五角度光度计

美媒披露五角大楼对付外星人11种武器美国航天局日前发布消息说，1977年发射的“旅行者1号”探测器已抵达太阳系边缘，这意味着“人类第一个星际使者”有望不久后首次脱离太阳系，进入星际空间。　　好吧，那让我们天马行空地想象一下，假如“人类星际使者”遭遇外星人怎么办？或者，更糟糕的情况，如果将并不友善的外星人引到地球，向人类发起袭击又该怎么办？人类在抵御外星人入侵时，是否已掌握合适的武器？　　美国《外交政策》杂志网站近日发表《超级战舰 地球》（Battleship Earth）文章,披露了美国五角大楼拟用来对付外星人的“十一般”太空武器。主要内容如下：　　夏季来临，好莱坞大片接连火热登场。耗资巨大的动作片如《复仇者联盟》（The Avengers）, 《超级战舰》（Battleship）, 与《普罗米修斯》（Prometheus）提醒我们，有一件事可以团结所有的美国人：对外星人袭击地球的共同恐惧。这些电影同时也告知世人，当宇宙舰队入侵时，人类在面对星际侵略者，不会轻易投降。我们将紧密团结在一起，携手击退装备着不可思议尖端武器的外星人……但是，我们到底用什么武器呢？我们真的准备好抵抗外星殖民者了吗？　　幸运的是，五角大楼的国防高级研究项目局（DARPA），与几家世界上最大的武器制造商一道，正在设计创造未来的武器。从配备激光的喷气式飞机到超音速飞机，再到隐形斗篷，“武装到牙齿”的人类也许为了拯救地球能与外星人进行一次公平的决斗。你或许认为我在开玩笑，但如果不是作为训练手册，美国宇航局为什么要把《复仇者联盟》传输到国际空间站放映呢？下面就让我们看一下现在正在研发的一些最具宇宙价值的武器发明。

http://image.xinmin.cn/2011/02/18/20110218105104073850.jpg　　蜂鸟侦察机的翼展仅为16厘米，并且不需要推进器，像真正的鸟一样煽动小小的翅膀来获得动力。　　中新网2月18日电据外媒报道，美国五角大楼近日研制出了一种可以放入口袋的蜂鸟侦察机，长度仅16厘米，重量还赶不上一只AA电池，且不需要推进器，像真正的鸟儿一样扇动小小的翅膀来获得动力，这种无人驾驶飞机每小时可飞行11英里。 军方希望利用在飞机中的微型摄像机在战区中侦查敌人的位置，而且不会被发现。这种无人侦查飞机费时5年，耗资400万美元才研制成功。 它的研制成功为新一代具有小鸟一样灵活性和外观的飞行器铺平了道路，并且挑战了空气动力学极限。讨论：用类似鸟翼取代桨翼真的有研发的价值吗？

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。 荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。 荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧 　　光分光光度计三个阶段；荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光Sh p ol’skill荧光分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]14日起，上海市杨浦区五角场街道国顺路81弄等3地列为中风险地区。[/size][/font]

各位前辈，请教分光光度计测量斜入射的问题。之前使用SolidSpe3700积分球只能测量0°和8°斜入射的漫反射率。其他角度只能用可变角测量镜面反射率。请问哪里能做大角度的漫反射测量，需要配合积分球。我们是做光学系统的消杂散光材料，反射率不高，但还是要表征不同入射角的漫反射率。(如有仪器 推荐 0Q 1263455019 有偿)

我看到分光光度计的吸光度校正用碱性重铬酸钾溶液，请问为何用碱性的，酸性的不行吗？是基于什么考虑？分光光度计灵敏度检验，用0.001％重铬酸钾，蒸馏水为参比，与440nm处测A大于0.010.....，这些都是出于什么考虑？问题较弱智，请大家不吝赐教！

光度准确度(Photonetric Accuracy)是一个根本性的、非常重要的技术指标。任何使用者买一台紫外可见分光光度计，其目的是提供准确可靠的分析数据；而数据是否准确、是否可靠，在很大程度上就取决于仪器的光度准确度这个最重要的技术指标及其有关指标。目前，我国有近40家厂商在生产紫外可见分光光度计，但其中绝大多数厂商在说明书或仪器样本中称“光度准确度”饲“测光精度”；国外生产紫外可见分光光度计的厂商中，也有许多厂商称“光度准确度”为“测光精度”；这些厂商，都是不对的。因为，他们把准确度( Accuracy)和精密度（Precision）混淆了；准确度指的是测量值与理论值之差，该偏差越小，说明测量的数据越准确、可靠，或者说光度准确度越高。而精密度指的是分析测试数据的离散性或重复性；是指同一操作者，在一次开机中连续重复多次测试某一吸收峰的吸光度值中最大值与最小值之差；该差值越小，说明该仪器的光度重复性越好。“光度准确度”和“光度精密度”二者不能混淆。正确的说法应该是紫外可见分光光度计的“光度准确度”而不能说成“测光精度”。

