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我遇到一个样品,里面含苹果酸和碳酸钠两种成分(客户告诉我们的),我们现在要测定这两种物质的含量,该怎么测?希望大家都来讨论讨论,苹果酸我们用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]可以测定,但碳酸钠测定很困难,因为这个样品只要一加入水,就会起反应,有很多泡产生,苹果酸和碳酸钠要发生反应,也就是一般的酸碱反应,于是碳酸根的含量检测出来也就不准了,然后我们只能通过用ICP测钠然后折算成碳酸钠,但这样算出来的碳酸钠的值加上苹果酸的值含量就远远超过100%,我们怀疑这个样品可能还含有碳酸氢钠。希望大家都来讨论讨论我们的检测过程,有什么问题,还有更好的检测方法吗?
[align=center][font='黑体'][size=21px]L-[/size][/font][font='黑体'][size=21px]苹果酸钠[/size][/font][/align][align=center][font='宋体'][size=18px]陈 超 凡 [/size][/font][/align][align=center][size=18px] [/size][/align][align=center][size=18px]2021[/size][size=18px]年7月[/size][size=18px]21[/size][size=18px]日[/size][/align][align=left][size=21px]理化性质[/size][/align][align=left]1.名称:L-羟基二丁酸钠[/align][align=left][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015519693_5947_1608728_3.png[/img] 2.分子式:C[font='等线'][size=18px]4[/size][/font]H[font='等线'][size=18px]4[/size][/font]Na[font='等线'][size=18px]2[/size][/font]O[font='等线'][size=18px]5’[/size][/font][size=18px]H[/size][font='等线'][size=18px]2[/size][/font][size=18px]O[/size][/align][align=left][/align][align=left]3.结构式:[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left] 有一个手心中心,该手性中心为L构型,是苹果酸钠的一个对映异构体。[/align][align=left]4.相对分子质量: 178.05[/align][align=left]5.性状:为白色结晶性粉末或块状物[/align][align=left]6.感官要求:[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015520590_9570_1608728_3.png[/img][/align][align=left]7.理化要求:[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015521400_1216_1608728_3.png[/img][/align][align=left][size=21px]制备[/size][/align][align=left]L-苹果酸和碳酸钠反应,经结晶、干燥制得的食品添加剂L-苹果酸钠。L-苹果酸的制备方法有以下几种方法:[/align][align=left][font='等线'][size=16px]1. [/size][/font][font='等线'][size=16px]L-苹果酸[/size][/font][font='等线'][size=16px]钠[/size][/font][font='等线'][size=16px]的[/size][/font][font='等线'][size=16px]生产工艺流程:[/size][/font][font='等线'][size=16px]L-苹果酸钠的生产工艺流程图如下: [/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015522191_3600_1608728_3.png[/img][/align][align=left]关键控制点: [/align][align=left](1)中和反应:L-苹果酸和碳酸钠发生中和反应,生产L-苹果酸钠。 投料比例:1.7:1.35,温度50~60℃,pH 6.8~7.2 [/align][align=left](2)过滤:温度50~60℃,溶液澄清 [/align][align=left](3)浓缩:二效蒸汽浓缩,温度 70 ~ 80℃、真空 -0.04~-0.06MPa,混合汽温度80~90℃、一效物料浓度40%,二效物料浓缩至比重142g/cm[font='等线'][size=16px]3[/size][/font] (60℃)出料。 [/align][align=left](4)结晶:温度20℃ [/align][align=left]2.微生物发酵法: [/align][align=left]一步发酵法:菌种有黄曲霉、米曲霉、寄生曲霉等,均以包括葡萄糖在内的多种糖为底物产生L-苹果酸。[/align][align=left]两步发酵法:由华根霉或少根根霉将葡萄糖生物合成富马酸,再由膜醭毕赤酵母、普通变形菌、芽孢杆菌或掷孢酵母等将富马酸转化为L-苹果酸。 一步发酵法较多地采用黄曲霉,它能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖及淀粉等多种糖质原料产生L-苹果酸。但培养基较复杂,发酵过程常有富马酸等其他有机酸产生,给分离提纯带来困难,难于得到高纯度的晶体,再加上产酸低,对糖转化率低 (30%~40%),周期长(最少也需5天),故至今在国内外均未实现工业化生产。[/align][align=left]两步发酵法的第一步,先用根霉将糖类发酵生成富马酸,即富马酸发酵,这里的糖较多的使用葡萄糖,葡萄糖可由淀粉经双酶水解而得。[/align][align=left]第二步是在前面所产的富马酸中接入酵母菌或细菌进行发酵,将富马酸转化为L-苹果酸,即转化发酵。采用这种方法,苹果酸对糖转化率最高可达60%以上,但是毕竟发酵周期太长,前后加起来要8~9天。虽然两步法与一步法一样,国内外学者正在不断地探索,取得了一些有价值的进展,但至今仍然未见工业化生产的报道。[/align][align=left]3.固定细胞转换法:该方法是首先大量培养富马酸酶活力高的菌体,收集菌体后用卡拉胶等适当的载体进行固定,然后装入柱式反应器,以富马酸钠盐为底物,流经反应器,由固定化细胞中的富马酸酶的催化作用,很容易将富马酸转化为L-苹果酸,且几乎无副产物,转化率高达95%以上。此法与上述两种方法相比,简单、 经济、高效,于是成了工业化生产的首先方法[/align][align=left]4. 酶促转化直接生产L-苹果酸钠:(1)将富马酸和选自碳酸氢钙、氢氧化钙和碳酸钙中的一种或多种钙盐加入水中并搅 拌混匀以进行中和反应,待所述中和反应完成后,任选调节反应体系的pH值为6 .5-7 .0,得 到富马酸钙悬浊液; (2)向步骤(1)得到的所述富马酸钙悬浊液中加入延胡索酸水合酶催化制剂进行酶促 反应,生成L-苹果酸钙悬浊液,其中,所述延胡索酸水合酶催化制剂选自延胡索酸水合酶或 者表达所述延胡索酸水合酶的重组工程菌,所述延胡索酸水合酶为FUMA、FUMC或它们的混 合物; (3)向步骤(2)得到的所述L-苹果酸钙悬浊液中加入碳酸钠以进行中和反应,待所述中 和反应完成后,得到L-苹果酸钠和碳酸钙的混合物; (4)将步骤(3)得到的所述混合物进行固液分离,得到L-苹果酸钠的上清液以及作为沉 淀物的碳酸钙,其中,将所述L-苹果酸钠的上清液进行处理制得固体的L-苹果酸钠,将所述 碳酸钙回收以在步骤(1)中作为钙盐循环使用。