炭疽杆菌噬菌体

p　　当国民还笼罩在非洲猪瘟疫情阴霾下，非洲、东欧等国家相继向世界动物卫生组织(OIE)报告：发生炭疽病疫情。/pp　　strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "意大利、亚美利亚、白俄罗斯相继发生炭疽病疫情/span/strong/pp　　9月16日，意大利兽医公共卫生部向OIE报告称，意大利发生了炭疽杆菌疫情。感染动物为牛，疑似病例42例，确认病例3例，死亡3例，/pp　　9月2日，亚美尼亚农业部食品安全局向OIE报告称，亚美尼亚发生炭疽杆菌感染疫情。感染动物为牛，疑似病例10例，确认病例1例，死亡1例。/pp　　8月19日，哈萨克斯坦农业部兽医管理和监督委员会向OIE报告称，哈萨克斯坦发生炭疽杆菌疫情。这次在牛(323例)、马(53例)、绵羊(113例)、猪(126例)中均发现炭疽病疑似病例。/pp　　8月12日，白俄罗斯农业和食品部向OIE报告称，白俄罗斯发生了炭疽杆菌疫情，感染动物为马。/pp　　8月7日，阿塞拜疆食品安全局向OIE报告称，阿塞拜疆发生了炭疽杆菌疫情。感染动物为绵羊，疑似病例140例，确认病例1例，死亡1例。/pp　　… … /pp　　strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "何为炭疽病?/span/strong/pp　　炭疽(anthrax)是炭疽杆菌(iBacillus anthracis/i)引起的人畜共患的急性传染病。炭疽主要为食草动物(牛、羊、马等)的传染病。人接触患炭疽的动物后，可以受染而患病。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 259px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/1c4e00fc-fd2e-41e5-b582-afa92414f8c8.jpg" title="微信图片_20190918142301.jpg" alt="微信图片_20190918142301.jpg" width="600" height="259" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "图片来自网络/pp style="text-indent: 2em "常见的炭疽有三种类型：皮肤炭疽，肺炭疽和肠炭疽。分型不同临床症状也不同。皮肤炭疽主要是皮肤斑丘疹，水泡，水泡破溃后皮肤出现黑色结痂，结痂脱落后成疤，同时伴有发热、头疼、淋巴结和肝脾肿大等。肺炭疽的主要表现为高热、呼吸困难、血样痰及胸痛等。肠炭疽的主要表现为恶心呕吐、腹痛、腹胀和血水样便等。/pp　　不管哪种类型炭疽病都具有传染性，而且病情较重，不及时治疗病死率高!/pp　　世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。/pp　　对于如此具有高传染及高病死率的疾病，除了临床症状检查比对，实验室会用哪些方法检测?/pp　　strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "实验室检查方法/span/strong/pp　　span style="color: rgb(255, 0, 0) "1.外周血象/span/pp　　(1)白细胞计数：一般为(10～20)× 10*9/L，有的增至(60～80)× 10*9/L。/pp　　(2)白细胞分类计数：中性粒细胞显著增多。/pp　　(3)血小板计数：血小板可减少。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 500px height: 295px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201909/noimg/e66c2ee0-aeee-40dd-bf1f-e74daf7fcb9d.gif" title="unicel-dxh-800-25.gif" alt="unicel-dxh-800-25.gif" width="500" height="295" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "血液分析仪/pp　　span style="color: rgb(255, 0, 0) "2.细菌学检查/span/pp　　(1)涂片检查：酌情采集分泌物、痰液、粪便、血液和脑脊液作涂片染色镜检，可见粗大的革兰阳性杆菌。/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/86f37d8d-cb82-439a-a118-83bb9a2314c8.jpg" title="C114040.jpg!w300x300.jpg" alt="C114040.jpg!w300x300.jpg"//pp style="text-align: center "涂片检查用显微镜/pp　　(2)细菌学培养：取分泌物、痰液、粪便、血液和脑脊液等进行细菌学培养，可有炭疽杆菌生长。/pp　　(3)细菌学鉴定：其鉴定方法有串珠湿片法、荧光抗体染色法和噬菌体裂解试验等。/pp　span style="color: rgb(255, 0, 0) "　3.动物接种/span/pp　　将上述标本接种于家免、豚鼠与小白鼠皮下，24h后出现局部的典型肿胀、出血等阳性反应。接种动物大多于48h内死亡，从其血液与组织中可查出和培养出炭疽杆菌。/pp　　span style="color: rgb(255, 0, 0) "4.血清学检查/span/pp　　近年来用荧光抗体法检测特异性抗体作快速诊断。/pp　　span style="color: rgb(255, 0, 0) "5.Asco1i沉淀试验/span/pp　　主要用于检验动物皮毛与脏器是否染菌。/pp　　span style="color: rgb(255, 0, 0) "6.其他辅助检查/span/pp　　X线摄片：肺炭疽可见支气管肺炎、胸腔积液、纵隔影增宽等。/pp　　那么如何才能预防炭疽?最重要的一点就是不接触传染源。/pp　　炭疽的传染源主要是病死动物，strong病死的牛、羊肉以及来源不明的肉制品千万不能食用，正规渠道购买的牛羊肉都是经过检疫的，只要烹饪时能煮熟煮透，就可放心食用/strong。发现牛、羊等动物突然死亡，不接触、不宰杀、不食用、不买卖，立即报告当地农业畜牧部门。/p

开学季又到了实验汪又要去“搬砖”了如何优雅的搬砖还不用求助师兄师姐当然是关注“小奥课堂”栏目啦今天小奥为各位介绍的 是一篇干货满满的 噬菌体展示方法实践手册 “噬菌体的扩增与定量” 这是一份难得的学霸笔记 请收好（收藏）！ Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、全人源转基因小鼠发现平台进行有效对接，能够广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。本文将针对噬菌体展示技术的噬菌体增殖和扩增实验细节进行探讨、分享具体实验过程的经验，以其原理为根本来指导实验过程，以精益求精的实验过程，增加噬菌体展示技术在抗体发现过程中的成功率。Part 2 ——噬菌体文库 扩增及展示的基本原理 | 现在普遍应用的噬菌体展示抗体片段的体系称之为“3+3体系”（3为噬菌体的p3衣壳蛋白）；3+3代表着p3衣壳蛋白有两个来源：噬菌粒（phagemid）M13KO7辅助噬菌体(Helper Phage）菌粒（phagemid）上的p3蛋白融合了抗体片段的基因，是文库多样性的关键；辅助噬菌体(Helper Phage)上的p3蛋白为噬菌体天然的p3蛋白。*噬菌粒是一种比较小的质粒载体，在大肠杆菌感受态中有较高的转化效率，并且能够在大肠杆菌中扩增。 含有噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体(Helper Phage)感染后，会利用大肠杆菌的酶系统、原料和能量进行扩增,最终包含噬菌粒的噬菌体从大肠杆菌释放出来，该子代噬菌体的p3衣壳蛋白会展示抗体片段。Part 3 ——在噬菌体扩增过程中 遇到的难题和对应的解决方案 | 噬菌体的建库过程实际上是抗体片段基因多样性的传递过程： 从血样中抗体基因的多样性传递到噬菌粒的过程，是噬菌粒文库构建的内容； 从噬菌粒的多样性传递到含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性，是噬菌粒质粒电转大肠杆菌的内容； 从含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性传递到噬菌体的多样性则是噬菌体扩增的内容，也是本文实验经验关注的问题。噬菌体的扩增最终目的是将噬菌粒中单一拷贝的抗体片段基因通过噬菌体的扩增过程变成10-100个拷贝，且这些拷贝基因能够在噬菌体表面的p3蛋白上展示出抗体蛋白片段。在噬菌体的扩增过程要使得文库的多样性得以保持和传递，需根据文库的初始大小确定在扩增过程中含有噬菌粒的大肠杆菌的数目和体积，对应加入的辅助噬菌体的多少进行有效感染，以及扩增后加入多少含有噬菌粒的噬菌体进行淘选等需要一一计算评估的问题，不同文库大小的噬菌体库在扩增过程中需要的扩增体积是不一样的。一份固化的实验方案很有可能会导致文库多样性的丢失。 要弄清楚这些问题，首先要具备以下几点基础的前置知识：（??以下内容全部划重点！！！）1. TG1大肠杆菌在OD600的读数：1OD代表的菌浓度为1e9个/ml。2. 噬菌体/辅助噬菌体在TG1处于对数生长期时有比较好的感染效率，TG1处于对数生长期的OD600值在0.4-0.8。3. TG1在对数生长期的生长速度是20分钟一代，需要密切关注TG1的生长，及时取菌进行实验。4. 辅助噬菌体和TG1的比值MOI在20：1时能够保证所有TG1被感染上。5. 含有噬菌粒的噬菌体能够感染正常的TG1大肠杆菌，并将噬菌粒留在TG1中并随着TG1的扩增进行扩增，在无辅助噬菌体的情况下无噬菌体的扩增。6. 噬菌粒质粒含有青霉素抗性，辅助噬菌体含有卡那霉素抗性。7. 含有噬菌粒的噬菌体可以通过感染正常的TG1，梯度稀释涂青霉素抗性的琼脂板进行滴度测定。8. 3+3模式下含有噬菌粒的噬菌体展示出p3融合抗体片段蛋白的效率比较低，只有5%-10%,在进行淘选时，加入的噬菌体的滴度应是文库多样性的100倍以上。 还有一个比较关键的问题是噬菌体作为一种病毒，很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境，从而感染F因子阳性的大肠杆菌。 （心疼一下生物汪，冒着生命危险搬砖啊！） 在噬菌体展示的相关实验需要在相对封闭的实验室进行以避免噬菌体对于大肠杆菌的污染，特别是在培养正常的TG1大肠杆菌时。噬菌体的灭活方式通常是紫外照射半小时以上。（合格的生物汪，是个莫得感情的病毒杀手！） Part 4 ——噬菌体扩增和定量 具体实验过程的分享 | 以下是以一个文库大小为1E9的噬菌体文库进行扩增的实验方案。*如果文库过大或者过小，可依比例增减扩增体积。 Day 1（搬砖秃头的第一天）1. 取含有噬菌粒的TG1菌种1ml (菌数目为1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培养基250ml摇瓶中，使用奥豪斯摇床37度220rpm摇菌摇床至OD600为约0.5。2. 取OD600为约0.5的菌液20ml (菌数目为1E10),按照MOI为20：1加入pfu为2E11的辅助噬菌体M13 K07，37度220rpm振荡半小时进行感染。3. 取感染后菌液到50ml离心管使用奥豪斯离心机5816R 3200g离心10分钟，去除培养基，以除去培养基中的葡萄糖对噬菌粒中p3蛋白融合了抗体片段蛋白表达的抑制。4. 用2xYT-AK培养基重悬菌团，将培养基加至400ml，用1L摇瓶在30度220rpm过夜摇菌。 Day 2（搬砖秃头的第二天）5. 将400ml菌液均分至大的离心瓶中，使用奥豪斯离心机5816R 10000g离心10分钟，取上清，10000g再次离心10分钟，去除残留的菌体碎片。6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中，在4℃孵育1小时并伴随着柔和的振荡，然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃10000g离心1小时。7. 去上清，用10mlPBS重悬噬菌体后，加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.8. 冰上孵育20分钟，然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃ 10000g离心半小时。9. 去上清液，用吸水纸吸干残留的PEG溶液，加入1-2ml的PBS重悬噬菌体，进行滴度测定。滴度测定：1. 在分隔的实验室，取正常的TG1大肠杆菌加入2xYT的培养基中，使用奥豪斯摇床摇菌至OD600值为0.5，如未能及时使用，可放入4℃ 2小时以备用。2. 将步骤9中扩增噬菌体原液用PBS稀释1E5-1E7倍。3. 取10ul噬菌体稀释液加入490ul OD600为0.5的TG1大肠杆菌中，使用奥豪斯摇床 37℃ 220rpm振荡半小时进行感染。4. 取感染液50ul均匀涂抹在含有2xYT-GA的琼脂板中，晾干后放入37℃培养箱过夜。并将未感染TG1大肠杆菌涂抹琼脂板作为阴性对照。 Day 3（搬砖秃头的第三天）5. 数2xYT-GA的琼脂板中的克隆数，根据稀释倍数计算扩增噬菌体的滴度 噬菌体滴度(pfu/ml)=（克隆数*10*50/10ul）*稀释倍数6. 取1E11-1E12的噬菌体用于淘选。试剂配方：2xYT培养基：Yeast Extract 10.0 g/L+Tryptone 16.0 g/L+NaCl 5.0 g/L2xYT-GA培养基: 2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+ 1% （W/V）葡萄糖2xYT-AK培养基：2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+50 μg/ml卡那霉素PEG溶液：20% (w/v) PEG 6000, 2.5 M NaCl Part 5仪器推荐：（做科研民工的每一天都不孤单，因为有小奥陪伴）噬菌体作为一种病毒，很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境，需要封闭的实验室，实验室所有的仪器需单独使用。奥豪斯恒温轻负载培养摇床转速范围为100-12—rpm,体积集约，功能强大，可为您的样品提供优异的摇荡效果：此外，噬菌体展示实验的过程中会有不同体积、不同转速和需要4℃条件的离心步骤，如果以多 台离心机满足实验的需求会造成实验设备资产的空置，造成极大的浪费！！！奥豪斯5816R多功能离心机和可选转子为噬菌体相关实验提供便利，一台离心机满足所有实验需求！接下来，小奥带你乘坐“帮你省科研经费”这辆车教你正确薅奥豪斯的羊毛 德国原装进口功能强大、离心效果优异的奥豪斯Frontier™ 离心机家族 推出“买一赠一”促销活动促销型号如下微量高速离心机FC5515R（冷冻型号）微量高速离心机FC5515（非冷冻型号）全新紧凑型微量离心机FC5513现在上车，还来得及哦！详情请联系奥豪斯哦！ 想了解更多关于奥豪斯Starter™ 系列产品信息？请进入「阅读全文」留下信息，我们的专业工程师将火速赶来，为您服务！ ▼