请问，怎么用分光光度计测亮度因素，该用哪种分光光度计

所谓光度准确度是指实际测得的光度值和真值或理论上的光度值之差。国际上对紫外可见分光光度计准确度的表示方法主要有两种：一种是吸光度准确度或吸光度误差用△A表示，另一种是透射比准确度或透射比误差，用△T表示。光度准确度是一个非常重要的技术指标，能直接反应仪器测试数据的准确程度。　　目前国内外生产厂家对光度准确度的测量方法不一，主要是各国的国家标准不同，美国国家标准规定：选择合适的标准参比材料，在规定的波长处，连续测10个吸光度或透射比读书，去10个读数的平均值，实际吸光度或透射比与观测值的平均值之差，即为光度准确度。　　测试光度准确度一般采用铬酸钾、重铬酸钾等标准物质，但目前国内大部分采用固体中性滤光片来进行测试。固体中性滤光片操作简单、携带方便，避免了寻找理想参照片基的麻烦，也可以得到多个所需要的、较理想的峰和谷。

一直存在一个争论：带紫外检测器的液相是否可以代替紫外分光光度计。最近查了一写资料，对两者进行比较：1 从光学精密度来比较：分光光度计的高，而紫外检测器的低，具体低多少，俺还想再做进一步的试验。2 从信号稳定性来比较：分光光度计的低，紫外检测器的高，具体相差多少，也要进行数据比较。3 从光学能量角度来比较：分光光度计的高，而紫外检测器的低。 也许还有很多别的指标可以比较，有待大家一起讨论。