[/align][align=left][font='等线'][size=16px]5[/size][/font][font='等线'][size=16px].[/size][/font][font='等线'][size=16px]细胞转化法:[/size][/font][font='等线'][size=16px][color=#333333]将从土壤中分离得到的Aspergillus wentii属菌株在糖30g/L,磷酸氢二铵3g/L,硫酸铵2g/L,氯化钾2g/L,硫酸镁1g/L,富马酸钠5g/L的培养液中培养48小时,过滤分离出细胞。在60-70℃下配制2%的卡拉胶溶液,降温到50℃时将分离出的细胞按10%(w/w)加入,搅拌均匀后倒入盘子中凝固,制成5mm×5mm×5mm的固定化细胞。然后装入8cm×60cm的玻璃柱。将1.4M的富马酸钠溶液以1000ml/h的速度流经固定化细胞柱,得到L-苹果酸盐和富马酸盐混合溶液。[/color][/size][/font][/align][align=left][font='等线'][size=16px][color=#333333](2)取1000ml经步骤(1)得到的混合液,其中含L-苹果酸钠186g,富马酸钠56g。将溶液加热到60℃,搅拌下加入170g(摩尔比1.05∶1)富马酸,搅拌反应3.5小时,PH=3.2,冷却到15~20℃,过滤,滤饼用少量水洗,然后用NaOH中和至PH=7-8供细胞转化用。所得滤液980ml,含富马酸单钠40g。加热至85℃,通过1500ml 001x7强酸性阳离子交换柱(直径6cm,高60cm),收集淋洗液经减压浓缩,L-苹果酸浓度增加到40%时,冷却到10~15℃,过滤回收富马酸。滤液进一步减压浓缩到L-苹果酸浓度至80~82%,冷却到15℃,结晶出91gL-苹果酸,母液中含有46gL-苹果酸,母液可循环使用。L-苹果酸收率相当于97%。[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][align=left][size=21px]应用[/size][/align][align=left][font='等线'][size=16px]苹果酸作为功能性酸味剂广泛用于饮料及食品工业。苹果酸的酸味持久,其酸味比柠檬酸强20%,不仅能保持天然果汁的风味,与合成甜味剂合用还可消除后苦味,可部分或全部代替柠檬酸用于饮料、食品的酸味调节。另外,L-苹果酸是人体三羧酸循环的重要枢纽之一,具有许多独特的生理功能。天然构型的L-苹果酸在细胞能量产生过程中发挥着十分重要的作用。同时在生物体内以络合形式贮存和运输金属离子,因此,L-苹果酸钙可用于预防和治疗因缺钙而引起的老年性骨质疏松。L-苹果酸还用于鲜肉的加工和保存,可加速肉的熟化和起保鲜作用。L-苹果酸能诱导皮肤细胞的分裂,改善皮肤组织的生长,因而可用于化妆品工业。由于柠檬酸会诱导脂肪酸的合成,在食品饮料中使用L-苹果酸可以减少脂肪合成,苹果酸有减肥的功能。近年来还发现L-苹果酸具有保肝,解毒及抗抑郁症的作用,是具有巨大应用前景的功能性添加剂。[/size][/font][/align][align=left][font='等线'][size=16px]L-苹果酸中含有天然的润肤成分,可以清除皮肤表面皱纹,使皮肤变得嫩白、光洁而有弹性,因此在化妆品配方中备受青睐;L-苹果酸可以配制多种香精、香料,用于多种日用化工产品,如牙膏、洗发香波等;国外将其用于替代柠檬酸作为新型洗涤助剂,用于合成高档特种洗涤剂。L-苹果酸可用于药物制剂、片剂、糖浆中,还可以配入氨基酸溶液中,能明显提高氨基酸的吸收率;L-苹果酸可以用于治疗肝病、贫血、免疫力低下、尿毒症、高血压、肝衰竭等多种疾病,并能减轻抗癌药物对正常细胞的毒害作用;还可用于制备和合成驱虫剂、抗牙垢剂等。另外L-苹果酸还可以作为工业清洗剂、树脂固化剂、合成材料增塑剂、饲料添加剂等。[/size][/font][/align][align=left]L-苹果酸钠是苹果酸钠的一种光学异构体,除旋光性之外,其理化性质和DL-苹果酸钠相同。同时L-苹果酸钠还可以直接参与生物体的新陈代谢,因此,相比于DL-苹果酸钠,L-苹果酸钠对人体健康更加有益。它作为酸度调节剂、食品调味剂、保鲜代盐剂、水分保持剂得到广泛应用。[/align][align=left]使用L-苹果酸钠的必要性如下:[/align][align=left] (1)美国FDA已开始限制柠檬酸及DL-苹果酸在老年人、肝肾功能障碍患者和儿童食品中使用。 [/align][align=left](2)根据联合国食品添加剂委员会JECFA的数据,苹果酸钠的ADI值为无限定(no specified)。目前,L-苹果酸、dl-苹果酸、dl-苹果酸钠均已是食品添加剂,且属于无毒物质。与dl-苹果酸钠相比,L-苹果酸钠具有重要的生理功能,可直接进入三羧酸循环,参与人体代谢,对人体的健康有益,同时还避免了D-苹果酸钠在人体的残留。因此,L-苹果酸钠也属于无毒物质,人体摄入是安全的。 (3)随着生物技术的发展,酶法转化生产L-苹果酸钠的成本和dl-苹果酸钠的成本正在逼近,使得L-苹果酸钠的大量使用成为了可能。此外,dl-苹果酸钠中含有50%的D-苹果酸钠不会被人体吸收,因此,理论上讲,当达到相同的使用效果时,L-苹果酸钠的用量仅需dl-苹果酸钠用量的一半。[/align][align=left]在水产品中的应用:水产品具有低脂肪、高蛋白的特点,是合理膳食结构中不可缺少的重要部分,已成为人们摄取动物性蛋白质的重要来源,并且鱼、虾、蟹等水产品肉质鲜美,风味独特,深受广大消费者的青睐。但是由于水产品容易腐败变质,在加工或储藏过程中必须加强水产品的保鲜。通常需要做抑菌抗菌处理。以金枪鱼、扇贝、虾仁的加工处理为例:[/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015523169_2920_1608728_3.png[/img](1)pH调整剂配方[/align][align=left][/align][align=left](2)加工工艺[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015524276_6168_1608728_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015525511_8120_1608728_3.png[/img](3)结果分析[/align][align=left][/align][align=left] 比较以上实验结果可以看出,添加一定量的pH调整剂处理能够减少水产品中的微生物数量,抑制细菌的生长繁殖,尽可能保持水产品的新鲜度。[/align][align=left]在果蔬腌制品中的应用:目前腌制食品企业往往在研制食品中添加各种食用酸,且把减盐增酸作为今后酱腌菜发展的方向。酸度调节剂能降低腌渍剂的pH值,抑制微生物的生长繁殖,对产品的储藏极为有利。再腌渍液中添加食醋、柠檬酸、苹果酸等酸度调节剂能使腌渍液的pH值下降,从而达到抑制微生物生长繁殖的目的,同时起到调味的作用。为了保持pH值在一个稳定的范围内,通常加入一定比例的有机酸盐。苹果酸用于腌菜中能够起到缓冲和调味的作用,从而既可以使腌渍菜保持较低的pH值,便于保鲜和货架期的延长,又可以酸味,赋予腌渍菜良好的口味和清爽的口感。[/align][align=left]以酸辣白菜的腌渍过程,来说明L-苹果酸钠的应用效果:[/align][align=left](1)加工方法 配方:白菜10kg,食盐1.5kg,白糖0.25kg,干辣椒0.1kg,菜籽油0.2kg,生姜丝0.2kg,酸味料(L-苹果酸、 L-苹果酸钠等)。 