噬菌体展示应用相关载体设计的关键：1 相互结合位点的选择在蛋白酶底物噬菌体展示中，一个关键的组分是亲和性结构域，它使我们可以将底物序列和非底物序列区分开。这其中包括蛋白—蛋白相互作用、蛋白—肽段相互作用以及多组氨酸与镍螯合基质的结合。整合这几种不同的系统的要素在于，展示系统是基于高亲和性相互作用而设计的。通常，相互结合的两个物质之间的解离常数（Kd）应该至少在一个较低的nmol/L的数量级上，这样在实验中复合物的解离速度就可以比蛋白酶解的速度慢得多。例如，我们以往在这个领域中的工作中，利用的是一个hGH的高亲和性变异体，此变异体与其受体的Kd值约13pmol/L。然而，对于蛋白酶底物噬菌体展示库，挑选在适当的缓冲液条件下（例如低pH或高pH）能够被破坏的这种相互作用，将有助于选择性地富集非底物序列（被捕获而结合于固体支持物上）和最佳的底物序列（被蛋白酶解而释放）。另外一个必须考虑的是靶蛋白酶（或者其他的一些噬菌粒形成中可能碰到的蛋白酶）必须不会酶切亲和性结构域。由于这个原因，亲和性结构域一般都是一个稳定的球蛋白或者一个短的肽段。2 底物卡匣（cassette）的设计和构建底物噬菌体展示要成功，一个关键在于切割仅仅发生在亲和性（捕获）结构域和噬菌粒之间。幸运的是，丝状噬菌体对蛋白酶解有极强的抗性：在所有已知的蛋白酶中，只有枯草杆菌蛋白酶能够引起噬菌体外膜蛋白的显著降解。为使底物序列更易与蛋白酶作用，在附近的连接序列中引入一定部分柔韧性（segmental flexibility）的设计要谨慎。例如，底物序列GPGG（X）。GGPG位于亲和性结构域和pⅢ基因之间，柔韧的甘氨酸—脯氨酸接头分布于随机序列的两端。在我们的实验中，已经证实截短形式的pⅢ蛋白是有效的，但另外也有报道使用全长pⅢ蛋白也能取得成功。在多价底物噬菌体展示中，一个全长pⅢ蛋白对于感染是必需的。一些其他的重要因素也主导着文库卡匣的设计，包括随机化的密码子、密码子的选择以及文库的大小，这些在第2章中有详细的描述。在许多情况下，我们不可能穷尽含有8个或8个以上的残基的整个底物序列所有可能的排列。然而，在文库仅展示了一部分可得到的序列的情况下，我们也有可能得到关于底物特异性的相关信息。例如，要构建一个包含5个密码子的随机文库，可以先列举其中2个密码子的序列，以此作为参照序列；从中得到的信息可用于第二次的文库构建，即将此两个密码子固定，再列举另外3个密码子和（或）其他的扩展的底物序列。作为替代，可以通过整合已知的特异性决定因素并查明那些现在还较不清楚的因素，从头设计一个更集中的文库。

蒙大拿大学的研究人员在《Science》发表了关于细菌如何引起感染的新见解，可能有助于未来的抗感染治疗。 研究对象不是细菌，而是感染病毒的噬菌体，作为国家卫生研究院资助项目的一部分，帮助开发细菌感染疫苗。“噬菌体通常被视为细菌寄生虫，”该论文的合着者助理教授Patrick Secor说。由于耐抗生素的细菌流行率越来越高，利用噬菌体（噬菌体疗法）替代抗生素杀死致病细菌的研究逐渐升温。噬菌体多种多样，被认为是地球上最普遍的生物实体。“当我们寻找感染致病菌铜绿假单胞菌的噬菌体时，我们发现大多数菌株都感染了一种名为Pf的噬菌体，但这种噬菌体不会杀死它们的细菌宿主，”Secor说。当Secor和斯坦福大学的研究人员在人体伤口中寻找Pf噬菌体时，他们惊讶地发现了大量丝状噬菌体——平均每个拭子上有100万个Pf噬菌体。Secor课题组以前研究过噬菌体是如何影响细菌毒性的。“因此，我们问，这些Pf噬菌体是否可能直接与人体免疫系统相互作用？”他们与斯坦福大学的合作者一起发现，Pf噬菌体被免疫细胞识别为了病毒，识别冷病毒的细胞表面受体同样也可以识别噬菌体。“这是一个关键的发现，”Secor说。“这些噬菌体诱导了抗病毒反应，但是面对细菌感染，这是一种不适当的免疫反应。”研究人员认为，这种不适当的免疫反应使细菌在伤口或肺内获得“掩护”，从而建立感染。研究人员希望，他们的发现可以刺激新研究，通过靶向感染细菌的噬菌体发展控制感染的有效策略。

双十一结束小奥的购物车都清空了没法儿给你抄了我借ELISA实践笔记给你抄快到期末/年底了实验汪们可要抓紧搬砖咯前面三份笔记拉到文末看哦以下，可都是尖货儿哟！??Part 1 —— 前 言 | ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点：1.待测样本极具多样性，且单一样品通常也是混合物，有很大的可能存在非特异吸附；2.不同的待测样品之间可能存在较大的浓度差异，浓度的大小和亲和力的大小均会对检测结果产生影响。在进行杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发时，需要选择合适的条件使信号值主要能够表征亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响。本文是ELISA定量测定方法开发和亲和力测定方法开发的进阶版本，配体受体反应的基本原理解析，和两种应用的差异性区分是进行ELISA筛选方法的开发的基础。 Part 2 - 原理解析 - ELISA信号值和亲和力大小的关系 无论是进行杂交瘤的筛选还是噬菌体展示的筛选，其化学原理的实质是抗体和抗原可逆的相互作用，John McCafferty在Phage Display of Peptides and Proteins A Laboratory Manual一书的第七章节Phage Display：Factors Affecting Panning Efficiency中对可逆反应的数学原理有过理论的推导和实验的验证，简而概之可以用下面的公式进行描述：Abinput代表可逆反应中抗体的加入量，Aginput 代表可逆反应中抗原的加入量，Kd代表Ab和Ag的亲和力大小。由公式可知，当反应完成时，形成的抗原抗体偶联物占抗体的加入量的比值（proportion bound），是一个与抗原的加入量和亲和力大小这两个参数相关的特征函数。具体在ELISA测定过程中当抗体的加入量是恒定值时，proportion bound可以用检测的信号值来等价表示，在ELISA反应中抗原的加入量和Kd将决定信号的大小。相同浓度的抗体，因为亲和力不一样，在同一抗原浓度下其proportion bound的比例也不一样，用具体的图形演示如下图：红色实线是亲和力为1nM的抗体Ab1随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线，蓝色实线是亲和力为10nM的抗体Ab2随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线，绿色虚线为在相同抗原浓度下，Ab1/ Ab2 proportion bound的比值。在抗原浓度为10nM的条件下，90%的Ab1(Kd=1nM)和50%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物，作为ELISA检测的信号值，Ab1，Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上1.8倍的信号差异；在抗原浓度为1nM的条件下，50%的Ab1(Kd=1nM)和9.1%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物，作为ELISA检测的信号值，Ab1，Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上5.5倍的信号差异；在加入的抗体浓度是相同的情况下，加入反应的抗原的浓度越少，ELISA信号比值的差异和抗体亲和力比值的差异更具相关性。抗原的浓度决定了ELISA筛选方法的选择性！以上是关于杂交瘤和噬菌体展示筛选理论状态的推导，也是ELISA筛选结果出来了做出客观解读的理论依据，在实际的筛选应用过程中由于不同的待测抗体样品之间可能存在较大的浓度差异。在抗原浓度较高的情况下ELISA信号差异很多情况下由于抗体样品的浓度差异导致的，ELISA信号值对于亲和力大小不具有选择性；只有在抗原浓度较低时，信号值主要能够表征抗体亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响，而在ELISA方法开发时当抗原浓度较低时，相对于抗原浓度较高时，其ELISA信号值要弱很多，提升ELISA方法信号的灵敏度，如何通过优化酶联抗体的浓度，挑选显色液和选择显色时间以增强ELISA检测的信号值是一个有区分度的ELISA筛选方法的关键。当ELISA检测的信号值得到提升时，由于筛选样品复杂性，往往其背景信号也会极大的提升，如何通过封闭液，酶标板材等降低背景信号值，得到好的信噪比是一个高质量的ELISA筛选方法的另一个关键。Part 3 - 实例分享 - ELISA用于噬菌体展示筛选布 局——————(Note 1)一 般 操 作 流 程1.酶标板的制备取浓度为100 ug/ml抗原，室温溶解，混匀用包被液按如下步骤稀释至0.2ug/ml，0.5ug/ml，1ug/ml，按加样布局表加入100ml/孔，分别加入酶标板条中 (Note 2)，其中加入包被液做包被抗体的空白对照，2-8℃过夜。2.用洗涤液洗板3次，拍干，加入300ml/孔封闭液(Note 3)室温封闭1小时；洗涤液洗板3次，拍干待用；3.取出包含有阴性对照和阳性对照过夜孵育制备含有噬菌体的深孔96孔板，在奥豪斯高速离心机中2000g离心15min，取上清，稀释10倍，一一对应加入包被好酶标板中。(Note 4)4.放入奥豪斯微孔板振荡器内 (如ISLDMPHDG- 30391935)，设置37℃、600rpm振荡1小时； 5.用洗涤液洗板3次，拍干；6.抗M13 p8酶联抗体稀释到合适的浓度（Note 5），在漩涡混合器上（如VXMNFS-30392112）混匀，100ul/孔。7.放入微孔板振荡器内，设置37℃、600rpm振荡1小时； 8.用洗涤液洗板4次，拍干；9.取酶联抗体对应的TMB显色液，临用前20分钟拿出平衡到室温，在漩涡混合器上混匀；（Note 6）10.使用8道排枪以100 ml/孔加入TMB显色液；11.显色液室温避光放置10-30分钟 （Note 7）；12.使用8道排枪以100ml/孔加入终止液终止反应；13.用酶标仪测定信号值；14.结果分析（Note 8）。Note1：由于不同的噬菌体样品有不同的亲疏水性，其对酶标板材的非特异吸附强度不一样，做一块没有抗原包被的阴性对照板是十分有必要的。Positive和Negtive是和样品有同样噬菌体制备过程，Positive Stock为早已经制备好的分装保存的阳性噬菌体，前者目的是监控在不同时间内噬菌体样品制备过程的差异，后者是监控在不同时间内ELISA检测操作的差异。Note2：在包被过程中，建议选择疏水性酶标板材（polysorp）,这样可以极大的减少背景信号值，提高整个方法的信噪比。在实验初期包被的抗原浓度需要少量0.2-1ug/ml，然后根据不同包被条件下同一样品信号大小来进行判断优化。一个已知亲和力的展示阳性抗体的噬菌体是十分有必要的，根据该阳性展示噬菌体样品的信号值来确定最终筛选过程中抗原的包被浓度。抗原直接包被酶标板材上会屏蔽部分结合位点，造成部分假阴性的结果，如果条件允许可采用生物素化抗原，首先5ug/ml的链霉亲和素包板，然后加入0.05-0.2 ug/ml不等的生物素化抗原。抗原直接包被和间接包被其效率不太一样，采用间接包被可适当降低生物素化抗原的包被浓度。Note3：在有生物素化抗原参与的ELISA实验中，不要加入含脱脂奶粉的封闭剂，脱脂奶粉含有微量生物素，会干扰整个检测体系。Note4：噬菌体上清液的稀释比例，可提前根据阳性噬菌体样品做好稀释预实验进行确定。Note5：应选择抗噬菌体的P8蛋白的酶联抗体，噬菌体有2000个以上的P8蛋白，适当的增加酶联抗体的浓度可以提高方法的灵敏程度，笔者曾增加5倍的酶联浓度得到了3倍的信号提升。Note 6：市面上TMB底物最低和最高有10倍的显色差异，建议选择市面上最强的TMB显色底物。需要提前确认检测仪器的信号线性范围，比如一般的酶标仪吸光度值的信号线性范围在0-3，吸光度值在3-4之间为非线性的，信号值超过3时，信号和亲和力的相关性变差。Note 7：显色时间可适当的延长，一般来说在30分中内显色的信号值和显色的时间成线性。Note 8：条件的选择最终是通过阳性噬菌体的信号值决定的，阳性噬菌体的亲和力大小是一个非常重要的选择参数。如阳性噬菌体的亲和力为1nM时，筛选的目的是得到高亲和力的抗体，可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为0.5时的条件作为最终的筛选条件，这样很多OD值很小的低亲和力的抗体均被过滤掉；筛选的目的是尽可能得到多的亲和力抗体，可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为2-3时的条件作为最终的筛选条件，低亲和力的抗体在OD值上也不会太小，可以得到体现。不论如何抗原的浓度大小决定了选择性，选择较小的抗原浓度进行反应是信号和亲和力大小匹配的关键和趋势性选择，信号大小的调节可以通过酶联抗体浓度，高显色能力的显色液和显色时间进行调节。如果在一块板的检测中未知样品的信号值大小呈合理的分布是ELISA条件较好的表现。Part 4 - 总结 - ELISA用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是ELISA用于亲和力测定方法的一种变种，想要得到好的信号和亲和力大小的相关性，低抗原浓度条件下进行方法学开发是必须的。低抗原浓度条件下会有低的信号值，通过增加酶联抗体浓度，选择高显色能力的显色液和延长显色时间，增加ELISA灵敏程度是ELISA优化的技术方向。由于检测样品的多样性和复杂性，高灵敏的ELISA检测体系必然会导致背景信号的增加，无法得到很好的信噪比，疏水性的酶标板条，尽可能低的样品的稀释倍数是解决这个问题的关键。一个稳健的能用于杂交瘤和噬菌体展示筛选方法是ELISA各种耗材，试剂和实验条件的完美组合，需要对试剂耗材的多种可能进行探索，也是平台经验的系统汇总，以下是用于筛选方法的优化方向的汇总。 以上，就是小奥带给大家的第四篇ELISA方法学开发的干货内容！我们下期再见哦！

