脂质体挤出器

请问有没有人测量脂质体的膜厚啊？ 我想测量脂质体的膜厚，不知道有没有人测量过这个？我想测几个样品，有没有人知道哪里有这方面的经验？

脂质体包覆的COX-2抑制剂纳米颗粒的靶向化疗脂质体确 (liposome) 是一种磷脂和胆固醇组成的双层膜球形囊泡. 脂质体可以用天然的磷脂和磷脂乙醇胺 (phosphatidylethanolamine, 源于鸡蛋) 或纯表面活性剂, 如 DOPE (dioleolylphosphatidylethanolamine) . 脂质体通常含有一个核心的水溶液 (但这并非脂质体定义). 不含有水溶性物质的脂质双膜体被称为胶束(miscell).脂质体 (Liposome) 是由两个希腊词'脂'和 '体' 的意思构成. 脂质体本身并不表明任何大小之特点, 因此不同于纳米体 (nanosome). 1961年英国剑桥大学巴巴拉汉姆学院血液学家Bangham先生首次描述脂质体. Bangham先生与其同事Horne为了测试研究所新到的电子显微镜, 加负染色剂(三氯醋酸,TCA)于干磷脂中, 随后他们观察到一种类脂双层结构, 酷似质膜, 这就是首次显微镜照片展示的细胞膜实质性证据. 由于其独特的性能脂质体可用于药物载体, 这是由于亲水溶解溶质不能轻易通过脂质双膜, 而疏水性化学物质,可以溶解到脂质体膜内, 所以脂质体既可携带疏水性分子, 也可亲水性分子. 脂质体双层可以与其他细胞膜双层融合, 从而传递携带内含物. 用脂质体来投递DNA (lipofection) 比 单独用DNA感染细胞要有效的多. 低(或高) pH脂质体中的水溶解药物都带有电荷 (即pH值是药物的等电点范围以外) . 随着pH值自然抵销 (质子能通过膜), 因药物能自由穿过细胞膜, 中和后的脂质体药物也会自由扩散, . 这一投递是借脂质体双层膜与细胞接触来扩散脂质体药物, 而不是直接的融合. 所以这种脂质体药物的生产与使用受到时间上的限制.另一种脂质体药物投递的方式是借巨吞噬细胞作用. 一定大小范围内的脂质体可被人体中巨噬细胞吞噬. 脂质体药物在脂质体被巨噬细胞的胞溶体溶解后释放出来.加上陪体 的脂质体更易激活这种内吞噬作用.另一脂质体的好处是它的癌细胞靶向能力, 所有健康人的血管内皮都是由内皮细胞所包裹, 严密阻止任何大颗粒从血液中漏出. 但肿瘤血管则不具有相同水平的密封效果,通常小于400nm的脂质体可可迅速从患者的血液进入肿瘤. 抗癌药物如阿霉素(Doxorubicin, Doxil) 和柔红霉素 (Daunorubicin, Daunoxome ) 就是利用脂质体给药系统. 脂质体可用磷脂水经超声波而制成. 低剪切率超声波制成像洋葱多层状脂质体, 如持续用高剪切超声波则倾向于形成较小的单层脂质体 (unilamellar). 超声波法被普遍认为是"毛, 粗"的制备方法, 较新的方法, 如挤出法(extrusion)制成的脂质体药物可供人类使用.当前研究已经能够使脂质体能躲避人体的免疫系统, 成为"隐形脂质体", 即脂质体外挂上惰性聚乙二醇( PEG ), PEG脂质体延长循环中的药物运送. 但是 目前的困难是PEG涂的厚度. 太厚则阻止脂质体与细胞的接合. 为了特异性接合脂质体可挂上单克隆抗体, 或特异性抗原. 这样脂质体药物只送到病变组织.

