色谱分离设备

气相色谱分析的分离原理主要是利用混合物中各组分在物理化学性质上的差异?。这些性质包括?沸点、极性和吸附性能。当混合物进入气相色谱仪后，各组分在色谱柱中的运行速度不同，从而实现分离。? 具体分离过程 ?汽化?：待分析样品在汽化室中被汽化，然后由载气（如氮气或氦气）带入色谱柱。?分配或吸附?：混合物中的各组分在色谱柱中的固定相（液体或固体）和载气之间进行分配或吸附。由于各组分的沸点、极性或吸附性能不同，它们在固定相和载气中的分配比例也不同。?分离?：载气携带混合物通过色谱柱时，各组分由于分配或吸附性能的不同，会在柱中反复进行分配或吸附/解吸，导致不同组分以不同的速度通过柱子。吸附力弱的组分先流出，而吸附力强的组分后流出。?检测?：流出色谱柱的组分进入检测器，检测器将组分的存在转化为电信号，记录下来形成色谱图。 关键参数和设备 ?保留时间（tR）?：从注入样品到某一组分出现峰值的时间。?保留体积（VR）?：将某一组分从柱上洗脱下来所需的载气体积。?检测器?：将物质的浓度或质量变化转化为电信号的关键设备。

单位要建设一个天然产物提取分离实验室,请问除了瓶瓶罐灌和一些大型设备外,还需要什么配套设备?目前打算购买得是超临界萃取装置和一套液相色谱纯化系统,还需要什么呢?

想购买设备，设备厂家做出的结果图，如何看出设备的分离情况

在测试中心液相色谱组呆了20多年，见过无数的客户，不同的客户对色谱的理解不一。很多人认为色谱就是打一针，出个谱图而已，容易的很，跟他们的科研档次无法比。觉得样品给你了，你必须做出来，而且很快得到其所需要的结果，全然不管你的仪器能否满足要求。做不好或者不想做，就会去告状，服务态度不好之类的。所以一旦征求意见，必然出现各种各样的服务问题。测试人员的地位在学校可见一斑。也有少数本身做液相色谱的，这些人沟通起来非常融洽，因为知道其实际做起来不容易，可惜这类的客户仅有百分之几。在色谱分析的三大分支中，我对液相、离子熟悉，对气相只是很了解，没动手做过。对于这三大类型，其实在实际中做的差别是很大的。先以我精通的离子色谱而言，我几乎涉及了所有的类型，离子色谱能否做关键在于设备，常规的很简单，特殊的全靠设备支撑，因为大部分离子色谱的分析都是优化的方法，固定的模式做起来并不难。但非常规的样品，则难度大大增加，即使同一个组分，由于基体差别，分析方案也是千差万别。也就是常规的很简单，特殊的则很难。现在厂家离子色谱方法开发就是一种特化的过程。离子色谱主要分析离子以及一些极性的化合物，表面上看应用范围比较窄，其实在很多领域有很好的应用，可以解决液相色谱无法解决的一些问题。对于气相色谱，复杂性比离子色谱要高，因为被测的有机化合物种类大大增加，但从气相的结构看，其载气的选择是非常有限的，主要靠色谱柱（极性，非极性，弱极性等），分离则依赖温度的程序升温，它真正的变化在色谱柱，在一般的分析中，大多变化在温度，柱子的变化并不多。因此对于气相色谱，基本就几根柱子。当然一些特别的检测则需要更高级特殊的装置，这跟离子色谱一样。由于受沸点的制约，气相色谱的应用受到很大的限制。而对于液相色谱，就我20年的经历，我认为其复杂性远远高于离子色谱和气相色谱。因为其变化比前二者更多，一是液相色谱分离有很多机理，每种机理都有对应的色谱柱类型，液相色谱的分离机理大约有十来个，很少有人会用过全部机理类型的色谱柱。虽然反相是最常见的分离手段，但由于反相的广泛使用，C18柱的变化类型极多差异很大，这不同C18柱之间的差异有时不亚于不同机理之间的差异。二是，液相色谱最大变化是流动相，不仅有机相类型有变，添加剂类型和浓度有变，不同pH差别很大，面对变化无穷的样品，这个流动相选择变化规律全靠长期的经验积累，很难用文字一言以蔽之。三是，液相色谱的检测器类型最多，离子色谱就三种，气相四五种，而液相色谱的检测器有十来种，相互之间差别极大，不同的检测器对色谱分离机理也有很大的选择性。因此要做好一张液相色谱图，很多情况下只能是你现有条件下的最佳分离，并不是这个化合物的最佳分析条件。对于特殊样品的分析，液相色谱更多的依赖于检测器和柱子的变化，同离子色谱不同。给你一个样品，用那类色谱(液相、气相还是离子)，什么柱和条件，则完全依赖你的功底和阅历，当你拥有尽可能多的仪器装备，你才能充分发挥你的能力，依据化合物的特点，样品的特性，选择合适的仪器和配置，做出最佳的色谱图。