美国国防部官员27日表示，位于犹他州的一处国防部实验室日前不慎将活炭疽杆菌样本送到了马里兰州一间商用实验室。　　综合美国媒体报道，美国国防部官员27日表示，位于犹他州的一处国防部实验室日前不慎将活炭疽杆菌样本送到了马里兰州一个商用实验室，后被工作人员发现。另外8个州以及韩国的一处美军基地实验室同样收到了炭疽杆菌样本，当局正在调查是否有活样本同被错误送出。　　目前9个州的4名工作人员以及22名驻韩美军正在接受暴露后预防治疗，不过国防部发言人沃伦表示，尚未发现任何感染病例，这起事件也不会对公众造成威胁。美国国防部实验室定时通过辐射使炭疽杆菌失去活跃性，再将这些&ldquo 已死&rdquo 的样本运至其他实验室作科研用途。　　5月22日，位于马里兰州的实验室确认收到由犹他州达格韦试验场寄来的活炭疽菌样本，并要求国防部进行调查，目前该样本已按照程序被销毁。同样收到该试验场样本的还有位于得克萨斯、纽约、加利福尼亚、田纳西等8个州的实验室以及位于韩国的美国乌山空军基地，当局正在调查上述实验室收到的是否同样为活样本。　　据报道，此次&ldquo 捅娄子&rdquo 的达格韦试验场用于试验美军对生化武器的防御能力，2011年，该试验场因出现一瓶致命神经毒剂VX失踪事件被关闭，该毒剂后被找到，但标签被贴错。　　美国历史上最致命的炭疽杆菌袭击事件发生在2001年9月，当时5封装有炭疽杆菌的信件被寄给数位国会议员和媒体，至少22人感染肺炭疽或皮肤炭疽，其中5人病发死亡。2008年，FBI经过数年侦查后认定，陆军生物防御实验室研究员布鲁斯· 埃文斯应对该案件负责，同年埃文斯还未受到指控就自杀身亡。此后FBI将埃文斯定为2001炭疽袭击的唯一责任人，不过这个结果受到极大质疑，有人认为埃文斯作为一名生物学家，并不具备将炭疽变为可吸入粉末的能力。　　人类感染炭疽杆菌后，会出现皮肤脓疱、咳嗽、吐痰、呼吸困难、脾脏肿胀等症状。尽管炭疽可在发病初期通过及时用大量抗生素治疗，但它的病理进展极快，因此致死率高。

p　　近日，中国科学院深圳先进技术研究院的研究团队在国际权威学术期刊Microbiome(《微生物组》)上发表最新研究，首次证实了人体肠道噬菌体组和糖尿病的关联性，为应用噬菌体干预肠道菌群，以及预防和治疗某些疾病提供了依据。/pp　　噬菌体是一类专一感染细菌的病毒，作为细菌的天敌，2014年被美国国立卫生研究院列为对抗耐药菌武器之一，同时也是人体肠道微生物组的重要组成部分。肠道噬菌体种类丰富、数量巨大，通过塑造肠道菌群结构，进而影响人体健康。但是，人们目前对于噬菌体的认识还非常匮乏。/pp　　论文作者首次利用已有的人体肠道微生物大数据，开发了一系列生物信息学方法，挖掘其中的噬菌体基因组序列，鉴定了大量的全新肠道噬菌体，揭示了肠道噬菌体组的多样性和新颖性。通过对这些噬菌体基因组序列的分析，科研人员发现这些噬菌体携带大量的功能基因，这些基因和宿主细菌在肠道环境中的生存适应性相关。/pp　　研究显示糖尿病患者的肠道细菌菌群组成变化和糖尿病有着显著的相关性。由于噬菌体—细菌之间是捕食者—被捕食者的关系，通常认为糖尿病人肠道菌群的变化会影响噬菌体的组成差异。但是，科研人员首次发现了肠道噬菌体的数量在糖尿病患者肠道中的数量显著高于对照组，经过进一步分析发现肠道细菌和噬菌体之间存在复杂的关系网络，细菌与噬菌体之间不是简单的“此消彼长”的关系。/pp　　据介绍，这个工作成果连同近期其他实验室发在《细胞》上的工作成果，都暗示着噬菌体—细菌—宿主两两之间存在着相互作用，这种关系有可能影响着人体的健康。未来，解析这些关系将是该领域的研究热点。/p

令人意外！噬菌体携带抗生素耐药性基因根据一项新的研究，来自多种环境的病毒组携带着抗生素耐药性基因。这一结果提示着噬菌体---感染细菌的病毒---可能在转移让细菌产生耐药性的基因中发挥着作用。相关研究结果将发表在2017年1月那期Environmental Pollution期刊上，论文标题为“Exploring the contribution of bacteriophages to antibiotic resistance”。来自西班牙赫罗纳大学的研究人员扫描了来自未经净化的污水、人粪便、猪粪便、淡水环境和海洋环境的病毒组，以便寻找抗生素耐药性存在的证据。他们发现这样的基因存在于所有分析的病毒组中，尽管它们的丰度存在差异。在人类相关的病毒组中，研究人员发现相对较少的耐药性基因，它们中的大多数与四环素耐药性相关联。他们在其他的样品中观察到更加丰富的抗生素耐药性基因。在猪粪便病毒组中发现的绝大多数耐药性基因是编码β-内酰胺酶的基因，而未经净化的污水、淡水和海洋样品携带许多各种不同的耐药性基因，包括那些赋予对至少三种不同的抗生素产生多药耐药性的基因。论文通信作者、赫罗纳大学加泰罗尼亚水研究所科学家José Balcázar写道，“我们的研究表明环境是一个巨大的噬菌体库，它们中的大多数携带着抗生素耐药性基因。”因存在细菌DNA污染，Balcázar和同事们排除了他们的病毒组数据中的一些数据。Balcázar也强调应更加深入地研究他的团队在人类相关的病毒组中发现的较低数量的耐药性基因。他写道，“还需更多数量的样品来证实这一观察结果。”Balcázar说，噬菌体在细菌之间转移耐药性基因的机制和噬菌体在基因转移中发挥多大重要的作用还需在未来的研究中加以阐明。

中国科学院南海海洋研究所研究员王晓雪团队建立了一种不依赖于噬菌体基因序列相似性的原噬菌体de novo预测新算法，集成分析流程的工具名为Prophage Tracer。9月22日，相关研究成果在线发表在《核酸研究》上。　　烈性噬菌体侵染细菌宿主后，大量繁殖，裂解宿主细胞释放子代噬菌体粒子。温和噬菌体则是进入宿主细胞内，将自身的DNA整合在宿主的基因组中，随着宿主细胞的复制而复制。这一过程称噬菌体的“溶原化”，整合在宿主基因组中的噬菌体DNA称“原噬菌体”（prophage）。特定条件能重新激活原噬菌体使其裂解宿主。研究发现在人、小鼠肠道以及珊瑚微生物组中溶原化的温和噬菌体比裂解状态更普遍。温和噬菌体的溶原-裂解转换是微生物生态领域的重要科学问题之一。　　温和噬菌体能和宿主形成长期共生关系，其整合切离等可以破坏或恢复宿主的基因正常功能，是宿主基因表达调控的重要途径。研究团队前期发现，希瓦氏菌的原噬菌体CP4So可以在低温诱导条件下发生切离，是细菌一种重要的适冷机制，且CP4So的切离受到宿主温度依赖性的H-NS磷酸化调控。因此，精确鉴定细菌中的原噬菌体及其插入位点对于研究温和噬菌体与宿主的共生关系至关重要。当前，鉴定原噬菌体的方法依赖于利用已知的噬菌体进行序列相似性检索。然而，噬菌体的基因组变异快，基于序列相似性检索方法较难发现未知类型噬菌体。此外，对噬菌体插入位点的预测不准确，较难区分原噬菌体携带的“cargo基因”和宿主基因的边界。　　为了解决上述问题，汤开浩等建立了一种从头预测原噬菌体的方法（如图）。该方法利用原噬菌体整合切离过程中会产生基因组结构变异基因组序列。这些序列隐藏在细菌基因组、转录组测序数据的reads中。研究建立重叠的序列比对方法，追踪和挖掘埋藏于测序原始数据中reads。只需甄别到1-2条reads便能精确定位原噬菌体（精确到单个碱基）。该方法不依赖于序列相似性，可预测未知的噬菌体。研究在珊瑚共附生细菌中鉴定到九个温和噬菌体，两个为新颖的温和噬菌体。　　研究工作得到国家杰出青年科学基金、国家自然科学基金水圈微生物重大研究计划、国家自然科学基金面上项目、国家重点研发计划等的资助。Prophage Tracer流程

2011年11月22日，由北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目"高效检测炭疽杆菌纳米技术研究"顺利通过国家质检总局专家组的鉴定。　　会上，来自深圳检验检疫局、军事医学科学院、中国检科院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料，听取了项目组的工作报告及技术报告，并对研究过程进行了质询。经审议鉴定后，专家组认为：该项目研究技术新颖，具有创新性，研究成果达到国际先进水平，一致同意项目通过鉴定，并建议在国境口岸推广应用。　　在国家质检总局卫生司、科技司及系统外有关单位领导和专家的关心和指导下，项目组通过3年认真细致的研究，成功建立了基于纳米金颗粒结合不对称PCR检测炭疽杆菌核酸序列的技术，利用纳米材料独特性检测白色粉末(炭疽杆菌)的特异、高效检测技术方法，填补了病原菌纳米检测领域的空白。项目组还制备了特异性高、反应时间短、方便实用的炭疽纳米技术检测试剂盒，获得国内及PCT国际专利各一项，有效解决了炭疽杆菌检测环境要求高、检测时限长的问题，为在国门第一道屏障线的国境口岸快速、准确地开展反生物恐怖工作提供了有力的技术保障，对加强口岸生物恐怖因子反恐工作、提高快速应对生物恐怖事件能力、保护人民生命健康、生产生活安全具有重要意义。　　车志军副局长代表项目组向鉴定委员会介绍了项目背景及基本情况。在美国"9.11"事件后，口岸生物恐怖事件时有发生。因此，国家质检总局、卫生部多次联合发文要求各口岸检验检疫部门建立健全应急机制、建立完善技术手段，大力加强核生化反恐力度。北京检验检疫局利用多年精心打造的纳米检测技术平台，联合国家纳米科学中心共同开展针对炭疽杆菌的特异高效纳米检测技术研究，通过高科技手段强化国境口岸安全管理。　　杨金良巡视员祝贺项目顺利通过鉴定，并对长期以来关心和支持该局科技工作的专家表示感谢。他希望，项目组在会后根据专家组提出的建议继续完善研究成果，做好成果验证工作，将研究成果应用到日常的检测工作当中，接受实践的检验。　　该局副局长车志军，巡视员杨金良出席了本次鉴定会。

近年来，使用MALDI-TOF飞行时间质谱进行微生物鉴定的方法已经普及，并广泛用于临床微生物鉴定、食品和药品工业领域质量控制以及微生物研究领域。然而这种常规方法，也有个别菌种鉴定起来有局限性，例如鉴定混合菌或孢子形成的细菌。我们尝试换种方法来进行微生物的鉴定。通过MS/MS检测胰蛋白酶消化的细菌蛋白和数据库检索的肽段来鉴定蛋白，锁定菌种种类，且可以从多个峰中选择特定的峰，用于蛋白混合物鉴定。我们使用胰蛋白酶珠进行蛋白质的快速酶解，使用岛津MALDImini-1数字离子阱MS/MS功能来鉴定芽孢杆菌。 MALDImini-1基质辅助激光解吸电离数字离子阱质谱仪。数字离子阱（DIT）技术是岛津独有的原创技术，紧凑迷你的体积，仅占用A3纸大小面积，即可实现MS多级的检测。数字离子阱是由数字信号驱动的四极离子阱，使用矩形波RF捕获离子，更容易调谐频率，无需使用高压即可捕获高质量离子。质量范围上限可达70000m/z，可拓展更广泛的应用。 将已形成芽孢的枯草芽孢杆菌取样，按上图工作流程制备样品。胰蛋白酶珠2ul，在湿润环境和37℃温度下，30分钟，对芽孢蛋白进行酶解。通过使用胰蛋白酶珠可缩短通常需要数小时以上的酶解时间。酶解完成后，添加基质溶液1ul，干燥后MALDImini-1即可开始MS，MS/MS检测。 MS/MS离子数据库检索结果 通过MALDImini-1的MS/MS功能与能够快速酶切的胰蛋白酶珠消化芽孢蛋白质方法组合，特异性多肽序列可以对芽孢杆菌进行快速鉴定。也有报道对食物中毒菌蜡状芽孢杆菌和高传染性炭疽芽孢杆菌进行了相同的研究。 新闻稿内容来源：岛津应用新闻NO.B112 应用文献下载

