荧光二向色镜

想请教大家一下圆二色谱和荧光光谱可以测定柚皮苷和柠檬苦素两种苦味物质结构变化吗？两种测定方法对分析样品性质有什么要求吗？

转帖，主要是给大家学习……作者是别的网站上的一位老师 荧光染料是细胞生物学等科学研究中不可或缺的重要工具，荧光滤色块是荧光显微镜中至关重要的一个部件，只有对两者进行合理的选择和搭配才能拍出理想的荧光图片。在实验室中，荧光染料染色效果不好，荧光滤色块观察效果不佳的情况时有耳闻，如何从琳琅满目的荧光染料和滤色块中挑出适合自己使用的呢？本文首先简单介绍下荧光的相关基础知识，然后通过实例来详细讲解在选择与搭配两者时应该遵从的原则以及需要注意的事项。 首先讲讲我自己的学习历程吧。我是从研究生阶段才开始接触荧光显微镜的，以前在本科的时候也就是用透射光看看各种细菌真菌，然后画个图交上去就完事了。荧光的成像原理要比透射光复杂得多，所以一开始接触荧光这些东西确实挺头大的。由于是老板招的第一届研究生，研究方向是植物细胞生物学，没有师兄师姐带，老板也没时间给我指导这些基础知识，什么都得靠自己学，我的学习之路就是从老板给我的一张Molecular Probes（MP）光盘开始的（图1）。这是一张MP公司的荧光染料操作指南，是老板从美国带回来的，版本是2001年的第八版，里面介绍了各种染料的分子结构，物化属性，染色原理，染液配制，染色步骤，参考文献等等，把各种染料的方方面面都介绍得非常详细。众所周知，MP（2003年被Invitrogen收购）是全球最专业的荧光染料生产商，产品种类齐全，各种新型的荧光染料也层出不穷。我最初的荧光知识就是从这张光盘中学来的，平时在配制和使用染料之前也会仔细阅读里面的操作指南（现在的最新版本是2010年9月份推出的第十一版，大家可以通过Invitrogen网站对相关内容进行浏览）。后来，随着接触荧光显微镜的时间和相关文献阅读的积累，逐渐对这些东西有了更全面更清晰的认识。http://www.microimage.com.cn/bbs/attachment/thumb/81_1955_2a0e8c20d367087.jpg图1. Molecular Probes公司2001年第八版的荧光探针操作手册一、荧光基础知识的学习 这里给初学者推荐一个学习荧光基础知识的好去处：Invitrogen荧光使用指南http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/support/Tutorials.html。网站分Introduction，Spectra和Light Filter and Sources三部分对荧光基础知识进行了详细介绍，教程采用的是Flash格式，图文音并茂，虽然讲解用的是英文，不过配上动画还是很好理解的，如果听不明白的话，可以点击右下角的“NOTES”查看字幕（图2）。相比于传统教材和文献中的文字图片介绍，MP做的Flash教程更适合初学者，直观，易懂。掌握好这三个教程，就算是入门了吧。http://www.microimage.com.cn/bbs/attachment/thumb/81_1955_3783d5e18b6c1e3.jpg图2. Invitrogen相关教程中的荧光产生的原理图二、荧光染料的选择与配制 细胞生物学发展到今天，单一荧光染色早已不能满足很多科研实验的需求了，在很多实验中经常需要同时进行双色，三色和多色荧光标记。MP公司的荧光染料已经覆盖了细胞内的各个细胞器和结构，而且每种细胞器或结构都有多种不同颜色的荧光染料以供选择和搭配（图3）。通过图中各种染料，细胞的每个角落都被点亮了，一个普通的细胞瞬间变成了一个色彩斑斓的世界，太神奇了！http://www.microimage.com.cn/bbs/attachment/thumb/81_1955_fe369f1febe6201.jpg图3. 被点亮的细胞：用于标记不同细胞器和亚细胞结构的荧光探针 当使用多种荧光染料对各种细胞器和结构进行同时标记时，它们的选择搭配是有讲究的。这里给大家介绍一个很好玩的小工具：Cell Staining Simulation Tool（细胞染色仿真工具）。