兰州分离科学研究所是甘肃省科技厅领导的民营科研机构。现承担了国家、甘肃省及有关单位的“手性药物分离技术研究”和“多肽系列产品的试生产研究”等课题，主要从事生物、医药等领域的研究开发工作。拟采购成套生产、实验、检测设备(高压反应釜、旋转蒸发仪、制备色谱、半制备色谱仪、多肽合成仪、罗兹泵、冷冻干燥机、高速离心机、盐水机组、电子显微镜和水分测定仪及部分检测设备)，目前进行设备的选型和采购工作。 请相关生产和授权经销单位在2006年5月16日前邮寄单位资质文件、产品详细资料等，以供参考(恕不接待来访)。联系人：郭迎福 裴卫斌电 话：0931-7667722 7667711传 真：0931-7662266地 址：甘肃省兰州市安宁区福兴路25号邮 编：730070 兰州分离科学研究所 2006 年4月28日[em01][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/04/200604281349_17591_1893412_3.gif[/img]

[color=#444444]1，内标标准曲线如何建立[/color][color=#444444]2，分离1,2-丙二胺，异丙醇胺，2,5-二甲基哌嗪所需要的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]条件，以及使用什么物质作为内标物较好，应该使用什么柱子（要具体），设备比较老旧，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]要固定柱室温度，尽量不要程升温度了，谢谢各位！[/color]

各位有色谱方法开发经验的前辈：现有两个问题需请教1.对于高浓度主峰，峰宽很宽，有6分钟样子，在紧随其后有1杂质峰，与主峰分离度只有0.8，色谱条件除了色谱柱可以更换外，其他条件均不能改变，那么用何种色谱柱可以提高两者的分离度为1.5以上；2.哪类色谱柱更适合于分析高浓度化合物；谢谢各位赐教，不胜感激！

1、色谱长度色谱长度与分离度通常成正比。色谱柱越长，组分之间分辩效果越好，但色谱柱越长压降越大，而输入的压力是有限的。色谱柱过长会增大进出口压力比，相反会降低分离度。通常采用的柱长2m~4m，内径2mm，毛细管柱长度可达20m～150m，内径为0.2mm。2、色谱柱填料颗粒大小填料的粒子越细，由于表面积增加，分辩效果越好，分离度就越高。但是颗粒极细时可能会增大柱压降，也会起反作用。一般采用惰性、多孔的固体颗粒。多由硅藻土或玻璃珠制成，分析不同极性的微生物化合物，为了获得最适的分离条件，要求有不同固定相的载体。3、柱温气体在液体中的溶解度或在固体表面的吸附程度都随温度增高而降低，在气液色谱分析中，当超过一定温度时，静态的液体通常会从色谱柱中挥发掉，所以选择柱温时应考虑到样品的沸点。一般是略低于样品沸点的平均值。4、载气种类常用的载气有 氮气、氢气等。其中氢气、氦气的分子量较小，有利于提高分析速度，但浓度较高的介质易在其间形成扩散，影响分离度，所以在实际测量中氢气、氦气一般都用在介质浓度较低的区域并提高其流速，减少扩散的影响。5、载气流速介质在固定相上的滞留时间，主要取决于介质自身的特性(挥发性，极性等)和载气的流速。所以流速快慢直接影响分离度。

