液相制备系统

最近实验室打算购置一台HPLC，请大家推荐一款好用的制备或者半制备液相系统，能附上价格更好，谢谢各位！

制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中，组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中，酶的分离是微克级；在植化和合成化学领域中，为了鉴别未知成份并进行结构测定，需要得到一至若干毫克的纯品；在药品和医药学测试中，需要克级的标准品和对照品；在当今的工业级提纯中，制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定，包括：生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品（分析标准）毒物学分析所需组份：高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产，活性成份，药物 制备方法的发展和扩大规模的计算　　在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别就是超量进样。其结果，超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线　　分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 　 在分析液相中，最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。　 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中，这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少，那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样　　大样品量的纯化有两种可行的方法：分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样，暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法，在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。　在浓缩法中，样品的浓度会提高，但进样体积保持不变。容量因子k’降低，同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 　　如果样品组份的溶解性很差，浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中，这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素，所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 　 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 　 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 　 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 　 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 　 需要小颗粒填料 方法的放大　浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的时候，优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 　　因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的，选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量，因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的　　判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数：产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的，因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率，但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品，但是产量和收率却是很低的。　 在色谱图2中峰有很好的分离，因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量，但是生产效率却很低。　 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开，这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。　 在实际应用中，每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。

全自动层析分离纯化系统和制备液相是一样的吗?有什么区别?

公司新买的制备液相，需要写一份简单的验证报告。网上找了好多资料都是关于分析液相的。制备液相的一点也没找到。我感觉自己能做的内容只有运行状况确认和流速检测。至于分析液相验证资料中，有的（如检测吸收或梯度比例等）是做不了，有的是没必要（最小检测浓度）。关于系统的整体验证（重复性试验）不知道制备液相的验证有没有必要做。请各位老师指教。最好是能给个模版，那就感激不尽了。

最近公司打算接一个甘草深加工开发项目， 打算从甘草中分离纯化制备甘草酸， 甘草多糖还有甘草酮类物质。 前期工作已经开始进行， 现在需要采购一台制备型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]， 用来分离和纯化甘草黄酮中的异甘草素， 预算还可以， 求推荐型号。 谢谢大家了

化药杂质制备，占0.1%，需要制备到克级，买中低压制备液相还是高压制备液相？

请教各位大侠：化药杂质制备，占主成分的0.1%，在分析液相上的分离度大于1.5，需要制备到几克左右的量，买中低压制备色谱还是高压制备？大家有什么好的品牌，推荐一下啊~~~还有，像我说的这种情况，用中低压制备液相制备，纯度一般会达到多少啊？真心求助，请大家帮忙，不要随便打广告啊！