分光光度计 一、概述 分光光度计是利用物质对光的选择吸收现象，进行物质的定性和定量分析的光电式分析仪器，也是一种光谱仪器。根据电磁辐射原理，不同的物质具有不同的选择吸收，也即具有不同的吸收光谱。通过对吸收光谱的分析可方便的判断物质的内部结构和化学组成。随着工业生产和科学技术的不断发展，以及人们对物质认识的不断深化，，迫切要求发展新的先进的分析技术和仪器，分光光度计就是在这种历史条件下问世和发展的。 分光光度计是分光仪器和光度计的一种组合。按工作光谱原理的不同，分光光度计可分为研究物质分子吸收光谱的分光光度计、研究物质中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计、研究物质分子荧光发射的荧光分光光度计和研究物质原子荧光发射的原子荧光分光光度汁、研究分子喇曼散射光谱的喇曼光谱仪等。由于分光光度法具有分析精度高、测量范围广、分析速度快、样品用量少等优点，分光光度计已成为探索自然、改造自然、发展科学技术和生产的强有力的工具，是现代化分析实验室必备的常规仪器之一。二、分光光度计的基本组成 分光光度计主要构成部分有光源部分、光度计部分、单色器和接受记录部分。分光光度计的主要组成部分可以用图1表示：光源 单色仪 样品池 接受放大系统 显示记录系统 图1 分光光度计框图下面分别叙述这几个部分的光学系统的特性。1光源系统分光光度计的光源系统由光源和照明系统组成。1.1光源 分光光度计中对光源有一定要求，理想的辐射光源应具备以下一些特性： (1)在所使用的被长范围内提供连续辐射，即光源应发射连 (2)辐射能量随波长的变化尽可能小，且有足够的强度。 (3)使用寿命较长。 (4)要有良好的稳定性，特别是对单光束仪器。 在190一360nm波长范围紫外波段，常用的光源是氢弧灯和氘弧灯，氘灯的紫外光发射强度比氢灯强。在360一2500nm波长范围可见和进红外波段，常用白炽钨灯作为光源。图2为氢灯、钨灯的光谱能量分布图。在2—50µ m波长的中远红外波段内，常用的光源是能斯脱和硅碳棒，其光谱能量分布如图3所示。另外，对于要求较低的仪器，灼热的金属丝(如镍铬丝)可以作为红外光源；而在远红外区高压汞灯也是一种常用的光源。 图2 光源能量分布 图3 红外辐射光源A－氢灯，B一钨灯，C一不同温度T的黑体辐射 A－能斯脱，B－硅碳棒1.2照明系统 光源系统的照明系统一般有两中：单光束照明系统和双光束照明系统。光源系统中的反射镜的作用是把光源发出的光线集中在单色器的入缝上，使整个狭缝照明均匀并充满单色器的孔径。在照明系统为单光束的仪器，只要求光源反射镜引入一个高通量的光束即可，对光源的成像质量要求不高。图4为一种单光束照明系统光路图。在双光束照明系统的分光光度计中，光源系统并不直接照明单色仪的狭缝，如图5所示。光度系统处于单色器和光源之间，而在光度系统中，有一个梳形减光楔，光源必须首先成像在减光楔上。减光楔通过光度系统要求清晰地成像在单色器的入缝上。 图4单光束照明系统 图5双光束照明系统2单色器系统单色器是分光光度计的核心部分，仪器的主要光学特性和工作特性基本上由单色器决定。它的作用是将光源发出的白光色散成各种波长的单色光，从出射狭缝中导出，照于样品上。分光光度计中的单色器是一个完整的色散系统，除了色散元件——棱镜或光栅外，还有入射和出射狭缝以及一组反射镜。根据工作光谱范围、色散率、分辨串等性能指标的要求，可分别选用棱镜或光栅分光的单色器，双联单色器，也可采用滤色片分光的单色器等。2.1虑光片滤光片是最简单、最廉价的单色装置。由于它的单色性不好，使测定精度大大受到限制。它的特性可以用最大透光波长(或称中心波长)和谱带半宽度(有效带宽)来表征。最大透光波长是指在此波长光源的辐射最强。有效带宽是指最大透光度值的一半处的谱带宽度。在分光光度计中，滤光片一般用来消除单色器的杂散光。滤光片可分为五种：中性滤光片，截止滤光片，通带滤光片，干涉滤光片以及校正滤光片(标准滤光片)。2.2单色器从波长范围宽广的光源辐射中分出波长单一的单色光的光学装置称为单色器。单色器是由入射狭绕、准直元件、色散元件(常用核能或光栅)、和出射狭绕组成。棱镜可以作为从紫外到中红外区的合适的色散元件。在紫外范围，常用的材料是硅、矾土和人造蓝宝石。矾土和人造蓝宝石能用于200到4000nm，但昂贵，所以常用熔融石英作棱镜材料。在可见范围，硅的色散次于光学玻璃，所以可见分光光度计常用廉价的光学玻璃作棱镜材科。玻璃和石英棱镜担色器的色散特性模式图见图6。为了便于比较，将显示线性色散的光栅单色器的色散特性也列在一起．图6 三种材料单色器的色散特性棱镜单色器的光谱纯度主要决定于棱镜的色散特性和光学设计。通常使用两种形式的棱镜单色器——本生(Bunsen)单色器和利特罗(Littrow)单色器。光栅是一种十分重要、应用范围很广的色散元件，可以用于紫外、可见、近红外范围的色散。光栅分透射光栅和反射光栅。透射光栅是在一块玻璃上或其它透明材料上刻一系列平行的和紧紧相靠的凹槽。生产这样的母光栅需要精密的装置，比较昂贵。复制光栅比较便宜，虽在性能上次于母光栅，但能满足应用。反射光栅是在复制光栅的表面上喷涂铝的薄膜制成的。也可在抛光的玻璃表面或金属表面镀铝，然后在铝表面上刻大量的平行线制成的。光栅的刻线越多，分辨率越高，每单位长度的刻线越多，它的色散就越大。闪耀波长是闪耀光栅的另一个重要的参数，在闪耀波长，光栅有最大能量输出。光栅的主要缺点是有次级光谱干扰分析，且杂散光的影响比棱镜更大，故常配虑光片以去除杂散光。棱镜的主要缺点是色散波长的非线性分布。光栅单色器有几种排列方式，通常用的一种是埃伯特（Ebert)式（图7），是埃伯特1889年发明的。它用一个球面镜准直和聚焦，并对称地放置两个狭缝，波长选择是通过旋转光栅实现的。后来采尼(Czerny)和特纳(Turner)对其进行了改进，用两个小的球面镜来代替大而昂贵的埃伯特球面镜（如图8），使得结构紧凑，后为现代仪器所常采用。图7 埃伯特衍射光栅单色器 图8采尼和特纳衍射光栅单色器入射和出射狭缝狭缝是单色器的重要组成部分之一，关系到分辨率的优劣。它是由具有很锐刀口的两片金属片精密加工制成的。刀口相互之间是严格平行的，并且是在相同的平面上。狭缝宽度有两种表示方法，一是用狭缝的两刀口之间的实际宽度表示，单位是毫米（mm）；另一是用从单色器出来的有效带宽表示，单位是纳米（nm），通常用后者表示。3光度系统 紫外可见和近红外分光光度计的光度系统分为单光束和双光束两种。3.1单光束的光度系统单光束的光度系统简单，如图9所示。此系统在采用比较法测量样品的光谱透过率或反射率时，通常有两种方式：图9 单光束的光度系统方式1：在整个工作波段测定完标准后，再测样品，得出的结果进行比较。此方式的缺点：波长的重复性不高，这是由于两次测量标被及样品的时间间隔长，光源的不稳定，波长的重复性、接收系统的不稳定等因素造成的。方式2：在待测的每一波长处标准和样品依次快速地替换，分别进行测量，进行比较。此方式的优点是严格保持标准和样品完全相同的照明及测试条件，但却使样品和标准不断地处于运动状态，因此采用较小。现代的自动分光光度计多采用双光束法来实现比较测量。3.2双光束的光度系统双光束光度系统的显著的特点和最基本要求是保持光路对称。即两光路中的反射次数和相应的反射角、透射次数和相应透射面的曲率以及射入接收器的角度和照射面积等，尽量要求做到对称，并且光路应尽量缩短，光学零件也应尽量减少。图10所示是在紫外——可见和近红外分光光度计中常用的双光束光度系统。图10 紫外—可见和近红外分光光度计中常用的双光束光度系统红外分光光度计中光学系统的基本要求与紫外一可见分光光度计相同。但在光学平衡法测定中，应用减光器Wl改变参考光束的强度来实现零点平衡。为了校正仪器的100％透过率，在样品光路中设有减光器W2。图11为红外分光光度计的光度系统图。图11 对称式红外分光光度计光度系统

光度计的波长校正原理：是不是在调整光栅的角度？还是在调整出光狭缝的位置？[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]&紫外可见光度计都是这种的吗？[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/03/202303271151384638_7347_5541493_3.png[/img]