氢型，钙型，钾钠，铵型阳离子色谱的分离特性，不同色谱填料的分离效果（文献资料最好）

在生物大分子纯化分析特别是蛋白质纯化分析中，色谱是非常重要而且常用的一种技术。 一、凝胶过滤　　凝胶过滤又叫分子筛色谱，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 二、离子交换色谱　　离子交换色谱是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。 三、吸附色谱　　1、 吸附柱色谱　　吸附柱色谱是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种色谱方法。 2、 薄层色谱　　薄层色谱是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种色谱方法。这种色谱方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸色谱操作进行展层。 3、 聚酰胺薄膜色谱　　聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。色谱时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。　　四、 亲和色谱 　　亲和色谱是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力，将某种配体连接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种色谱技术。亲和色谱是分离生物大分子最为有效的色谱技术，分辨率很高。 亲和色谱的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，特异的废物（S''）才能和一定的酶（E）结合，产生复合物（E－S''）一样。在亲和色谱中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。而亲和色谱与酶一底物反应不同的是，前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质上亲和色谱是把具有识别能力的配体L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂M－L，或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。 因此，当把围相载体装人小色谱柱（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个色谱峰。然后，恰当地改变起始缓冲 液的PH值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把物质S从固相载体上解离下来，并形成了第M个色谱峰（见图6－2）。显然，通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后，可以重复使用。　　上面介绍的亲和色谱法也是特异性配体亲和色谱法。另外还有通用性配体亲和色谱法。这两种亲和色谱法相比，前者的配体一般为复杂的生命大分子物质（如抗体、受体和酶的类似底物等），它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质（如金属、染料，以及氨基酸等），它成本低廉、具有较高的吸附容量，通过改善吸附和脱附条件可提高色谱的分辨率。　　五、聚焦色谱　　聚焦色谱也是一种柱色谱。因此，它和另外的色谱一样，照例具有流动相，其流动相为　多缓冲剂，固定相为多缓冲交换剂。　　聚焦色谱原理可以尝试从PH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。 1、PH梯度溶液的形成　　在离子交换色谱中，PH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如，当使用阴离子 剂进行色谱时，制备PH由高到低呈线性变化的梯度溶液的方法是，在梯度仪的混合室（这色谱柱者）中装高PH溶液，而在另一室装低PH极限溶液，然后打开色谱柱的下端出口，让洗脱液连续不断地流过柱体。这时从柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低变化的。而在聚焦色谱中，当洗脱液流进多缓冲交换剂时，由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基团，故PH梯度溶液可以自动形成。 　　2．蛋白质的行为　　蛋白质所带电荷取决于它的等电点（PI）和色谱柱中的PH值。当柱中的PH低于蛋白质的PI时，蛋白质带正电荷，且不与阴离于交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动，固定相中的PH值是随着淋洗时间延长而变化的。当蛋白质移动至环境PH高于其PI时，蛋白质由带正电行变为带负电荷，并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过，蛋白质周围的环境PH 再次低于PI时，它又带正电荷，并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移，上述过程将反复进行，于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来，从而达到了分离的目的。 　　不同蛋白质具有不同的等电点，它们在被离子交换剂结合以前，移动之距离是不同的，洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

操作条件对于色谱分离有很大影响。 柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米，柱长为1-4米。 柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。 载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10-100亳升之间。 固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。（1）固体吸附剂或担体粗细：一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。（2）固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用15%-25%。比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。 进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。对于常规分析，液体进样量为1-20微升；气体进样量为0.1-5毫升。

优化液相色谱（HPLC）的分离效果是确保分析结果准确性和重现性的关键步骤。以下是一些常用的策略来优化HPLC分离效果： 1. 选择合适的色谱柱： 根据待分离化合物的性质选择合适的色谱柱类型（如反相色谱柱、离子交换柱、亲和色谱柱等）。 色谱柱的尺寸（内径、长度）、填料粒度和类型都会影响分离效果。 2. 调整流动相组成： 改变流动相的组成，如溶剂比例、pH值、离子强度等，可以优化分离。 使用缓冲液可以帮助控制pH值，改善峰形和分离度。 3. 优化梯度洗脱程序： 设计合适的梯度洗脱程序，使各组分在色谱柱上逐渐分离。 避免过快的梯度变化，以免造成峰展宽或保留时间的不稳定。 4. 调整流速： 流速影响色谱柱的柱压、分离效率和保留时间。通常，降低流速可以提高分离度，但会增加分析时间。 5. 优化柱温： 控制色谱柱的温度可以改善分离度，减少峰展宽，并提高保留时间的重现性。 6. 改进样品制备： 确保样品纯净，避免杂质干扰。 使用适当的样品制备方法，如固相萃取、液-液萃取等，以富集目标化合物或去除干扰物质。 7. 使用合适的检测器： 根据分析物的性质选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器、电喷雾检测器等）。 以下是一些具体的优化步骤： 初步分离：首先使用等度洗脱或简单的梯度洗脱程序来观察样品的初步分离情况。 峰优化：针对特定峰，调整流动相的组成和梯度程序，改善峰形和分离度。 系统适应性：在确定最佳条件下，测试系统适应性，确保分离效果在不同时间、不同批次之间稳定。 方法验证：对优化后的方法进行验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度和耐用性等参数。 通过上述步骤，可以逐步优化[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱的分离效果，达到最佳的分析性能。