这是Invitrogen公司最近推出的一个实用小工具，链接http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/support/Research-Tools/Cell-Staining-Tool.html。从工具界面的左下角点击需要进行标记的细胞结构，然后选择想染的颜色，再从后面的产品栏中选择一个适合自己样品的染料（有些是染活细胞的，有些是染固定细胞的），选中的染料会出现在右上角，接着进行第二、三、四种细胞结构的标记，注意不同结构尽量选择不同颜色带中的染料进行标记，最后左上角会出现一个仿真的染色效果图。有了这个小工具，自己俨然成了个专画细胞肖像的大画家，赶紧先过把手瘾！我分两次用8种染料给这位细胞画了两幅肖像，第一幅是用DAPI，MitoTracker Red CMRos，Alexa 488 phalloidin与CellMask Deep Red plasma membranes stain分别标记了细胞核，线粒体，微丝和细胞膜（图4）；第二幅是用LC3B antibody with Alexa Fluor 350，ER-Tracker Red，tubulin antibody with Alexa Fluor 647与NBD C6-ceramide分别标记了自噬小体，内质网，微管和高尔基体（图5）。这个小工具非常适合对荧光染料的激发光发射光参数不熟悉或不敏感的人，可以通过颜色带来直接挑选和搭配自己想要的染料，十分直观。http://www.microimage.com.cn/bbs/attachment/thumb/81_1955_cc12af7dc56849b.jpg图4. 细胞核，线粒体，微丝和细胞膜染色仿真效果图http://www.microimage.com.cn/bbs/attachment/thumb/81_1955_d773b61c020e271.jpg图5. 自噬小体，内质网，微管和高尔基体染色仿真效果图（一）、荧光染料选购原则 现在针对某一种物质或结构，各个厂商都会有多种荧光染料供大家选择，选购时需要注意以下事项：1. 根据现有滤色块或激光器进行选择，或者根据新买的染料再重新配一个滤色块；2. 多色荧光成像时，要尽量避免染料之间的窜色，同时还要避开样品自发荧光的影响；3. 染料的物理化学性质，优先考虑稳定性和抗淬灭性强的染料，离子荧光染料尽量选择Km值大的染料，对细胞内的离子浓度缓冲作用小；4. 尽量选择负载后不会改变细胞的生理生化状态，或对细胞无毒副作用的染料；5. 根据自己的实验需求是染活细胞还是固定细胞，选择相对应的染料，有时还要考虑染料能否经受醛类物质的处理；6. 包装形式：很多染料厂商会提供粉末和溶液两种形式，尽量选择粉末形式的，粉末的稳定性和保质期一般要比溶液长很多，而且尽量选择多管分装的粉末。7. 厂商选择：如果经费充足的话就首选MP的吧，其次再考虑Sigma，Roche等其他公司，国产知道的有碧云天，凯基等等。（二）、荧光染料配制及操作注意事项1. 详细阅读厂商提供的说明书，了解该染料的详细信息，严格参照操作指南进行配制；2. 如果是多管分装的粉末，每次配一管，配成适当高浓度的母液，然后再分装成几小管，每管10~20微升，小管封口，避光，低温保存，尽量避免反复冻融，每小管依照次序用完后再另开新的小管；4. 用母液配制的工作液尽量现配现用，染色过程尽量避光；5. 第一次使用某染料时，必须根据说明书或参考文献，进行染色浓度和染色时间摸索，以确定最佳染色条件；6. 为了增强染料的负载效率，可适当进行抽真空，或者添加微量的表面活性剂（如0.005% silwet，Triton X-100等等）；7. 染完色后，用培养液或缓冲液洗涤几次，以降低背景荧光强度；8. 染色完成后及时进行观察，适时使用些抗淬灭剂以增强染料的光稳定性。三、荧光滤色块类型的选择 荧光滤色块（Filter cube），又称荧光滤片组（Filter set），一个完整的荧光滤色块由激发光阻滤片，发射光阻滤片和二向色镜（分色镜）三部分组成，模块侧面标有这三块滤色片的光谱参数（图6，图7）。http://www.microimage.com.cn/bbs/attachment/thumb/81_1955_a229a709e1d60b8.jpg[al