分光光度计的用途之一是鉴定物质。用来测量待测物质对可见光的吸光度并进行定量分析的仪器，称为可见分光光度计；紫外可见分光光度计用来测量待测物质对可见光或紫外光(200～760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度，也可以测定细菌细胞密度。分光光度计的用途之二待测物质是标准物及标准图谱对照进行分析。分光光度计的用途之三是比较最大吸收波长吸收系数的一致性。分光光度计的用途之四是物质的纯度检验。分光光度计的用途之五是推测化合物的分子结构及构成。分光光度计的用途之六是判定络合物的组成及稳定常数的测定。

转一个别的论坛搞的某期“百家讲堂”活动，是关于红外的，供参考。 --zwyu==========================================================================红外分光光度计在药物分析当中的应用 主讲人：ludy ludy从事多年的药品分析和药品质量控制工作，虽工作环境较单一，但日常勤于思考善于联想，注意总结日常工作和搜集各类相关资料，愿意与广大药物分析和研究者共同探讨一起进步。我们的口号是：一个苹果大家平分，一个好的思路大家共享。 （主办：我的仪家；协办：实验室社区、生技论坛、色谱世界、39检测认证论坛）========================================================================== 红外分光光度计相信大家就算没有用过也见过，没有见过也听说过，比如进口品牌的Nicolet、岛津、PE生产的各类型红外分光光度计。红外分光光度计是用一定频率的红外线聚焦照射被分析的试样，如果分子中某个基团的振动频率与照射红外线相同就会产生共振，这个基团就吸收一定频率的红外线，把分子吸收的红外线的情况用仪器记录下来，便能得到全面反映试样成份特征的光谱，从而推测化合物的类型和结构。这仪器在药物分析、环境监测、化工领域均有广泛的使用，但迪迪学识有限，也只能对红外分光光度计在药物分析当中的应用，做一粗糙归纳，与诸君共享。 一、在标准方法上的应用。 基本上一个方法在国家标准上得以应用，就说明是一个比较成熟稳定的方法，适合全国各种实验室使用，经得起重复。咱就先说红外分光光度计在《中国药典》上的应用。 由于红外光谱特征性较强，用于物质鉴定较紫外光谱更可靠，特别是用于化学结构比较复杂的药品活化学结构相互之间差异小的药品的鉴别，那是远胜于用其他常规理化鉴别方法。《中国药典》1977年版开始应用红外光谱鉴别药品，不过早期用的是色散型红外分光光度计，然后逐渐被傅立叶变换红外分光光度计所取代了。 不要以为红外只能做鉴别，当然，目前在《中国药典》里主要是做鉴别，但也偶尔用来进行杂质检查。实际上红外也能做含测，这点我们留到下章再讲。 随着红外分光光度计的逐渐普及，《中国药典》里采用该仪器做鉴别的品种也逐年增多，而且从仅用来鉴别原料药发展到开始鉴别制剂。早期一个原料药的鉴别项目，是非常多的，有的品种甚至达到十几个鉴别项目，要通过不同的化学反应鉴别基团，还要上紫外观察最大最小吸收，甚至再弄个薄层色谱。但是有了红外分光光度计后，妥了，一个红外图谱扫描下来，是就是，不是也很清楚。据说这个思路也是跟老外学的，向USP靠拢，人家美国药典中的鉴别项目，就是用红外来确证的。《中国药典》红外光谱测定法中试样的制备方式。气体、液体和固体样品均可用红外分光光度法发进行分析。（测定气体迪迪还没见过，也是好奇的很哪），常用方法有以下4种： 1、压片法 通常为KBr（溴化钾）压片，少数品种采用KCl（氯化钾）压片，样品与KBr的量的比例一般为1：100，样品用量及片子的厚度，以能得到基线80%以上透光率，最大吸收峰约在20%透光率的红外图谱为好。 2、糊法 常用糊剂为石蜡油，将样品研细，与糊剂混合成糊状，夹在两窗片之间进行测试。 3、薄膜法 薄膜的制备可将样品直接放在盐窗上加热，熔融后涂成薄膜，或将样品溶于挥发性溶剂中，滴于盐窗上，待溶剂挥发后即得薄膜。 4、将样品溶于适宜的溶剂，制成1%~10%浓度的溶液，置于0.1~0.5mm厚度的液体池中录制光谱。所用溶剂应具备以下条件：对溶质有较大的溶解度；溶剂在较大波长范围内无吸收；不腐蚀液体池的窗片；与溶质不发生化学反应等。常用的溶剂有二硫化碳、四氯化碳、氯仿和环己烷等。 其实在实际应用中，绝大部分都是用压片法，也就是将固体的药物研细，与溴化钾粉末混合后压片，放入样品池中扫描图谱。有一些为油状的药物，则是沾少许涂抹于压好的溴化钾片上，放入样品池中扫描图谱。 《中国药典》中的红外鉴别，多采用标准图谱对照法，即将样品测得图谱与《药品红外光谱集》里的图谱相对照，相同则为同一物质，不同则为不同物质。