测脂质体内相pH用什么仪器呢

有个问题，脂质体的不溶性微粒检测，是跟药典里面关于脂质体的不溶性微粒检测方法一样么？有没有什么文件可以看啊，哪位大神知道，求指导

眼部疾病的常用治疗方式是局部给以药物溶液（例如滴眼液），这些传统剂型占据市售制剂的90%左右。然而，眼部的生理屏障以及候选药物的低溶解性为眼部给药系统的发展带来许多难题。 最近，各种旨在提高难溶性药物生物利用度的眼部给药方式大量出现。中科院上海药物所甘勇课题组专题综述了这些眼部给药方式，包括水凝胶、聚合物胶束、纳米混悬液和脂质纳米载体等。同时，深入阐述了脂质纳米载体，包括乳液、脂质体、立方液晶、囊泡等，为眼部药物传递提供许多优势，比如提高难溶性药物的生物利用度、靶向给药、控制药物释放以及降低全身副作用等。(相关工作主要由甘莉、王静完成：Drug Discovery Today, in press.) 依据脂质体纳米粒作为眼用载体的独特优势，上海药物所甘勇课题组设计研究了一种新型双阳离子型核壳脂质体纳米粒(DLCS-NP)。采用薄膜分散水化-挤膜法，直接将旋干的脂质膜与分散的壳聚糖纳米粒(CS-NP)混悬液水化，自组装形成核壳结构的阴离子脂质体纳米粒(LCS-NP)，随后利用阳离子N--N,N,N-三甲酰丙烷甲基硫酸盐与磷脂双分子层的亲和作用，在LCS-NP表面形成正电荷磷脂修饰层，形成DLCS-NP。该具有独特双阳离子型核壳脂质体纳米粒，能够显著延长载体角膜滞留时间，提高细胞摄取量，并具有一定的溶酶体逃逸能力，取得了理想的体内外眼表基因转染效果，为眼表疾病的基因治疗开辟了新途径。(相关工作主要由蒋敏、甘莉完成：Biomaterials, 2012, 33: 7621-7630.) 该项研究取得了上海市自然科学基金 (No.11ZR1444700)、国家自然科学基金资助项目(No.81102387)、国家科技重大专项“重大新药创制” (No.2009ZX09301-01) 和国家重点基础研究发展计划 (No.2009CB930300)的资助。 全文链接 1 2　 http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121127573032605614.jpgDLCS-NP的细胞摄取及摄取机制示意图

如何用浊度法检测脂质体的稳定性。其中应用紫外可见分光光度计。浊度与吸光度之间有什么关系？

如题，想问下，多相脂质体需要分析什么参数？今天被人问到，手边没有药典，不知论坛有没有做，帮忙看看药典有没有这个规定啊。看看附录里面。

称量固体标准品配制标准曲线溶液，使用注射液脂质体来配制质控样品，怎么比较都是标准曲线高于质控，已经做过溶液准确度考察。两个处理方式不同只在于标准曲线是直接用溶液，后面再加基质，而质控是直接配制在基质中。已经做过脂质体破碎的考察，增加涡旋时间或者增加有机试剂都没有变化。前处理方式也比较过，没有变化。现在不知道原因出在哪了？

脂质体被用作病毒体的人工模型，能够对关键的膜结合药物目标进行系统梳理。隆德大学（瑞典）质子通道研究小组的副教授Sindra Peterson Årsköld博士及其同事的工作重点从事病毒蛋白质和抗病毒剂的脂质体研究。Peterson Årsköld博士表示，如果没有马尔文Zetasizer Nano ZS纳米颗粒分析系统快速、可靠而且高资源利用率的测定性能,在各种样品条件下精确的例行样品质量控制就不可能实现。作为一名蛋白质科学家，Peterson Årsköld博士解释了样品分析成本为何对其工作如此至关重要的原因:“水中超声降解磷脂产生的脂质体被用于获取极其详细的定量生物物理数据。因此极其重要的是,每批脂质体需要在窄分布粒径和单层方面具有相同的高品质，而且其形态也需要能够复制并始终如一。在脂质体生产方法的开发以及对脂质体进行优化以获得新型蛋白质体系的过程中，对这些参数的监测也很关键。举例来说，一些条件会形成多层脂质体，像洋葱一样有许多薄层。这意味着，我们每次生产一种新样品时，我们都必须进行质量检查以确保过程的一致性。”“虽然电子显微镜检查（EM）能为我们提供更加详细的数据，但获得图像要花一整天。因此使用EM进行常规样品检测的成本很高。Zetasizer Nano ZS应用动态光散射原理（DLS）,既没有破坏性也很快速。"它能够在几分钟内对我们的样品进行检测，” Peterson Årsköld博士说。“实际上，这是一种有用而且易于使用的系统，自从我购入该仪器以来，我们系的蛋白质化学家们每天都使用它，而且现在再也不愿意在没有它的情况下工作了！”作为隆德大学生物化学及结构生物系的一部分，Peterson Årsköld博士 以及质子通道研究小组一直在研究甲型流感病毒产生的M2蛋白质，一种小型单跨横跨膜（TM）蛋白质的性状。Peterson Årsköld博士共同署名，发布在国家科学院会议论文集（PNAS）上的论文指出使多个质子能够侵入甲型流感病毒，引发宿主细胞感染，而不形成较大电位的神秘过程。结果证明M2蛋白质与pH值非常复杂、功能调谐关系，能够为成功的抗病毒药物的开发提供更好的机会。