非特异性荧光背景可能是由于fitc标记的二抗与非对应的材料或者一抗的非特异性结合或静电相互作用所致。

荧光仪报警Spectrometer warning:8.29.11.0scaler1.1 Pulse shift correction locking error：最近荧光仪一直出现Measuremeng of sample xxxx 计数率不可靠Spectrometer warning:8.29.11.0scaler1.1 Pulse shift correction locking error等报警信息，本人用的是帕纳科X射线荧光分析仪，有哪位达人能提供下线索，是什么原因？

荧光显微镜在绿色激发的情况下！为什么观察样品会发黄！？

课题经费有限，求购一台二手荧光共聚焦显微镜，有的老板联系，13811919943

荧光显微镜的原理 ：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源 、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源——般采用超高压汞灯(50一200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长 ，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种[url=http://www.gengxu.cn]滤光片[/url]必须选择配合使用。荧光显微镜就其光路来分有两种：1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。荧光显微镜使用方法．1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。4．放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。荧光显微镜的观察在示教台上的荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，可见经o．01％的丫啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。

[color=#c001cb][size=4][font=SimSun] 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源 、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源一般采用超高压汞灯(50一200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长 ，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。 [/font][/size][/color]

仪器名称 OLYMPUS荧光显微镜 型　　号 BX51TF 主要指标 1、目镜放大倍数10X； 2、物镜放大倍数分别为 4，10，20，40，100X（油镜）； 3、制冷CCD摄像头（300万像素）与IBM电脑连机操作； 4、除明场（Bright Field）外，还可产生四种激光（蓝Blue，绿Green，紫外UV，黄Yellow）。 功能范围 1、用于明场下染色标本的观察和拍照； 2、主要用于荧光染色标本和免疫杂交标本的观察和拍照。 荧光显微镜操作步骤 1、使用前确保你已经熟悉显微镜的基本操作，否则不允许操作。 2、先开电源（ON），启动发光器，再开照相机电源。以免先照相机再开荧光显微镜电源时，强大电源将照相机电子零件烧损。 3、在显微镜下找到需要的物象后，打开电脑的成像系统。需要使用荧光时，请务必预热荧光灯电源15分钟。 4、选择滤镜，将滤镜推入（以免光线向外散失）后，于暗室下开始观察。应一次把全部玻片观察完毕，勿中途切断电源，否则须待冷却后（约30分钟）才能再开电源。最少开机30分钟才可关机，以免缩短灯泡寿命。 5、荧光色素于普通光线照射下易消失，故未观察之标本宜置不透光盒内储存于冰箱（4～5℃）。而在荧光显微镜之紫外线照射下亦易使荧光消失，故照像宜速。 6、等冷却后，再将防尘罩罩上。 7、测试完毕后，请认真填写登记表格。 8、本区春夏气候潮湿，存放荧光显微镜暗室应有除湿设备，并每星期将荧光显微镜至少开机一次，以免显微镜发霉损及镜头与滤光镜。

我想看到干酪食品中的脂肪球分布，是否可以用染色方法，利用荧光显微镜观察样品呢？？？荧光显微镜是否向电镜一样要求复杂的前处理呢？？？请指教！！

请问谁做过GB/T20361-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色扑荧光检测法？请教下用Varian PRS柱净化的条件

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现在做FISH 的老师越来越多了。 购置一台适用的荧光显微镜就显的很重要，刚才看到论坛里有个网友 购置了一台荧光显微镜，看看了配置还是比较不错的。总的来说可以做如下总结，还请大家多指教1 需要选择一款正立荧光显微镜，如果钱比较充裕可以选择主机比较高档一些的，以方便以后可以升级，比如OLYMPUS BX53, NIKON 80I LEICA DM 4500B 等等。如果以后不考虑升级，就可以稍微降低些主机，BX43, 55I 这类档次也都可以。2 选择带通的激发快 。 做FISH 其实是挺怕串色的，选择带通激发块可以避免串色，UV ,B 激发需要带通，G激发选长通型的就可以了3 选择一款黑白冷CCD，尽量不要选彩色CCD. 做FISH 讲究CCD的感度要好，分辨率不要求太高。选140万像素，-15度制冷，6.45 微米像素 ，14 位灰度的CCD 是比较理想的。4 选择物镜。 物镜要至少选择半复消色差物镜或者萤石物镜。这种物镜的荧光透过率好。5 如果钱还比较宽裕，建议加配DIC 附件,特别是染色体上做FISH 的，特别需要配DIC 而不是配相差附件。因为相差物镜会大大削弱荧光的透射率。6 荧光光源， 当然要配100瓦汞灯，或者配X-CITE 120 金属卤素灯。以上是抛砖引玉，一定有不妥的地方，请大家补充指正。

