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干酪素是动物乳汁中的含磷蛋白。结构式为NH2RCOOH,无臭、无味的白色至黄色粉末,相对密度1. 25-1.31。几乎不溶于水、醇及醚。溶于稀碱液、碱性碳酸盐溶液和浓酸,在弱酸中沉淀。有吸湿性,干燥时稳定,潮湿时迅速变硬。Casein http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/01/201101132036_273929_1633128_3.gif 又称:酪蛋白;酪蛋白酸钠;酪朊;乳酪素;奶酪素 目前主要生产地为甘肃地区,应用大部分在南方城市。 英文名: Caseins;casein;caseini'ihammersten CAS号:9000-71-9 通常是指由牛乳腺分泌的多种(约20种)磷蛋白(phosphoproteins)的混合物。存在于牛奶或干酪(cheese)中 干酪素是等电点为pH4.6的两性蛋白质。在牛奶中以磷酸二钙;磷酸三钙或两者的复合物形式存在,构造极为复杂,直到现在没有完全确定的分子式,分子量大约为57000-375000。干酪素在牛奶中约含3%,约占牛奶蛋白质的80%。纯干酪素为白色;无味;无臭的粒状固体。相对密度约1.26。不溶于水和有机溶剂。干酪素能吸收水分,浸于水中,则迅速膨胀,但料子并不结合。 用干酪素可配成制造胶合板的水溶性胶粘剂。 贮存于阴凉、干燥、通风的库房内,远离火种、热源,防潮、防霉变。
求助~请问各位大侠有没有遇到这样的情况,做干酪素法测定鞣质含量(按05版中国药典方法测定)时,每次做的不被吸附的多酚含量都不一样。我好郁闷哦,同一个检品做出来的结果有时合格,有时不合格,而且数据相差很远[em09509]。干酪素吸附鞣质的影响因素有什么呢,恳请大家帮帮忙~
[b] 磷钼钨酸-干酪素法测定中药注射剂中的鞣质引言:[/b]鞣质( tannins) 亦称鞣酸、丹宁、丹宁酸,为多酚类化合物,在 70% 以上的中草药中广泛存在,其存在部位以树皮和虫瘿( galls) 中常见。鞣质可分为可水解鞣( hydrolysable tannins) 和缩合鞣质( condensed tannins)。鞣质是一类具有沉淀蛋白作用的水溶性多酚类化合物,约70%以上的中草药中含鞣质类化合物。它是由没食子酸(或其聚合物)的葡萄糖(及其它多元醇)酯、黄烷醇及其衍生物的聚合物以及两者混合共同组成的植物多元酚。鞣质常作为杂质除去,因为在中药制剂中,鞣质除了会影响制剂的稳定性和澄明度外,还可能会引起一系列严重的生理反应。例如,某些鞣质注入体内会引起黄疸和肝坏死等一系列临床症状。近年来中药注射剂的安全性问题已引起人们的广泛关注,中药注射剂中鞣质将使血液中的蛋白质凝固,从而引起皮下出血 多次注射局部组织可能导致组织坏死,造成无菌炎症 加速红细胞的凝聚,并能与血红蛋白形成药物性沉淀。此外,鞣质检查也是中药注射剂的特殊检查项目之一。一、仪器电子分析天平:Mettler Toledo ME204 CAB-002紫外可见分光光度计:Agilent Cary60 CUV -001[img=,312,227]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709241152_01_2204446_3.png[/img]水浴锅 江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司 中药所005二、试剂及样品1、试剂:干酪素 AR 250g 批号 20160812 天津市福晨化学试剂厂磷钼钨酸试液 AR 500ml 批号 20170817 天津市光复精细化工研究院无水碳酸钠 AR 500g 批号 20120526 国药集团化学试剂有限公司2、对照品没食子酸 约30mg 110831-201605 中国食品药品检定研究院 纯度90.8%3、样品:XXX注射液 20170207 超滤后样品、20170209 超滤后样品 三、实验依据:《中国药典》2015年版四部 2202鞣质含量测定法四、实验过程:1、对照品溶液的制备:取2017年09月11日配制的对照品溶液(0.04867mg/ml)2、供试品溶液的制备:分别精密量取20170207、20170209批样品10ml,分别置100ml容量瓶置,加水稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液。3、最大吸收波长的测定:精密量取对照品溶液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液lml,加水10ml,用29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇勾,放置3 0分钟,以相应的试剂(水)为空白,在500nm-800nm波长范围内扫描,测定其最大吸收波长。4、总酚 精密量取供试品溶液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液lml,加水10ml,用29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇勾,放置3 0分钟,依法在760nm处测定吸光度,从标准曲线计算得供试品溶液中没食子酸的量(mg)。5、不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25ml,加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1小时,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2ml,置25ml棕色量瓶中,自“加入磷钼钨酸试液lml”起,加水10ml,同总酚处理方法,依法测定吸光度,同时进行干酪素吸附空白试验,计算扣除空白值,计算没食子酸的量(mg)。6、按下式计算鞣质的含量:鞣质含量= 总酚量—不被吸附的多酚量五、测定数据见报告[align=left]1、经光谱扫描,对照品光谱再765nm-750nm波长处有较大的宽幅吸收,可选择760nm作为测定波长。2、①760nm波长处总酚吸光度:20170207: 0.2539、0.252120170209:0.2714、0.2669;干酪素吸附空白:0.2186;不被吸附的多酚吸光度:20170207: 0.2347 20170209: 0.2682以曲线方程 y=108.48x+0.0661 R2=0.9926样品鞣质浓度为(X总-X不)*25*100/2则20170207 鞣质含量C1=0.22mg/ml, C2=0.20mg/ml, C平均=0.21 mg/ml;20170209 鞣质含量C1=0.037mg/ml, C2=-0.015mg/ml, C平均=0.011 mg/ml;[/align]②755nm波长处总酚吸光度:20170207: 0.2540、0.252320170209:0.2719、0.2669;干酪素吸附空白:0.2186;不被吸附的多酚吸光度:20170207: 0.2353 20170209: 0.2690以曲线方程 y=108.92x+0.0651 R2=0.9928样品鞣质浓度为(X总-X不)*25*100/2则20170207 鞣质含量C1=0.21mg/ml, C2=0.19mg/ml, C平均=0.20 mg/ml;20170209 鞣质含量C1=0.033mg/ml, C2=-0.026mg/ml, C平均=0.003mg/ml。[img=,503,556]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709241155_01_2204446_3.png[/img]3、结果分析:①760nm、755nm波长处结果和曲线无明显差异;[img=,575,436]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709241159_01_2204446_3.png[/img]②20170207总酚和不被吸附的多酚吸光度能较好的区分,20170209总酚与不被吸附的多酚吸光度较接近,结果准确性较差;③可能 由于样品中鞣质含量较低,其他酚类物质较多,且干酪素吸附实验条件对结果影响较大,吸附能力较弱,需考察干酪素吸附的影响因素;④样品稀释100倍后吸光度较为合适,不被吸附的多酚实验中滤液较为澄清,也可以继续考察其他稀释倍数。[img=,554,439]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709241159_02_2204446_3.png[/img]参考文献:1、中国药典2015年版四部22202鞣质含量测定法。2、沈洁 浙江大学药学院 《磷钼酸-干酪素法测定丹参药材中鞣质含量》分析化学2008.04[align=left][/align]