液相色谱中死时间几种测定方法1：有响应的溶剂出峰时间为死时间。2：进样后的阀切换峰，对应的时间为死时间。3：工作站中输入色谱柱的空余体积或孔隙率，自动计算。（对于C18柱，也可以用硝酸钠或硫脲等在色谱柱上完全不保留组分的出峰时间来测定死时间。）影响分离度的因素有三个因素控制两个色谱峰之间的分离度——容量因子，选择性，柱效容量因子反映样品分子和固定相及流动相之间的作用力，选择性是说明色谱系统区分两个或多个色谱峰的能力，柱效与色谱峰的宽度有关，很明显要达到一定的分离度，宽色谱峰要比窄色谱峰需要更大的分离度选择性。理论塔板数越高柱效越高，柱效的高低受柱内效应和柱外效应的影响。选择性是固定相区分两个被分离样品组分的能力，用容量因子之比进行计算，它是两个被分离色谱峰顶点距离的量度，如果选择性是Ⅰ，则两个组分完全不能分离。选择性数值越高，分离越好。由于选择性取决于被分离物的物理和化学结构，流动相和固定相，流动相组成，PH，色谱柱温度，流动相添加剂，因此，尽量优化实验条件提高选择性以降低成本。容量因子为物质的特性，当分析条件一定时，容量因子为固定值。溶剂的洗脱强度与其极性有关：反相色谱：溶剂的极性越强，洗脱强度越弱。正相色谱：溶剂的极性越强，洗脱能力越强。（注意：不可以使用纯水作为正想色谱的流动相）一般样品分析要求：容量因子大于2小于5

美国赛分科技（Sepax Technologies Inc. ）致力于开发生产化学与生物分离科学、生物表面科学和蛋白质组学研究（proteomics）领域的产品，包括高分辩率的高效液相仪器、色谱柱、配件和用于DNA测序和蛋白质分离的新型毛细管涂布材料与毛细管电泳仪，以及为微芯片分离和DNA、蛋白质微序列提供最好的表面技术与分离技术。 Sepax Technologies Inc.创新的尺寸排阻色谱柱（凝胶色谱柱）的填料是以刚性的高纯度球型硅胶为基质，利用独特的表面修饰技术在表面通过共价化学键合亲水性基团而成，该固定相具有亲水性并且是中性的，可以消除与生物大分子（特别是蛋白质）的非特异性相互作用，Sepax Nanofilm SEC系列尺寸排阻色谱柱具有分离的高效率与高选择性。pH适用范围为2-8.5，可使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。Sepax Nanofilm SEC系列尺寸排阻色谱柱适用于分离蛋白质和多肽类生物大分子样品以及天然与合成高分子物质。Sepax CNT SEC尺寸排阻色谱柱可以用于分离制备纳米物质，如碳钠米管、钠米棒。流动相不仅可以用缓冲溶液，也可以使用有机溶剂，如乙腈、甲醇、四氢呋喃等。 Sepax Proteomix系列离子交换色谱柱的填料是以刚性、球形、化学和机械性能都非常优异的高度交联的聚苯乙烯-二乙烯基苯（PS/DVB）聚合物为基质、树脂表面涂覆一层纳米厚度的中性的亲水性聚合物薄膜、在亲水性薄层的表面通过共价化学键合致密且均匀的离子交换功能基团而成。亲水性的薄层完全覆盖疏水的树脂表面，可以消除与生物分子之间的非特异性结合作用，从而达到高效分离，并且可以获得非常高的回收率。PS/DVB 树脂分为无孔与有孔两种。Sepax Proteomix离子交换固定相有键合磺酸根的强阳离子交换（SCX）、羧酸根的弱阳离子交换（WCX）、季胺的强阴离子交换（SAX）、叔胺的弱阴离子交换（WAX）四种。Sepax Proteomix系列离子交换色谱柱可以耐受高温（80℃）与高压（4,000psi），其pH适用范围为2-12，适用于分离蛋白质、低聚核苷酸和多肽类生物样品。流动相的选择范围广，可以是水，也可以是乙腈、甲醇等有机溶剂，还可以是缓冲盐溶液，如磷酸盐、tris、醋酸盐等。 Sepax Technologies Inc.已开发出独特的表面涂布技术，使聚合反应仅在表面上发生，可用于涂布目前市场上最细的毛细管柱（直径小于5μm）。此独特的技术能够在毛细管的内表面均一涂布厚度可控（1～50nm）的中性、阳性或阴性聚合物薄层。这些涂布的毛细管柱具有可控或可逆转的EOF，在毛细管电泳中是一高度可靠和高效率的分离工具，它已广泛应用于高通量分析中，如蛋白质组学研究。 在生物化学分离领域，Sepax Technologies Inc.也为小分子分离提供完整系列的、高质量的正相与反相HPLC柱，包括C18、C8、C4、C2、苯基柱、腈基柱、氨基柱、硅胶柱、混合型的离子交换柱HP-SCX与SAX以及宽pH范围的聚合物填料（poly-PS/DVB）柱等。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=19417]产品资料[/url]