大肠杆菌中带有绿色荧光蛋白的基因，想要拍照的话，是用油镜还是多大倍数的物镜？显微镜是奥林巴斯的，软件是MIE。高手指教一下，谢啦

[b][size=4]荧光探针提供了方便、快捷、廉价的分析测试手段,并具有很高的灵敏度和选择性,因而在分析化学、临床生物化学、医学以及环境科学等领域有广泛的应用前景。氟硼二吡咯(BOD IPY)是一种光物理和光化学性能优异的荧光染料,本文综述了近年来BOD IPY类阳离子荧光探针的最新研究进展和发展趋势。[/size][/b]

我作了一个样品,在水溶液中最大发射波长为512nm左右（绿色荧光），在甲醇溶液最大发射波长为423nm左右（蓝色荧光），而在两种溶液中的激发曲线是相同的，最大激发波长为250nm，406nm的峰也比较强。向各位同仁请教一下，不知你们作过类似的化合物吗？什么化合物有这样的现象呢？

1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。 2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

实验室有两台国产的双目显微镜一台是体视的，想给它们配个电子目镜，看到网上价格从1两百到一两千都有，有些无从选择了。希望价格在1000左右，当然物美价廉更好。像素能够200万以上，成像效果较好，起码发文章能用。另外，由于需经常看荧光染色的植物（比如花粉管），微生物（荧光染色，紫外激发）的片子，打算购买一台国产的荧光显微镜。价格能控制在3 ，4万以内。看了上光的 “落射荧光显微镜XSP-63B”（http://www.sgaaa.com/yingguang1.htm），应该能满足使用。似乎贵了些。还请网上各位推荐合适的荧光显微镜，如能顺告价格，不胜感谢。

生物、化学是一家。[em0814]Kary Mullis因为发明PCR技术而获得了1993年的诺贝尔化学奖，但谁都知道PCR的意义在于分子生物领域；15年后Roger Y. Tsien因为绿色荧光蛋白GFP的发现而获得了化学奖，不过GFP还是因为其分子标记能力而在生命科学领域有着广泛的研究和应用。本帖应景请大家谈谈GFP，形式自由，可以发收集的研究进展等资料，也可以谈谈自己对GFP的研究或了解，或者说说感想也行。还是老原则：质优者额外加分。