制作方法: 白菜洗净,切成3cm长、1cm宽,加盐后搅拌均匀,1h后去除盐水加糖、酸味料,并与经过油炸过的生姜丝、干辣椒丝搅拌均匀,腌制1天即可。 (2)结果分析 改变酸味料中L-苹果酸和L-苹果酸钠的比例,分析不同比例条件下腌菜的口味,结果如下:[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015526527_5962_1608728_3.png[/img] 由此可以看出,苹果酸钠用于腌渍菜中,能够起到缓冲和调味作用,从而既可使腌渍菜保持较低的pH值,便于保鲜和货架期的延长,又可调节酸味,赋予腌渍菜良好的口味和清爽的口感。[/align][align=left]果味饮品方面:L-苹果酸钠既可以与柠檬酸钠、DL-苹果酸钠、L-酒石酸钠等常规食品添加剂混合使用,也可以替代或部分替代上述传统食品添加剂。以某种果醋饮料为例,说明L-苹果酸钠的应用效果。[/align][align=left](1)工艺流程 取某种果味饮料A,加入一定量的L-苹果酸钠,制得饮料B,分别对饮料A和饮料B进行感官评价,具体方法见下表。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015527279_4600_1608728_3.png[/img][/align][align=left]实验结果以每个评价项目的有效评分总和除以有效人员,得出每个项目的平均得分,得分越高说明该添加剂对酸度和风味影响越大,评价结果见下表。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015528294_7217_1608728_3.png[/img][/align][align=left]因此,添加L-苹果酸钠的饮料B在酸味和风味表达上明显优于不添加L-苹果酸钠的饮料A。[/align][align=left][size=21px]限量[/size][/align][align=left]苹果酸,于1967年在美国食品和药品管理局登记,是国际上公认的安全、无毒无害的食用有机酸。而作为苹果酸的钠盐,苹果酸钠同样安全无毒,在食品中使用绝对安全可靠,可以作为食品添加剂用于各类食品中对人类健康不会产生危害,其ADI值为无限定。[/align][align=left][/align][align=left][size=21px]质量指标[/size][/align][align=left] 中华人民共和国国家标准:根据中华人民共和国国家标准要求,食品调加剂L-苹果酸应符合以下技术指标:[/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015529257_8172_1608728_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][size=21px]检测[/size][/align]1.鉴别试验:试剂和材料:对氨基苯磺酸;(1+1)盐酸溶液;乙酸钴-双氧铀溶液:称取4g乙酸双氧铀,置于50mL乙酸溶液(60g/L)中,加热使溶解 称取20 g乙酸钴,同样置于50 mL 乙酸溶液(60 g/L)中 在温热状态下将两溶液混合,冷却至约20 °C并保持2 h,过滤,即得;亚硝酸钠溶液:200 g/L;氢氧化钠溶液:40 g/L(1)溶解性试验:称取1 g试样,精确至0.01 g,用水溶解并稀释至10 mL,溶液应澄清。(2)钠盐试验:铂丝用盐酸溶液湿润后,蘸取试样,在无色火焰中燃烧,火焰应显亮黄色。称取1 g试样,精确至0.01 g,用适量的水溶解,加1 mL盐酸溶液,用水稀释至20 mL。取1 mL该溶液,加5 mL乙酸钴-双氧铀溶液,振摇,有黄色沉淀产生。(3)苹果酸盐试验:称取 1 g 试样,精确至 0.01 g,加适量的水溶解并稀释至 20 mL。取试样溶液 5mL 放入瓷蒸发皿中, 加对氨基苯磺酸 10 mg,在水浴上加热数分钟,加亚硝酸钠溶液 5 mL,略加热,滴加氢氧化钠溶液使成碱性,应显红色。2. L-苹果酸钠(以C[font='等线'][size=16px]4[/size][/font]H[font='等线'][size=16px]4[/size][/font]Na[font='等线'][size=16px]2[/size][/font]O[font='等线'][size=16px]5[/size][/font]计)含量的测定 (1)试剂和材料:冰乙酸;高氯酸标准滴定溶液: c(HClO4) =0.1 mol/L;结晶紫指示液:2 g/L[align=left](2)分析步骤:[color=#000000]称取 [/color][color=#000000]0.15 g [/color][color=#000000]干燥后的试样,精确至 [/color][color=#000000]0.000 1 g[/color][color=#000000],加 [/color][color=#000000]30 mL [/color][color=#000000]冰乙酸溶解,用高氯酸标准滴定溶液滴定。用电位计指示终点。当用指示剂判断终点时,加几滴结晶紫指示液,溶液由紫色经过蓝色变为绿色即为终点。在测定的同时[/color][color=#000000], [/color][color=#000000]按与测定相同的步骤[/color][color=#000000], [/color][color=#000000]对不加试样而使用相同数量的试剂溶液做空白试验。 [/color][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015530218_6149_1608728_3.png[/img][color=#000000](3)结果计算:[/color][color=#000000]L-苹果酸钠(以C4H4Na2O5计)的质量分数 w1 ,按公式计算[/color][color=#000000]:[/color][/align][align=left][color=#000000]式中:[/color][/align][align=left][color=#000000]v0——空白试验消耗高氯酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL) [/color][/align][align=left][color=#000000]v1——试样消耗高氯酸标准滴溶液的体积,单位为毫升(mL) [/color][/align][align=left][color=#000000]c ——高氯酸标准滴溶液浓度的准确数值,单位为摩尔每升(mol/L) [/color][/align][align=left][color=#000000]M ——苹果酸钠的摩尔质量的数值,单位为克每摩尔(g/mol)[M(C[/color][font='等线'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][color=#000000]H[/color][font='等线'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][color=#000000]Na[/color][font='等线'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][color=#000000]O[/color][font='等线'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][color=#000000])]=89.03) [/color][/align][align=left][color=#000000]m ——试样的质量,单位为克(g) [/color][/align][align=left][color=#000000]1000——换算因子。