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2010年4月13日,由北京理化分析测试技术学会和北京市电镜学会共同主办的“北京市2010年度激光共聚、原子力显微学最新进展学术研讨会”在北京北科大厦举办。来自科研院所、大专院校、检测机构等单位的150余人参加了此次会议。会议旨在推动北京市及周边省市激光共焦扫描显微学、原子力显微学的进步和发展,提高广大相关工作者的学术及技术水平,促进上述学科在生命科学等领域中的应用和发展。闲话少说,让我们一起走进会议现场吧~~~[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif[/img]
共焦显微镜因其高分辨率和能三维立体成像的优点被广泛应用在生物、医疗、半导体等方面。文章首先分析了影响共焦显微镜分辨率的因素,主要有光源、探测器孔径和杂散光等;并结合这些因素介绍了双光子共焦碌微镜、彩色共焦显微镜、荧光共焦显微镜、光纤共焦显微镜;然后从提高系统成像速度的方面介绍了波分复用共焦显微镜和频分复用共焦显微镜;最后分析了共焦显微镜的发展趋势。一、引言随着人们对于生物医学的研究,传统的光学显微镜已经无法满足研究的需要,人们需要可以实现三维成像的显微镜。1957年Marvin Minsky提出了共焦扫描显微镜的原理。1969年,耶鲁大学的Paul Davidovits和M.David Egger设计了第一台共焦显微镜,1987年第一台商业化共焦显微镜的问世,真正实现了三维立体成像。与普通光学显微镜相比,共焦显微镜具有极其明显的优点:能对物体的不同层面进行逐层扫描,从而获得大量的物体断层图像;可以利用计算机进行图像处理;具有较高的横向分辨率和纵向分辨率;对于透明和半透明物体,可以得到其内部的结构图像;还可以对活体细胞进行观察,获取活细胞内的信息,并对获得的信息进行定量分析。自共焦显微原理被提出以来,引起了研究者的广泛关注,提高显微系统的分辨率和改善系统的性能是研究者开发新型显微镜时考虑的主要因素。近几十年,国内外学者通过对共焦显微成像系统的三维点扩散函数、光学传递函数等方面的分析,得出影响显微系统分辨率的因素,主要包括系统的激励光源、探测器孔径、杂散光等。此外,共焦显微镜的成像速度也是决定系统性能的一个重要因素,专家们也一直在进行提高系统成像速度的研究。本文主要从提高显微系统分辨率和系统成像速度这两个方面来介绍共焦显微镜的发展情况。二、共焦扫描显微镜分辨率的提高光源、探测器孔径和杂散光等是影响共焦显微镜分辨率的几个主要因素,因此可以通过改善这些方面来提高显微系统的分辨率。1.光源显微镜的成像性质在很大程度上取决于所采用光源的相干性,有关研究表明,光源相干性好的系统其分辨率要比相干性差的系统要好,并且照明光源对分辨率的改变范围达到了26.4%。因此,选取适合的照明光源对提高显微系统的分辨率有很大帮助。常规的共焦扫描显微镜主要使用普通单色激光作为光源,随着技术的进步,目前已经出现了使用飞秒激光、超白激光、高斯光束作为光源的共焦显微镜,以提高系统性能,获得更高的分辨率。①飞秒激光为光源的双先子扫描共焦显微镜双光子扫描共焦显微镜通常使用近红外的飞秒激光作为激发光源,由于红外光具有较强的穿透性,它能探测到生物样品表面下更深层的荧光图像,并且生物组织对红外光吸收少,随着探测深度的增加衰减会变小,另一方面红外光的衍射低,光束的形状保持性好。2005年,Wild等人利用双光子扫描共焦显微技术实时观察和定量分析了PAHs在植物叶片表面和内部的光降解过程。后来又进一步研究了菲从空气到叶片的迁移过程、菲在叶片内部的运动及其分布情况等,该技术可观测PAHs在叶片内部的最大深度约为200μm。②白激光( supercontinuum laser)为光源的彩色共焦显微镜彩色共焦显微镜是利用光学系统的彩色像差,光源的不同光谱成分会聚焦到样品的不同深度,通过分析由样品反射的光谱能有效地获得样品的扫描深度。