏瑞科圣诺制药迈杰转化医学中国科学院计算生物学重点实验室环码生物中国科学院微生物所微生物生理与代谢工程院重点实验室......更多参会企业名单持续更新中！已确认嘉宾持续更新中！魏于全，中国科学院院士卢山，美国麻省大学医学院终身教授, 新型疫苗研究室主任，国际疫苗学会前任主席朱凤才，江苏省 CDC 副主任李琦涵，中国医学科学院医学生物学研究所所长陈凌，中国科学院广州生物医药与健康研究院首任院长、研究员Valerie Gouon-Evans，波士顿医学中心副主任肝脏疾病和再生项目主任杨振军，北京大学药学院教授、天然药物及仿生药物国家重点实验室PI寸韡，中国医学科学院医学生物学研究所研究员，实验室负责人严景华，中国科学院微生物所微生物生理与代谢工程院重点实验室研究员张波，中国科学院武汉病毒研究所/生物安全大科学研究中心研究员孙逊，四川大学华西药学院博士生导师，药剂学系主任戴连攀，中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室组长朱涛，康希诺执行董事、首席科学官兼副总经理邵辉，依生生物 CEO贾为国，中生复诺健首席科学家 CSO于继云，震旦鼎泰董事长杨嘉明，丽珠生物研发副总经理史跃年，昂瑞生物Co-Founder、CEO王年爽，S-2P技术设计者，再生元科学家回爱民，复星医药全球研发总裁，首席医学官冯辉，君实生物COO施前，丹序医药 CEO马连东，开拓药业副总裁、新药研究院院长党群，河南真实生物总裁胡业勤，迈科康生产副总经理栗世铀，启辰生生物CEO林秋彬，羽冠生物创始人兼 CEO俞航，蓝鹊生物创始人兼CEO程鑫，艾棣维欣临床开发部医学总监张龙贵，厚存纳米创始人庞司林，深信生物研发总监、深信生物南京公司负责人......更多重磅嘉宾持续更新中！敬请期待！【早鸟特惠12.10截止！】12月10日前注册享立减1000元早鸟特惠！更有定向企业/科研机构参会票等你来注册！扫描下方二维码，即享早鸟特惠！【演讲嘉宾火热征集中】演讲摘要/论文投稿，经组委评估并确认的嘉宾将享受以下福利：获得一张免费全程参会证；会议期间午餐券、嘉宾招待晚宴；在会议期间专享演讲嘉宾休息室；组委会官方宣传与推广。投稿邮箱：vaccon@bmapglobal.com【更多赞助形式等您开启！】论坛开放主题演讲，产品展示，插页广告，晚宴赞助，吊绳&名卡、手提袋、瓶装水、椅套广告等多种形式、全方位供您展示先进疫苗技术！即刻联系我们，获得有限的赞助演讲机会！详情咨询：180 1793 9885（同微信）【关注官微，及时获取会议最新信息！】联系组委会：180 1793 9885（同微信）邮箱：vaccon@bmapglobal.com网站：www.bagevent.com/event/7801342?bag_track=instrument 媒体合作联系：上海商图信息咨询有限公司赵俊雯| Jane ZhaoTel: 021-61071886（ext.8027）官网: www.bmapglobal.com