1. 是不是所以的混合物均可用柱色谱分离？柱色谱是万能分离方法吗？2.含有金属物质的分离一般用什么样的溶剂较好？

气相色谱如何提高分离度方法： ?增加?柱长?：增加柱长可以增加分离度，但也会增加分析时间。??减少进样量?：减少进样量可以提高分离度，固体样品可以通过加大溶剂量来降低浓度。?提高进样技术?：防止造成两次进样，确保样品准确进入色谱柱。?降低?载气流速?：降低载气流速可以减少传质阻力，提高分离度。?降低色谱柱温度?：降低柱温可以提高分离度，但会增加分析时间。?提高汽化室温度?：提高汽化室温度可以确保样品完全汽化。?减少系统的死体积?：确保色谱柱连接紧密，选择合适的汽化室。?毛细管色谱柱分流?：选择合适的分流比可以提高分离度。 每种方法的原理和适用情况 ?增加柱长?：长柱子提供更多的时间让不同组分在柱内分离，但也会增加分析时间。?减少进样量?：减少进样量可以减少峰重叠，提高分离度，适用于样品浓度较低的情况。?提高进样技术?：确保每次进样准确，防止样品溅射或多次进样。?降低载气流速?：慢流速可以减少传质阻力，但也会增加分析时间。?降低色谱柱温度?：低温有利于组分分离，但会增加分析时间。?提高汽化室温度?：高温确保样品完全汽化，避免峰形扩展。?减少系统的死体积?：减少死体积可以减少峰扩展，提高分辨率。?毛细管色谱柱分流?：合适的分流比可以平衡分离度和分析时间。

反相色谱的分离原理？

[color=#444444]各位大佬，有机磷盐能用柱色谱进行分离吗。[/color]

氢型，钙型，钾钠，铵型阳离子色谱的分离特性，不同色谱填料的分离效果（文献资料最好）

为什么说色谱分离技术的分离效率最高

操作条件对于色谱分离有很大影响。 柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米，柱长为1-4米。 柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。 载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10-100亳升之间。 固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。（1）固体吸附剂或担体粗细：一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。（2）固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用15%-25%。比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。 进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。对于常规分析，液体进样量为1-20微升；气体进样量为0.1-5毫升

色谱分离的原理

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=171584]蛋白质的多维色谱分离[/url]蛋白质的多维色谱分离通常生物体内提取的蛋白质样品成分复杂，应用多维色谱进行分离的方法必将流行。文章简单介绍了多维色谱分离的理论，算是一个入门材料吧。

各位大大： 混甲酚的分离选用什么样的色谱柱呢？我现在有一款备选的FLB-cd-5025-1 这款色谱柱好贵12000一根，又没有价格适中一点的色谱柱型号推荐推荐啊！谢谢各位大大！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif

离子色谱的分离机理主要是离子交换，有3种分离方式，它们是高效离子交换色谱（HPIC）、离子排斥色谱 （HPIEC）和离子对色谱 （MPIC）。那选用色谱柱是否要根据这个来呢？