要了解脂质体毛细管电泳（LCE），首先得给大家解释一个概念：生物膜（Biomembrane）。生物膜是指组成生物体细胞各个“构件”的膜，细胞内的细胞膜、核膜以及内质网、高尔基体、线粒体等细胞器，就是这台“机器”中一些功能相关的“部件”，它们都由膜构成，这些膜的化学组成相似，基本结构大致相同，统称为生物膜。生物膜色谱（Biomembrane Chromatography）是一种新型液相色谱模式，它以天然或人工模拟生物膜为固定相，主要用来研究溶质分子与生物膜间的相互作用。目前，最常用的生物膜色谱固定相是固定化脂质体，因为它能更好的模拟生物膜的脂双层结构，并具备生物膜的流动性特征。这种人工模拟的生物膜体系不仅可以精确地模拟生物膜的化学环境，而且其物理性能也可以通过调节温度，pH、离子强度等得到有效控制。LCE就是利用脂质体作为假固定相的毛细管电泳，主要用于分离蛋白质、手性分子及模拟药物-生物膜相互作用的新型毛细管电泳。与生物膜色谱相比，LCE方法简单，可操作性强，成本低廉，尤其是测定药物的Klw 准确、重现性好，具有更好的发展前景。目前，LCE 无论在理论还是技术方面都还不太成熟，应用范围也较为有限，因而其发展空间还很广阔。

目前我们采用过柱子的方法纯化脂质体，效率不高，并且纯化产物纯度不高，想咨询一下是否可以采用制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]来对产物进行纯化。

【作者】 张晓云； 倪京满； 乔华； 孟庆刚； 王荷；【机构】 兰州大学药学院药剂教研室； 兰州大学第一医院药剂科； 兰州大学药学院药剂教研室 兰州730000； 兰州730000； 兰州730000；【摘要】 采用RP-HPLC法测定鬼臼毒素纳米脂质体的重要质控指标包封率。流动相:甲醇-水=60∶40;色谱柱:D ikm a公司的D iamonsil C18(150×4.6 mm,5μm);紫外检测波长:290 nm;流速:1 m l/m in。回收率为101.1%,RSD=1.94%(n=3)。本测定方法简便、快速,准确度高,可用于鬼臼毒素纳米脂质体的含量测定。 更多还原【关键词】 高效液相色谱； 鬼臼毒素； 纳米脂质体； 包封率；

【序号】：1【作者】：[url=http://yuanjian.cnki.com.cn/Search/Result?author=%E5%BC%A0%E5%B0%8F%E6%B4%AA]张小洪[/url] 【题名】：[b]脂质体、分散体和肠溶包衣替米考星体外释放和抑菌研究[/b]【期刊】：重庆大学硕士论文【年、卷、期、起止页码】: [color=#333333]2014[/color]【全文链接】：http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10611-1014043590.htm