2004年,美国宾夕法尼亚州立大学的Zhiwen Liu课题小组使用光子晶体光纤产生的超连续谱白光作为彩色共焦显微镜的光源,这种超连续谱白光具有大的带宽,能够提高系统的扫描范围,能达到7μm扫描深度。另外超白激光有较高的空间相干性,无斑点噪声,能提高系统的信噪比和扫描速度。③使用高斯光束的荧光共焦显微镜荧光共焦显微镜是通过激光照射样品激发样品发出荧光,再通过探测器接受荧光对样品进行观察的共焦显微镜。华南农业大学的杨初平等人研究了不同光源孔径和束斑尺寸的高斯光束对荧光共焦显微镜分辨率的影响表明:与一定孔径尺寸的平行光束相比,采用高斯光束系统可以获得更好的分辨率。 2. 探测器孔径和杂散光共焦显微镜中探测器孔径能滤除部分杂散光,提高系统的分辨率和信噪比。根据相关文献对共焦扫描显微镜的三维光学传递函数与探测器孔径之间的依赖关系的研究,可以得到探测小孔直径为:d=β*1.22λ/NA,式中,β为物镜的放大率,λ为光的波长,NA为物镜的数值孔径。由该公式确定探测器小孔的直径,一方面满足了共焦扫描系统对探测器小孔直径的要求,从而保证高的横向和纵向分辨率,另一方面,又最大限度地使由试样中发射的荧光能量被探测器接收。为了更进一步提高系统分辨率,许多研究者对共焦显微镜中探测孔径进行了改进,例如使用单模光纤代替普通针孔孔径,还有双D型孔径等。① 使用单模光纤的光纤共焦显微镜在光纤共焦显微镜中用光纤分路器代替传统共焦显微镜中的光束分路器,并以单模光纤来代替光源和探测器的微米尺寸针孔孔径。使用单模光纤的优点在于:首先,在采用寻常针孔制作的共焦显微镜中,光源、针孔、探测器等有可能不在一条直线上从而会引起像差;但是在光纤作为针孔的共焦显微镜中,即使有的部件偏离直线时也不会引入像差。其次,使用单模光纤代替微型针孔,容易清除针孔的污染,而且不易受污染。第三,在使用光纤的系统中,可以自由移动显微镜部分而不必挪动探测器。2006年德克萨斯大学使用光纤共焦显微镜进行口腔病变检测,测得的系统横向和轴向分辨率分别为2. 1µm和10µm,成像速度为15帧/s,可观测范围为200µm×200µm。② 具有D型孔径的共焦显微镜近几年,具有对称D型光瞳的共焦显微成像技术引起广泛的关注,图1所示是该系统示意图。2006年美国东北大学的Peter J.Dwyer等人使用这种共焦显微镜进行了人体皮肤内部成像的实验,测得横向分辨率为1.7士0.1µm。2009年新加坡国立大学的Wei Gong等人采用傍轴近似方法理论分析了在共焦显微镜中使用双D型孔径对轴向分辨率的影响。分析表明在图1中的d值给定时,进入瞳孔的光信号强度l会随着探测器尺寸的增加而增加;但是在探测器尺寸给定时,光信号强度I会随着d的增加而单调递减。在使用有限大小的探测器时,改变d的大小,轴向分辨率可以得到改善。 http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1321512815.png 图1 双D型孔径共焦成像系统示意图在共焦成像光学系统中,到达像面的杂散光会在像面上产生附加的强度分布,从而进一步降低了像面的对比度,限制了系统分辨率的提高,因此在显微系统设计时,杂散光的影响也是不容忽视的。一般除了使用探测小孔来抑制杂散光,其他的一些设备例如可变瞳滤波器等对杂散光也有很好的过滤作用。最近以色列魏茨曼科学研究所的O.sipSchwartz and Dan Oron等人提出在系统中使用可变瞳滤波器,这个滤波器能够使多光子荧光共焦显微镜达到分辨率阿贝极限的非线性模拟,从而改善系统的分辨率。三、共焦扫描显微成像速度的提高共焦显微镜快速的成像速度为研究者观察生物细胞中快速动态反应提供了良好的条件。在共焦扫描显微成像系统中,传统的方法是通过改善扫描探测技术来提高成像速度。现有的扫描探测技术主要有Nipkow转盘法、狭缝共焦检测法、多光束的微光学器件检测法。这些方法可以改善扫描速度,但是与系统分辨率,视场之间都存在矛盾,因此又诞生了两种提高成像速度的新型显微镜:波分复用共焦显微镜和频分复用共焦显微镜。