Sil-AVI-ST色谱柱分离性能研究仪器与试剂表1 仪器设备仪器名称生产厂家 P230II型高压恒流泵 UV230II紫外-可见检测器 大连依利特分析仪器有限公司 GLK型装柱系统 无锡加莱克色谱科技有限公司 FTIR-850傅里叶变换红外光谱仪 天津港东科技股份有限公司 SB-100DT超声波清洗机 宁波新芝生物科技股份有限公司 RCT basic基本型数显加热磁力搅拌器 德国IKA公司 FA2004电子天平 上海舜宇恒平科学仪器有限公司 DZF-2B型真空干燥箱 北京市永光明医疗仪器有限公司 DZF-6020型真空干燥箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 H2050R大容量高速台式冷冻离心机 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司 实验试剂 实验试剂 试剂名称[/align]生产厂家 球形多孔硅胶 日本DAISOGEL公司 （3-巯丙基）三乙氧基硅烷（MPS）、2,2-偶氮二异丁腈（AIBN）、（3-氯苯基）硫脲、对氨基苯甲酰胺、萘、丙苯 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 甲苯、三氯甲烷 天津市大茂化学试剂厂 甲醇、硫代乙酰胺、环己醇、异丙醇 天津市科密欧化学试剂有限公司 1-烯丙基-3-乙烯基咪唑溴盐（AVI）、巯基乙酸十八烷基酯（ST）、苯甲酰胺、苯、正丁基苯、乙酸铵 上海麦克林生化科技股份有限公司 乙腈 天津赛孚瑞科技有限公司 二乙基硫脲、亚乙基硫脲 上海泰坦科技股份有限公司阿达玛斯试剂 蒽 北京伊诺凯科技有限公司 色谱用超纯水 法国Millipore公司的Milli-Q系统纯化制备 实验内容Sil-AVI-ST色谱固定相的制备 Sil-AVI-ST色谱固定相需经两步反应制备。 制备Sil-MPS的反应：称取2.0g[/size]提前干燥好的球形多孔硅胶置于150mL的双颈烧瓶中，加入溶剂甲苯45mL，再加入2mL的MPS，混合均匀，在氮气保护的条件下，于95℃加热，磁力搅拌反应24h后，待冷却至室温，先使用甲苯离心洗涤多次，再使用甲醇离心洗涤多次，洗涤后的产物置于80℃的烘箱中干燥24h，得到Sil-MPS。 制备Sil-AVI-ST的反应：称取2.0g提前干燥好的Sil-MPS置于150mL的双颈烧瓶中，加入3g的AVI和0.24g的AIBN，加入[font='times new roman']50mL的溶剂三氯甲烷，再加入0.6g的ST，混合均匀，在氮气保护的条件下，于60℃加热，磁力搅拌反应24h后，待冷却至室温，先使用三氯甲烷离心洗涤多次，再使用甲醇离心洗涤多次，洗涤后的产物置于80℃的烘箱中干燥24h，最终得到Sil-AVI-ST。 Sil-AVI-ST色谱柱填充 通过高压匀浆法将Sil-AVI-ST填充到空不锈钢柱（150mm×4.6mm）中：以环己醇-三氯甲烷（1:1，v/v）为匀浆液，称取2g的Sil-AVI-ST与匀浆液混合，超声处理使其分散均匀，将其倒入连接[font='times new roman']好空不锈钢柱的匀浆罐中，以甲醇-异丙醇（1:1，v/v）为加压液，缓慢调节装柱机压力至35MPa并保持30 min，装填结束后缓慢调节装柱机压力降至0MPa并静置30min，卸下色谱柱并组装柱头和筛板，用乙腈冲洗使其活化，备用。 结果与讨论Sil-AVI-ST色谱固定相的表征 使用傅里叶变换红外光谱仪测定Sil-AVI-ST在4000-500cm-1范围内的红外吸收以对其进行表征，结果如图1所示。Sil-AVI-ST色谱固定相在3400cm-1[font='timesnew roman']的Si-OH拉伸振动峰减弱，表明一些硅醇基团与硅烷偶联试剂发生了反应，在2930cm-1和2860cm-1处的峰为-CH3和-CH2的拉伸振动特征吸收，1550 cm-1处的峰符合咪唑基团双键的拉伸振动特征峰,32]，以上特征吸收可以证明Sil-AVI-ST色谱固定相的成功制备。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102222056598_6883_5389809_3.jpeg图1 Sil-AVI-ST的红外光谱图Sil-AVI-ST色谱柱分离硫脲类物质 选取二乙基硫脲、亚乙基硫脲和（[/font]3-氯苯基）硫脲三种亲水性硫脲类物质对Sil-AVI-ST色谱柱的分离性能进行考察。如图3-2所示，以乙腈/水（99:1，v/v）为流动相，二乙基硫脲的保留时间为2.29833min，亚乙基硫脲的保留时间为2.58750min，（3-氯苯基）硫脲的保留时间为2.95917min，三种硫脲类物质的洗脱顺序与亲水性顺序相符，且在4min内可实现基线分离，分离度分别为2.92和3.03，峰型良好，表现出令人满意的选择性和分离效率。