液相制备柱和半制备柱有什么区别，挑选这类柱子应该看哪些参数指标。求大神指导

看书时遇到了个问题，想请教各位大侠：制备液相色谱与半制备液相色谱有何区别，他们各自的原理是什么？在用途方面有何差异？

制备型加压液相色谱，按照色谱柱和样品量的大小，分为：（1）低压液相色谱；（2）中压液相色谱；（3）高压液相色谱；（4）快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠，没有统一、明确的标准。1快速色谱柱压通常为2bar（或30psi）左右，对于那些容易分离的简单混合物，由于快速色谱具有操作简便、经济等优点，常常是实验室的首选。但快速色谱不同于一般的层析分离，这种分离没有压力，而快速分离通常使用瓶装氮气加压，使流动相具有一定的流速，从而缩短了分离时间。Still等人率先于1978年详细研究了快速色谱，并于1981年获得了专利保护(美国专利4，293，422)。快速色谱使用的柱子一般是玻璃柱，柱直径为3～10cm．长度为7～15cm。快速色谱中使用最广泛的固定相为硅胶。采用的粒径通常为：25～40μm，40～63μm或63～200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附剂也常用作快速色谱的固定相使用。2低压色谱（LPLC）柱压一般低于5bar（或75psi）。低压色谱一般是由蠕动泵、进样阀和检测器组成，可以连续化，实现自动的梯度淋洗和馏分收集等操作。色谱柱管一般是玻璃或聚合物材料的，长度一般为240-440mm，内径为10-40mm。对于大多数在紫外区有吸收的物质，光学检测器很常用。填料一般使用软质的葡聚糖、琼脂糖、纤维素、合成高聚物或离子交换剂，粒径一般为40-60μm。3中压液相色谱（MPLC）柱压在5-20bar（或75-300psi）之间，广泛用于实验室和工业规模的生物制品(如动物脏器提取液、浓缩液、体液、植物提取液、生物技术发酵液等--往往需要经过滤膜作初级净化)的处理，以提取或纯化所需的产品。中压液相制备色谱的主要部件为输液泵、进样阀、检测器、馏分收集器等，比如瑞士公司的早期的中压液相制备色谱，其输液泵最大流速可达156mL/min，并配有阻尼器，以保证液流的稳定；进样器配有0.5-50mL的不同体积的定量管；检测器有紫外和示差折光检测器，流通池体积比较大，允许大流量流动相通过而无需分流；馏分收集器有原盘式和排式两种，原盘式的接收管最多达80个，而后者则更多；色谱柱内径9-105mm，长度250-1760mm不等。对于一般中压制备色谱，当色谱柱直径较大时，柱头往往设计成锥形或有类似于伞状的液流导向结构，使得当大量样品进入到柱头上时，能迅速地分散到整个柱横截面上，及时被流动相冲走，避免了因样品的局部过浓而引起柱超负荷和谱带加宽。柱子填料则采用比较耐压的交联改性的多糖凝胶(如Sepharose CL，Superose等)，聚合物微球，复合材料介质或硬质SiO2基体的化学键合相等，粒径一般在25～40μm（最常用的填料尺寸是15-25μm，25-40μm或40-63μm），可采用湿法或干法装柱。4高压液相色谱(HPLC)是指柱压一般大于20bar（或300psi）的“高压(或高效)液相色谱”，通常指所用色谱柱的塔板数大于2000，一般是在2，000～20，000的范围之间。当需要从大量的物质中分离纯化不足1％的所需成分时，分离工作将会十分困难，往往在纯化的最后阶段需要使用10μm或更小颗粒的高效填料。为获得所需微量组分，可采用如下分离手段：制备型分离→半制备型分离→分析型分离→产物。为提高每次分离获得纯品的数量，制备型高压液相色谱分离通常在超载情况下运行。高压液相色谱，即目前常用的高效液相色谱。色谱柱内填装的是粒度范围较窄的微小颗粒固定相(3～30μm)，为使流动相流出，需采用较高的压力，同时系统的复杂性及成本亦增大，但分辨率可得到较大的提高。而填装较大颗粒的固定相时，如中压液相色谱系统，装柱较容易，柱的通透性较高(只需较低的泵压力)，可采用更大的色谱柱和更经济的仪器，由此分辨率也较低。5用分析型高压液相色谱进行制备型分离当所需纯化合物的量很少时(微克级至几毫克)，可用分析型色谱柱进行多次分离。效果和利用大直径色谱柱进行一次性分离相同。采用小直径色谱柱时，可利用已有的分析型仪器，而无需在色谱柱、填料及附件方面投入更大资金；另外，还可在很大程度上避免由于放大所产生的问题，使分离速度加快。小直径色谱柱的尺寸一般为250×4.6mm，通常装有反相填料，每次可进样5～100ug，通过多次进样分离，可获得足够的纯品。例如，Suzuki等(1994)报道从豆科植物羽扇豆(Lupinus Hirsutus)中分离一羽扇豆生物碱糖苷时，其最后的分离步骤采用LiChrosorb Si60，5μm，250×4.6mm色谱柱进行高压液相色谱分离，洗脱剂为含25％甲醇的yi醚溶液－5％氨水50:1。经常需用分析型色谱柱进行分离的一个领域是对肽类化合物的纯化。生物活性肽的含量通常很低，用分析型高压液相色谱作为最后的纯化手段时，不会使色谱柱超载。为了提高分离效率，可将分析型高压液相色谱柱连接起来使用。此时可采用颗粒度在20～30μm的填料，以保持适当的通透性，尤其是当使用含水溶剂时。当使用己烷等有机溶剂时，由于流动相的粘度较低，可使用颗粒度为10μm的填料。然而由于分析型色谱系统无法提供大规模制备型分离所需的流速，其应用受到一定限制。（来源：分析测试百科网）

