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【名词解释】此处采用最通俗的说法,书上那些复杂的定义,这里不讲究;苷:在母核上,连接一个或多个糖,一般就叫苷,极性较大;苷元:单纯地母核,或者母核去掉一个或多个或所有的糖,就称其为相应苷的苷元,极性较小;比如A结构=B结构+糖,那么B就是A的苷元形式,A就是B的苷;【发贴背景】1. 分到了化合物就需要对其进行活性测试(没有活性发不了SCI);2. 一般来说,苷元的活性比苷的活性要好,而我分到的都是些苷;3. 综合第1点和第2点,我要将苷进行水解,得到苷元成分;【如何水解】1. 水解分很多种,酸水解,碱水解,酶水解,等等;2. 酸水解我嫌麻烦,碱水解我不乐意,酶水解我才喜欢;【为何选择酶水解】1. 我有相应的水解酶(β-D-葡萄糖水解酶);2. 它干净,不需要用到其它试剂;3. 它专一,基本没有其它副产物;4. 它速度,几个小时就可以完成了;5. 最重要的:我很喜欢,我说了算;【水解反应】样品处理:1g样品用少量甲醇溶解后加入200ml水稀释,后加入250mg酶;反应条件:放入40度水浴锅恒温加热,搅拌,全程监测;下图,左为京尼平苷,右为苷元:京尼平;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221338_325732_1745326_3.jpg【仪器试剂】水:重蒸水 甲醇:色谱纯,天津大茂 HPLC:Waters 高效液相Waters 996 DAD检测器Waters Model 600 controller液相色谱【色谱条件】 色谱柱:Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm)流动相:40%甲醇/水(V:V)流速:1.0ml/min柱温:常温(约25度);检测波长:全波长检测;进样量:5微升;【实验过程】这是京尼平苷反应前的色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221353_325734_1745326_3.jpg反应开始后,大约是半小时(没有确切时间)后取样过滤后进针通过进行峰面积比较,京尼平苷:京尼平=77:23http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221354_325736_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间(没记时)通过进行峰面积比较,京尼平苷:京尼平=62:38http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221355_325737_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间(真没记时)通过进行峰面积比较,京尼平苷:京尼平=55:45http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221356_325738_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间(我真的没记时)通过进行峰面积比较,京尼平苷:京尼平=17:83http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221356_325739_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间(我真的没记时,反正到午饭的时间点了)已经全部转化完毕了,干燥后等着交样品测活性吧http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221358_325740_1745326_3.jpg【结果与讨论】1. 酶水解,简单、快速、方便、低廉、干净;前提:你有相应的酶(葡萄糖苷酶还是很容易得到的);2. 由于糖没有紫外吸收,所以所有的谱图均未看到糖信号,利用示差应该是可以检测到的(不过40%的流动相,出峰会很早);示差我们是有的,但是平衡太麻烦我不乐意开,最重要的是,糖能否检测到跟本实验关系不大;3. 比值为77:23那张图,好像显示一些其它双紫外吸收的小杂质,后来几张图没有了,应该也被水解了;4. 取的样品没有考虑量的多少,吸收基本都在1.0以上(很大),倾向的重点是转化的过程;5. Ultimate XB-C18,很多人问我极限的柱子到底怎么样,看图说话嘛,上面好多图啊,呵呵;6. 另外,这款柱子,其实跟某日本知名品牌柱子(为避免不必要的麻烦,不透露品牌)分离效果差不多,但是呢,柱压要低30%左右,这是最普通最形象的比较结果。7. 价格比较?那得问小S小卢了,反正我是试用。。
1. 发贴背景 京尼平苷——最为典型的环烯醚萜类化合物之一,事实上,去掉最后“之一”两个字,也不为过。 京尼平苷具有众多的药理活性,像什么保肝利胆,像什么抗炎镇静等等,甚至最近的研究表明,它还具有一定的抗老年痴呆活性等等。这么多药理活性,你信么?好吧,我要告诉你,药理作用就是扯淡,平时说着玩一玩是可以的,正式场合。。。还是谈点正经地比较好。 不管怎么样,给个京尼平苷的结构吧。。2. 仪器与试剂 甲醇:天津大茂产的色谱甲醇 水:娃哈哈纯净水 HPLC:忘了抄型号了,汗3. 色谱条件 流动相:A泵甲醇、B泵水溶液; 流速:A泵0.2ml/min、B泵0.8ml/min; 柱温:柱温箱30度恒温; 检测波长:230nm; 进样量:5微升; 色谱柱:Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm) 某色谱柱一(国产品牌)(5μm,4.6x250mm) 某色谱柱二(国产品牌)(5μm,4.6x250mm) 某知名色谱柱三(国外品牌)(5μm,4.6x250mm)4. 样品处理 京尼平苷标准品由本人提取分离纯化得到,纯度99.5%以上。取少量用甲醇溶解,过滤备用。5. 实验结果某国产品牌一分析结果如图所示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106131606_299641_1745326_3.jpg某国产品牌二分析结果如图所示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106131606_299642_1745326_3.jpg某国外品牌分析结果如图所示:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106161328_300126_1745326_3.jpgUltimate XB-C18柱分析结果如图所示:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106161331_300127_1745326_3.jpg6. 小结与讨论(下面将结合我对柱子的实际需求,对色谱柱的柱压、保留时间、柱效进行比较)6.1 柱压比较 国产品牌1和国产品牌2压力较低,双泵泵压均为16MPa左右,单从压力的角度来说,这是一个不错的结果。与之相对的是,某国外品牌色谱柱的柱压,双泵压力均高达26MPa左右,这是让人不太满意的结果。耐人寻味的是,Ultimate XB-C18柱的压力为20MPa,大小左右介于二者之间,且更偏向于前者,这个结果,是完全可以接受的。6.2 保留时间比较 对我而言,分析液相的结果将用于指导制备液相条件的确定。保留时间太短,在降低甲醇比例分离多组分的样品时,此类色谱柱将不具备优势,比如,用10%甲醇水时样品在10min内就出峰,将来要“往后拖”的时候,就只有5%甲醇水等选择了(换柱子不太可能);相反,如果保留时间太长,“往后拖”分离多组分样品时,制备液相的出峰时间将变得极其漫长,这是不可接受的。从分析结果来看,如果要购买制备色谱柱,本人将不考虑国产品牌2(这段估计看着很费劲吧,汗)。6.3 柱效比较 本人极其厌烦理论塔板数一类的东西,简单明了干净利落是我追求的风格。关于柱效,最简单的说法就是,峰宽越窄峰高越高柱效越好。从图中可以看出,国产品牌1柱效过低,明显不适合用于分离此类化合物(国产品牌2色谱柱有点旧,此处不参与比较);Ultimate XB-C18柱的柱效跟某知名国外品牌基本相当,或者说,略好。7. 结论 通过以上比较得出结论,以后在选择制备型液相色谱柱(限文中提到的4种品牌)的时候,某国产色谱柱保留时间太短,将不予考虑;另一国产色谱柱由于对此类样品的分离柱效太低,将不予考虑;在对柱压没有太大要求的情况下,Ultimate XB-C18和某国外品牌将成为考虑的对象。如果是对柱压有要求(嫌高),那么Ultimate XB-C18将会成为唯一的选择。
目前,中药研发的瓶颈是什么呢?