第一篇来自Sowmya Swaminathan, Nature Cell Biology, "GFP: the green revolution", doi:10.1038/ncb1953, October 1, 2009；第二篇来自Andy, brainslab.wordpress.com,"Horseradish peroxidase as marker for anatomical em", April 3, 2011；第三篇来自Andy, brainslab.wordpress.com, "MiniSOG, a light and electron microscopy fusable marker", April 16, 2011第一篇：绿色荧光蛋白: 绿色革命http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131175417948693.jpg来自秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的两个触觉感受器神经元的细胞体(cell body)用编码β-微管蛋白的基因表达的绿色荧光蛋白标记，图片来自doi:10.1126/science.8303295.1994年，Chalfie等人在Science杂志发表一篇报道，表明来自维多利亚水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)，在没有任何A. Victoria的辅助因子存在下，能在活着的细菌和线虫细胞中用作蛋白定位和表达的标记。这种显示GFP作为体内研究蛋白的工具基本上改变了细胞生物学家能够解决的问题的性质和范围。1962年，Shimomura和他的同事们在A. victoria生物发光蛋白水母素(aequorin)的纯化过程中偶然间第一次发现了GFP。1974年，Morise和他的同事们在随后的纯化、晶体形成和从水母素到GFP能量转移的体外重建过程中，为GFP的荧光性质提供启迪，而且证实GFP接受来自水母素的能量转移后发射绿光。在此之后许多年，在外源系统中GFP是否需要水母素和可能来自水母的其他因子发出荧光，这仍然是一个公开的问题。1992年，也就是在GFP发现后的30年，Prasher等人克隆了编码GFP的基因，就为实验上评估它用作蛋白质的体内标记铺平道路。而在两年后，Chalfie等人证实当GFP在细菌和线虫细胞中表达时，它能够发出荧光。在线虫中，GFP是在一个表达β-微管蛋白的基因启动子的控制下表达的。它在线虫特异性神经元中的时空表达模拟了内源性β-微管蛋白基因的表达，因而证明GFP能够作为一种可靠的标记以便监控基因表达模式。此后不久，Roger Tsien的实验室对天然GFP进行改造使之变得更加明亮和耐光，以及在一个与常规显微镜过滤器装置相匹配的波长下激发，因而增加了它的实际适应性。GFP技术的下一个突破便是开发GFP变异体产生蓝色、青色和黄色荧光蛋白，因而能够使得影像实验在细胞和有机体中采用多种标记的蛋白。绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。而EGFP是增强型的GFP (enhanced GFP)，发生了双氨基酸取代，亮氨酸(Leu)取代GFP上第64位苯丙氨酸(Phe)，苏氨酸(Thr)取代了GFP上的第65位丝氨酸(Ser)，与GFP相比，具有更强更稳定的绿色荧光。黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)其序列与GFP基本相同，不同之处就是把第203位Thr以Tyr取代，这样的GFP不发出绿色荧光，而发出较长波长的黄色荧光。青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)与此类似，也是GFP第66位Tyr(酪氨酸)被Thr(色氨酸)所取代的结果，发青色荧光。由此可见，GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似，只有1-2个氨基酸残基的变化。在GFP发现后的将近半个世纪以来，因为发现和开发绿色荧光蛋白，2008年诺贝尔化学奖被授予给Osamu Shimomura, Martin Chalfie和Roger Tsien，来表彰这次发现给后世带来的巨大影响。参考文献：Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. W. & Prasher, D. C. Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science 263, 802–805 (1994).Shimomura, O., Johnson, F. H. & Saiga, Y., Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan Aequorea. J. Cell. Comp. Physiol. 59, 223–239 (1962).Morise, H., Shimomura, O., Johnson, F. H. & Winant, J. Intermolecular energy transfer in the bioluminescent system of Aequorea. Biochemistry 13, 2656–2662 (1974).Prasher, D. C., Eckenrode, V. K., Ward, W. W., Prendergast, F. G. & Cormier, M. J. Primary structure of the Aequorea victoria green-fluorescent protein. Gene 111, 229–233 (1992).Tsien, R. Y. The green fluorescent protein. Annu. Rev. Biochem. 67, 509–544 (1998).第二篇：辣根过氧化物酶作为解剖学电子显微镜(anatomical electron microscopy)的标记要绘制诸如视网膜的大容量组织中的突触联系(synaptic connection) James R. Anderson等人于2009年就已经主张应当将分子表达谱(molecular profiling)与电子显微镜图片相关联。如今，这里给出一个例子来说明分子表达谱仪(molecular profiler)如何得到很好的利用。Jianli Li等人采用电穿孔技术产生将携带有靶向到细胞膜的辣根过氧化物酶(membrane-targeted horseradish peroxidase, mHRP)基因的表达构建物导入神经元。辣根过氧化物酶发射可放大的波长为428nm的荧光。这些研究人员就使用它作为解剖学上的标记，与蝌蚪神经元的连续切片电子显微镜图片(serial section electron microscopy, SCEM)在空间上相互关联。辣根过氧化物酶的优势之一在于它在包括线粒体/小泡(vesicle)在内的细胞膜上均匀分布。它也有助于鉴定长轴突(axon)/小直径的树突(dendrite)。但是另一方面，不同于其他的标记，它不得不在动物仍然活着的时候通过电穿孔技术导入细胞才有效果。下面是一系列电子显微镜图片，其中远侧树突分支(distal dendritic branch)，蓝色显示；带有轴突末端(axon terminal, 用粉红色显示)的突触，用白色箭头符号指示：http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131175420478195.jpg比例尺=1微米当从向右观看这一系列图片时，你能够看到树突如何缩减，而研究人员能够在他们的微回路(microcircuit)模型中重构这些图片。