也有少部分样品采用与对照品图谱对照，即将样品测得图谱与对照品同法处理测得的图谱相比较，此法多见于新药标准中采用（迪迪窃想：可能是因为新药，还没有经过权威部门大量实验验证出一个成熟的标准图谱吧）。 《中国药典》最早应用红外分光光度计是用来鉴别甾体激素类药物。因为甾体激素类药物分子中大多具有α、β不饱和酮结构，他们的紫外吸收光谱非常相似，用紫外光铺法很难鉴别，其他理化鉴别方法如熔点、选广度和显色反应同样缺乏专属性，而它们的红外光谱却有明显区别。比如那个醋酸泼尼松，醋酸地塞米松，全都是“松”，你单单用紫外和理化鉴别，很难区分。 由于分离提取这些前处理技术的局限，起初红外分光光度计很少用于药物制剂的鉴别，因为鉴别制剂首先需要对样品进行前处理，要避免辅料的干扰和晶型的改变，不象鉴别原料药基本上都是拿来就用不需处理的。比如在《中国药典》迪迪就只碰到过甲睾酮片这一个制剂，是用红外鉴别的。 但是在研究领域，则有很多研究人员致力于采用红外分光光度计鉴别药物制剂，也发表了许多论文。其实只要前处理方法能重复而且不改变主料成分的性质，用红外鉴别原料和鉴别制剂的仪器操作是完全一样的。比如对主药规格较大的片剂，象甲硝唑片啦、对乙酰氨基酚片啦，采取提取分离和重结晶得到纯品，然后进行红外鉴别。这些个片剂价格便宜量又足，一片药片中主药成分往往占70%以上，真是很好提取的对象呢。迪迪稍微检索了下，发现不但片剂、胶囊剂有红外鉴别的论文，连注射剂都有了。 英国药典和美国药典早就采用红外鉴别各种不同剂型的制剂了，因此顺应形势紧跟潮流，《中国药典》2010年版也增加了若干个红外鉴别制剂的品种，当然，新版药典也增加了红外鉴别原料药的品种了。 迪迪个人估计，这个进步在某方面，也得多谢那些高科技造假者，因为他们针对标准而发明创造出各种各样的造假掺假方法，使得标准也不得不魔高一尺道高一丈，与时俱进地采用更能准确鉴别的鉴定方法，而红外分光光度计，在鉴别这方面具有不可比拟的优势啊。 红外光谱不仅可以提供化合物的类型、官能团以及结构异构等信息，还能反映出化学键的键长和键角等结构的诧异。当某些药品具有不同的晶型结构时，它们的键长和键角等就会发生不同程度的变化，从而使其红外光谱中的某些特征频率、峰形和峰强出现显著差异。因此采用红外光谱法检查药品中低效（或无效）晶型，方法鉴别又可靠。《中国药典》中甲苯咪唑中A晶型的检查，就是一例。甲苯咪唑中A晶型是无效晶型，C晶型为有效晶型，这两种晶型在不同的波数处有最大吸收。采用石蜡糊制法，分别测定供试品与含有10%A晶型的甲苯咪唑对照品的红外图谱，通过计算相应峰位的吸收度比值进行判断。 用红外分光光度计测定样品含量，目前《中国药典》还没有收载，在美国药典(USP)中有收载，可惜迪迪功力不够，没能看到是怎么个含测法，望有识之士加以补充啊。迪迪查到有论文采用衰减全反射红外光谱（ATR-FTIR）法测定含量的，也有直接测定光谱，处理后进行含测的。二、在药物研究中的应用。 这里讲的红外分光光度计的应用，即是在研究领域上的，这些方法也许目前还未得到普及和推广，但已逐步显示出它们的实用价值。 比如有研究者运用Matlab小波变换的处理技术对红外光谱进行滤噪与平滑，获得光滑的谱图，建立了红外光谱对药物含水量非线性定量模型。这是用红外来测定含水量的，请注意，不是近红外测水分哦，是红外测水分。不过迪迪对此有点点怀疑，这个这个样品在压片过程中，尤其是在红外灯照射下，自身的水分会不会有所减少啊？ 也有研究者用红外进行样品纯度的检测，通过比较不同纯度的样品建立一些数学模型，从而达到测量样品纯度的目的。 还有研究者用红外测定中药制剂掺杂化学成分，利用红外光谱矢量的特征，不经化学提取分离，直接进行中药掺假判别。它利用已知化学药物的红外光谱和待测样品的红外光谱，通过计算机分析给出特征值，直接得到样品中化学药物的含量。如用此方法测定壮阳类药物中参入西地那非。 最后，也是应用最广泛的药物研究领域，就是红外分光光度计在中药材真伪鉴别上了，这方面的研究和实用价值颇大，比如用红外鉴别药材产地啊，药材的真伪，药材的不同采摘期啊。有相当多的研究，都是采用先提取中药中的某成分，或者采用某种提取方法提取出某混合物，然后进行红外鉴别。 铛铛铛铛铛，让我们鼓掌欢迎迪迪最崇拜的孙素琴孙老师的研究成果出场。以下为新闻简介：孙素琴突破现有分离提取思路，创新采用红外指纹图谱直接、快速、无损测定中药材、中药配方颗粒、中药注射剂，中药保健品等，并借助模式识别技术识别不同产地、生长期、野生与栽培的药材，不同炮制法、不同批次的中成药、保健饮品。她提出了红外光谱的“三级鉴定”法。它利用了一维红外光谱、二阶导数谱和二维相关红外光谱。差异性较大的不同种药材仅需要一般的红外图谱就能够简单地做出判定，我们称其为一级鉴定。当药品的差异性较小，用普通的一维红外图谱显示不出它们的差异性，我们可以采