植物细胞原生质体制制备与融合2006-11-20 17:14植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。１９３７年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。１９６Ｏ年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶，成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体，开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备（１）取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强，再生与分生比例较高。常用的外植体包括：种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗２～３次，然后浸人 ７０％酒精消毒后，再放进 ３％次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次，并用无菌滤纸吸干。（２）酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液：反应液应是一种ＰＨ值在５·５～５·８的缓冲液，内合纤维素酶０．３%～３．０%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等，②酶解：除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃～30℃,2～4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标，说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应，避免脆弱的原生质体受到更多的损害。（３） 分离 在反应液中除了大量的原生质体外，尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取２００～４００目的不锈钢网或尼龙布ｊ叭ｉ过滤除渣，也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。（４） 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂，应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤２～４次。 （5） 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁，此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中，则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察，残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测，基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外，尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合（1）化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器，试剂易于得到，因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇（ＰＥＧ）纳合成钙高ｐＨ诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法（在无菌条件下进行）：按比例混合双亲原生质体-----滴加 ＰＥＧ溶液，摇匀，静置----滴加高钙高ｐＨ值溶液，摇匀，静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。（２）物理法诱导融合 １９７９年Ｓｅｎｄａ等发明了微电极法诱导细胞融合。１９８１年Ｚｉ。。ｍａｎｎ等提出了改进的平行电极法，现简介如下：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂，作用条件比较温和，而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当，亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因，要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近，有人提出以Ｘ射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤，融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移；致死量处理后合ｕ可能产生没再仅体万染色体ｗ划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法，大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型．2） 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体，发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3） 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成，可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种，某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4） 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或ＤＮＡ片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞，一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养（液体或固体），再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞：若一方细胞大，另一方细胞小，则大。小细胞融合的就是杂合细胞；若～方细胞基本无色，另一方为绿色，则自绿色结合的细胞是杂合细胞；如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征，则可作为识别杂合的标志；发现ｈ述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出，移置再牛培养基培养。（2）以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信，但实验者有时会受到仪器的限制，工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补：不同基山叨的白化突变株出aBｘAh，可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株需要提供外源激素Ｂ才能生长，则甲株与乙株融合，杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选：假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性（如抗卡那霉素），则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选：根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点，用它处理受体原生质体，只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复，等等。 （３）采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株，可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ，见８．２．２．２）和随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。（４）根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。１９３７年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。１９６Ｏ年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶，成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体，开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备（１）取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强，再生与分生比例较高。常用的外植体包括：种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗２～３次，然后浸人 ７０％酒精消毒后，再放进 ３％次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次，并用无菌滤纸吸干。（２）酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液：反应液应是一种ＰＨ值在５·５～５·８的缓冲液，内合纤维素酶０．３%～３．０%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等，②酶解：除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃～30℃,2～4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标，说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应，避免脆弱的原生质体受到更多的损害。（３） 分离 在反应液中除了大量的原生质体外，尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取２００～４００目的不锈钢网或尼龙布ｊ叭ｉ过滤除渣，也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。（４） 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂，应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤２～４次。 （5） 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁，此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中，则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察，残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测，基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外，尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合（1）化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器，试剂易于得到，因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇（ＰＥＧ）纳合成钙高ｐＨ诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法（在无菌条件下进行）：按比例混合双亲原生质体-----滴加 ＰＥＧ溶液，摇匀，静置----滴加高钙高ｐＨ值溶液，摇匀，静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。（２）物理法诱导融合 １９７９年Ｓｅｎｄａ等发明了微电极法诱导细胞融合。１９８１年Ｚｉ。。ｍａｎｎ等提出了改进的平行电极法，现简介如下：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂，作用条件比较温和，而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当，亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因，要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近，有人提出以Ｘ射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤，融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移；致死量处理后合ｕ可能产生没再仅体万染色体ｗ划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法，大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型．2） 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体，发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3） 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成，可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种，某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4） 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或ＤＮＡ片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞，一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养（液体或固体），再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞：若一方细胞大，另一方细胞小，则大。小细胞融合的就是杂合细胞；若～方细胞基本无色，另一方为绿色，则自绿色结合的细胞是杂合细胞；如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征，则可作为识别杂合的标志；发现ｈ述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出，移置再牛培养基培养。（2）以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信，但实验者有时会受到仪器的限制，工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补：不同基山叨的白化突变株出aBｘAh，可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株需要提供外源激素Ｂ才能生长，则甲株与乙株融合，杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选：假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性（如抗卡那霉素），则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选：根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点，用它处理受体原生质体，只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复，等等。 （３）采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株，可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ，见８．２．２．２）和随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。（４）根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

