推荐厂家
暂无
暂无
报名链接:http://www.pharmogo.com/technical.php?act=show&id=24 主 题 应用PBPK模型模拟预测单克隆抗体的体内PK 时 间 2015年7月15日(周三)下午2:30-4:00 主办方 上海凡默谷 主讲人 薛彩福 产品经理【内容】随着近年来生物技术药物的飞速发展,生物药物俨然已成为当今新药研究发展中最活跃和最迅速的新领域。而与传统的药物相比,生物技术药物具有种族特异性、免疫原性和非预期的多向活性等特点,使得其在体内的药代动力学的研究受到诸多因素的限制。尤其对于蛋白质类药物来说,由于与大量的内源性蛋白结构相似,受到相应的干扰和影响。GastroPlus从PBPK模型的角度出发,在原有模型的基础上,进一步完善。为单克隆抗体(mAbs)的PBPK搭建,提供了丰富的建模平台。通过GastroPlus,您将获悉mAbs在不同剂量,不同剂型,不同种属,不同组织中的体内PK变化。为mAbs的研究和设计提供新的思路和决策。本次网络会议,我们将为你讲述如何利用GastroPlus搭建mAbs的PBPK模型,并进行体内行为的模拟和预测。
经过抗体测定的阳性孔,可以扩大培养,进行克隆,以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长,互相争夺营养和空间,而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早,太早细胞性状不稳定,数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞,经过一段时期培养之后,也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失,使部分细胞丧失产生抗体的能力,所以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。一般说,免疫性强的抗原克隆次数可少一些,但至少要3~5次克隆才能稳定。克隆化的方法很多,包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。一、有限稀释法1.材料① 微量培养盘,盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞(即饲养细胞)每孔2万~4万。② HT培养基2.操作方法① 取出抗体阳性孔细胞,用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色,计数。② 用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。③ 用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘,每孔0.05ml,细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和0.5个/孔。④ 5%CO2饱和湿度,37℃培养。⑤ 每天用倒置显微镜观察克隆生长情况,选择只有一个集落生长的孔,弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。⑥ 克隆大量繁殖后,布满孔底的1/3~1/2时,测培养液抗体。⑦ 抗体阳性孔细胞,移到有饲养层的组织培养瓶中,并传2~4代就可以脱离饲养细胞,建成克隆株。二、软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长,而达到克隆化,具体操作如下:1.配2.5%的琼脂糖30ml,水浴溶化后,移入45℃水浴中。2.将117ml完全DMEM液和3ml 10倍浓度的DMEM液混合,置45℃水浴预热。3.将琼脂糖与DMEM液混合,即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液,并加75×108 脾细胞。4.每块平皿加10ml,于室温中凝固。5.DMEM中的细胞与DMEM―琼脂1:1混合,将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上,使其全部覆盖。6.放入CO2箱饱和湿度,37℃培养10天。7.用PBS配制0.6%琼脂糖,于沸水浴溶解后,置45℃,在保温情况下取一试管,迅速加入0.1ml 25%羊红血球,0.2ml豚鼠补体,2.7ml 0.6%琼脂糖。8.用3ml琼脂糖―羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围,可筛选抗羊红血球Ig。三、显微镜操作法在直径6cm培养皿中,加入1ml 1.0×108 细胞悬液放置5%CO2饱和湿度,37℃温箱中放置30min以上,倒置显微镜下,寻找那些与周围相距甚远的单个细胞,将毛细管口(一头有直角弯头毛细管,一头连接一尺长乳胶管,用口控制液体进入)水平置放于液面上,左右微动,直到看见管口,对准细胞,吸入毛细管,将管中细胞移到预先加有2.0×104~5.0×104 饲养细胞96孔板内,培养后,即可获得单个细胞形成的克隆。四、荧光激活分离法用一种荧光激活细胞分类器(Fluorescein Activafed Cell Sorter,FACS)。其基本原理是:将细胞经荧光抗体染色后,经喷嘴形成单个细胞的线形液滴,在莱塞光激发下,荧光素发射荧光,此信号由光电倍增管接收,再结合细胞形态大小产生光散射信号,经电脑处理,产生信号并与预定的信号对比,根据细胞荧光强度及细胞大小不同,将细胞分成不同级别,在电场中发生偏离,而分别收集于不同容器中。