[/color][/align][align=left][color=#000000]3.比旋光度测定:[/color][/align][align=left][color=#000000]比旋光度的测定,[/color][color=#000000]称取4.25g实验室样品,精确至0.001g,加入20 mL水溶解,移至50 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。 比旋光度am(20℃,D)数值以“(°)?dm2?kg-1”表示,按照公式计算:[/color][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015531018_5551_1608728_3.png[/img][/align][align=left] 式中: a—测得的旋光角,单位为度(°); l—旋光管的长度,单位为分米(dm); Pa—溶液中有效组分的质量浓度,单位为克每毫升(g∕mL)。[/align][align=left][/align][align=left][color=#000000]4[/color][color=#000000].干燥减量的测定:[/color][/align][align=left][color=#000000](1)分析步骤:[/color][color=#000000]称取 4 g 试样,精确至 0.000 2 g,置于已烘至质量恒定的称量瓶中,在 120 °C±2 °C的恒温干燥箱中 干燥 2 h,调整温度至 160 °C±2 °C,再干燥 2 h,取出,置于干燥器中冷却至室温,称量。[/color][/align][align=left][color=#000000](2)结果计算:[/color][color=#000000]干燥减量的质量分数 ,按公式计算:[/color][/align][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015531685_128_1608728_3.png[/img]式中:m——干燥前试样的质量,单位为克(g) m1——干燥后试样的质量,单位为克(g)。5.富马酸和马来酸含量的测定:(1)方法提要:用高效液相色谱法,在选定的工作条件下,以磷酸氢二铵溶液为流动相,用高压输液泵将流动相泵入 C18色谱柱使试样溶液中各组分进行分离,用紫外检测器进行检测,由数据处理系统记录和处理色谱信号。(2)试剂和材料:水:符合GB/T 6682-2008的一级水;富马酸:色谱纯;马来酸:色谱纯(3)仪器和设备:高效液相色谱仪,带脱气装置,配备紫外检测器。(4)参考色谱条件: 流动相:取磷酸氢二铵20 g,加入约900 mL水溶解后,用磷酸调节溶液的pH为2,然后用0.45 μm的滤膜过滤,再定容至1000 mL。 色谱柱:C18,填料孔径12 nm,填料粒径5 μm,柱长250 mm,柱内径4.6 mm,或其他等效色谱柱。 流速:0.8 mL/min。 柱温:40 °C 波长:210 nm。 进样量:20 μL。(5)分析步骤: 工作曲线的绘制:按表 A.1 中 DL-苹果酸、马来酸和富马酸浓度标准系列,配制出两种不同浓度的混合标准溶液,按照 浓度和峰面积绘制工作曲线,各物质的保留时间参照表 A.2。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015532765_2322_1608728_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015533938_371_1608728_3.png[/img] 试样溶液的制备;称取0.5 g试样,精确至0.000 2 g,于100 mL容量瓶,加少量水溶解并稀释至刻度,混匀。色谱分析前 用0.45μm微孔滤膜过滤。 测定:在规定的色谱条件下,取标准溶液和试样溶液各20 μL分别注入液相色谱仪,在工作曲线上查得试液 中富马酸或马来酸的浓度。 结果计算:富马酸或马来酸含量的质量分数以 w3 计,按公式计算:[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107262015534637_2124_1608728_3.png[/img]式中:c ——测定得到的试样中富马酸或马来酸的浓度,单位为毫克每升(mg/L) m ——试样的质量,单位为克(g) 100——试样的定容体积,单位为毫升(mL) 1000——换算因子。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不 大于其算术平均值的 10%。[size=21px]参考文献[/size]【1】一种L-苹果酸钠的直接酶促转化生产方法。周铁成,王云山,王自强,冯晓东,赵晶。国家专利,申请号 201710208506.5。【2】中华人民共和国国家标准 GB13737-2008。
[align=center][font='宋体'][size=18px]方纲[/size][/font][/align][align=center][font='黑体'][size=21px]DL-[/size][/font][font='黑体'][size=21px]苹果酸钠[/size][/font][/align][align=center][size=18px]2021[/size][size=18px]年7月3日[/size][/align][align=left][font='华文中宋'][size=21px]理化性质[/size][/font][/align][align=left][font='宋体']1.分子式:[/font][font='宋体']C[/font][font='宋体'][size=18px]4[/size][/font][font='宋体']H[/font][font='宋体'][size=18px]4[/size][/font][font='宋体']Na[/font][font='宋体'][size=18px]2[/size][/font][font='宋体']O[/font][font='宋体'][size=18px]5[/size][/font][font='宋体']nH[/font][font='宋体'][size=18px]2[/size][/font][font='宋体']O(n=3 或 n=1/2)[/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429110426_2793_1608728_3.png[/img][font='宋体']2.结构式:[/font][/align][align=left][font='宋体']存在一个手心中心,有[/font][font='宋体']D[/font][font='宋体']、[/font][font='宋体']L[/font][font='宋体']两种构型,[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸钠为兼有两种构型的外消旋体。[/font][/align][align=left][font='宋体']3.相对分子质量:[/font][font='宋体']三水结晶品 232.10 [/font][font='宋体'] [/font][font='宋体']半水结晶品 187.06[/font][/align][align=left][font='宋体']4.性状:为白色结晶性粉末或块状物[/font][/align][align=left][font='华文中宋'][size=21px]制备[/size][/font][/align][align=left][font='宋体']苹果酸和氢氧化钠反应,经结晶、干燥制得的食品添加剂DL-苹果酸钠。