每天下班，家住内蒙古农机院附近的李女士都会提前一站下车，在学府花园一家鲜奶吧买半斤鲜奶回家，已经持续半年。"这都是当天的鲜奶，又不加防腐剂，喝着挺放心。"李女士说。　　"当日鲜奶、巴氏消毒、安全健康"这几乎是每家鲜奶吧的标准宣传语，然而记者在调查中却发现，被鲜奶吧高价销售的鲜奶存在诸多让人忽视的问题。　　时间不准确 "当日鲜奶"或产自"昨日"　　在牛嬷嬷鲜奶栈光华街总店，鲜奶每斤8元的售价要比超市里的袋装奶、盒装奶贵上许多，但前来买鲜奶的人络绎不绝。店员介绍牛嬷嬷鲜奶栈在呼和浩特有20余家加盟店。　　"牧场每天早晨7点左右送来鲜奶，当天的奶当天卖".牛嬷嬷鲜奶栈段姓工作人员称。　　在滨河湾小区阿妈牧场鲜奶吧、学府花园路幸福鲜奶吧等多家鲜奶吧，店主无一例外声称每天早晨5点鲜奶便从牧场送来。　　记者进一步了解到，为这些鲜奶吧供奶的牧场大多距离市区较远，牧场挤奶一般分早、中、晚三个时段进行。　　"早晨送到市里的奶，都是前一天晚上挤好的。"呼和浩特市裕田牧场的郝姓工作人员对记者说。而牧场每天清晨挤好的牛奶，送往市区大约在上午10点以后。　　"鲜奶配送和销售时均需冷藏，且冷藏也仅有3天保质期。"在呼和浩特市食品药品监督管理局餐饮服务管理科(以下简称食药局餐饮科)这一说法得到证实。　　如此来看，消费者买到手的"当日鲜奶"可能产自"昨天".　　安全无保证 "巴氏消毒"程序各异　　巴氏消毒机是每个鲜奶吧必备的硬件设施，其原理来自于巴氏消毒法，或是将牛奶加热到62到65℃，保持30分钟，或是将牛奶加热到75到90℃，保温15到16秒。经巴氏消毒的鲜奶依然需要冷藏。　　在光华街上的鑫奶屋鲜奶吧，墙壁上贴着几张宣传巴氏消毒奶诸多优点的宣传画，女店员将进过巴氏消毒的鲜奶按照大小瓶分装，随后放进冷藏柜。"喝的时候用微波炉热一下就行。"女店员称。　　"别家鲜奶吧卖的都是现成的热奶，你家为什么还得加热?"记者询问。　　女店员回答："饭一直放在锅里热着时间长了都会馊，你说鲜奶一直热着能行吗?"　　但记者发现不论是任何时段，许多鲜奶吧都可以从巴氏消毒机中盛出冒着热气的鲜奶。店员们称，奶一直都热着，随时可以饮用。　　呼和浩特食药局餐饮科的工作人员介绍，70℃以上的鲜奶可以存放2个小时，温度太高鲜奶的营养价值就会被破坏，而在10到60℃之间，则是细菌繁殖最好的温床。　　质量无检测 "安全健康"没有依据　　在粮饷府街特牧尔有机鲜奶吧，店内一面墙壁上悬挂餐饮服务许可证、有机产品认证书以及特牧尔牧场获得的多个证书。店员称这里的鲜奶都来自于特牧尔牧场。　　记者与该牧场负责鲜奶吧加盟工作的马姓人员联系后得知，该牧场在向伊利送牛奶的同时，还向呼和浩特市区6家加盟店供奶。　　当记者问道"送往鲜奶吧的牛奶有没有经过蛋白质、三聚氰胺、重金属含量等相关检测"时，马姓人回答"送伊利的奶跟送鲜奶吧的奶一样，通过伊利的检测就说明没问题。"　　裕田牧场拥有奶牛500余头，在向蒙牛供奶的同时，也向呼和浩特市区8家鲜奶吧供奶。"我们个人没有检测条件，通过蒙牛检测的奶肯定没问题。"郝姓工作人员说。　　"会不会有牧场以次充好将达不到检测标准的牛奶送给鲜奶吧?"呼和浩特市赛罕区苏女士提出疑问。　　食药局餐饮科工作人员介绍，目前针对牛奶的微生物、蛋白质、重金属含量等各种检测达30余项，牧场和鲜奶吧都不具备这种检测技术，且个人检测数据不能作为法律依据。　　由于鲜奶吧是一种新兴行业，其制售鲜奶的环节分别对应卫生、质监、工商、食药、农牧业5个部门，目前内蒙古没有针对鲜奶吧的相关管理办法。　　记者同时在呼和浩特市食药局了解到，关于鲜奶吧的监管问题市政府曾组织召开研讨会，部署技术人员对鲜奶吧的鲜奶进行抽检，并将根据抽检数据出台相关管理办法。"今后鲜奶吧可能会由食药部门统一监管，只要有了实际可行的管理办法，对鲜奶吧的监管就会不打折扣的进行。"食药局餐饮科的工作人员对记者说。