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102222063451_6159_5389809_3.png 图硫脲类物质在Sil-AVI-ST色谱柱中的分离谱图[font='times new roman']Sil-AVI-ST色谱柱分离酰胺类物质 选择硫代乙酰胺、苯甲酰胺和对氨基苯甲酰胺三种亲水性酰胺类物质对Sil-AVI-ST色谱柱的分离能力进行考察。如图3所示，以乙腈/水（99:1，v/v）为流动相，硫代乙酰胺的保留时间为2.38000min，苯甲酰胺的保留时间为2.93083min，对氨基苯甲酰胺的保留时间为4.35083min，且在5min内可实现基线分离，分离度分别为5.40和9.20，峰型良好，表现出令人满意的选择性和分离效率。三种酰胺类物质的洗脱顺序与亲水性顺序不完全相符，可能是由于Sil-AVI-ST固定相能提供多种保留机制，除了亲水相互作用外，固定相表面键合的AVI和ST提供的额外的疏水、氢键、π-π[font='times new roman']和静电相互作用，因此改变了分析物的洗脱顺序。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102222061135_6789_5389809_3.png图3酰胺类物质在Sil-AVI-ST色谱柱中的分离谱图 Sil-AVI-ST色谱柱分离烷基苯类物质 选取甲苯、丙苯和丁苯三种疏水性烷基苯类物质对Sil-AVI-ST色谱柱的分离性能进行考察。如图4所示，以乙腈/水（30:70，v/v）为流动相，甲苯的保留时间为2.45667min，丙苯的保留时间为2.76250min，丁苯的保留时间为3.07417min，三种烷基苯类物质的洗脱顺序与极性顺序一致，且在4min内可实现基线分离，分离度分别为2.22和1.80[size=16px]，峰型良好，证明Sil-AVI-ST具有在富水条件下有效分离疏水类分析物的能力。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102222062721_2454_5389809_3.png图4 烷基苯类物质在Sil-AVI-ST色谱柱中的分离谱图Sil-AVI-ST色谱柱分离芳香类物质 选择苯、萘和蒽三种疏水性芳香类物质对Sil-AVI-ST色谱柱的分离性能进行考察。如图5所示，以乙腈/水（20:80，v/v）为流动相，苯的保留时间为2.49083min，萘的保留时间为3.16417min，蒽的保留时间为6.33988min，三种芳香类物质的洗脱顺序与极性顺序一致，可实现基线分离。蒽的色谱峰有严重的拖尾现象，这可能是疏水长链烷基在反相模式下对弱极性分析物的强吸附作用导致的，除了疏水作用以外，咪唑阳离子与芳香环之间的π-π相互作用也增强了芳香类分析物的保留，多种相互作用机制导致色谱峰有一定的拖尾现象。[/font] https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102222064716_4839_5389809_3.png图5 芳香类物质在Sil-AVI-ST色谱柱中的分离谱图 结论 本文在采用自由基介导的巯基键合反应合成一种新型咪唑类离子液体嵌入巯基硬脂酸功能化色谱固定相，并对其分离性能进行考察。 首先制备巯丙基化硅球（Sil-MPS），随后通过自由基介导的巯基键合反应将AVI键合到Sil-MPS表面，并与巯基乙酸十八烷基酯（ST）进一步反应以提高疏水选择性，获得新型咪唑类离子液体嵌入巯基硬脂酸功能化色谱固定相（Sil-AVI-ST），采用傅里叶变换红外光谱表征可证明其制备成功。将制备的Sil-AVI-ST色谱固定相用于各种分析物的分离，以对其分离能力进行考察。Sil-AVI-ST固定相达到了预期的分离效果，可以在亲水模式下分离亲水性的硫脲类和酰胺类物质，也可以在反相模式下分离疏水性的烷基苯类和芳香类物质。 实验结果表明，Sil-AVI-ST色谱柱具有多种类型的分离机制，这有利于在单个色谱柱上高效地分离多种类型的化合物。嵌入极性配体AVI可以提高长链烷基固定相对亲水分析物的分离效率，且Sil-AVI-ST色谱柱可以实现在富水条件下对疏水分析物的分离，这一点在一定程度上克服了传统反相色谱固定相的缺点。因此新制备的Sil-AVI-ST固定相具有良好的实际应用潜力。 本课题通过开发新的混合模式色谱固定相，为解决传统色谱固定相的缺陷、寻找在单柱上高效分离多种类型混合物的方法，提供了研究思路。