现单位采购一批设备和价格区间，根据价格区间决定国产还是进口，谢谢。1。高效包衣机 5万多；2。离心制粒机 10万多；3。冷冻干燥机 15万多；4。高压均质机 15万多；5。粒度测定仪 35万左右；6。滴丸机 5万左右；7。三维混合机 3万多；8。旋振筛 1万多；9。 压片机及辅助系统10万多；10。 自动取样溶出仪 20万多；11。高级流变拓展系统 50万多；12。 实验型多功能湿法混合制粒机 5万多本人在武汉高校，近期将上报资料，下月招标，最后定牌子和大致价额区间，欢迎提供信息，也可以就各个仪器发表看法，这样可以知道我们如何选择好的一起。厂家要求在武汉有维修服务，保修服务好。其中冻干机分实验型报价20万左右，国外知名品牌，或者冷冻面积1.5M2左右，-80度，可冻干曲线，共晶点，10ML西林瓶2000个以上等，价格可放宽至35万左右，国产品牌。高压均质机要求国际品牌（主要用来做脂质体、细胞破碎和聚合物纳米颗粒,粒径大概100-200NM左右，处理量10L，可在线灭菌，过滤，自动处理，最小处理量小，残留量小等），预算可上浮。粒度仪国际品牌，测量脂质体等纳米颗粒大小，最好可做ZETA 电位。自动溶出仪国内知名品牌。其他仪器以实验型转中试为主，处理体积一般在10L左右。欢迎各位就所使用的一起发表意见，便宜选择，非常感谢。同时欢迎报价和性能数据发至个人邮箱zpzhanglk@yahoo.com.cn, 多个型号的更欢迎，这样便于选择。如果感兴趣会电话联系代理商。

一、新制剂品种的开发除片剂和胶囊等常用剂型外，从多种剂型、多种用药新途径和新方法考虑开发制剂以提高药效，减低副作用，改善病人用药顺应性，是开发新制剂的一个重要方面。如将雌二醇、黄体酮、甲地孕酮等开发成软胶囊，将硫酸沙丁胺醇等药物开发成鼻腔给药制剂、雾化吸入剂等，将阿昔洛韦和环孢素分别制备成缓释制剂和微乳制剂等。　　儿童及老人用制剂如滴剂和栓剂，五官科用制剂如牙线、毫微粒、口胶剂、眼胶剂以及速溶、速效制剂等都是具有治疗或技术特色的制剂。除分散片外，还有多种剂型可达到速溶和速效。如含水溶性药物的软胶囊和滴剂，可溶性包合物制剂，固体分散物制剂，可溶性片等。　　研究复方制剂也是国外制剂行业的重要方向。大量的OTC药物是复方制剂。与普通制剂开发相比较，国内的复方制剂较少，对开发复方制剂应有充分的临床用药依据和药效学依据，对开发治疗危重疾病的复方制剂应充分调研。开发原则是应有协同作用，减少副作用。二、口服缓释及控释制剂的发展　　缓控释制剂不断增加，对其技术及质量的要求也不断提高。国外对这类制剂发展提出了更高要求，即从仅要求平稳血药浓度发展到以提高病人在疾病状态下的药效为目标。开发这类产品应解决三个关键的问题：①该制剂能否提高治疗值？即该制剂能否有治疗需要的释药速度、释药时间及部位或靶位？②该制剂如何达到以上要求？即对上述释药特征是否优化？是否经药效学和药理学实验取得了药动学与药效学的相关，特别是在疾病状态下的相关？③该制剂选择的剂型和技术是否对以上特征最适合？是否包括了对经济学、方便用药和制定剂量方案等方面的综合考虑。按此标准，仅有很少缓控释制剂符合要求。　　但从现有开发角度，缓控释品种大大增加。许多作用强的药物、半衰期很短或很长的药物、抗生素药物、成瘾性药物均制成缓释制剂以适应特殊医疗应用。发展1天1次给药的缓释及控释品种、复方缓释及控释制剂、液体缓释及控释制剂是今后的重要趋势。三、注射给药剂型1、注射用微球 发展注射用微球的主要目的是为了达到缓释、长效。1986年法国Ipsen上市肌注曲普瑞林-聚丙交酯-乙交酯微球；此后又陆续生产了醋酸亮丙瑞林、布舍端林和米特瑞林肌注微球。正在研究的其它微球制剂有皮下注射的生长激素释放因子（GRF）毫微球、羧基喜树碱聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒、睾丸酮微球等。2、静脉注射用脂质体 各种抗癌药物等的脂质体均有研究，上市的有阿霉素、两性霉素、柔红霉素等。采用挤出冻干设备生产以及采用空白脂质体包合是发展脂质体的重要工艺改进。有报道将各种细胞因子如IFN-γ、IL-1、TNF-α等包埋于脂质体中，静脉注射达缓释效果，改变体内的分布特性，更易进入细胞发挥作用、提高受体敏感性，提高细胞毒活性。值得一提的则是脂质体用作基因治疗的载体。脂质体可携带各种基因片段，保护基因不被核酸酶降解，并且脂质与细胞膜融合将目的基因导入细胞。脂质体介导的基因转移方法被美国癌症协会批准为应用于临床基因治疗的第一方案。3、疫苗控释制剂 一次接种疫苗以达到完全免疫、提高接种类、减低接种费用是世界卫生组织疫苗发展规划的主要目标之一。目前进行的研究的疫苗控释制剂主要是微球或其它微粒制剂，通过材料的选择和包埋程度。可控制疫苗释放速度，如速释及恒释，脉冲释放等。研究的疫苗包括类毒素疫苗、病毒疫苗、核酸疫苗及人工合成疫苗等。4、脂肪乳剂 近年来已臻成熟的乳剂生产工艺和乳剂辅料为含药脂肪乳的开发生产创造了条件。如依托米酯、异丙酚、棕榈酸地塞米松脂质乳剂、氟比洛芬乙氧基α-乙酯脂质乳剂、前列腺素E1脂质乳等。