2023年3月17日经国家市场监督管理总局（国家标准化管理委员会）批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准，代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年，经过了3轮意见征求，有280+单位参与研制与验证，有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作，最终大功告成。本次修订微生物指标主要内容：新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是新增检测指标，有些老师不清楚检测过程中需要用到哪些设备，我们根据标准的要求做个简单介绍。根据标准要求我们需要准备以下仪器和耗材：1. 电子天平：实验室常用仪器2. pH计或精密pH试纸：实验室常用仪器或耗材3. 恒温培养箱：实验室常用仪器4. 冰箱：实验室常用仪器5. 恒温水浴箱：实验室常用仪器6. 显微镜：实验室常用仪器7. 无菌吸管：实验室常用耗材或仪器8. 无菌试管：实验室常用耗材9. 无菌平皿：实验室常用耗材10. 厌氧培养装置：华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统11. 过滤设备：华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置12. 滤膜:实验室常用耗材13. 无齿镊子：实验室常用耗材其他会用到的设备：HD-C系列菌落计数仪、HD-DT系列自动样品稀释仪、HD-GM系列全自动革兰氏染色仪、HD-S系列自动培养基分装仪、HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统产气荚膜梭状芽孢杆菌检测流程图一、 样品1. 污染较轻的水样，可直接取100 ml水样进行检验。2. 污染严重的水样，可使用0.1%缓冲蛋白胨水将水样按10倍系列稀释，取100ml进行检验。使用华端生物HD-DT系列自动样品稀释仪：自动称重，自动按比例稀释。二、 过滤水样先用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将滤膜正面朝上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100 ml水样注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07X104Pa(-0.5 个大气压)下抽滤。每次试验均需要用100 mL0.1%缓冲蛋白胨水讲行空白对照。使用华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置：配备直排泵，无需废液瓶，直排废液；火焰灭菌支架和滤杯，提高实验效率。三、 厌氧培养过滤完水样后，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，移滤膜倒置在SPS琼脂培养基上，滤膜截留细菌面与培养基完全贴紧，避免气泡产生，然后将平皿倒置于厌氧培养装置内，于36℃±1℃厌氧培养18 h~24 h，计数黑色菌落数。使用华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统：使用灵活、成本低，培养效果有保障，操作简单、智能。四、菌落计数对滤膜上证实为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落进行计数使用华端生物HD-C系列菌落计数仪：手动菌落计数器辅助计数，操作方便；全自动菌落计数仪：软件自动计数，计数快捷、准确。五、 细菌鉴定用上述培养液涂片，革兰氏染色、镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽抱,位于菌体中央或近端，其宽度一般不超过菌体宽度。使用华端生物HD-GM系列全自动革兰氏染色仪：自动化的染色仪使革兰氏染色实验自动化、标准化，批量大时可节约大量时间。使用华端生物HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统：标准化的试剂操作，仪器自动判读结果，避免人工判读偏差。六、其他仪器使用华端生物HD-S系列自动培养基分装仪：自动分装培养基或者其他微生物试剂，方便、快速。使用华端生物HD-M系列微生物质谱快速鉴定仪：相比传统鉴定方式更快出结果、准确性更高、操作更简单、检测范围更广。杭州华端生物科技有限公司创始团队十多年来一直专注于为用户提供有竞争力的食品、药品、医疗及科研微生物实验室的整体解决方案与服务。2021年我们开始运营品牌“华端生物”，品牌寓意中华之端，华端人不断创新研发，提升产品竞争力，打造新国货。在企业发展过程中，我们始终秉持这一理念，不断引进、培养高科技人才，加大研发力度，并通过对产品持续创新、服务坚持初衷和团队共同成长的持续投入，不断推出符合市场需求的解决方案和服务。我们坚信，“更好的产品、更好的服务和更好的团队”是我们能够赢得客户青睐的核心竞争力，我们会始终不忘初心、砥砺前行，实现“与客户共同保障食品安全、药品安全和公共卫生安全”的社会使命。以史为鉴、开创未来。杭州华端生物科技有限公司诚挚期待与广大用户深入交流，与想要加入团队共同奋斗的同仁，携手前行，共创美好未来。核心价值观：拼搏、专注，突破、创新！企业愿景：提升国产微生物检测设备的竞争力！公司使命：为食品、药品和公共卫生安全提供保障。

p　　卫生部临检中心组织的2018年第一次临床微生物室间质评已经结束，但关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题，在微信朋友圈里谈得正热烈 (见文《溶血 or 流感?傻傻分不清?》)[1]。主要是因为在这次质评中，生化鉴定仪和有些品牌的质谱仪的鉴定结果出错了。令小布自豪的是，布鲁克MALDI Biotyper质谱的鉴定结果与标准答案完全相符!所以小布在这里来一段点评。/pp　　流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌虽然同属，但属于两个不同的种，致病性和临床意义也大不相同，前者是上呼吸道感染的常见致病菌，而后者是上呼吸道的正常定植菌。小布认为要认真、仔细地把它们区分开，千万不要混淆!/pp　　可是这两种菌的亲缘关系很近，用传统的形态学和生化方法难以区分。虽然产荚膜的流感嗜血杆菌可以通过荚膜肿胀实验区别于溶血嗜血杆菌，但有些流感嗜血杆菌是不产荚膜的，通常被认为是无法分型的。同样，虽然有的溶血嗜血杆菌能够通过卫星试验观察到溶血环，但不是所有的溶血嗜血杆菌都能观察到明显的溶血环。/pp　　难道就没有好办法了吗?当然不是!/pp　　span style="color: rgb(31, 73, 125) "strong质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的好方法/strong/span/pp　　早在2013年中国CDC的研究人员就通过质谱图的聚类分析，发现质谱可以把流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌清楚地分成两类，甚至可以把不同地区来源的菌株进一步细分(见图1)[2]。/pp style="text-align: center"strongimg src="http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/dfbc448c-6829-4363-bbc8-eb80e5161d6e.jpg" title="1.jpg" width="450" height="409" border="0" hspace="0" vspace="0" style="width: 450px height: 409px "//strong/ppstrong　　▲图1. 流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的聚类分析树状图(MALDI Biotyper结果)/strong/pp　　2014年荷兰公共卫生区域实验室、荷兰医学中心与布鲁克微生物研发中心共同发表了MALDI Biotyper能够正确鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的文章 [2]，专家们通过分析不同来源的277个菌株，发现质谱法与测序法鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的结果几乎完全一致(见表1)。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/5e7cf664-5cee-4464-b1b3-ac63e6d76a51.jpg" title="2.jpg"//pp　　strong▼表1.流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的MALDI Biotyper质谱法与测序法鉴定结果比较/strong/pp　　另外，布鲁克公司在美国FDA注册进行临床试验的结果显示：通过对74个流感嗜血杆菌和31个溶血嗜血杆菌的检测MALDI Biotyper质谱法鉴定100%正确!(结果摘自布鲁克公司提交美国FDA的报告)/pp　　可见，质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌可以信赖的方法!有些老师不免心生疑问：既然布鲁克质谱的鉴定结果都是正确的，那为什么其它品牌的质谱鉴定错了呢?/pp　　strongspan style="color: rgb(31, 73, 125) "质谱法的数据库和鉴定结果的算法非常重要/span/strong/pp　　原来呀，质谱鉴定微生物时，需要通过软件拿采集到的样品“蛋白指纹图”到数据库里进行逐个比对，因此，数据库建立与比对时所采用的理念与算法，以及数据库的容量，是影响鉴定结果非常重要的因素。/pp　　布鲁克MALDI Biotyper的建库理念是以菌株为单位，数据库中每个条目都是一个独立的菌株。它的比对算法是采用指纹识别中的“模式识别”算法，就是把样品的“蛋白指纹图”与数据库中所有菌株的“蛋白指纹图”快速自动地进行逐个图逐个峰的比较，看看每对比对的“蛋白指纹图”之间有哪些峰是匹配的，哪些峰是不匹配的，以及匹配的谱峰之间相对强度的相关性，从而得到一个综合的匹配分数，并根据分数值告诉我们鉴定的可信程度。/pp　　MALDI Biotyper的算法看上去通俗、简单，正可谓“大道至简”吧，不仅非常实用!而且最大程度上避免了误判!就像警察通过指纹比对来识别罪犯一样，只要数据库里有罪犯的指纹，它就能正确地识别出罪犯 即使数据库里没有罪犯的指纹，它也不会找错，只是告诉我们当前数据库里没有匹配的指纹，只要扩大搜索数据库的范围，定会让罪犯无以循形，不会造成冤假错案!/pp　　有些老师可能会问：我们是做菌种鉴定，MALDI Biotyper的数据库为什么不以菌种为单位，而是以菌株为单位建立的呢?难道它能鉴定到菌株吗?/pp　　大家知道，微生物种类繁多，每种微生物又包含丰富多样的不同菌株，而同一菌种内不同菌株之间的差异是天然存在的，并和微生物的种类有关，有的种内差异大，有的种内差异小。所以，布鲁克决定在菌株水平上建库，并在选择每个菌种的建库菌株时，尽可能包含差异大的菌株，而剔除差异小的菌株。MALDI Biotyper在菌株水平建库，具有以下优势：/pp　　span style="color: rgb(255, 0, 0) "给代表性菌株预留了充分的覆盖范围/span/ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "　　避免了数据库不必要的冗余/span/ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "　　容易实现数据库的扩充和更新/span/ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "　　能快速适应分类学的改变/span/pp　　充分发挥了质谱技术分辨能力远远高于传统方法(如生span style="color: rgb(255, 0, 0) "/span化方法)的特点，不丢失种水平之内菌株之间的差异。/pp　　正是由于上述优势，美国CDC、加拿大国家微生物实验室和美国NIH等多家机构也在采用布鲁克的仪器和理念建立数据库并对外开放。/pp　　通过以上对布鲁克MALDI Biotyper质谱的数据库与软件算法的简单介绍，相信各位老师就能理解为什么这次卫生部的质评中，布鲁克质谱的鉴定结果是正确的，也就很好理解为什么美国FDA批准Bruker MALDI Biotyper CA系统作为首个鉴定新型致病菌耳念珠菌(C. auris) 的新方法了[4-6]。/pp　　参考文献/pp　　1. 溶血 or 流感?傻傻分不清?/pp　　2. B. Q. Zhu, D Xiao et al. MALDI-TOF MS Distinctly Differentiates Nontypable Haemophilus influenzae from Haemophilus haemolyticus.PLoS One. 2013 8(2): e56139/pp　　3. J. P. Bruin, M. Kostrzewa et al. Identification of Haemophilus influenzae and Haemophilus haemolyticus by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2014, 33:279–284/pp　　4. https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm605336.htm/pp　　5. FDA首次批准质谱方法鉴定新型致病菌耳念珠菌 (Candida auris)/pp　　6. “布”下天罗地网，防止“耳念”侵袭/p

美国航天局科研人员最近开发出一种能快速检测航天器细菌的新技术。这项技术也能同时运用于军事、医疗、制药等领域，如检测可引发炭疽病的炭疽杆菌。　　美航天局下属喷气推进实验室的科研人员在10月刊的《应用与环境微生物学》(Applied and Environmental Microbiology)杂志上报告说，这项新技术能找到构成细菌芽孢的主要物质吡啶二羧酸，从而发现细菌芽孢的位置。而芽孢是细菌生长到一定阶段在细菌体内形成的一种微生物体，其数量及其生长状况等是鉴定细菌的依据之一。　　该项技术的工作原理是，先在被检测物表面约一角钱硬币大小的地方涂上铽 ，然后将其置于紫外线灯下照射，几分钟内，人们通过显微镜和特殊相机便能看到是否有细菌芽孢，因为铽能把细菌芽孢的主要物质吡啶二羧酸变成明亮的绿色。铽是一种化学金属元素，它的化学符号是TB，被用于生成电视机屏幕上的绿色。　　参与开发这一新技术的艾德里安庞塞说，细菌芽孢可以在极其恶劣的环境下生存，可抵御高温、低温、强辐射和化学物质，并最多可以在太空存活6年之久。庞塞说，发现了细菌芽孢，就可以发现细菌本身。　　目前这项被称为“航天器洁净方法”的技术已引起了美国国土安全部的兴趣。美国国土安全部化学生物研究项目负责人詹姆士安东尼认为，该技术将有助于加快生物污染事件发生后的现场检测工作，并节省时间和成本。

国家卫健委日前发布2020年第9号公告，其中“马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种”乳杆菌被列为新食品原料。据悉，这是天津科技大学王艳萍教授科研攻关的成果，是我国首次分离得到、全球首株完成全基因组测序、具有自主知识产权的新乳杆菌，对酸奶及益生菌等发酵食品升级品质、改善口感、清洁标签等将起到提升作用。　　原料天然化、黏稠度和细腻口感是酸奶品质的高地。在欧洲，酸奶生产商通常使用特殊功能的乳酸菌来提高酸奶质地的“黏性”，同时，许多国家禁止在发酵乳中添加增稠剂、稳定剂，对天然酸奶的追求已成为未来市场趋势。　　酸奶等益生菌发酵食品以其较高的营养价值和容易被人体吸收等特点受到人们青睐，我国每年包括酸奶在内的益生菌类食品市场都保持了两位数的增长，高品质酸奶成为乳品新消费需求。“挖掘中国微生物宝库资源，研发胞外多糖乳杆菌，解决酸奶不添加增稠剂而获得味蕾舒适的黏性及口感，使中国益生菌食品行业与国际接轨，助推产业优质化发展。”王艳萍把酸奶新型乳杆菌目标定位为对胞外多糖乳酸菌的研究和开发，利用微生物的筛选技术，获得高产胞外多糖的乳酸菌，通过对其产糖分子机制的研究，最终发现了马奶酒样乳杆菌ZW3胞外多糖合成的途径及其关键基因的作用。　　经过近20年科学研究，在4次国家自然基金及多项省部级科研基金支持下，研发获得成功，在国内外学术期刊上发表文章论文30余篇。王艳萍通过收集、分离、功能确认菌株，到菌粉生产工艺、菌粉的稳定性、菌粉产品应用等一系列研究，对ZW3菌株高产胞外多糖的分子学机制、结构、性能及功能等方面进行了全面深入的研究，为该菌株在发酵食品、乳品、功能性食品、保健食品、化妆品以及微生态药物等领域的广泛应用奠定了坚实的基础。　　马奶酒样乳杆菌ZW3是全球研究最深入和最全面、首株完成全基因组测序的马乳酒样乳杆菌，通过其自身代谢产物实现酸奶黏度增稠，可以避免因添加增稠剂和稳定剂影响发酵乳制品的口感及质量，使酸奶更美味和优质。　　王艳萍介绍，乳酸菌胞外多糖具有独特的物理学和流变学特性以及公认的食用安全性，是天然的生物增稠剂，可以替代目前正在应用的、来源于非食品级细菌的稳定剂或增稠剂，在发酵乳品加工中具有重要用途，能提高干酪得率、降低酸奶凝胶脱水收缩现象，解决酸奶生产中常出现的凝胶易断裂、黏稠度低、乳清易析出等质量问题。　　据该菌种申报单位诺佰克（武汉）生物科技有限公司的专家介绍，该乳杆菌是具有优异食品加工性能与调节肠道、精神健康等多种益生功能于一体的多功能菌株，有高产胞外多糖的特性，在食品中应用能减少稳定剂、增稠剂的使用，打造清洁标签，升级产品；可去除或减少发酵过程中产生的亚硝酸盐，提高产品安全性；还在调节肠道健康、提高免疫、抗氧化等方面具有多种功能。许多乳品行业专家都认为此乳杆菌是“小菌种，大作为”。