看了论坛里面关于半制备的帖子，还是有点迷茫，特向各位大侠请教。制备液相与半制备液相是否与仪器没有太大关系，而是与所用柱子有关系呢？我现在用的是19*100mm的柱子，那它是不是半制备柱呢？我们能否用更大一点的制备柱？请不吝赐教。

农残中会用到凝胶净化色谱，虽然不常见，但是必须得有。我们想买一套制备液相，是否可以代替凝胶净化色谱因为制备液相平时可以做科研用

求 （半）制备液相结构相关资料

使用制备或半制备液相时，流动相除了用甲醇，水以外，还能像分析液相那样往里面添加些添加剂么？

各位大虾，小弟在此有问题求助，半制备色谱（0-50ml/min）制备色谱（0-100ml/min）他们在液相的构造上哪些部件是和分析性液相不同的希望具体一点，同时在半制备，制备领域国内我知道有创新通恒，伊力特，上海通微还有江苏汉邦近期也有产品出来。进口的有安捷伦 岛津 吉尔森什么的。大家都来点评一下使用心得。哈哈不过最好还是帮我把第一个问题解答详细

1. 他们的区别是在于仪器的不同还是所接柱子的不同呢？2. Agilent 1260 Infinity Ⅱ (Agilent, USA) on a column (21.2 × 250 mm, 7 μm) 这算制备型HPLC还是半制备型HPLC呢？3. 如果在分析[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]上装5 μm的柱子 Agilent 1260, on a column (10 × 250 mm, 5 μm) 这样可以称之为半制备型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分离嘛？

想采购一台制备液相，但接触不多，因此想咨询：1.制备液相的组成？使用注意事项有哪些？2.和HPLC比，有什么不同吗？比如样品处理、流动相、进样量等等3.其在应用方面有哪些呢？欢迎讨论！奖励积分！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gif

我最近刚用岛津制备液相，示差检测器RID-10A,流速30ml/min,250*30色谱柱，柱前端有保护住，问题是进的所有应是单峰的对照品都显示成没有完全分开的裂峰，进样品除产生类似溶剂峰的峰型外，没有峰型产生，可我的样品中含有很多成分（分析液相测得），基线变得不平滑（就跟画波浪线似的），进样量很大的。我是新手，有用过制备的高手遇到这样的情况吗？帮我解疑，谢谢！[em0810]

做制备液相的朋友多不,我有不少问题请教,

最近做核磁时发现一个奇怪现象：样品是液相制备出，然后旋干的。做LC-MS确定是干净的，但做核磁（DMSO-D6）时发现几个无关的杂峰分别是7.05 7.17 7.3，很多样品都出现过这种情况，不知何故，各位有没有见过这种情况那？谢谢。附件上的谱图是我们只用流动相冲了系统，然后旋干流动相做的核磁，其中三个峰就是我们不知是什么的东西。现在知道的是这个杂质是溶于水的，水洗可以洗掉。