求高手指点： 目标分离物：丁酮&乙酸乙酯目前使用色谱柱为：Elite-624 PE 600参数：柱子：50摄氏度 保留9min 以4摄氏度/分 升温至180 载气：N2目前还未能将其分离，保留时间一致；可有高人做过此分离，恳请分享下参数！ [em09511]

根据三种不同分离机理，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]可分为高效离子交换色谱（HPIC），离子排斥色谱（HPIEC）和离子对色谱（MPIC）。用于三种分离方式的柱填料的树脂骨架基本上都是苯乙烯－二乙烯基苯的共聚物。HPIC用低容量的离子交换树脂，HPIEC用高容量的树脂，MPIC用不含离子交换基团的多孔树脂。[em21]

色谱分离模式研究进展 高效液相色谱法（HPLC）是分离科学中最常用的方法之一，已经广泛应用于生命科学、环境监测、食品安全、脂质组学、蛋白质组学、药物分析等领域。本文总结与归纳了色谱分离模式研究进展。 目前液相色谱常见的分离模式包括反相液相色谱（RPLC）、正相液相色谱（NPLC）、亲水相互作用色谱（HILIC）、离子交换色谱（IEC）、尺寸排阻色谱（SEC）等。在单一的分离模式下，分析物与固定相之间往往存在一种作用力或以一种作用力为主。以最常用的RPLC为例，其对于疏水性物质具有很好的分离效果，但却不适用于强极性和离子型物质的分离分析。近年来，混合模式色谱（MMC）因其具有高选择性和高负载能力而受到越来越多的关注。基于MMC的多保留机制，可以在单一色谱柱中实现多模式分离分析，可满足多分离应用的目的。近年来报道的混合模式色谱包括RPLC/IEC、RPLC/HILIC、HILIC/IEC以及RPLC/HILIC/IEC等。 Shi等以不同比例甲基三甲氧基硅烷（MTMS）和巯丙基三甲氧基硅烷（MPTMS）功能化的聚倍半硅氧烷介孔微球为基础，通过“硫醇-烯”点击化学反应，制备了具有不同氨基密度的新型RPLC/IEC混合模式固定相，与硅胶基氨基键合柱（S-NH2）相比，合成的新型氨基固定相在高碱性条件下表现出更高的水热稳定性和更长的使用寿命，适用于极性药物和离子型药物的分离，并成功应用于复方药物中多种物质的同时分离。 Wei等以2,4,6-三（4-氨基苯基）-1,3,5-三嗪（TAPT）和2,5-二羟基对苯二甲醛（DHTA）为单体构建了亚胺连接的COF材料，进一步将其键合在氨基化硅胶（SiO2-NH2）上，制备了新型多功能固定相TAPT-DHTA-COF@SiO2（图1）。设计的TAPT-DHTA-COF@SiO2色谱固定相具备RPLC/HILIC混合分离模式，能够有效分离疏水性苯基酮、邻苯二甲酸酯和类固醇激素。此外，TAPT-DHTA-COF中的极性氨基和羟基基团也提高了对于亲水性核苷/碱基的分离选择性。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102227049704_3414_5389809_3.jpeg图1 RPLC/HILIC混合模式TAPT-DHTA-COF@SiO2色谱固定相[/align]Fig. 1 RPLC/HILIC mixed mode TAPT-DHTA-COF@SiO2 chromatographic stationary phase Bo等使用4-苯乙烯磺酸钠（NASS）和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯（DMAEMA）为功能单体，采用表面引发原子转移自由基聚合（SI-ATRP）法将聚（NASS-co-DMAEMA）键合在二氧化硅表面，制备了HILIC/IEC混合模式色谱固定相，并实现了核苷、β-激动剂和红花注射液的分离。此外，通过调控NASS和DMAEMA的比例，可以实现固定相电荷和极性的调节，DMAEMA还赋予了色谱柱温敏响应特性，可进一步改善分离选择性。 Chen等以1,3,5 -三甲酰基间苯三酚（Tp）和二羟基联苯胺（BD-(OH)2）为前驱体，采用原位生长法制备了SiO2@TpBD-(OH)[font='times new roman']2色谱固定相。填充的SiO2@TpBD-(OH)2色谱柱具有RPLC/HILIC/IEC三种保留机制，与传统的单模式色谱柱相比，对苯系物、多环芳烃、核苷类、碱类和酸性有机化合物具有良好的选择性和较高的分离性能，此外，SiO2@TpBD-(OH)2色谱柱可实现湖泊水体中多种有机污染物的基线分离，在环境检测中具有一定的应用潜力。 Wang等采用表面引发自由基聚合法，将带有双键的阳离子和阴离子组成的ILs与二氧化硅材料结合在一起，制备了固定相PIm-Br和PIm-VBS，可用于RPLC/HILIC/IEC混合模式分离分析，最高柱效可达83,810 N/m。Zeng等使用马来海松酸甲基丙烯酸缩水甘油酯（MPAG）和聚乙烯亚胺（PEI）作为配体，制备了Sil-MPAG-PEI色谱固定相。由于PEI的存在，该材料同时表现出阴离子交换和亲水相互作用特性。在不同流动相条件下，可以[back=#ffffff]从RPLC模式切换到RPLC/HILIC/IEC混合模式。Sil-MPAG-PEI可提供多种相互作用，包括疏水、π-π、氢键、亲水、离子交换和静电相互作用，可以实现核苷/碱基类、黄酮类、烷基苯类、酚类、苯胺类和多环芳烃类物质的高选择性分离，并具有良好的稳定性。