2010年9月26日，科技部基础研究司组织专家在烟台对依托山东绿叶制药股份有限公司的长效缓控释和靶向制剂及技术国家重点实验室的建设计划进行可行性论证。科技部基础研究司、山东省科技厅、烟台市科技局有关负责同志以及依托单位的领导和实验室工作人员参加了会议。 专家组在听取了实验室的建设计划报告并考察了实验室之后，经过质疑和讨论，认为该实验室以微球、脂质体等长效和靶向给药系统及释药技术为主要研究方向，以注射用长效缓控释微球给药系统、注射用脂质体给药系统等靶向制剂及相关关键技术、相关功能材料为重点研究内容，建设计划目标明确、措施可行，同意通过该实验室的建设计划。专家组对实验室名称进行了深入的探讨，并建议实验室要进一步凝练实验室目标和重点研究内容，突出研究特色及优势。 该实验室的建设将为解决我国长效注射微球、注射用脂质体、功能性生物材料等方面的关键共性技术问题、加强我国相关新型制剂行业高层次人才培养、促进研究成果向生产力的顺利转化和行业技术进步提供有力支撑。

脂质体化妆品及其应用LIPOSOME COSMETICS AND ITS APPLICATION2000年04期张根旺 脂质体是一种生物载体，加载活性成分的脂质体对治疗疾病和皮肤护理非常有效．本文介绍了脂质体的结构、定义、分类、制备方法及其在化妆品中的应用．Liposomes are a kind of biological carrier.Lipsomes loaded active materials are very effective in treatming disease and skin care.The structure,definition,catalogs and preparation of liposomes and its application in cosmetics are introduced in this paper. 关键词： 脂质体 , 制备 , 应用 | 全部关键词