据中国新闻网报道，针对近日连发的肉毒杆菌中毒案件，台“卫生署”初步怀疑可能是真空即食豆制品惹祸。对此，台“卫生署”今日表示：根据调查，全台仅有3家厂商符合灭菌标准，可以在常温下贩售，提醒民众购买时要小心。　　针对“真空包装即食豆干”可引发肉毒杆菌中毒的说法，“卫生署食品药物管理局食品组组长”蔡淑贞表示，经“食品工业发展研究所”调查市售的真空包豆干发现，真正符合灭菌标准，且可以在常温下贩售的产品，只有3家：得意中华食品有限公司、福记冷冻食品公司、大房食品有限公司。对台湾市场上，不符合灭菌标准，也无法达到冷藏条件的生产者，建议暂时不要大规模生产真空包装的黄豆制品。同时，蔡淑贞还表示，为确保民众健康，“卫生署”将订定《真空包装即食食品良好卫生规范》，最快下个星期发布公告，若20天后，各界对该规范无异议表示，公告后3个月后，最快11月便可实施。　　消息传来，网友不禁要问，在传统认知里，真空包装不就是无菌抑菌的代名词吗?对此，专家解释：一般消费大众认为的“真空”即代表“无菌”、开封后立即食用的“绝对安全”，并不完全正确。　　有些真空包装的食品，入卤豆干、卤素肚等，因为具有低酸性(酸碱值高于4.6)、高水活性的特性，如果在不符合食品良好卫生规范环境下，生产制造过程受到肉毒杆菌的污染时，真空包装的无氧条件，便成为肉毒杆菌适合生长的“温床”。　　据了解，肉毒杆菌的理想生长温度在摄氏35至40度或28至30度之间。因此，单凭冷藏这项措施不能有效消除容易腐坏的密封包装食物的肉毒杆菌风险。肉毒杆菌，作为毒性极强的神经毒素，极小量便已足以引致肉毒中毒。食用者在进食毒素后约18至36小时内，产生疲倦、虚弱无力、眩晕、视力模糊、言语障碍和吞咽困难等症状，严重者可令患者的呼吸肌肉瘫痪，引致死亡。作为美容中常见的“瘦脸针”便是以肉毒杆菌的医疗使用。但肉毒杆菌也不是不可预防的，当食物加热至摄氏80度并维持至少10分钟，就可破坏这种毒素。在治疗方面，应尽快注射肉毒中毒抗毒素，也可影响肉毒杆菌的发病。　　对于食品中肉毒杆菌的卫生规定，国家标准中规定：为防止肉毒杆菌生长或毒素形成，真空包装食品，在包装前必须把食物加热至摄氏90度，并维持10分钟，或进行其他可同样有效杀死肉毒杆菌的加热程序 提高食品含盐量，并将食物的酸碱度保持在5或以下 降低食物的水活性至0.97或更低水平 使用适当分量的防腐剂，例如亚硝酸盐等。　　在此，国家标准频道要提醒众位消费者，请谨慎食用真空包装的食品，一定要注意购买保质期内的真空包装食品。购买后，必须依标识采用冷藏或冷冻，且食用前必须煮沸(100℃加热10分钟以上)。为了家人的身体健康，请一定要在保存期限内食用。如果出现不适症状，请及时就医。

综合韩媒报道，韩国京畿道安山市一家幼儿园近日发生大规模食物中毒事件，截至27日，出现腹痛、呕吐、腹泻等食物中毒症状的孩子、家人和老师共111人，部分学生还出现了溶血性尿毒综合征症状。 溶血性尿毒症综合征，俗称“汉堡病”，因1982年美国儿童食用未熟的汉堡集体食物中毒而得名。致病原因主要为食用被污染或者没熟透的食物，免疫力较低的孩子和老人容易感染。若病情恶化至损伤肾脏，只能靠透析维持生命，1950年代，病死率一度高达40%～50%，近年来由于改进了对急性肾衰竭的治疗，病死率已下降至5~15%左右。 肠出血性大肠杆菌(EHEC)是可引起较严重的健康危害的致病菌，肠出血性肠杆菌感染是一种人畜共患病。大肠杆菌O157:H7是EHEC中最常见影响最广泛的致病性大肠菌，它除引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌STEC是肠出血性大肠杆菌的一类，能产生志贺毒素的非O157：H7大肠杆菌，包括了在日本出现的E.coli O111以及2011年在德国及欧洲其他国家出现的E.coli O104。这类大肠杆菌感染后，可引起自限性腹泻、出血性结肠炎和溶血性尿毒综合症（HUS）。一般寄生在牛、羊等家畜和其他反刍动物体内，人类主要是通过未经烹调烹调不彻底的肉类和奶制品等被感染。 食安科技针对于肠出血性大肠杆菌检测国内早期已推出大肠杆菌O157检测板、大肠杆菌O157测试片和大肠杆菌STEC测试片，适合于餐饮配餐企业、食品生产企业、校园食品安全、疾控中心、动物饲料质量安全等单位的使用。 大肠杆菌O157检测板 大肠杆菌O157测试片 大肠杆菌STEC测试片

一场肉毒杆菌风波，卷入数家企业。肉毒杆菌为何物?国际以及国内是否有相关标准?　　中国农业大学食品科学与营养工程学院副教授朱毅在接受记者采访时表示，不管国内国外，奶粉生产中，肉毒杆菌都不作为必检项目，但是不少企业都有一定的相关自检。&ldquo 根据乳品和奶粉的相关工艺和食用人群，相对来讲本次涉及的乳品应该是安全的，但是给6~12月份婴幼儿食用的奶粉需要警惕。&rdquo 　　肉毒杆菌尚无相关标准　　资料显示，肉毒杆菌是一种生长在常温、低酸和缺氧环境中的革兰氏阳性细菌。食入和吸收这种毒素后，神经系统将遭到破坏，出现恶心、呕吐、头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状。　　&ldquo 由于肉毒杆菌并不是全部有毒，并且企业都有一定的内控标准，而含乳饮料、奶粉等生产又有一定的高温生产工艺，基本上肉毒杆菌芽孢都给消灭掉了。&rdquo 朱毅表示，在临床上，这种感染非常罕见，因此也就没有制定相关的标准。　　乳业专家王丁棉也表示，肉毒梭状杆菌其致病性在于它所产生的肉毒毒素，肉毒毒素系蛋白质类毒素，对热敏感，不耐高温不耐高酸。酸度pH4.5以下或者温度在45℃就可以抑制它，100℃的高温几分钟可以杀死。　　&ldquo 但对奶粉还需要一定的警惕，虽然基本毒素不存在，就怕如果奶粉中有芽孢，因为芽孢耐热能力比较强，在加工工艺中没有消灭的话可能有一定的风险。食用2段奶粉的婴幼儿都是6~12月的婴幼儿，婴幼儿的肠道不是很强，如果繁殖分泌毒素，就会有肉毒毒素中毒。&rdquo 朱毅说。　　监管须打通全产业链　　有人士指出，洋奶粉问题频出，暴露出我国相关国家标准缺失的问题，有关部门应尽快完善相关标准，才能提升监管力度。　　但一名国家食品安全标准制定专家曾对《每日经济新闻》记者表示，在现有多项标准已经出台的情况下，新标准的制定须经过严格论证，而且需要一定的成本，增加的成本会转嫁到消费者身上。目前可行的办法并不是倒逼更多的标准出台，而是在贯彻好既有标准的前提下，打通全产业链的有力监管，这一点在乳制品产业链中显得尤为重要。　　食药监总局相关负责人对记者表示，针对经营企业的标准规范仍在制定过程中，为实现全程追溯，卫计委正在就规范的制定紧密协商，未来将出台的新规将就批批检验以及流通环节检验等多方面提出要求。　　上述国家食品安全标准制定专家认为，乳制品产业链在饲料、加工、存储、包装、运输等环节都可能造成质量问题。从原料采购，到生产企业生产，再到经营企业销售等，监管部门的监管须建立起全程质量追溯体系，拓展到产业链的每一个环节中。

新西兰恒天然乳品含肉毒杆菌事件备受关注。9日，国家食品安全风险评估中心开展公众开放日活动，相关专家称，婴儿奶粉中含有肉毒杆菌的情况十分罕见，对此的监测不会纳入标准体系中。　　国家食品安全风险评估中心微生物实验部研究院郭云昌博士说，肉毒杆菌产生肉毒毒素需要苛刻的条件，其中一条是严格厌氧。而这一条，在非真空包装的奶粉中难以实现。尽管肉毒杆菌在环境中广泛存在，但奶粉中的污染比较罕见。从以往经验来看，我国肉毒杆菌污染多为储藏不当的变质肉类食品或家庭自制发酵豆类、谷类制品。　　控制肉毒杆菌污染的关键是工艺设计和过程控制而非标准管理，世界各国和地区并无食品中肉毒杆菌及其毒素的限量规定，一般只对密闭发酵、罐头类食品规定符合商业无菌的要求。尽管本次奶粉污染事件是偶发，消费者不必恐慌，但政府监管部门应该高度重视，要综合国内召回产品检测情况和各贸易国的反馈态度以及CAC动向，确定我国今后的管理方式。　　国家食品安全风险评估中心技术顾问刘秀梅研究员说，以往也有婴儿肉毒素中毒事件发生，但其与成人中毒有所不同，不是吃了含有毒素的奶粉，而是因为婴儿免疫力低下，身体发育未完全。如果含有芽孢的食物进入婴儿的胃肠道，会定植于体内，生长繁殖，进而产生毒素。但此类事件十分罕见，目前查到的是2001年英国曾发生过这类案例。　　刘秀梅说，其实婴儿奶粉中更值得关注的是阪崎肠杆菌。三次国际专家评估会议，三次都在关注阪崎肠杆菌，而没有关注肉毒杆菌。2004年开始获得国际关注，2008年，国内关于婴儿配方奶粉的标准也对阪崎肠杆菌进行了相关规定，相关部门对此也是必检项目。但由于含肉毒杆菌的情况非常罕见，因此，对于奶粉的管理标准中，加入监测肉毒杆菌一项的可能性几乎为零。　　怎么预防婴儿奶粉喂养安全呢?　　世界卫生组织曾为此专门设置指南，如何合理喂养婴儿配方奶粉。除了厂家保障产品安全外，孩子的母亲往往承担着重要的工作。刘秀梅认为，首先要购买正规厂家生产的可靠产品。2004年阜阳奶粉大头娃娃事件中，涉事产品很多都是小作坊、黑窝点生产的三无产品。其次，喂养方式也很重要。大头娃娃事件中，也暴露了留守儿童被隔代喂养中存在的问题。老人为省钱，减量喂养奶粉。　　现在流入中国的被污染的奶粉原料大约有20吨，大部分原料还没有被加工为产品，已经加工为产品的，根据要求已经被召回。流入中国的产品中，到底有没有肉毒杆菌?刘秀梅认为，产品中如果含有肉毒毒素的话，由于其潜伏期很短，一旦进入人体将会迅速发生中毒事件，而目前尚未这种事件。她建议，不要过分担心肉毒杆菌奶粉对孩子健康的危害，因为发生的可能性还是非常低的。　　在9日上午国家卫生计生委召开的新闻发布会上，国家食品安全风险评估中心微生物实验部的主任李凤琴研究员也确认这一观点，她表示，到目前为止还没有接到报告因为吃含有肉毒杆菌的奶粉而有人出现不适的病例。　　国家卫生计生委新闻发言人、宣传司副司长邓海华说：“国家卫生计生委的职能是标准制定和风险评估，我们接到国际食品安全当局网络通报新西兰污染乳制品问题的邮件之后，及时把有关信息向质检总局、食品药品监管总局进行了通报，配合相关监管部门做好相应的处置工作。我们还组织国家食品安全风险评估中心的相关专家，通过各种有效途径，包括博客、微博、网站、接受媒体采访等等，对于肉毒杆菌的科普知识进行了大量宣传。”

Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔)旗下全球知名的微生物培养与诊断产品Oxoid最新推出了优化的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基，不仅能够对食品和水样中的大肠杆菌与大肠群菌快速分离、区分和计数，而且能够快速对大肠杆菌进行确认鉴定。 大肠杆菌和大肠菌群直接或间接来自人与温血动物的肠道，它们在食品中的出现预示某些肠道病原菌的存在，因此在国内外的检测标准中大肠杆菌和大肠菌群的数量都是评价食品卫生质量的重要指标之一。Oxoid的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基中的显色剂用来检测大肠杆菌的ß -葡萄糖苷酸酶活性和大肠菌群的ß -半乳糖苷酶活性(包括大肠杆菌)，因此平板上紫色的大肠杆菌菌落与粉色的大肠菌群菌落非常清晰地区分开来，可以快速、方便地对食品和水样中的这两种菌群进行分离、区分和计数。　　现在，Oxoid对这款培养基的蛋白胨成分进行了优化，初步鉴定的紫色大肠杆菌菌落可以在平板上直接通过吲哚试验确认。向平板加入Kovac’s溶液，紫色的大肠杆菌菌落立刻呈现明显的樱桃红色，即确认为阳性的大肠杆菌，而无需额外的确认实验。　　对于食品微生物常规检测项目，Oxiod还有其它的显色培养基：BrillianceTM沙门氏菌显色培养基，BrillianceTM李斯特菌显色培养基、BrillianceTM阪崎肠杆菌显色培养基、BrillianceTM蜡样芽孢杆菌显色培养基等。同时，Oxoid还在不断的研究开发新的产品，努力为食品行业微生物检测提供更简便、更快速的解决方案。　　关于Oxoid　　Oxoid 是 Thermo Fisher Scientific 旗下的知名微生物产品品牌,其产品涵盖整个微生物科学领域，为临床检验、工业生产领域和基础学术研究的微生物诊断提供优质的解决方案。Oxoid最初起源于欧洲，其历史可以追溯到十九世纪微生物科学开始的年代。Oxoid总部位于英国Basingstoke，并在全球设有多家生产厂，如加拿大、德国、澳大利亚等等。2006年Oxoid在中国北京设立了一条新的微生物制成培养基生产线，它的运营使中国的微生物工作者在微生物培养基产品上可以与世界标准接轨，并大幅度减少了微生物实验室操作的工作量，有效地提高了微生物实验室检验的标准化程度。2006年Oxoid正式成为全球科学服务领域的领导者Thermo Fisher Scientific旗下的品牌之一，与另一微生物品牌Remel组成微生物产品部，资源整合优化后，为全球的微生物工作者提供更全面的产品与更专业的服务!欲了解更多信息，请浏览网站：www.oxoid.com。