请问，有用紫外分光光度计测过胶体浓度或者粒径的么~谢谢！

分光光度计是利用物质对光的选择性吸收的特性，以较纯的单色光作为入射光，测定物质对光的吸收，从而对物质进行定性或定量分析的仪器。在使用过程中常常会出现测量误差，这些误差又是如何产生的呢？一、仪器本身性能带来的误差1、复色光对比耳定律的偏离比耳定律成立的前提条件是入射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.1nm；可见分光光度计带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。2、杂散光的影响杂散光是指进入检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有：分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。3、仪器噪声对测t的影响仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到分光光度计的绝对噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。4、波长和吸光度准确度样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光度计透射比准确度为A级士0.6%， B级土1.0%。二、测量条件的选择1 参比溶液和溶剂的选择分光光度计的测量实际上是以通过参比池的光强度作为入射光强度来测定试样的吸光度，先调节仪器使透过参比池溶液的吸光度为零，然后让同一束光通过样品，使得吸光度比较真实地反映待测物质的浓度，所以参比溶液的选择非常重要。如果仅有待测物质与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂或蒸馏水作参比溶液。如果显色剂有颜色，并在测定波长下有吸收，则用显色剂溶液作参比溶液，所加人显色剂及其它试剂的量，与试样中的加入量应一致。如果样品中其它组分本身的颜色对测定有干扰，而所用显色剂没颜色，则用不加显色剂的样品溶液作参比液。正确选择合适的溶剂，对提高分析的准确度起重要作用。为减小溶剂中杂质的影响，应选择高纯度的溶剂；溶剂应不与待测物质发生化学反应；待测物在溶剂中要有一定的溶解度；在测定的波长范围内，溶剂本身没有吸收，注意常用溶剂的最短可用波长；当用挥发性大的溶剂时，测量过程中吸收池应加盖。2 测试波长的选择当用分光光度计对溶液进行测定时，首先需要选择合适的测量波长。选择的依据是该被测溶液的吸收曲线。在一般情况下，我们总是选择最大吸收波长作为测量波长，这样可以提高灵敏度。而在有些情况下最大吸收峰很尖锐、吸收过大或附近有干扰存在，就不能选最大吸收波长，而必须在保证有一定灵敏度的情况下，选择吸收曲线中的其它波长进行测定(曲线较平坦处对应的波长)，以消除干扰。绘制吸收曲线是正确选择波长的有效手段和方法。

所谓光度准确度是指实际测得的光度值和真值或理论上的光度值之差。国际上对紫外可见分光光度计准确度的表示方法主要有两种： 一种是吸光度准确度或吸光度误差用△A表示，另一种是透射比准确度或透射比误差，用△T表示。光度准确度是一个非常重要的技术指标，能直接反应仪器测试数据的准确程度。目前国内外生产厂家对光度准确度的测量方法不一，主要是各国的国家标准不同，美国国家标准规定：选择合适的标准参比材料，在规定的波长处，连续测10个吸光度或透射比读书，去10个读数的平均值，实际吸光度或透射比与观测值的平均值之差，即为光度准确度。测试光度准确度一般采用铬酸钾、重铬酸钾等标准物质，但目前国内大部分采用固体中性滤光片来进行测试。固体中性滤光片操作简单、携带方便，避免了寻找理想参照片基的麻烦，也可以得到多个所需要的、较理想的峰和谷。

基线平直度的重要性(对分析测试误差的影响) 紫外可见分光光度计的光度噪声直接影响仪器的信噪比,它是限制分析检测浓度下限的主要因素。目前, 各国紫外可见分光光度计的生产厂商, 给出的整机光度噪声都是指仪器在500nm 处的光度噪声( 称之为整机的光度噪声) , 主要用于比较不同仪器的优劣。而紫外可见分光光度计的使用者往往要在不同波长上使用, 特别要在紫外区使用。所以, 只给出500 nm处的整机光度噪声, 不能满足使用者的要求。因此, 提出了基线平直度的概念。紫外可见分光光度计的基线平直度是指每个波长上的光度噪声, 它是用户zui关心的技术指标之一。它是紫外可见分光光度计各个波长上主要分析误差的来源之一。它决定紫外可见分光光度计在各个波长下的分析检测浓度的下限。但是很可惜, 目前很多仪器制造者、使用者都还没有认识到或还没有重视基线平直度这个技术指标。