买台半制备液相挺好，能做杨还能制备标准品，虽然纯度差点，但也有不少用处，能省不少钱，一举两得。

我想对胡萝卜素素类的物质进行高效液相半制备，请问条件该怎么选呀，该用什么杨的柱子？

[align=center][size=13px]制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]在杂质鉴定工作中的应用[/size][/align][size=13px]说起[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]，想必大家都不陌生，很多实验室里都有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，平常用来分析日常样品。其实[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]一共有两种，一种是分析型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]，还有一种是制备（半制备）型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]。分析型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]适用于日常样品的分析测试，仪器精度高，既能准确定性，也能准确定量。而制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]较分析型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]牺牲了一定的精密度，在定性与定量方面更加倾斜于定性，其最终目的是用于对化合物的分离和纯化。[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310241626431367_8815_3141805_3.jpeg[/img][/align][size=13px]制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]的仪器结构和分析型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]大多数都是一致的，主要分为溶剂系统、泵及混合器、进样系统、色谱柱分离系统、检测器、数据工作站，此外还有一个组分收集器，也可以称为馏分收集器。[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310241626434426_9805_3141805_3.jpeg[/img][/align][size=13px]在生物制药、化工以及农药研发等工作中，我们常常会遇到一些成分复杂的测试样品，这些样品除了主成分含量比较高以外，还有很多各种各样的杂质，为了了解这些杂质在生产工艺中的来源，我们需要了解这[/size][size=13px]些杂质具体是什么物质，什么结构。目前对杂质进行鉴定的手段有质谱，紫外，红外以及核磁等，若想利用这些手段得知未知物的结构，那首先要获得足够纯度的杂质，纯度越高组分越单一，鉴定出来的可能性就越大。[/size][size=13px]通过对这些杂质进行鉴定，有利于推断杂质的由来，从而调整生产工艺路线来避免生成这些杂质，从而获得纯度更高更安全的产品。[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310241626435844_7797_3141805_3.jpeg[/img][/align][size=13px]使用制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]的目的就是为了利用色谱柱的分离能力，可以使得复杂组分在色谱柱固定相的作用下分离开来，然后获得不同时间段的馏分。制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]的检测器后面通常会接一个馏分收集器，这个馏分收集器类似于一个样品盘，样品盘孔位众多，每个孔位上带有一个收集试管，用来接收分离出来的组分。[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310241626439338_1338_3141805_3.jpeg[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310241626442448_6233_3141805_3.jpeg[/img][/align][size=13px]比如一个样品，它通过色谱柱的分离在检测器上有四个信号，分别为[/size][size=13px]A[/size][size=13px]，[/size][size=13px]B[/size][size=13px]，[/size][size=13px]C[/size][size=13px]，[/size][size=13px]D[/size][size=13px]，这四个信号的保留时间是已知的，然后在馏分收集器的设置里面设置四个时间段，时间段囊括色谱峰从[/size][size=13px]出峰开始到出峰结束[/size][size=13px]即可。例：[/size][size=13px]A[/size][size=13px]物质出峰开始时间为[/size][size=13px]10.2min[/size][size=13px]，出峰结束时间为[/size][size=13px]10.5min[/size][size=13px]，那么收集峰的时间就可以为[/size][size=13px]10.2[/size][size=13px]～[/size][size=13px]10.5min[/size][size=13px]，收集[/size][size=13px]0.3min[/size][size=13px]，如果流速为[/size][size=13px]10ml/min[/size][size=13px]的话，单次进样收集[/size][size=13px]A[/size][size=13px]的液体体积为[/size][size=13px]0.3min×10ml/min=3ml[/size][size=13px]，这[/size][size=13px]3ml[/size][size=13px]里面绝大多数为流动相溶剂，其余的就是[/size][size=13px]A[/size][size=13px]组分了。单次进样收集的[/size][size=13px]A[/size][size=13px]组分其实很少很少，肯定是不够鉴定所需要的量的，所以需要不断重复收集，然后合并所有相同组分的馏出液进行浓缩等手段进行浓缩再纯化，从而得到含量更高的样品，然后再用其它仪器进行分析鉴定。[/size][size=13px]总结：制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]在杂质的分离和鉴定工作中[/size][size=13px]具体重要[/size][size=13px]作用，一个未知杂质的制备往往要耗费大量的时间和精力，同时分离方法的摸索也是一个很有挑战性的工作。[/size]

高效液相色谱制备标准品的储备液的问题做高效液相色谱需要制备标准品的储备液，由于所需量很少，微克级别的，怕称量不精确，所以想把倍数扩大，多称量一些，多配一些储备液留着以后慢慢用。但又担心不能长时间保存。所以想请教一下，储备液一般可以保存多久？在什么条件下保存？十分感谢！

学校半制备液相，坏了，可以用半制备柱上分析液相分离吗

做化合物分离纯化的无外乎有开放层析柱（该方法想得到纯化合物不容易啊），制备薄层，高效液相制备三种方法吧。请问你在实验中会用到制备液相吗？投票后最好有详细说明，投票有奖哦！

没有亲自动手做过制备液相,只是了解基本原理,现在想学习一下,请教各位有什么学习资料可参考,谢谢!

我有一个有机混合的液体，想用高效液相制备色谱分离出来，想问一下天津那所高校或者研究所有高效液相制备色谱，谢谢！

最经在做细胞内辅酶Ⅰ提取研究，想通过制备型液相来纯化经高压均质机破壁和粗提取的辅酶。但是不知道该制备型液相固定相怎么选择，选择哪种填料好