点击此处可了解更多详情→【水中大肠杆菌检测仪】 水中大肠杆菌检测仪是一种用于封装容器的设备，它可以实现自动化的封口过程，并具有程控功能。在水中大肠杆菌检测中，程控定量 封口机具有以下几方面的作用： 1.提高封口效率：水中大肠杆菌检测仪可以实现自动化的封口过程，大大提高了封口效率。相比于手动封口，它能够更快速地完成封口任务，并且能够保持封口的一致性和稳定性，减少人为因素对结果的影响。 2.保障封口质量：水中大肠杆菌检测仪通过程控功能，可以准确控制封口的时间、温度和压力等参数，确保封口质量的稳定性和一致性。这对于水中大肠杆菌检测来说非常重要，因为一个良好的封口可以有效地防止样品的污染和外部细菌的进入，保证检测结果的准确性和可靠性。 3.减少操作风险：水中大肠杆菌检测仪的自动化操作减少了人为操作的风险。在水中大肠杆菌检测中，人为操作可能会引入外部细菌污染，影响检测结果的准确性。而程控定量封口机的使用可以避免这种风险，确保样品的纯净性和可靠性。 4.提高工作效率：程控定量封口机的自动化操作和高效率封口能够提高工作效率。这对于大批量的水中大肠杆菌检测来说非常重要，可以节省人力和时间成本，提高检测的效率和生产力。 综上所述，水中大肠杆菌检测仪在水中大肠杆菌检测中具有重要的作用。它能够提高封口效率、保障封口质量、减少操作风险和提高工作效率，为水中大肠杆菌检测提供了可靠的封口保障。

各有关单位及专家：根据广东省动物学会团体标准制修订计划安排，由华南农业大学负责起草的《产酸克雷伯杆菌 PCR 检测方法》和《奇异变形杆菌 PCR 检测方法》、由中山大学等担负负责起草的《鸡内金渣水产饲料添加剂原料》3项团体标准已完成了征求意见稿的编写。按照《广东省动物学会团体标准管理办法（试行）》相关规定，现印发给你们，请研究提出修改意见，并填写《广东省动物学会团体标准征求意见反馈表》，于2023年4月17日前通过邮件反馈至gdsdongwuxuehui@163.com。附件下载鸡内金渣水产饲料添加剂原料（征求意见稿）.pdf产酸克雷伯杆菌PCR检测方法（征求意见稿）.pdf奇异变形杆菌PCR检测方法（征求意见稿）.pdf广东省动物学会团体标准征求意见反馈表.doc

据国外食品类网站报道，英国利兹海德食品研究所食品安全与危机管理主任托尼.海因斯表示，在大肠杆菌疫情期间，德国卫生当局失去了对食品行业的控制力，然而有效的追溯体系对于避免大肠杆菌疫情再次上演至关重要。　　据了解，大肠杆菌疫情共造成德国48人死亡，法国15人死亡，最终疫情源头被追溯至从埃及进口的葫芦巴种子，后来这些种子被运至德国下萨克森州用以培植芽菜，培植出的芽菜最终导致疫情的爆发。　　近日欧盟食品安全局执行理事在柏林会议上称，欧盟的食品安全体系非常脆弱。对此海因斯专家做出了回应认为，欧盟是全球最大的食品贸易市场，市场的完全开放使得食品安全体系面临很多威胁，一种食品会含有来自世界各地的多种配料，然而很多配料并未按照欧盟标准进行生产，对食品的配料成分进行追溯对于危机管理来讲至关重要，了解食品原料的来源、原料加工制成的食品类型、成品的销售地不仅是一项法律要求，对于危机管理的追溯来讲也很有帮助。

使用超高效合相色谱(UPC2)分析短杆菌肽Sean M. McCarthy, Andrew J. Aubin, 和 Michael D. Jones沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)应用效益■ 快速分离短杆菌肽■ 载量线性响应■ 准确、高精度分析短杆菌肽的方法■ 有可能用于其它疏水性肽和蛋白质沃特世解决方案ACQUITY UPC2系统ACQUITY SQDACQUITY UPC2 CSH氟苯基色谱柱Empower&trade 3软件关键词超高效合相色谱、UPC2、疏水性肽、短杆菌肽简介用反相液相色谱(RPLC)分析疏水性肽和蛋白质难度很大，因为溶液中经常需要使用洗涤剂保持疏水性物质的稳定性，而这些洗涤剂容易发生聚集和/或沉淀，严重影响它们的回收，这些因素以及其它原因使得难以用RPLC分离疏水性肽和蛋白质。在本应用纪要中，我们为您介绍一种在ACQUITY UPC2TM系统上使用沃特世(Waters)超高效合相色谱技术分离典型跨膜肽-短杆菌肽的方法。短杆菌肽是由芽孢杆菌产生的一种常见和已被良好表征的跨膜肽物质，它被用作对抗革兰氏阳性和某些革兰氏阴性细菌的局部用抗生素，短杆菌肽包括通用组成为甲酰-L-缬氨酸-甘氨酸-L-丙氨酸-D-亮氨酸-L-丙氨酸-D-缬氨酸-L-缬氨酸-D-缬氨酸-L-色氨酸-D-亮氨酸-L-X-D-亮氨酸-L-色氨酸-D-亮氨酸-L-色氨酸-氨基乙醇的一族化合物，其中X取决于短杆菌肽分子，即分别占总短杆菌肽量约87.5%、7.1%和5.1%的革兰氏A(X=色氨酸)、革兰氏B(X=苯丙氨酸)和革兰氏C(X=酪氨酸)，1需要交替的D和L氨基酸单元构成_-螺旋状。我们研究了色谱柱化学品、流动相改性剂和梯度斜率对分离短杆菌肽的影响。采用优化方法分离市场上销售的非处方药物(OTC)，将测定的短杆菌肽浓度与标示量进行对比。采用质谱仪测定短杆菌肽的浓度，采用选择离子谱表征每种物质。在ACQUITY UPC2系统上使用我们的方法，可得到线性和可重复的结果&mdash &mdash 测定的OTC制剂浓度为标示量的98.4%。试验测试条件除非另有说明，以下是用于所有色谱最终方法的最佳条件。UPC2测试条件UPC2系统: ACQUITY UPC2检测器： PDA、ACQUITY SQD PDA @ 280nm,分辨率为6 nm(补偿400至500 nm)色谱柱： ACQUITY UPC2 CSH 氟苯基,3.0 x 100 mm, 1.7 &mu m柱温： 50 ° C样品温度： 15 ° CUPC2 ABPR: 1885 psi进样量： 1 &mu L流速： 2.0 mL/min流动相A： CO2流动相B： 含0.1%TFA的甲醇(除非另有标示)梯度： 20%至30% B，1.5minSQD条件离子源： ES+锥孔电压： 20 V毛细管电压： 3.7kV源温度： 150 ° C脱溶剂气温度： 500 ° C脱溶剂气体流速： 400 L/hr锥孔气体流速： 25 L/hrSIR: 922.6,930.3,941.9数据管理Empower 3软件样品描述用解硫胺素芽孢杆菌(短芽孢杆菌)制备的短杆菌肽从Sigma Aldrich公司购买，将样品溶解在甲醇中制成0.5mg/mL浓度的溶液，如需要，可用甲醇稀释。含有短杆菌肽的非处方软膏是从当地药店购买的。将0.2g软膏溶解在10mL正己烷中，然后用5mL甲醇萃取短杆菌肽，去除甲醇层，用0.2-&mu m的烧结玻璃盘过滤，然后直接进样ACQUITY UPC2系统。结果与讨论我们系统性地筛选了四种色谱柱，测定哪种分离效果最佳，结果如图1所示，色谱柱筛选过程可在1小时内非常快速地完成。在我们设定的筛选条件下，BEH 2-EP和BEH色谱柱未检测到谱峰，由于其它色谱柱表现出合适的色谱性能，因而未对这两者的非洗脱原因深入研究，其中ACQUITY UPC2 CSH氟苯基色谱柱检测的色谱峰形最佳，因此采用该色谱柱继续研究。图1.通过短杆菌肽标准物的色谱峰形和保留时间筛选各种化学特性色谱柱。所有色谱柱规格为3.0x100mm，填装亚-2-微米填料；所有分离条件都采用流动相 A：CO2、流动相 B、含0.1% FA的MeOH、2 mL/min, 3%B至25% B，5min。为了分离短杆菌肽物质，对酸性改性剂的影响进行了研究，结果表明：使用三氟乙酸(TFA)可得到稍好的峰形，提高了短杆菌肽A和短杆菌肽C之间的分离度，结果如图2所示。已知TFA会抑制质谱电离，但每种物质的信号都足以定量检测治疗制剂，后续将对此进行讨论。对于要求更高灵敏度的应用，可能需要降低TFA浓度或使用甲酸，以达到希望的检测限值。图2.酸性改性剂对分离短杆菌肽的影响。当设置好合适色谱条件后，通过减少梯度时间优化分离过程，结果如图3所示，我们能够在1.5分钟时间内使每种短杆菌肽组分的分离度达到1.4或更高，在相同流速下通过减少运行时间增加梯度斜率，不但实现有效分离，同时还将短杆菌肽A的信噪比从336提高至605。图3.UV 280-nm痕量检测优化分离短杆菌肽A、B和C。我们测试了最佳分离条件，能够使用单四极杆质谱(SQD)检测每种物质，图4显示：每种物质都被质谱良好分离和检测到，另外每种短杆菌肽物质都显示含有绝大多数的M+2H离子，后续的研究将使用这些参数进行选择离子监测。图4：每种短杆菌肽物质的总离子图谱-A和加合离子图谱-B-D。选择强度最高的离子评估市场上销售的抗菌制剂中的短杆菌肽含量，对于多肽序列，红色残基是L型同分异构体，黑色残基是D型同分异构体。为了评估我们的方法是否适用于定量分析市场上销售的非处方药中的短杆菌肽，我们在ACQUITY SQD上使用选择离子监测，结果如图5A所示。我们绘制浓度-峰面积曲线，得到每种物质的校正曲线。结果发现：如图5B-D所示，每种成分在测试范围内都呈线性响应。另外还使用校正曲线测定了非处方药物中的每种短杆菌肽物质浓度。图5，图A-25.0、12.5、1.25和0.625mg/mL浓度的标准溶液中含有短杆菌肽物质的叠加选择离子谱。图B、C和D-每种短杆菌肽A、B和C各自的MS峰面积线性拟合图。使用开发的方法评估非处方药物中的短杆菌肽物质的浓度和相对丰度。如图6所示，重复分析结果表明：每种短杆菌肽%RSD值小，计算浓度与标签上的标称值相吻合；我们还发现短杆菌肽物质的相对丰度与文献报道的丰度非常吻合1。图6. 从抗菌软膏中萃取的短杆菌肽A、B和C的叠加选择离子谱重复进样分析的计算RSD值(N=3)在可接受限值以内，计算丰度与文献报道数值非常吻合1。结论正如本应用纪要所展示的，ACQUITY UPC2系统与ACQUITYUPC2色谱柱化学结合使用，可为短杆菌肽提供简单、准确和可重现的分析方法。该工作表明ACQUITY UPC2系统可用于分析疏水性肽，还可能用于分析疏水性蛋白质，例如膜蛋白。参考文献1. The Merck Index and Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals.13th ed. Whitehouse Station, NJ : Merck Research Laboratories 2001.关于沃特世公司 (www.waters.com)50多年来，沃特世公司(NYSE:WAT)通过提供实用和可持续的创新，使医疗服务、环境管理、食品安全和全球水质监测领域有了显著进步，从而为实验室相关机构创造了业务优势。作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者，沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。2010年沃特世拥有16.4亿美元的收入和5,400名员工，它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。联系人：叶晓晨沃特世科技（上海）有限公司 市场服务部xiao_chen_ye@waters.com周瑞琳(GraceChow)泰信策略(PMC)020-8356928813602845427grace.chow@pmc.com.cn