通常通过物体进入我们眼睛的光有三类：反射光、透射光及发射光，而且我们常见到的太阳光，白炽灯光或日光灯光都是白光，它们由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫等七种颜色的光复合而成。当白光照到物体上时，一部分被物体吸收，另一部分则被物体反射，这就是反射光。不同的物体会反射不同颜色的光，有的反射红光，有的反射蓝光，有的反射绿光，这些反射光进入我们眼睛，我们就看到有的物体是红的，有的是蓝的，有的是绿的，不反射任何光的物体的颜色就是黑的。不透明体的颜色是由它反射的色光决定的,物体能反射红光,所以为红色.黑色能吸收所有的色光所以为黑色。透明体的颜色是由它透过的色光决定的,红色只能透过红光,所以为红色.白色能反射所有的色光所以它为白色。 http://img63.chem17.com/9/20140731/635424247726010838791.jpg荧光指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。简单来讲深色物质吸收所有光，所以没有反射光进入人的眼睛，所以颜色为黑色。从而深色物质里吸收的短波长光激发物质产生荧光效应。所以相比于532nm波长的激光，785nm的更适合应用于易产生荧光效应的物质的拉曼检测。

瑞典皇家科学院８日宣布，将２０１４年诺贝尔化学奖授予美国科学家埃里克·贝齐格、威廉·莫纳和德国科学家斯特凡·黑尔，以表彰他们为发展超分辨率荧光显微镜所作的贡献。 诺贝尔化学奖评选委员会当天声明说，长期以来，光学显微镜的分辨率被认为不会超过光波波长的一半，这被称为“阿贝分辨率”。借助荧光分子的帮助，今年获奖者们的研究成果巧妙地绕过了经典光学的这一“束缚”，他们开创性的成就使光学显微镜能够窥探纳米世界。如今，纳米级分辨率的显微镜在世界范围内广泛运用，人类每天都能从其带来的新知识中获益。 声明还说，黑尔于２０００年开发出受激发射损耗（ＳＴＥＤ）显微镜，他用一束激光激发荧光分子发光，再用另一束激光消除掉纳米尺寸以外的所有荧光，通过两束激光交替扫描样本，呈现出突破“阿贝分辨率”的图像。贝齐格和莫纳通过各自的独立研究，为另一种显微镜技术——单分子显微镜的发展奠定了基础，这一方法主要是依靠开关单个荧光分子来实现更清晰的成像。２００６年，贝齐格第一次应用了这种方法。因此，这两项成果同获今年诺贝尔化学奖。 今年诺贝尔化学奖奖金共８００万瑞典克朗（约合１１１万美元），将由三位获奖者平分。

各位大侠：小弟目前正在做四环素和雌二醇的共分离实验，但两种物质各自的最优分离条件都无法分离出另一种物质，即完全无信号响应。不知我这同一色谱条件分离此二种物质的目标能否实现？目前我使用的四环素色谱条件：流动相为甲醇-缓冲液（0.1 mol/L丙二酸+0.05 mol/L氯化镁，用氨水将 pH值调至 6.5）(50:50, v/v)，流速为1.0 mL/min。采用荧光检测，激发波长为 375 nm，测定波长为 535 nm。雌二醇色谱条件：流动相为乙腈-水（55：45，v/v）。采用紫外检测，波长为205nm。色谱柱为C18，25cm柱。谢谢各位！

最近在做一些分子荧光的实验，自己也刚开始学，再外面借别人的用很不方便，而且做不了多久。所以想搞一台二手的好好学习一下，不知道这里有没有合适的信息推荐。最好是进口的设备，价格不要太贵。

今天销售部门反应，一家香水厂，用我们的香精做出香水后，喷在织物上，用荧光灯检测后发现有荧光反应。把这个问题反馈到我公司，销售部门想出个说明，说我们的香精中不含有荧光增白剂，大家知道这个荧光增白剂怎么检测吗，？用个紫外灯随便照照就能看出结果，完全没有道理和依据。但是，客户又认死理，油盐不进。我在网上没有找到关于日用香精的相关荧光规定