最新发布的2013年1月国际学术期刊《控释杂志》（Journal of Controlled Release）发表了中国科学院深圳先进技术研究院生物医学与健康工程研究所生物医学超声研究组的最新成果：载紫杉醇的纳米脂质体-微泡复合物作为超声促发的药物载体及其抗肿瘤作用的研究。（在线发表于2013年1月7日） 超声不仅仅是一种重要的医学成像诊断工具，其机械波及辐射力特性也赋予其在声操控、给药及治疗领域的重要应用潜力。近年来，载药超声微泡的出现，使得微泡在作为超声造影剂用于疾病诊断的同时，也可作为药物载体用于疾病的治疗。一方面，载药超声微泡在受到低频超声辐照时，微泡会发生爆破从而释放其中携载的药物；另一方面，超声微泡在较低声压作用下产生的空化或声孔效应，可使临近细胞产生瞬间可修复的细胞膜空隙，从而大大增加药物的细胞摄取和生物利用度。迄今，超声靶向微泡爆破介导药物或基因的靶向传递已经成为一种新型的给药方法，是目前药物传递系统研究的热点课题。然而，现行应用的单层微泡脂质壳层的载药能力有限，往往难于达到疾病治疗的有效剂量。 针对这一问题，严飞等将紫杉醇药物包裹于具有高载药量的脂质体中，进而偶联到超声微泡的表面，获得了具有高载药量和具有超声爆破释放性能的载药脂质体-微泡复合物，从而巧妙地解决了这一问题。经过1年多的实验研究，研究人员对这一新型的声敏载药脂质体-微泡复合物进行了详细的表征，发现这种新型的脂质体-微泡复合物能够大大增加药物的载药量和包封率，并对其体外药物释放特性进行了测定、在优化的超声参数条件下可以显著增加肿瘤细胞对药物的摄取，在体外细胞以及体内动物实验证实了该载药脂质体-微泡复合物联合超声可以显著提高紫杉醇药物的抗肿瘤效果并增加药物在肿瘤部位的浓度，免疫组织化学进一步分析发现其抗肿瘤作用的机制主要是通过增加肿瘤组织的细胞凋亡和抑制肿瘤新生血管生成来实现的。 本研究进一步证实了载药脂质体-微泡复合物在体内的抗肿瘤疗效并揭示了其抗肿瘤效应的作用机制，为超声敏锐成像诊断/给药/治疗一体化应用研究奠定了基础。 http://www.cas.cn/ky/kyjz/201301/W020130124649211439309.jpg

1【题名】：β-榄香烯脂质体注射液的研究【作者】：马淑贤1；王海波1；唐少珍1；徐建阳1；宁伶俐2；丁玉玲2；郭永沺2【杂志名】： 中国药学杂志【年, 卷(期), 起止页码】：1992(11)【全文链接】: http://211.154.163.124:8080/jwk_zgyxzz/CN/abstract/abstract10897.shtml2、【题名】： 微柱离心-气相色谱法测定β-榄香烯脂质体包封率【作者】：王秀敏 邓英杰 郝艳丽 陈妍 钟海军 赵春杰 【杂志名】： 沈阳药科大学学报 【年, 卷(期), 起止页码】：2004, 21(6)【全文链接】: http://d.wanfangdata.com.cn/periodical_syykdxxb200406005.aspx3、【题名】： 超滤法-气相色谱法测定β-榄香烯脂质体药物含量及包封率【作者】：谢守德 李希 冯建安 肖锦 Xie Shoude Li Xi Feng Jianan Xiao Jin 【杂志名】：中国药业 【年, 卷(期), 起止页码】：2009, 18(18)【全文链接】:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgyy200918020.aspx4、【题名】： β-榄香烯脂质体的制备工艺研究 【作者】：黄汉昌 朱宏吉 张明贤 李庆武 林强 兰天路 [url=http://s.wanfangdata.com.cn/Paper.aspx?f=detail&q=%e4%bd%9c%e8%80%85%3a%