鲍曼不动杆菌的治疗和研究进展！鲍曼不动杆菌感染的治疗一直是临床上很大的难题，因为鲍曼不动杆菌极易对各种消毒剂和抗菌药物产生耐药性，对重症患者、ICU病房的患者等威胁很大。MDR-AB（多重耐药鲍曼不动杆菌）、PDR-AB（泛耐药鲍曼不动杆菌）、CRAB（耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌）等的广泛传播更是成了医生和患者的噩梦。 在院内感染中，不动杆菌属的感染占有较高的比例，而在院内提取到的不动杆菌属的菌株，绝大多数为鲍曼不动杆菌。鲍曼不动杆菌为革兰氏阴性菌，故对万古霉素等存在固有耐药，对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、氯霉素、四环素、diyi及第二代头孢菌素也保持着较高的耐药率。通常情况下，对鲍曼不动杆菌有较强作用的药物主要有抗绿脓杆菌的青霉素类、第三和第四代头孢菌素（主要是头孢他啶、头孢吡肟等）、碳青霉烯类、β-内酰胺类抗生素复合制剂（头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等）、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、替加环素、多粘菌素、舒巴坦等。但是因为近年来抗菌药物的滥用，鲍曼不动杆菌对以上药物的耐药率也在不断上升，氟喹诺酮类、氨基糖苷类等耐药率甚高，碳青霉烯类的耐药率也有上升。 考虑到鲍曼不动杆菌极易对抗菌药物耐药，故用药时应联合用药。常用的方案有β-内酰胺类+氟喹诺酮类、β-内酰胺类+氨基糖苷类等。我个人shouxuan的方案为头孢哌酮/舒巴坦+磷霉素（时间差攻击疗法），也可选择氨苄西林/舒巴坦+环丙沙星等）。 研究进展 随着医学技术的飞速发展，对疾病特别是危重病的救治水平不断提高，广谱抗生素的广泛使用是其重要手段之一。但是，临床治疗中滥用抗生素现象非常普遍，在抗生素的强大压力下，不可避免地产生大量耐药菌株，这些耐药菌株已成为当代医院感染的棘手问题，从本组资料结果显示，鲍曼不动杆菌对亚安培南、美罗培南的耐药率相对较低，原因是碳青霉烯类药物对青霉素结合蛋白（PBPS）亲和力强。　　但仍有少部分鲍曼不动杆菌对其耐药，原因可能是其能产生一种能水解碳青霉烯类药物的β-内酰胺酶ARI-I，这无疑是一个可怕的信号。此外，与头孢哌酮/舒巴坦的化学结构不同或鲍曼不动杆菌的多重耐药性表达形式不同有关。而对喹诺酮类抗生素耐药率达60%以上，这可能是近年来喹诺酮类药物的广泛应用引起抗菌药物介导的耐药性基因突变，编码DNA旋转酶的gyra 或gyrb基因发生突变被认为是细菌产生耐药的主要原因。此外，氨基糖苷类抗生素的耐药率皆较高，这可能是本院普遍应用该类抗生素出现的耐药，给临床治疗带来了巨大的困难，因此，应注意各类抗生素的合理应用。 试验结果表明，临床上不动杆菌感染中，鲍曼不动杆菌占绝大多数(75.0%)，其次为醋酸钙不动杆菌、洛菲不动杆菌、琼氏不动杆菌，与有关报道不一致，可能是由于不动杆菌属的命名较混乱，分类原则及鉴定系统不同所致。在4种不动杆菌的鉴定中，41℃培养时生长，苹果酸盐同化试验阳性，可初步鉴定为鲍曼不动杆菌与琼氏不动杆菌，两者的区别在于前者苯乙酸盐同化试验阳性，且氧化木糖，而后者不氧化木糖，且苯乙酸盐同化试验阴性。41℃培养时不生长，癸酸盐同化试验阳性，可初步鉴定为醋酸钙不动杆菌与洛菲不动杆菌，两者区别在于前者枸橼酸盐、苯乙酸盐同化试验均阳性，而后者均阴性。　　从72株鲍曼不动杆菌的来源看，其感染部位分布广泛，如呼吸系统、泌尿系统、伤口、腹腔及神经系统等。其中以呼吸系统感染占多数(54.2%)。不动杆菌是近几年医院内感染出现率较高的菌属，其中鲍曼不动杆菌所引起的感染应引起重视。 2001～2005年对12种抗菌药物的药物敏感监测显示，12种药物对鲍曼不动杆菌的耐药率呈总体上升趋势，耐药率zuijin的IMP，其耐药率从2001年的6.5%上升至2005年的31.7%，头孢菌素类（CAZ、CFP、FEP）的耐药率从2001年的20.0%、38.6%、31.5%上升至2005年的66.7%、72.4%、67.7%；PIP、SXT、ATM、CIP、TZP、LEV耐药率也从2001年的19.6%～60.2%增加到2005年的52.2%～72.1%；耐药率下降的有TOB和GEN 2种药物，其耐药率分别从2001年的62.8%和63.6%下降到2005年的48.2%和45.2%，这可能与这类药物临床上现在不常使用有关。从表3可见，ICU 12种药物的耐药率明显高于非ICU，差异存在非常显著性（P0.01），在ICU耐药率较低的是IMP和TZP，耐药率分别为41.7%和53.3%，除此外其余抗生素的耐药率均在70.0%以上，由此可见，ICU鲍曼不动杆菌耐药现象已十分严重，且表现为多重耐药。这与鲍曼不动杆菌产生多种酶有关：对头孢菌素类的耐药，主要是产超广谱β-内酰胺酶；对亚胺培南耐药，主要与产金属β-内酰胺酶有关；喹诺酮类的耐药主要与gyrA和parC基因突变有关。 综上所述，鉴于近年鲍曼不动杆菌的耐药率有进一步上升的趋势，这应当引起临床医师及微生物界的高度重视。为减少该菌医院感染的发生及多重耐药菌株的出现，我们应对医疗器械进行严格彻底的消毒及对鲍曼不动杆菌进行规范的连续监测，弄清其耐药机制并及时监测其耐药情况。同时，临床医师应重视获得性鲍曼不动杆菌感染，与临床微生物实验室密切协作，加强耐药性的监测，有效预防和控制感染。欢迎访问中国微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

Gasdermin蛋白是人类细胞中在细胞膜上打孔，释放免疫因子并诱导细胞死亡的关键因子。Gasdermin打孔的机制是由caspase介导的，在炎性小体信号传导过程中触发，对防御病原体和癌症至关重要【1】。人类中Gasdermins家族由六个成员组成，GSDMA–GSDME以及pejvakin。但是各种各样的Gasdermin蛋白在进化上的起源以及生物学作用仍然不甚清楚。为此，美国哈佛大学医学院Philip J. Kranzusch研究组与以色列魏茨曼研究所Rotem Sorek研究组合作在Science发文题为Bacterial gasdermins reveal an ancient mechanism of cell death，揭开了细胞焦亡作为细菌以及动物中共有的一种古老的、调节细胞程序性死亡的方式。通过序列分析，作者们发现与哺乳动物Gasdermin蛋白相似不同50个细菌来源的蛋白，其中作者们测定了来自慢生根瘤菌嗜热菌（Bradyrhizobium tropiciagri）和Vitiosangium sp的bGSDMs的晶体结构，结果显示bGSDMs的总体结构都是共享的，与哺乳动物Gasdermin N末端结构具有显著的同源性（图1）。晶体结构分析同时也显示在哺乳动物Gasdermin蛋白中C末端结构，会维持该蛋白处于一种自我抑制的状态；虽然bGSDMs中没有与哺乳动物中Gasdermin蛋白C末端结构相似结构，但是仍然具有自我抑制结构特征（图1）。图1 对细菌来源的Gasdermin蛋白进化保守型以及结构分析随后，作者们想知道bGSDMs在细菌系统中是否有抗噬菌体的功能，作者们发现bGSDMs对大肠杆菌噬菌体具有显著的抵抗性。因此，bGSDMs是细菌“防御工事”中的关键组分。另外，作者们发现bGSDM的激活会诱导细菌细胞膜的破坏，而且在其激活过程中需要蛋白酶的参与，因为引入蛋白酶靶向位点的突变会废除bGSDM的细胞毒性（图2）。图2 蛋白酶参与bGSDM的激活进一步的，作者们对bGSDM的切割过程进行探究。作者们发现bGSDM的切割需要蛋白酶的催化，但是并不需要棕榈酰化修饰。另外，通过质谱分析作者们鉴定到了古字状菌属的Runella中bGSDM的具体切割位点以及处于自我抑制状态的结构生物学基础。通过构建绿色荧光蛋白的融合蛋白，作者们对bGSDM激活的动态过程进行的监测。作者们发现在激活过程中会由弥散分布的形式变成与膜结构存在联系的点状结构，通过透射电镜的检测可以观测到bGSDM切割后会导致细胞膜完整性的破坏，并导致细胞内容物的快速释放。图3 工作模型总的来说，该工作的建立了细菌与哺乳动物中Gasdermin蛋白打孔从而导致的细胞程序性死亡的具体模型（图3），证明了细菌中bGSDM系统可以发挥防御作用，并且该作用依赖于蛋白酶的参与，该工作将有助于深入了解细胞焦亡的具体作用机制以及在进化上的起源。原文链接：https://www.science.org/doi/10.1126/science.abj8432

美国政府7日宣布一系列食品安全新规。这是贝拉克奥巴马政府为全面改革食品安全监管体系采取的第一个行动。一段时间以来，美国发生多起食品安全事故，现有食品安全制度饱受诟病。　　三大重点　　新规由奥巴马总统今年3月下令成立的一个食品安全工作协调小组提出。　　美国《华盛顿邮报》8日报道，新规重点是做好预防、加大执法力度以及改善监管部门对食品安全事件的反应。　　美国副总统约瑟夫拜登7日在新闻发布会上就食品安全新规说：“几乎没有什么比确保食品安全更应该成为一项基本而重要的政府责任。”　　“如今，让美国家庭烦恼的事已经够多。他们不应该再为(食品安全)担忧，”拜登说。　　勤检多查　　美国近期数起食品安全事故涉及沙门氏菌感染。《华盛顿邮报》报道，每年有大约14.2万美国人因食用受沙门氏菌感染鸡蛋患病，其中大约30人死亡。这样的鸡蛋一般来自受沙门氏菌感染的母鸡。　　新规要求鸡蛋生产商定期检测鸡蛋受沙门氏菌感染情况，要求他们从采取同样严格措施的供应商处购买蛋鸡。此外，鸡蛋除了要在批发和零售环节冷藏，还要在农场和运输过程中冷藏。　　美国食品和药物管理局(FDA)局长玛格丽特汉伯格说，新规将使每12个鸡蛋的成本增加1美分，生产商将因此额外支出8100万美元。但是，这样做可以将沙门氏菌感染患病人数减少约7.9万，使美国每年省下14亿美元医疗开支。　　食品和药物管理局还将联手农业部下属的食品安全及检验局(FSIS)，采取措施减少大肠杆菌感染。　　根据要求，食品安全及检验局将在肉类食品加工厂增加抽样检测次数，特别是增加对牛肉馅的检测。食品和药物管理局则定于7月底前发布一份指南，说明如何防止番茄、瓜和绿叶蔬菜在生产和销售过程受大肠杆菌污染。　　专人协调　　美国食品安全监管工作由15个联邦机构承担。《华盛顿邮报》说，这样分工过于复杂、甚至“荒谬”。比如，食品和药物管理局负责监管农产品，农业部负责肉类食品。根据这一分工，奶酪比萨饼归前者管，而意大利辣香肠比萨饼要归农业部管。　　新规提出，这些食品安全监管机构派专人负责协调。食品和药物管理局将增设专门负责食品安全工作的副局长。食品安全及检验局将聘用一名首席医务官负责协调事宜。　　美国消费者联盟负责食品安全干事让哈洛兰对此举措表示满意。他说，消费者第一次在食品安全事务上有个“可找的人”。　　消费者欢迎　　美国政府早就提出要改革食品卫生监管体系。前总统比尔克林顿1999年就曾提出过要加强食品卫生监管，但始终不见具体行动。　　此次推出的新规受到消费者肯定。比尔马尔勒是长期代理有关食品安全诉讼的律师。他在博客中写道，在美国现行食品卫生监管体系下，总是要等有人因食品卫生问题生病或死亡才会引起关注。新规“将重点放在防范，而不是等病菌蔓延后再去数有多少人因病菌感染而丧生。”　　美国食品杂货商协会的斯科特法贝尔也称赞新规重在防范的特色，认为新规“给食品安全制度打下新的基础。”