在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确度直接关系到所测数据的可信性及科学性,所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面仪网谈几点提高分光光度计使用准确度的方法。1.干燥剂使用问题干燥剂使用问题存放于分光光度计中的干燥剂失效将导致1)数显不稳、无法调“0”点或“100%”点(电路或光电管受潮);(2)反射镜发霉或沾污, 影响光效率、杂散光增加。鉴于上述原因,分光光度计的放置地点应远离水池等湿度较大的地方,存放于分光光度计中的干燥剂应定期更换或烘烤。2.比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题有些分光光度计使用者在测量分析样品时对这个问题不够重视,因操作不当造成偶然误差,严重影响分析结果。首先,应保证比色皿置于比色皿架中不倾斜位置。比色皿在比色皿架中稍许倾斜,就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致,还可能使入射光不能全部通过样品池,导致测试结果不符合准确度要求。其次,应保证每次测试时,比色皿架推拉到位。若比色皿架推拉不到位,将影响到测试结果的重复性或准确度。最后,还应保证比色皿的清洁度,延长比色皿的使用寿命。3.工作环境问题实验室环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响分光光度计机械系统的灵活性,降低分光光度计各种限位开关、按键、光电耦合器的可靠性,它们也是造成光学部件铝膜锈蚀的原因之一。因此,分光光度计在使用一定周期后,内部积累的一定量的尘埃,最好由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘处理。同时,将各发热元件的散热器重新紧固,对光学盒的密封窗口进行清洁,必要时对光路进行校准,对机械部分进行清洁和必要的润滑。最后,按分光光度计仪器的要求恢复原状。需有专业检定人员对分光光度计进行必要的调校和检定,以保证分光光度计的准确度。对于因测试样品等过程中产生的腐蚀性气体在实,验结束后使用分光光度计人员应及时将其清除 以防腐蚀性气体在气室中或存放环境中保留时间过长 对分,光光度计机械系统和光学部件等造成腐蚀致使分光光,度计的使用寿命减少和准确度降低。

实验室准备买一台紫外分光光度计，用于中药及制剂的检测，以后可能会有一些研究方面的扩展应用，选择了一些产品，包括尤尼柯UV-4802、普析通用TU-1900、岛津UV-1700/2450、瓦里安CARY50。因为对分光光度计了解很少，现在存在几个问题，想请教一下大家。1.光谱带宽。可变和固定带宽相比，应用的范围肯定是更广，但价格至少贵1万，实用的意义有多大？2nm左右是否已经能够满足绝大部分时候的应用？如果选择可变，又是用在什么地方呢？2.不同档次的仪器，价格可能相差将近一倍，但性能指标似乎差异不大，而分光光度计一方面使用频率较低，一方面技术比较成熟故障率都很低，是多花一倍的钱买个cary50什么的还是节省一点买个4802更实际？3.对于杂散光、噪声、光度准确度和重复性，的确是很重要，但似乎大家都能达到或远远超过实际使用时的要求（至少是绝大部分时候）。那么对这些指标到底该要求到什么程度呢？一味追求更高指标有意义吗？理论的东西都知道，名牌的高档的指标高的肯定有他的优势，但适合自己才是最重要的，尤其是作为企业，考虑的不光是品牌和性能，成本也是必不可少的。了解太少，选择太难，希望有熟悉分光光度计的朋友帮帮忙，从实用的角度帮我介绍、分析一下，或者推荐一些（包括但不限于上述）品牌型号，并说一说理由。万分感激！[em0716]

分光光度计的应用常识分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230标示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。

分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中，将每一种单色光分离出来，并测量其强度的仪器叫做分光光度计。分光光度计分类：原子吸收分光光度计、荧光分光光度计、可见分光光度计、红外分光光度计、紫外可见分光光度计 不同的分类有不同的应用领域： 　　原子吸收分光光度计为冶金、地质环保、食品、医疗、化工、农林等行业的材料分析及质量控制部门进行常量、微量金属（半金属）元素分析的有力工具，是生产、教育、科研单位分析实验室的比备常规仪器之一。　　荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。应用于科研、化工、医药、生化、环保以及临床检验、食品检验、教学实验等领域。　　可见分光光度计具有透射比,吸光度,浓度直接测定,有自动调0%τ,100%τ功能.能选配5cm光径比色架及2.3.5cm矩形比色皿扩大测定范围.可选配PC软件包,经RS232C联结PC机,打印机实施功能扩大.广泛应用于治金、治药、食品工业、医药,卫生,化工,学校,生物化学,石油化工, ,质量控制,,环境保护及科研实验室等化学分析等。 　　红外分光光度计. 一般的红外光谱是指2.5-50微米（对应波数4000－－200厘米-1）之间的中红外光谱，这是研究研究有机化合物最常用的光谱区域。红外光谱法的特点是：快速、样品量少（几微克-几毫克），特征性强（各种物质有其特定的红外光谱图）、能分析各种状态（气、液、固）的试样以及不破坏样品。红外光谱仪是化学、物理、地质、生物、医学、纺织、环保及材料科学等的重要研究工具和测试手段，而远红光谱更是研究金属配位化合物的重要手段。　　紫外可见分光光度计该仪器操作简单、功能完善、可靠性高，在国内居领先水平。该仪器操作简单、功能完善、可靠性高，可广泛用于药品检验、药物分析、环境检测、卫生防疫食品、化工、科研等领域对物质进行定性、定量分析。是生产、科研、教学的必备仪器。（选自网络，侵删）