液体介质体积电阻率测定仪符合DL/T421标准，适用于测定绝缘油和抗燃油体积电阻率，可广泛应用于电力、石油、化工、商检及科研等部门。仪器特点采用双CPU微型计算机控制。控温、检测、打印、冷却等自动进行。采用进口转换器，实现体积电阻率的高精度测量。具有制冷和加热功能。整机结构合理，安全方便。油体积电阻率测定仪按DL421.91《绝缘油体积电阻率测定法》的电力行业标准为依据，根据有源电桥的原理研制成功的一种新型电阻率测定专用仪器。具有结构简单、线性度好、灵敏度高、测试结果稳定、操作安全等优点，其性能远高于通常的电压电流法。仪器由参数测量系统、油杯加热控温系统两部分组成，具有自动计时、液晶显示功能。可测量绝缘油体积电阻率。找到符合标准的两种型号都是得利特（北京）公司的，他们家主要就是做油品分析仪器的生产厂家，型号多，性能稳定。体积电阻率测定仪还可以被称作：电阻测试仪，电阻率测试仪，表面电阻测试仪，油介损测试仪，介损测试仪，绝缘油介损测试仪，体积电阻率测试仪，体积表面电阻测试仪，介质损耗测定仪。

【图书名称】：脂质体【图书作者】：邓意辉 【 出版社 】： 北京 : 化学工业出版社, 【出版时间】：2007 【所需格式】：pdf【全文链接】：无

请教老师们，我做液相色谱，液相色谱主药峰没有出现是怎么回事我现在在测我做的一种药物固体脂质纳米粒中药物含量，标准品出现了药物峰，可是我的样品我在没有分离游离药物和脂质体的情况下，整个破乳后去测，却未见药物峰出现，请老师们给予指教，非常感谢，我现在不知所措了

想请教各位制备脂质体过程中，磷脂双分子层形成的原理，教科书上没有讲清楚，在此请教各位！

如果水中含胶质体比较高，那么会对测量指标的时候有什么样的影响，可采取什么样的预处理方式呢？在网上查了好久都没有结果。还想请教一下，水中的胶质体主要是哪些？胶质体的定义是怎么样的？想找一些这方面的文献。

1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ，这种通道能维持几毫秒到几秒，然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多，在基因治疗方面的优势也日趋显著，是一种很好的活体基因导入方法。活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高，它的特点主要在以下几个方面:首先，靶器官的选择面广，理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中，则在某种意义上说已失去了基因导入的价值，这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时，研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达，以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入，获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。其次，对导入的外源基因片段的大小没有限制，从几KB 或十几KB 的表达载体， 到100～200KB 的YAC、BAC基因组 ，都有成功导入并获得表达的报道。此外活体电穿孔法操作简单快速，电穿孔的时间只有几秒钟，而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。但电穿孔法也存在一些的缺点:首先，外源基因表达持续的时间很短，虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达，但大多1～2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。由于应用不同的表达载体，Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达，而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏，则表达持续时间会较短，表达时间在1 个月以内，但以骨骼肌为靶组织，表达可持续15个月。3、 活体电穿孔法与其他活体基因导入方法的比较 到目前为止，非病毒载体的活体基因导入方法有直接注射法、脂质体法、基因枪法、电穿孔法等。每一种方法都有其各自的特殊性，因此很难将这几种方法进行简单的比较。直接注射法：可将外源基因直接注射到靶位点或血管中，但此种方法不适合以肌肉作为靶器官，它的外源基因表达效率极低，仅为电穿孔法的百分之一。脂质体法：活体基因转移法中脂质体法更适宜较大面积组织的基因导入，但无法避免DNA浓度变低，在出血的情况下会使本来不高的DNA浓度更加降低，往往造成基因导入效率低。基因枪法：适合于DNA较易接触到的质地较坚韧的组织如皮肤，而视网膜、胚胎和禽类的胚盘等组织会由于机械刺激和出血造成器质性损伤或发育停滞，因而不能用基因枪法完成。DNA包裹的金属颗粒从基因枪发出到达组织表面大多只几百微米的距离，较深层的组织不易操作， 表达效率也较低。Muramatsu报道在材料一致的情况下，电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法，而且电穿孔法适合多种组织的操作 。4 、活体电穿孔法施加条件的研究 波型的选择在电穿孔过程中方波较指数衰减波更能获得较高的基因表达。同时方波只要要求控制电压和时间，十分直观，而指数衰减波需要控制的电压、电容、电阻等参数，这样的条件摸索过程中，方波较指数衰减波更易得到高表达。