DL-[/font][font='宋体']苹果酸的制备方法:[/font][/align][align=left][font='宋体']1.[/font] [font='宋体']DL-苹果酸的化学合成法[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体'] 将200kg顺丁烯二酸酐溶于400kg水,于不锈钢高压釜中,185℃±3℃和1.0MPa下搅拌反应6~8h,在反应过程中,当温度 120℃时,顺丁烯二酸与水作用生成苹果酸;而当温度 130℃时,顺丁烯二酸本身也异构化为反丁烯二酸。而在反应条件下,苹果酸又与反丁烯二酸存在着一种平衡,因此当反应结束后,顺丁烯二酸与苹果酸的比例为1:17。若在反应初期,按比例加入反丁烯二酸,则收率可由63%上升到90%以上。反应物冷却至100℃以下后,压入蒸馏釜于60℃下减压浓缩,再经冷却、结晶、离心[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429111529_5144_1608728_3.png[/img][font='宋体']分离、干燥而得成品。[/font][font='宋体']化学合成法是工业制备[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸的主要方法。[/font][/align][align=left][font='宋体'](1)合成方法:[/font][/align][align=left][font='宋体']顺丁烯二酸酐100g(1. 0mol)置于装有磁力搅拌的高压反应釜中,加入H2O 100mL,搅拌下加热至设计温度及压力后保持 4h, 冷却, 将反应混合物[/font][font='宋体']过滤,得到[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液,其近似组成为:[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸40%~50%,富马酸1%~2%,马来酸1.5%~2%[/font][/align][align=left][font='宋体'](2)纯品制备:[/font][/align][align=left][font='宋体']a[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']控制结晶:将初步纯化处理过的组成约为[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸60%,马来酸1.6%和富马酸0[/font][font='宋体'].54%[/font][font='宋体']的混合溶液1000g减压浓缩至79%,调整温度至70度,然后向溶液中加入60目~100目的苹果酸晶种20g后缓慢搅拌(20r/min~30r/min),降温(1.5度/h)至40度后继续搅拌10h,离心分离,所得结晶料滤液的附着量为4.5%,在离心机种用25度60%纯苹果酸水溶液100g洗涤后再脱水、送风干燥得晶体350g([/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸99.45%,富马酸0.65%,马来酸0.10%)[/font][/align][align=left][font='宋体']b[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']树脂纯化:将8升含有马来酸和富马酸的[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液以450[/font][font='宋体']ml/h[/font][font='宋体']的速度依次通过阴离子交换柱、活性碳柱赫阳离子交换柱。洗脱液经浓缩、干燥后得到纯品。[/font][/align][align=left][font='宋体'](3)纯化工艺研究;[/font][/align][align=left][font='宋体']反应所得[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液中除含有目的产物[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸外,还含有一些不纯的物质,如没有完全反应的马来酸、异构化的富马酸、副反应产生的有色物质及金属离子等,因此对[/font][font='宋体']DL-[/font][font='宋体']苹果酸溶液的提纯时影响产品质量的关键。[/font][/align][align=left][font='宋体']一般情况下,[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液含有2%左右的马来酸和2%~3%的富马酸,可以通过如下方法去除;[/font][/align][align=left][font='宋体']a[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']溶液萃取法:用乙醚,戊酮等溶剂萃取后[/font][font='宋体']DL-[/font][font='宋体']苹果酸溶液中的马来酸和富马酸的含量可以降至0.02%以下[/font][/align][align=left][font='宋体']b[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']沉淀法:再[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液中加入氢氧化钙,使它以[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸钙的形式析出,析出的晶体经酸化分离、提纯可以得到[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸纯品[/font][/align][align=left][font='宋体']c[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']结晶控制法:将[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液减压浓缩至一定浓度后,加入适量的[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶种,调整降温速度,使得[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶粒析出,马来酸和富马酸大部分存在于溶液中或者[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶粒表面,[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶粒经洗涤、干燥后可得到纯度较高的[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶体。[/font][/align][align=left][font='宋体']d[/font][font='宋体'].[/font][font='宋体']离子交换去除法:通过离子交换树脂进行选择性吸附,以达到对[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液的精制目的。[/font][/align][align=left][font='宋体']其中溶液萃取法和沉淀法犹豫操作过程繁琐,且引入了第三种物质增加了分离难度,因此不适合于工业生产。