本人实验室主要测电镀污水金属离子，如铜、锌、铬、镍等几种金属离子，用的是分光光度法，我想请问一下各位朋友，用哪一种分光光度计合适一点？麻烦多给意见，急，谢谢

校准证书上给出分光光度计透射比不确定度为1.0%，k=2，能否计算出吸光度的不确定度，如何计算？

[font=黑体][size=4]分光光度计的应用常识[/size][/font]分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。　　分光光度计的简单原理　　分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　核酸的定量 　　核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长 260 nm。 每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上 述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定 可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。　　事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和 溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定 读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗 粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。　　从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气 泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的 比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。　　除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如 A 260 / A 280 的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。　　蛋白质的直接定量（UV法）　　这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。　　蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除 320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A，最佳的线性范围在 1.0-1.5 之间。实验中选择 Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A 280 的吸光值的变化范围不超过 1%，表明结果非常稳定。　　漂移的原因是因为 Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。　　蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如 DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。　　比色法蛋白质定量　　蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。　　比色方法一般有 BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。　　Lowry 法：以最早期的 Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2+反应，产生蓝色的反应物。但是与 Biuret 相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含 EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。　　BCA（Bicinchoninine　acid　assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产 生 Cu+，后者与 BCA 形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在 562 nm 波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于 Lowry 法，操作简单，敏感度高。但是与 Lowry 法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。　　Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰 595 nm。其最大的特点是，敏感度好，是 Lowry 和 BCA 两种测试方法的 2 倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定１小时，方便结果；而且与一系列干扰 Lowry，BCA 反应的还原剂（如 DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。　　某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以 同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller 等测试人奶中的蛋白，结果 Lowry，BCA 测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry 测试细胞匀浆中的蛋白质，以 BSA 作标准品，浓度1.34 mg / ml，以 a 球蛋白作标准品，浓度 2.64 mg / ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品 的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品 （包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外， 非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。　　细菌细胞密度（OD 600）　　实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600 是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。 以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验 中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能 离心，保持细菌悬浮状态。　　分光光度计的重要配件 —— 比色杯　　比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。 一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性 的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。　　由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。 目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需 50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。 随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实 验室的必备设备之一。

紫外分光光度计根本作业原理和红外光谱仪类似，使用必定频率的紫外可见光照耀被剖析的有机物质，导致分子中价电子的跃迁，它将有挑选地被吸收。一组吸收随波长而改变的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，关于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因而测量光谱可以进行定性剖析，而且根据吸收与已知浓度的标样的对比，还能进行定量剖析。　　紫外-可见分光光度计　　紫外-可见分光光度计的类型很多，但可概括为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　1、单光束分光光度计　　经单色器分光后的一束平行光，轮番经过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简便型分光光度计结构简略，操作方便，维修容易，适用于惯例剖析。　　2、双光束分光光度计　　经单色器分光后经反射镜分解为强度持平的两束光，一束经过参比池，一束经过样品池。光度计能主动对比两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它变换成吸光度并作为波长的函数记载下来。　　双光束分光光度计通常都能主动记载吸收光谱曲线。由于两束光一起别离经过参比池和样品池，还能主动消除光源强度改变所导致的差错。　　3、双波长分光光度计　　由同一光源宣布的光被分红两束，别离经过两个单色器，得到两束不同波长1和2 的单色光;使用切光器使两束光以必定的频率替换照耀同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波利益的吸光度差值。关于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)剖析，以及存在布景搅扰或共存组分吸收搅扰的情况下，使用双波长分光光度法，通常能进步办法的灵敏度和挑选性。使用双波长分光光度计，能取得导数光谱。　　经过光学系统变换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长作业方式。假如能在1和2处别离记载吸光度随时刻改变的曲线，还能进行化学反应动力学研讨.

分光光度计在低温下多少度还能正常检测？

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。　　　　分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　　　核酸的定量 　　核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。　　　　事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。　　　　除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。　　　　蛋白质的直接定量（UV法） 　　这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg 公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm 的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于[f

[color=#DC143C]分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。　　分光光度计的简单原理　　分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　核酸的定量 　　核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长 260 nm。 每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上 述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定 可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。　　事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和 溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定 读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗 粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。　　从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气 泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的 比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。　　除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如 A 260 / A 280 的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。　　蛋白质的直接定量（UV法）　　这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。　　蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除 320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A，最佳的线性范围在 1.0-1.5 之间。实验中选择 Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A 280 的吸光值的变化范围不超过 1%，表明结果非常稳定。　　漂移的原因是因为 Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。　　蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如 DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。　　比色法蛋白质定量　　蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。　　比色方法一般有 BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。　　Lowry 法：以最早期的 Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2+反应，产生蓝色的反应物。但是与 Biuret 相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含 EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。　　BCA（Bicinchoninine　acid　assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产 生 Cu+，后者与 BCA 形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在 562 nm 波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于 Lowry 法，操作简单，敏感度高。但是与 Lowry 法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。　　Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰 595 nm。其最大的特点是，敏感度好，是 Lowry 和 BCA 两种测试方法的 2 倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定１小时，方便结果；而且与一系列干扰 Lowry，BCA 反应的还原剂（如 DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。　　某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以 同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller 等测试人奶中的蛋白，结果 Lowry，BCA 测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry 测试细胞匀浆中的蛋白质，以 BSA 作标准品，浓度1.34 mg / ml，以 a 球蛋白作标准品，浓度 2.64 mg / ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品 的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品 （包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外， 非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。　　细菌细胞密度（OD 600）　　实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600 是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。 以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验 中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能 离心，保持细菌悬浮状态。　　分光光度计的重要配件 —— 比色杯　　比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。 一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性 的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。　　由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。 目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需 50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。 随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实 验室的必备设备之一。 [/color]