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克拉维酸紫外吸收很弱,查阅了很多文献之后决定用柱前衍生化法处理后再HPLC分析。文献报道:用0.2g/mL的咪唑溶液(pH6.8)作为衍生化试剂,按1体积的咪唑溶液与4体积的克拉维酸溶液进行混合,静置20min后进行测定。现在遇到了这么个问题:在同样的检测波长(311NM)下,单独进样咪唑溶液在药物峰位置也会出峰,也就是说咪唑峰对药物峰有干扰。请教群里的朋友,这个问题该怎么解决?
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302021634_424293_1621890_3.jpg3.2.P.5.3.2 有关物质色谱图见附件8~234。有关物质检查方法验证概要项目验证结果流动相选择流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0),流动相B为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0)-乙腈(20:80)。专属性各破坏条件下,产生的杂质与主成分能够有效分离,主成分峰未检出不纯物。线性和范围无相关研究内容。定量限、检测限阿莫西林以17.9分钟±1分钟基线计算信噪比,当S/N≒3时,检测限为1.48ng(浓度为0.074µg/ml),当S/N≒10时,定量限为4.92ng(浓度为0.246µg/ml);克拉维酸以6.3分钟±1分钟基线计算信噪比,当S/N≒3时,检测限为1.27ng(浓度为0.063µg/ml),当S/N≒10时,定量限为4.22ng(浓度为0.211µg/ml)。准确度无相关研究内容。精密度自身对照溶液连续进样6次,阿莫西林和克拉维酸峰面积和保留时间精密度RSD均小于0.5%溶液稳定性本品供试品溶液室温放置8小时稳定性较好,阿莫西林和克拉维酸钾主峰面积的RSD值和归一化含量RSD值均小于2.0%;当室温放置8小时后,杂质个数和杂质含量没有明显变化。耐用性磷酸盐pH值在5.5~6.0,检测波长230±2nm,流速、柱温耐用范围较宽。3.2.P.5.3.2.1 流动相选择(色谱图见附件8~10)参照中国药典2012年版二部收载的阿莫西林克拉维酸钾相关制剂有关物质项和新药转正标准第75册收载的阿莫西林克拉维酸钾胶囊质量标准WS1-(X-024)-2007Z有关物质项,流动相体系采用流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0),流动相B为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0)-乙腈(20:80)。根据初步拟订的流动相体系进行梯度洗脱选择试验,试验结果统计见下表图。梯度洗脱方式(一)时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)tR + 0982tR + 207030tR + 22982tR + 32982梯度洗脱方式(二)时间(分钟)[font=宋
继”阿莫西林克拉维酸钾胶囊有关物质方法学”项目结束,整理的含量测定方法学。项目:含量测定(3.2.P.5.2.9)检查方法:照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录Ⅴ D)测定试验条件:仪器:LC-2010CHT (SHIMADZU)万分之一电子天平(Sartorius ABS-124S型)工作站(LCsolution色谱工作站)色谱柱(填料:C18,规格:250mm×4.6mm,填料粒径:5μm)Xtimate C18 4.6*250 ,PN:Xt5B18425 ,SN:411101950UV检测器(检测波长:220nm)柱温:室温流动相:0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(取磷酸二氢钠7.8g,加水900ml使溶解,用10%磷酸溶液或氢氧化钠试液调节pH值至4.4±0.1,加水稀释至1000ml)-甲醇(95:5)。流速:1.0ml/min。运行时间:约20分钟。系统适用性:取阿莫西林克拉维酸系统适用性试验对照品,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.8mg的溶液,取20μl注入液相色谱仪,记录的色谱图应与标准图谱一致。具体试验操作:取装量差异项下的内容物适量,精密称取适量,加水适量,超声使溶解并定量稀释制成每1ml中含阿莫西林0.5mg的溶液,滤过,立即精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另分别精密称取阿莫西林对照品与克拉维酸对照品各适量,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿莫西林0.5mg和每1ml中含克拉维酸0.125mg的混合溶液,同法测定。按外标法以峰面积分别计算供试品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。计算公式:标示量百分含量(%)=××100%式中:Cs为对照品的浓度(mg/ml);At为供试液的主峰面积;Nt为供试液的稀释倍数;AS为对照品溶液的主峰面积;W为供试品取样量(mg)。“色”路蹒跚,藤下葡萄,某品种含量测定方法学之耐用性试验部分路蹒跚,藤下葡萄,某品种含量测定方法学之耐用性试验部分http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292159_448382_1621890_3.gif3.2.P.5.3.6.1波长选择本品含量测定检测波长参照中国药典2010年版二部收载的阿莫西林克拉维酸钾相关制剂质量标准含量测定项,即220nm。3.2.P.5.3.6.2流动相选择(色谱图见附件1122~1124)参照中国药典2010年版二部收载的阿莫西林克拉维酸钾相关制剂质量标准含量测定项,以0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(取磷酸二氢钠7.8g,加水900ml使溶解,用10%磷酸溶液或氢氧化钠试液调节pH值至4.4±0.1,加水稀释至1000ml)-甲醇(95:5)为流动相。试验过程:系统适用性试验供试液:精密称取阿莫西林克拉维酸钾系统适用性对照品4.2mg至5ml量瓶中,加流动相适量超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试液;对照品溶液:精密称取阿莫西林对照品29.1mg和克拉维酸钾对照品7.3mg至50ml量瓶中,加水适量超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试液;精密量取上述供试液各20μl注入高效液相色谱仪,记录色谱图,典型色谱图见下图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292200_448383_1621890_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292200_448384_1621890_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306292201_448385_1621890_3.gif3.2.P.5.3.6.3进样精密度试验(色谱图见附件1125~1130)