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[align=center]API质谱仪MRM定量方法的建立方法[/align] 质谱仪凭借其高灵敏度和选择性,定量小分子化合物越来越受到重视。MRM:Multi Reaction Monitor,指多反应监测。针对二级质谱或多级质谱的某两级之间,即母离子选一个离子,碰撞后,从形成的子离子中也只选一个离子。因为两次都只选单离子,所以噪音和干扰被排除得更多,灵敏度信噪比会更高,尤其对于复杂的、基质背景高的样品。那么我们今天来分享一下API质谱仪MRM定量方法的建立方法。 首先选择Q1 FULLSCAN:用SYRINGE PUMP 5ul/min,样品浓度约1-10pmol/u,根据待测化合物性质选择+- ESI/APCI/APPI。根据待测化合物分子量选择扫描范围:在分子量上下各100Da足够,TIME不要小于1秒。通过调节DP,使得分子离子峰明显高于噪音峰,确定分子离子。如果分子离子峰不明显,可能需要增加样品浓度,如果仍然不能确定分子离子,考虑改变离子化方式或样品前处理方法,例如POS方式可酸化溶液,NEG方式碱化溶液。对于某些化合物,POS方式[sup]+[/sup]不明显,可考虑[M+NH[sub]4[/sub]][sup]+[/sup],尽量避免采用[sup]+[/sup],[sup]+[/sup]。 第二步选择Q1 MI SCAN:TIME 100ms,用SYRINGEPUMP 5ul/min,根据第1步选择的母离子,EDIT RAMP优化DP,CXP及EP,存储此参数。 第三步选择PRODUCT ION SCAN,用SYRINGE PUMP5ul/min,扫描范围:上限比母离子高10-50 Da,下限50-100 Da,TIME 不小于1s。通过调节CE等参数得到高质量的MS2图,母离子相对峰高在1/4-1/2即可。Acquire命名 MCA20次,平滑后选择特征子离子。 第四步选择MRM优化,用SYRINGE PUMP5ul/min。根据特征子离子强度选择MRM离子对,母离子M/Z值由第1步确定,子离子M/Z值由第3步确定,精确到小数点后1位。可选择多个MRM离子对,同时优化,对较弱离子对可适当多分配TIME例如200 ms,强离子对可40-50 ms。同时EDIT RAMP优化COMPOUND项下参数先根据第3步的CE优化CXP,然后再优化CE,在质量扫描范围窗口点右键对各离子参数分别设定。CAD参数可手动优化,值不要太高,通常4-6。初步建立METHOD,存储为*.dam文件。 第五步不接色谱柱进行FIA定量优化。首先接通LC系统,检查工作是否正常,有无气泡,否则先排气。激活CONFIGURE中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]配置。在ACQURE栏内调出第3步初步建立的METHOD,若已经有LC条件,则可参考,若无根据拟选用的色谱柱内径确定LC流速(2mm典型流速200-300ul/min,3mm典型流速400-500ul/min,4.6 mm典型流速800-1000ul/min)以及流动相组成,设定MS初始温度和气流,加上LC PUMP和AUTOSAMPLER,并设定同步方式为LC SYNC。 第六步使用4mm以上内径色谱柱时先设定分流比,使进入MS的流量在200-400ul/min最佳。MS与LC的period都设为0.5-1min,进样体积2-5ul,浓度0.01-0.1pmol/ul,按照FIA教程操作,优化CUR,GAS1,GAS2(API3000AUX要手动优化),TEMP,IS。平衡5 min后开始进行FIA定量优化,完成最后方法的质谱条件优化。 第七步接好并平衡色谱柱,至少20min,用适当浓度标准品检验峰型等分离情况。根据色谱分离情况,可设定梯度洗脱。MRM可以不必所有峰都基线分离,但要避开基质的离子抑制干扰(出峰时间不能太早,要在溶剂峰后)。 第八步空白基质添加标准品,稀释成不同浓度,通常可2倍等比稀释,5-7级。根据LC流动相选择溶剂体系一致的稀释液,配制实际样品。编辑批处理文件,排列进样顺序,最好第一针先做空白,然后由稀到浓。平衡MS离子源和色谱柱后开始正式采样。 以上是一种化合物的定量方法,如果多种物质同时定量(包括内标),分别用纯标样重复第2-4步,记录各参数,然后合并到第5步最后的METHOD,再进行第6-8步。完成上述所有步骤后,即可制做标准曲线。如果不能自动正确积分色谱图,可手工修改。有内标和无内标的计算方法分别演示。最后结果的打印和存贮,复制。 今天的分享到此结束,感谢仪器信息网提供原创大赛让我们有机会互相分享学习!
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A5000气相色谱工作站 多点校准曲线的建立方法,需求建立过程在使用多点时,必须自己把峰面积自己输入进去吗?工作站不能自动显示吗?