如果采用结晶控制法和离子交换法去除法相结合就可以避免上述过程出现的弊端,就能在大规模工业化生产过程中得到较高纯度的[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸[/font][/align][align=left][font='宋体']在工业合成过程中,我们将[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸溶液在60度到75度下减压浓缩至70%~80%的饱和溶液,调整温度至60到70度,加入0.5%~5%的[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶种,如果在此温度范围以外结晶,则会有二次结晶生成,即产生晶簇,从而使结晶颗粒细而且纯度低。另外,因富马酸在溶液中的溶解度低,控制结晶温度以可以控制富马酸的析出量,以确保产品的纯度,所得到较高纯度的[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸晶体,其中马来酸含量小于等于0.2%,富马酸含量小于等于1.0%。[/font][/align][align=left][font='宋体']2.[/font][font='宋体']微生物发酵法[/font][font='宋体']:所得到的是[/font][font='宋体']L[/font][font='宋体']-苹果酸。[/font][font='宋体']一步发酵法[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']菌种有黄曲霉、米曲霉、寄生曲霉等,均以包括葡萄糖在内的多种糖为底物产生L-苹果酸。[/font][/align][align=left][font='宋体']两步发酵法[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']由华根霉或少根根霉将葡萄糖生物合成富马酸,再由膜醭毕赤酵母、普通变形菌、芽孢杆菌或掷孢酵母等将富马酸转化为L-苹果酸。 一步发酵法较多地采用黄曲霉,它能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖及淀粉等多种糖质原料产生L-苹果酸。但培养基较复杂,发酵过程常有富马酸等其他有机酸产生,给分离提纯带来困难,难于得到高纯度的晶体,再加上产酸低,对糖转化率低 (30%~40%),周期长(最少也需5天),故至今在国内外均未实现工业化生产。[/font][/align][align=left][font='宋体']两步发酵法的第一步,先用根霉将糖类发酵生成富马酸,即富马酸发酵,这里的糖较多的使用葡萄糖,葡萄糖可由淀粉经双酶水解而得。[/font][/align][align=left][font='宋体']第二步是在前面所产的富马酸中接入酵母菌或细菌进行发酵,将富马酸转化为L-苹果酸,即转化发酵。采用这种方法,苹果酸对糖转化率最高可达60%以上,但是毕竟发酵周期太长,前后加起来要8~9天。虽然两步法与一步法一样,国内外学者正在不断地探索,取得了一些有价值的进展,但至今仍然未见工业化生产的报道。[/font][/align][align=left][font='宋体']3.[/font][font='宋体']固定细胞转换法[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']该方法是首先大量培养富马酸酶活力高的菌体,收集菌体后用卡拉胶等适当的载体进行固定,然后装入柱式反应器,以富马酸钠盐为底物,流经反应器,由固定化细胞中的富马酸酶的催化作用,很容易将富马酸转化为L-苹果酸,且几乎无副产物,转化率高达95%以上。此法与上述两种方法相比,简单、 经济、高效,于是成了工业化生产的首先方法[/font][/align][align=left][font='华文中宋'][size=21px]应用[/size][/font][/align][align=left][font='宋体']主要用作缓冲剂,调味剂和代盐剂。[/font][/align][align=left][font='宋体']作为缓冲剂,与苹果酸配合使用调节食物的p[/font][font='宋体']H[/font][font='宋体']值,并使加入少量的酸或碱时,不会使得氢离子浓度发生显著变化,从而抑制微生物生长,起到抗菌防腐效果;用于食品调味,缓和酸味;代替食盐或代替部分食盐的使用,制作低盐食品如无盐酱油,降低火腿香肠中盐的含量。[/font][/align][align=left][font='宋体']苹果酸钠是一种无色晶体或白色结晶粉末,是重要的有机酸盐之一。苹果酸钠和苹果酸配合使用,用作各种果酱、果冻、果汁、饮料、冷饮、奶制品和糕点等的凝胶剂、营养增补剂及风味剂。苹果酸钠安全无毒,在食品中使用绝对安全可靠,对人类健康不会产生危害。联合国粮农与世界卫生组织对其每日摄入量不作任何限制,可认为其属于无毒品。[/font][/align][align=left][font='宋体']在水产品中的应用:中国水产资源丰富,水产品种类繁多。水产品具有低脂肪、高蛋白的特点,是合理膳食结构中不可缺少的重要部分,已成为人们社区动物性蛋白质的重要来源,并且鱼、虾、蟹等水产品肉质鲜美,风味独特,深受广大消费者的青睐。近年来,进出口加工品也越来越多,水产品加工成品和半成品逐渐走向市场,融入百姓生活。但是由于水产品容易腐败变质,再加工或储藏过程中必须加强水产品的保鲜。通常需要做抑菌抗菌处理。苹果酸钠正好具有抑菌保鲜的功能。下面以金枪鱼、扇贝、虾仁的加工处理为例进行说明。[/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429112589_2853_1608728_3.png[/img][font='宋体'](1)p[/font][font='宋体']H[/font][font='宋体']调整剂配方[/font][/align][align=left][font='宋体'](2)加工工艺[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429114515_4764_1608728_3.png[/img][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429115758_8511_1608728_3.png[/img][font='宋体'](3)结果[/font][/align][align=left][font='宋体']比较以上实验结果可以看出,添加一定量的p[/font][font='宋体']H[/font][font='宋体']调整剂处理能够减少水产品中的微生物数量,抑制细菌的生长繁殖,尽可能保持水产品的新鲜度。[/font][/align][align=left][font='宋体']在果蔬腌制品中的应用:目前腌制食品企业往往在研制食品中添加各种食用酸,且把减盐增酸作为今后酱[/font][font='calibri']腌菜发展的方向。酸度调节剂能降低腌渍剂的p[/font][font='calibri']H[/font][font='calibri']值,抑制微生物的生长繁殖,对产品的储藏极为有利。再腌渍液中添加食醋、柠檬酸、苹果酸等酸度调节剂能使腌渍液的pH值下降,从而达到抑制微生物生长繁殖的目的,同时起到调味的作用。为了保持p[/font][font='calibri']H[/font][font='calibri']值在一个稳定的范围内,通常加入一定比例的有机酸盐。苹果酸用于腌菜中能够起到缓冲和调味的作用,从而既可以使腌渍菜保持较低的pH值,便于保鲜和货架期的延长,又可以酸味,赋予腌渍菜良好的口味和清爽的口感。