[font=宋体][font=宋体]抗体具备与特定抗原结合的独特能力,在生物学、医学及生物医学研究中发挥着举足轻重的作用。[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][b]单克隆抗体([/b][/url][/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][b][font=Calibri]MAbs[/font][font=宋体])[/font][/b][/url][/font][font=宋体]和[/font][font=宋体][font=宋体]多克隆抗体([/font][font=Calibri]PAbs[/font][font=宋体])已成为免疫学研究、诊断及疫苗质量控制中不可或缺的工具。本文将[/font][/font][font=宋体]简单介绍[/font][font=宋体]这两种抗体生产[/font][font=宋体]的[/font][font=宋体]关键步骤及其优化策略。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、多克隆抗体的生产与应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]多克隆抗体的制备涉及抗原制备、动物选择、佐剂配置[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]注射方案等多个环节。在抗原制备时,应确保其质量与数量,以保证免疫反应的特异性。动物种类的选择则需考虑所需抗体量[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]血液样本获取的难易程度等因素。注射方案应根据动物种类和佐剂特性制定,并在注射后密切监测动物的反应,确保免疫过程的顺利进行。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]多克隆抗体因其制备周期短、成本相对较低,广泛应用于[/font][font=宋体]基础[/font][font=宋体][font=宋体]研究。然而,由于其来源于多种[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆,特异性相对较低,因此在某些需要高度特异性的应用场景中,其应用受到一定限制。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、单克隆抗体的生产与应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体则是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的,具有高度特异性。[/font][/font][font=宋体]通过杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体的[/font][font=宋体][font=宋体]生产过程涉及[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的生成、与骨髓瘤细胞的融合、杂交瘤细胞的克隆与选择以及抗体的扩大生产等步骤。其中,[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的生成和通过腹水诱导法生产抗体是基于实验动物的关键[/font][/font][font=宋体]步骤[/font][font=宋体]。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体因其高度的特异性和可重复性,广泛应用[/font][font=宋体]于[/font][font=宋体]基础研究、诊断[/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体]和医疗领域。例如,在疾病诊断中,单克隆抗体可以精确地识别并定位病原体,为疾病的早期发现和治疗提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为优化免疫反应,建议在抗原制备时[/font][font=宋体]确保[/font][font=宋体]其质量与纯度,注射前进行充分的质量控制。在选择动物种类时,应综合考虑抗体需求量、血液样本获取的难易程度以及抗原与动物间的系统发育关系。此外,佐剂的选择和制备也至关重要,需确保混合物的稳定性和质量,谨慎选择注射途径和注射量。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]多克隆抗体与单克隆抗体各具特色,分别适用于不同的研究场景。通过优化生产过程中的各个环节,我们可以提高抗体的质量和产量,为生物医学研究和临床应用提供更加精准、有效的工具。未来,随着技术的不断进步,这两种抗体将在更多领域展现其独特的价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]本篇文章由义翘神州进行整理,同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services]单克隆定制服务[/url]和[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services]多克隆抗体制备服务[/url],详情可点击了解![/b]参考文献:[/font][font='Segoe UI'][color=#212121]Leenaars M, Hendriksen CF. Critical steps in the production of polyclonal and monoclonal antibodies: evaluation and recommendations.[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#212121] [/color][/font][i][font='Segoe UI'][color=#212121]ILAR J[/color][/font][/i][font='Segoe UI'][color=#212121]. 2005 46(3):269-279. doi:10.1093/ilar.46.3.269[/color][/font][font=Calibri] [/font]