生物标记三部曲：绿色荧光蛋白(GFP)、辣根过氧化物酶(HRP)和小型单线态氧制造者(MiniSOG)【towersimper注：本文为译文，每篇都有部分改动，仅用作研究之用，不得用作商业开发，转载请标明翻译者towersimper，第一篇来自Sowmya Swaminathan, Nature Cell Biology, "GFP: the green revolution", doi:10.1038/ncb1953, October 1, 2009；第二篇来自Andy, brainslab.wordpress.com,"Horseradish peroxidase as marker for anatomical em", April 3, 2011； 第三篇来自Andy, brainslab.wordpress.com, "MiniSOG, a light and electron microscopy fusable marker", April 16, 2011】 第一篇：绿色荧光蛋白: 绿色革命http://bbs.bioon.net/bbs/data/attachment/album/201107/23/1829154rjsutzjgu2tw4hf.jpg来自秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的两个触觉感受器神经元的细胞体(cell body)用编码β-微管蛋白的基因表达的绿色荧光蛋白标记，图片来自doi:10.1126/science.8303295.1994年，Chalfie等人在Science杂志发表一篇报道，表明来自维多利亚水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)，在没有任何A. Victoria的辅助因子存在下，能在活着的细菌和线虫细胞中用作蛋白定位和表达的标记。这种显示GFP作为体内研究蛋白的工具基本上改变了细胞生物学家能够解决的问题的性质和范围。1962年，Shimomura和他的同事们在A. victoria生物发光蛋白水母素(aequorin)的纯化过程中偶然间第一次发现了GFP。1974年，Morise和他的同事们在随后的纯化、晶体形成和从水母素到GFP能量转移的体外重建过程中，为GFP的荧光性质提供启迪，而且证实GFP接受来自水母素的能量转移后发射绿光。在此之后许多年，在外源系统中GFP是否需要水母素和可能来自水母的其他因子发出荧光，这仍然是一个公开的问题。1992年，也就是在GFP发现后的30年，Prasher等人克隆了编码GFP的基因，就为实验上评估它用作蛋白质的体内标记铺平道路。而在两年后，Chalfie等人证实当GFP在细菌和线虫细胞中表达时，它能够发出荧光。在线虫中，GFP是在一个表达β-微管蛋白的基因启动子的控制下表达的。它在线虫特异性神经元中的时空表达模拟了内源性β-微管蛋白基因的表达，因而证明GFP能够作为一种可靠的标记以便监控基因表达模式。此后不久，Roger Tsien的实验室对天然GFP进行改造使之变得更加明亮和耐光，以及在一个与常规显微镜过滤器装置相匹配的波长下激发，因而增加了它的实际适应性。GFP技术的下一个突破便是开发GFP变异体产生蓝色、青色和黄色荧光蛋白，因而能够使得影像实验在细胞和有机体中采用多种标记的蛋白。绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光。而EGFP是增强型的GFP (enhanced GFP)，发生了双氨基酸取代，亮氨酸(Leu)取代GFP上第64位苯丙氨酸(Phe)，苏氨酸(Thr)取代了GFP上的第65位丝氨酸(Ser)，与GFP相比，具有更强更稳定的绿色荧光。黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)其序列与GFP基本相同，不同之处就是把第203位Thr以Tyr取代，这样的GFP不发出绿色荧光，而发出较长波长的黄色荧光。青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)与此类似，也是GFP第66位Tyr(酪氨酸)被Thr(色氨酸)所取代的结果，发青色荧光。由此可见，GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似，只有1-2个氨基酸残基的变化。

1、荧光显微镜的照明方式通常为落射照明，即光源通过物镜投射于样品上；2、荧光显微镜的光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；3、荧光显微镜有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。 荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

[color=#444444]我的荧光光谱测出来的发射峰波长在400nm，颜色应该是紫色或蓝色荧光。 但是在365nm波长紫外灯下看到的荧光是绿色或黄色荧光，波长应该大于500nm。有什么原因会导致这种情况吗？并且在加了电压之后，荧光颜色变为紫色，但是波长却红移至467nm。感觉更离谱了。[/color]