[/font][/align][align=left][font='华文中宋'][size=21px]限量[/size][/font][/align][align=left][font='宋体']苹果酸钠安全无毒,在食品中使用绝对安全可靠,对人类健康不会产生危害。联合国粮农与世界卫生组织对其每日摄入量不作任何限制,可认为其属于无毒品。[/font][/align][align=left][font='华文中宋'][size=21px]质量指标[/size][/font][/align][align=left][font='宋体']1.中华人民共和国国家标准[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']DL-[/font][font='宋体']苹果酸含量98.0%~102.0%,碱度(以碳酸钠计)[/font][font='宋体']≤[/font][font='宋体']0.2%,干燥减量对于三水结晶品在20.5%~23.5%、对于半水结晶品[/font][font='宋体']≤[/font][font='宋体']7.0%,铅([/font][font='宋体']P[/font][font='宋体']b)[/font][font='宋体']≤[/font][font='宋体']2.0 mg/kg,富马酸(丁烯二酸)[/font][font='宋体']≤[/font][font='宋体']1.0%,马来酸(苹果酸)[/font][font='宋体']≤[/font][font='宋体']0.05%[/font][/align][align=left][font='宋体']2.[/font][font='宋体']按日本食品添加剂标准,苹果酸应符合下列质量指标:含量≥99.0%(质量),溶状、水溶液澄清,熔点127~130℃,重金属≤0.002%(质量),氯化物≤0.0035%(质量),铁≤0.004%(质量),灼烧残留物≤o.05%(质量)。[/font][/align][align=left][font='宋体']3.[/font][font='宋体']按美国食用化学品法典(1983)规定,苹果酸应符合下列质量指标:含量≥99.5%(质量)。熔点130~132℃,灰分≤0.1%(质量),重金属(以Pb计)≤0.002%(质量),砷(以As计)≤0.0003%(质量),铅≤0.001%(质量),富马酸≤0.5%(质量),顺丁烯二酸≤0.05%(质量),水不溶≤o.1‰(质量)。[/font][/align][align=left][font='华文中宋'][size=21px]检测[/size][/font][/align][font='宋体']1.鉴别试验:[/font][font='宋体'](1)试剂和材料:对氨基苯磺酸;(1+1)盐酸溶液;乙酸钴-双氧铀溶液:称取4g乙酸双氧铀,置于50mL乙酸溶液(60g/[/font][font='宋体']L[/font][font='宋体'])中,加热[/font][font='宋体']使溶解 称取20 g乙酸钴,同样置于50 mL 乙酸溶液(60 g/L)中 在温热状态下将两溶液混合,冷却至约20 °C并保持2 h,过滤,即得;亚硝酸钠溶液:200 g/L;氢氧化钠溶液:40 g/L[/font][font='宋体'] [/font][font='宋体'](2)[/font][font='宋体']溶解性试验[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']称取1 g试样,精确至0.01 g,用水溶解并稀释至10 mL,溶液应澄清。[/font][font='宋体'](3)[/font][font='宋体']钠盐试验[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']铂丝用盐酸溶液湿润后,蘸取试样,在无色火焰中燃烧,火焰应显亮黄色。称取1 g试样,精确至0.01 g,用适量的水溶解,加1 mL盐酸溶液,用水稀释至20 mL。取1 mL该溶液, 加5 mL乙酸钴-双氧铀溶液,振摇,有黄色沉淀产生。[/font][font='宋体'](4)[/font][font='宋体']苹果酸盐试验[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']称取 1 g 试样,精确至 0.01 g,加适量的水溶解并稀释至 20 mL。取试样溶液 5mL 放入瓷蒸发皿中, 加对氨基苯磺酸 10 mg,在水浴上加热数分钟,加亚硝酸钠溶液 5 mL,略加热,滴加氢氧化钠溶液使成碱 性,应显红色。[/font][font='宋体']2.[/font] [font='宋体']DL-苹果酸钠(以C4H4Na2O5 计)含量的测定[/font][font='宋体'](1)[/font][font='宋体']试剂和材料[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']冰乙酸[/font][font='宋体'];[/font][font='宋体']高氯酸标准滴定溶液: c(HClO4) =0.1 mol/L;结晶紫指示液:2 g/L[/font][align=left][font='宋体'](2)分析步骤:[/font][font='宋体'][color=#000000]称取 [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]0.15 g [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]干燥后的试样,精确至 [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]0.000 1 g[/color][/font][font='宋体'][color=#000000],加 [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]30 mL [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]冰乙酸溶解,用高氯酸标准滴定溶液滴定。用电位计指示终点。当用指示剂判断终点时,加几滴结晶紫指示液,溶液由紫色经过蓝色变为绿色即为终点。在测定的同时[/color][/font][font='宋体'][color=#000000], [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]按与测定相同的步骤[/color][/font][font='宋体'][color=#000000], [/color][/font][font='宋体'][color=#000000]对不加试样而使用相同数量的试剂溶液做空白试验。 [/color][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429117795_315_1608728_3.png[/img][font='宋体'][color=#000000](3)结果计算:[/color][/font][font='宋体'][color=#000000]DL-苹果酸钠(以 C4H4Na2O5 计)的质量分数 w1 ,按公式计算[/color][/font][font='宋体'][color=#000000]:[/color][/font][/align][align=left][font='times'][color=#000000]式中:[/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]v0——空白试验消耗高氯酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL) [/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]v1——试样消耗高氯酸标准滴溶液的体积,单位为毫升(mL) [/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]c ——高氯酸标准滴溶液浓度的准确数值,单位为摩尔每升(mol/L) [/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]M ——苹果酸钠的摩尔质量的数值,单位为克每摩尔(g/mol)[M(C[/color][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='宋体'][color=#000000]H[/color][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='宋体'][color=#000000]Na[/color][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='宋体'][color=#000000]O[/color][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='宋体'][color=#000000])]=89.03) [/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]m ——试样的质量,单位为克(g) [/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]1000——换算因子。[/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000]3.干燥减量的测定:[/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000](1)分析步骤:[/color][/font][font='宋体'][color=#000000]称取 4 g 试样,精确至 0.000 2 g,置于已烘至质量恒定的称量瓶中,在 120 °C±2 °C的恒温干燥箱中 干燥 2 h,调整温度至 160 °C±2 °C,再干燥 2 h,取出,置于干燥器中冷却至室温,称量。[/color][/font][/align][align=left][font='宋体'][color=#000000](2)结果计算:[/color][/font][font='宋体'][color=#000000]干燥减量的质量分数 ,按公式计算:[/color][/font][/align][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429118746_8579_1608728_3.png[/img][font='宋体']式中:[/font][font='宋体']m——干燥前试样的质量,单位为克(g) [/font][font='宋体']m1——干燥后试样的质量,单位为克(g)。[/font][font='宋体']4.富马酸和马来酸含量的测定:[/font][font='宋体'](1)方法提要:[/font][font='宋体']用高效液相色谱法,在选定的工作条件下,以磷酸氢二铵溶液为流动相,用高压输液泵将流动相泵入 C18色谱柱使试样溶液中各组分进行分离,用紫外检测器进行检测,由数据处理系统记录和处理色谱信号。[/font][font='宋体'](2)试剂和材料:[/font][font='宋体']水:符合GB/T 6682-2008的一级水[/font][font='宋体'];[/font][font='宋体']富马酸:色谱纯[/font][font='宋体'];[/font][font='宋体']马来酸:色谱纯[/font][font='宋体'](3)仪器和设备:[/font][font='宋体']高效液相色谱仪,带脱气装置,配备紫外检测器[/font][font='宋体']。[/font][font='宋体'](4)[/font][font='宋体']参考色谱条件[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']流动相:取磷酸氢二铵20 g,加入约900 mL水溶解后,用磷酸调节溶液的pH为2,然后用0.45 μm的滤膜过滤,再定容至1000 mL。[/font][font='宋体']色谱柱:C18,填料孔径12 nm,填料粒径5 μm,柱长250 mm,柱内径4.6 mm,或其他等效色谱柱。[/font][font='宋体']流速:0.8 mL/min。[/font][font='宋体']柱温:40 °C[/font][font='宋体']波长:210 nm。[/font][font='宋体']进样量:20 μL。[/font][font='宋体'](5)分析步骤:[/font][font='宋体']工作曲线的绘制[/font][font='宋体']:[/font][font='宋体']按表 A.1 中 DL-苹果酸、马来酸和富马酸浓度标准系列,配制出两种不同浓度的混合标准溶液,按照 浓度和峰面积绘制工作曲线,各物质的保留时间参照表 A.2。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429119999_4569_1608728_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429120924_4471_1608728_3.png[/img][font='宋体']试样溶液的制备;[/font][font='宋体']称取0.5 g试样,精确至0.000 2 g,于100 mL容量瓶,加少量水溶解并稀释至刻度,混匀。色谱分析前 用0.45μm微孔滤膜过滤。[/font][font='宋体']测定:[/font][font='宋体']在规定的色谱条件下,取标准溶液和试样溶液各20 μL分别注入液相色谱仪,在工作曲线上查得试液 中富马酸或马来酸的浓度。[/font][font='宋体']结果计算:[/font][font='宋体']富马酸或马来酸含量的质量分数以 w3 计,按公式计算:[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107251429121807_7487_1608728_3.png[/img][font='宋体']式中:[/font][font='宋体']c ——测定得到的试样中富马酸或马来酸的浓度,单位为毫克每升(mg/L) [/font][font='宋体'] [/font][font='宋体']m ——试样的质量,单位为克(g) [/font][font='宋体']100——试样的定容体积,单位为毫升(mL) [/font][font='宋体']1000——换算因子。[/font][font='宋体']实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不 大于其算术平均值的 10%。[/font][font='华文中宋'][size=21px]参考文献[/size][/font][font='宋体']【1】药典级[/font][font='宋体']DL[/font][font='宋体']-苹果酸的合成及精制工艺。蒋俊杰,潘春,张俊鹏,尹文浩,张晓萍。合成化学[/font][font='宋体']【2】紫外高压汞灯诱导马来酸钠溶液反应制备苹果酸钠。谢湘华,张谊华,曾宪康,俞稼镛。感光科学与光化学,1996年第14卷第4期[/font][font='宋体']【3】中华人民共和国国家标准 [/font][font='宋体']GB30608-2014[/font][font='宋体'] [/font]