[table=640][tr][td=2,1]2010年全国电子显微学会议及征文通知(第一轮)[/td][/tr][tr][td=2,1][color=#999999]浏览次数:120(2010-4-1) 双击自动滚屏[/color][/td][/tr][tr][td=2,1]一、2010年全国电子显微学会议通知2010年我们将庆祝中国电子显微镜学会成立三十周年!这三十年来,随着中国改革开放的不断深入,中国的电子显微学事业也有了飞跃发展,我国电子显微学领域的研究工作已开始步入世界相关学科前沿行列中。许多老科学家为中国电镜事业的发展奉献了他们毕生的精力!学会决定于2010年秋季召开全国电子显微学学术研讨会,以此庆贺中国电子显微镜学会成立三十周年。大会将特别邀请国际、国内显微学及相关科学领域著名学者做特邀报告,以使我国相关领域的广大电镜工作者和青年学生获得与这些著名学者直接交流的机会。大会将邀请相关仪器设备的厂商做电镜和其他仪器的最新发展介绍及产品展示。大会的学术交流内容包括透射电子显微镜、扫描电子显微镜、微束分析、扫描探针显微镜(包括STM、AFM等)、激光共聚焦显微镜等在物理学、材料科学、纳米科技、生命科学、化学化工、环境科学、地学等领域中的基础和应用研究成果;显微学相关仪器的理论、技术和实验方法的发展与改进;电镜及其它显微学仪器的使用、改进与维修经验的交流等。二、征文1. 征文内容:(1)透射电子显微镜、扫描电子显微镜、微束分析仪器、扫描探针显微镜(含扫描隧道显微镜,原子力显微镜等)、激光共聚焦显微镜等在物理学、材料科学、生命科学、医学、农林、化学化工、地学、环境科学等研究领域和生产中的应用。(2)电子显微镜、微束分析仪器、扫描探针显微镜(含扫描隧道显微镜,原子力显微镜等)、激光共聚焦显微镜等仪器设备相关的理论研究,新产品研制,性能改进,软件开发等。(3)显微学的图像处理的理论研究,仪器设备及软件研发。(4)显微学样品制备的仪器,制样方法和技术的研发与改进。(5)显微学仪器的管理、使用及维修方面的经验。会议将以大会邀请报告,分会场报告,专题讨论,论文展示(poster)等形式进行。2. 论文的体裁、格式、版面要求 (1) 应征论文应主题突出、数据可靠、论证严密、图像清晰、文句简练。要求提供论文详细摘要稿1份(原稿),同时请提供论文全文稿1份(原稿)。来稿同时用电子邮件发至编辑部(E-mail:dzxwxb@blem.ac.cn)(格式见《电子显微学报》征稿简则,请登录学报网页查看:www.dzxwxb.ac.cn)。论文摘要供会议论文(摘要)集刊用。论文全文将择优录用刊载于《电子显微学报》。 (2) 对论文要求: 入选论文摘要稿将汇编成《2010年全国电子显微学年会论文集》,单独印刷出版,不再属《电子显微学报》。论文集为大16开本,文稿全部内容排在170mm×240mm的版面内,每篇论文摘要可占1~2个版面,所附图片要求另用A4白纸剪裁整齐,规范排好。附英文题目、作者单位及作者姓名的汉语拼音。文集将在会议前出版。(参阅历届全国电子显微学会议出版的论文摘要集的版面格式) 择优选用的论文全文稿将在《电子显微学报》以正刊形式于2010年内发表。 要求有详细的英文摘要。 (3) 来稿由学术委员会组织专家审阅,根据文章水平及图片质量择优选用。来稿不论选用与否,概不退回。 (4) 征文截稿日期为2010年4月15日,以邮戳为准。来稿请写明联系人的姓名、地址、邮编、电话(含手机)及E-mail地址等。论文稿请寄“北京市中关村北二条13号,中国电子显微镜学会2010年全国电子显微学会议秘书处,邮编100190”。过时恕不受理。 联系电话:010-82671519(编辑部);010-82673560(秘书处) E-mail:dzxwxb@blem.ac.cn 中国电子显微镜学会“2010年全国电子显微学会议”秘书处2010年12月28日 附《电子显微学报》介绍 ☆中国科学引文数据库来源期刊(CSCD)(核心库期刊) ☆中国学术期刊综合评价数据库来源期刊(CAJCED) ☆中国期刊全文数据库全文收录(CJFD) ☆中国自然科学核心期刊(北京大学图书馆) ☆美国化学文摘CA 收录 ☆俄罗斯文摘杂志AJ 收录 [/td][/tr][/table]