老牌乳业公司飞鹤如今陷入"布鲁氏杆菌"传染病危机。这种源自牲畜的病菌，已被证实感染了飞鹤乳业的数十位员工，他们相信奶源遭到污染，不过飞鹤否认此事。如今，感染者与飞鹤的争议仍未了结……　　50年老厂黑龙江飞鹤乳业，曾在沸沸扬扬的"三聚氰胺"事件中幸免。不过，这次，它卷入一场关于布鲁氏杆菌病例(下称布病)的风波。　　11月11日，《法治周末》记者调查获悉，黑龙江省飞鹤甘南欧美养殖有限公司(飞鹤乳业下属子公司，下称养殖公司)出现布病病例，几十名工人、600余头奶牛陆续染病。　　多位职工向《法治周末》记者证实，"牛得病了之后还在正常产奶，牛奶还拉到北厂(飞鹤甘南乳业公司)生产线上生产奶制品".不过，养殖公司公开否认这一说法，并表示，牧场的全部奶牛健康状况良好。　　目前，感染布病的职工依然在家养病，等待相关部门的鉴定结果。飞鹤乳业虽然按全额为患病职工补发了工资，但并没有得到职工的谅解。　　现在，患病职工们很担心，因患病导致身体无法全面恢复健康，他们担心自己将来的健康无人负责。　　布鲁氏病菌侵袭飞鹤　　今年32岁的马光亮是2009年12月到养殖公司工作的，工种是挤奶工。　　2010年10月左右，养殖场大量奶牛被查出得了布病，作为挤奶工的马光亮被临时抽调到兽医组为奶牛接种布鲁氏杆菌活菌疫苗。　　"可能就是接种疫苗时感染上了布病，此后不久，我晚上睡觉时常常冒虚汗，走路都觉得没力气，以前在家自己喜欢炒菜，后来切菜都浑身冒汗，关节也时常疼痛麻木。"马光亮向《法治周末》记者介绍说。　　和马光亮一样，当时厂内不同工种的多名职工也出现类似症状。这不是黑龙江省唯一的案例。2010年12月，4只未经检疫的山羊进入了东北农业大学的实验室，28名师生在实验后患上了布病。这个消息直到十个月之后才公开。　　飞鹤养殖场场内兽医组修蹄工郑晓光和马光亮是病情相对严重的。他称，现在在家重活根本干不了，走几百米路就腰酸腿疼，以前能用手抬动100斤左右的煤，现在根本无法做到，已经基本没有劳动能力了。　　发现有职工感染布病，2011年1月25日，养殖场组织11名职工到甘南县疾病预防控制中心检查，结果11名职工的检查结果全部感染了布病。　　齐齐哈尔市疾病预防控制中心在今年3月29日出具的职业病诊断证明书显示：上述11名职工的诊断结论均是职业性布鲁氏菌病(急性期)。　　多位接受采访的患病职工告诉《法治周末》记者，诊断结果出来后，养殖场并没有及时为工人治疗，态度也非常刁蛮，只是发了些口服药，吃药后效果并不明显。　　在职工的要求下，今年5月，上述患病职工入住齐齐哈尔市第七医院住院治疗。3个月后，病情缓解后出院。　　此后，他们又到黑龙江省农垦医院进行检查。　　"黑龙江省农垦医院的检查结果中试管凝剂是1比800,半抗体是1比1600.西医说这病只能祛病症，没法祛病毒。我治了这么长时间，病情还是没减轻，我担心无法根治。"郑晓光称，他同其他几名职工治疗后，病情仍在不断加重。　　黑龙江省农垦医院给出的诊断是布病感染，症状为骨骼蜕变。　　"医生说，一般只有老年人才会骨骼蜕变，而我们刚刚壮年，今后能否恢复，自己很担心。"郑晓光说。　　2011年4月15日，在染病职工的坚持下，甘南县人力和社会保障局为11名职工出具了《企业职工工伤申请和认定决定书》，认定上述职工的伤残为工伤。　　多位染病职工向记者证实，11名染病职工被查出患病后，厂内组织职工分批进行了检查，又陆续有多名职工查出患有布鲁氏菌病，到目前为止，至少有26名职工被查出患有该病。"就连场长胡格吉勒及两名高层主管都查出患有布鲁氏菌病，但是他们是在海拉尔相关医院检查的，至今没有对外公布。"　　郑晓光称，国庆节长假期间，媒体关注了此事，县里和场里的负责人已经向他们承诺，尽全力为他和工友进行治疗，现在他和工友们正在接受相关诊断。　　前不久，他们在齐齐哈尔第一医院接受了彻底检查。　　染病的挤奶工刘东军告诉《法治周末》记者，在染病治疗初期，厂里只给他开了每月600元的最低工资，前不久刚刚补发了工资。　　据一位染病的职工介绍，场里最初对待职工染病很漠视，很多职工要求检查都遭到拒绝，有一位职工因自己旷工三天去医院检查，被单位辞退，后来因检查出布病，场里才为其支付了医疗费用。　　被污染的产业链　　布鲁氏菌病在中国属乙类传染病。《中华人民共和国传染病防治法》规定管理的传染病分甲、乙、丙三类。乙类传染病是指传染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、甲型H1N1流感等疾病。布病病原菌主要由患病牲畜传染给人，使其出现发热、关节肌肉疼痛、乏力、多汗等临床表现，严重的可能导致中枢神经损伤，引起脑膜炎等并发症。　　这种细菌可能通过三种途径进入人体：人吃了被感染的奶制品、通过人体表面的伤口感染，或通过眼睫膜、鼻腔黏膜、口腔等途径感染。　　郑晓光是2010年10月到飞鹤养殖场工作的兽医组修蹄工，据他回忆，他刚来厂里不久，就有600余头牛被感染上了布鲁氏杆菌病。此事也得到了其他工友的证实。　　他在没有任何兽医技术及经验的情况下，被抽调去为奶牛接种布鲁氏杆菌活菌疫苗，"虽然有防护措施，但自己根本没有意识到该病菌的传播和扩散的严重性，导致事后不久就染病。"郑晓光说。　　多名受访的职工称，染病的牛被隔离在单独的牛舍，每个牛舍200头牛，但是得病的奶牛依然每天按时产奶，养殖场没有采取解决方案，病牛产的奶被拉到北厂的生产线上生产成奶粉。　　养殖场里的病牛究竟是如何大面积染病的呢?　　郑晓光怀疑，因为养殖场要建万头养牛基地，奶牛头数不够，去年从新西兰引进了一批，这批牛有可能是染病的牛，后期慢慢传染很多奶牛也得了该病。　　染病职工分析，他们染病的原因可能是，给病牛投了布鲁氏杆菌活菌疫苗，这种菌到牛身上，可以让病牛一年内维持原来的产量。在第一批投放之后厂子又投了三次苗，这三次每投一次之后就有一批人得病。　　得病的奶牛依然产奶，这让消费者开始担心飞鹤乳业的奶源安全问题。　　飞鹤乳业在不久前发表声明矢口否认上述事实，并称奶源质量未受影响。　　据《法治周末》记者从甘南县政府相关部门了解到，目前，黑龙江省有关部门组成调查组已经进驻该县，针对飞鹤乳业奶源及职工染病问题进行调查，调查结果尚未公布。　　在飞鹤乳业的官方网站上，企业的口号是："一贯"好奶粉。　　此前，飞鹤乳业董事长冷友斌在接受媒体采访时称："我的目标是要告诉所有的中国消费者，北纬47度(养殖场所在地)生产的牛奶是最好的。如果中国的孩子还要靠外国人养，那么我觉得是一种屈辱，我就是要做中国最好的婴幼儿奶粉，在我眼里任何事情都不能为质量让路，这是我的底线。"　　飞鹤乳业一直以诚信著称，始终坚持"不合格原料坚决不投产，不合格产品坚决不出厂"的原则，对鲜奶、原材料、半成品、成品进行24小时全程跟踪检验，经过25道检验程序，203项次检验层层严格把关，确保每一滴奶各项指标不仅完全达到国家食品卫生安全标准，更符合世界卫生组织(WHO)关于婴幼儿食品卫生法规的严格要求。　　但是，自从职工染病后该企业的诚信口号备受社会各界质疑。　　甘南县畜牧局的一位未具姓名的负责人告诉《法治周末》记者，飞鹤乳业作为当地的招商引资企业，也是支柱产业，作为畜牧监管部门他们没有权力进场对奶牛进行防疫和检查，所有的检疫项目都由企业自己负责，作为畜牧部门，对发生上述事件也感到无奈。　　而甘南县疾病预防控制中心主任曲江波对飞鹤乳业职工染病一事似乎是很气愤。　　11月11日下午两点，养殖场与患病职工在疾病预防控制中心会议室协商患病职工的下一步治疗方案，《法治周末》记者以患病职工亲属身份参加了此次会议，原定和职工商讨的飞鹤牧业董事长王绍刚没有到场，只是派养殖场办公室主任张绍春参加了会议，引起了所有患病职工的不满，会议不欢而散。　　曲江波介绍说，飞鹤乳业职工染病后，作为疾控中心，一直积极协调职工诊断，并帮助请权威专家，但作为企业的飞鹤乳业根本没有一个积极的态度。　　染病职工前路茫然　　黑龙江飞鹤乳业有限公司始建于1962年，2003年5月，飞鹤乳业在美国纳斯达克成功上市，成为中国乳品行业第一家在美国的上市企业 2005年4月，飞鹤乳业成功登陆美国纽约证券交易所 到2007年底，飞鹤仅原料粉销售收入就突破3亿元大关，并远销亚非、中东、欧洲等几十个国家和地区 2008年3月，飞鹤凭借超强实力荣获"2007婴幼行业奶粉类十佳品牌".　　2008年9月，震惊行业的"三鹿奶粉事件"发生后，飞鹤乳业凭借优质的奶源、过硬的产品质量、严格的检测流程经受住了严峻的考验，成为了为数不多的合格企业之一。　　2008年10月，飞鹤产品全国各地销售市场供不应求，最高销量与去年同期相比提升600%.　　作为业内业绩佼佼者，飞鹤乳业在处理此次传染病事件中显得尤为被动。　　国庆节长假后，媒体报道了飞鹤甘南欧美养殖有限公司有多名牧场的工人感染布鲁氏杆菌事件。飞鹤乳业在当地政府的督导下，为职工进行了进一步检查。　　中国农业大学动物布鲁氏菌病防控技术研究室吴清民教授接受记者采访时表示，布病分为急性期和慢性期，发烧后一个月左右属于急性期。如果在急性期及时治疗，大多数病例在短期内临床症状会消失，这样病例的疾病复发或形成并发症者只占10%左右。如果患者能够坚持疗程和医嘱，对将来的工作、生活影响不大或无影响。如果治疗不及时或用药不合适，转化为慢性型，则病程很长、反复发作或出现并发症，如关节炎、劳动力下降等，治疗困难，可能影响终生。最为严重的后果是终生残疾，丧失劳动能力或生育能力，但在及时发现并有效治疗的情况下出现这种严重后果的比例较低。　　可是，接受记者采访的患病职工称，自从查出染病后，只是断断续续治疗，现在所有患病职工都在家等待结果。　　"得了病不可怕，可怕的是不能治愈，我们现在虽然出院了，可是上下楼都气喘嘘嘘，浑身冒汗，我现在很担心我们的病没有治愈。"马光亮告诉记者。　　11月11日，患病职工在县疾控中心取走了齐齐哈尔市疾控中心的检验报告，检测结果显示，经定期培养和观察，检测结果为阴性。而同时下发的齐齐哈尔市第一医院的检验报告单显示，一般细菌培养与鉴定，未见细菌生长，布鲁氏菌虎红平凝集实验呈阳性。　　疾控中心相关负责人为患病职工解释说，从上述结果看，职工感染的布病已经治愈，但体内还有布鲁氏杆菌，只是不再生长。　　在场的职工要求疾控中心开出治愈证明，遭到婉拒。　　很多职工在近一段时间要求到齐齐哈尔以外的医院进行检查治疗，但一直没有得到飞鹤乳业的回复。　　"从结果看，我们现在还不是健康的人，现在找工作甚至自己开个店都需要有健康证，我们才30岁左右，有的刚大学毕业参加工作，我们的未来该怎么办?怎么生活?"刘东军无奈地告诉记者。　　一位刚大学毕业的患病职工告诉记者，他到场内工作4个月，就得了布病，因为布病病情严重会影响生育，准备要结婚的女朋友也在近日和自己分手了，他觉得很茫然。　　企业的社会责任　　现在所有患病职工依然赋闲在家，等待最终结果。养殖场委派的办公室主任张绍春对此也很无奈："具体下一步该怎么做，我也无法答复你们，要等领导研究后再定。"　　对于这样的结果，患病职工感到很伤心："企业根本没有诚意给我们治好病，让我们不再担心。"　　此前，王绍刚面对媒体曾表示：对于患病的员工表示一个歉意的同时，承认在日常处理工作中，工作确实做得不细。　　他表示，对于患病职工的整个赔偿工作现在已经初步达成了一些意见。按照伤残等级鉴定的级别，根据法律法规的规定和治疗期治疗鉴定，根据这几个要件，来共同进行下一步的赔偿流程。　　染病职工对此说法并不认可，他们表示，自从患病以来，只见到王绍刚一次，王承诺以后，就再没有见到过他，他们怀疑企业对职工的诚意，并希望能进一步到相关权威医院继续诊疗。　　10月4日，甘南县副县长陈景春在接受媒体采访时介绍，目前飞鹤甘南牧场的全部奶牛健康状况良好，奶源质量也没有受到影响，经过齐齐哈尔市质量技术监督部门的监测，乳制品产品的质量，符合国家标准。　　但这一面之词受到公众质疑：在没有专家组调查得出结果前，甘南县政府单方面承诺上述事实，显然有失公允。在媒体报道短短两天之内，甘南县政府通过何种途径检测的，有没有第三方介入?　　在甘南县政府网站，甘南县县委书记王洪公开讲话称，2010年，全县规模以上工业增加值实现12亿元，增长92.8% 实缴税金6707万元。飞鹤(甘南)乳品加工项目加工鲜奶45223吨，实缴税金4000万元，成为全县税收支柱企业。　　甘南县县长崔凤臣所做的《2010年政府工作报告》显示，2009年，飞鹤乳业公司新建机械榨乳站60个，保证了鲜奶的品质和安全，累计加工鲜奶59426吨，实现增加值3.3亿元，实缴税金5146万元。　　飞鹤甘南欧美养殖有限公司董事长王绍刚接受《法治周末》记者采访时承认，因为企业对传染病防治工作经验的欠缺，导致奶牛和职工染病，现在省市县三级政府对此事相当重视，会严格按照传染病防治法的相关规定，为职工继续治疗和相关补偿。　　"我们已经对染病的奶牛进行处理，淘汰后屠宰掩埋。"王少刚介绍说。但他拒绝向记者透露染病奶牛的数量。　　王绍刚称，虽然飞鹤乳业是当地的支柱产业，但政府已经积极应对，不会对此事进行隐瞒包庇。　　对于染病奶牛还继续产奶一事，王绍刚没有向记者正面回复。

手机中的新应用正逐渐改变着用户的消费世界，” v-Fluence Interactive 网络市场研究与支撑中心总裁Jay Byrne在最近的评论文章中列数了几款时新的手机应用：“比如，一款名为CellScope的手机技术使得手机的摄像头可被用作发光的显微镜——这意味着拥有这种摄像技术的手机，比如iPhone，可被用来收集和传输照片，用于疾病的诊断。”　　“通过升级软件或者摄像头来实现诸如此类的应用已经为期不远了，在不远的将来，在任何iPhone或者其它的手持设备上都能实现这些功能，包括大肠杆菌或者食物中其它细菌的检测。假设你发现你的细纹牛排味道有些不对，只需用你的手机咔一下，就可以看看这个来自麦当劳的巨无霸有没有受到污染。还有H1N1、打喷嚏等，也只需咔一声，诊断结论和一些相关的信息就可以实时的被呈现出来了。”　　这种类型的手机新应用是数不胜数的，它们可以改变消费者的抉择过程和行为倾向。Byrne这样说道：“我们在食品质量和疾病诊上做好了大量进入和控制的准备了吗?问题不在于我们是否做好准备，该来的都要来。并且，这也只是手机众多应用中最细微最新鲜的’一颗螺丝钉’而也，手机的应用到底有多惊人，超乎任何人的想象!”

由新西兰乳制品巨头恒天然集团董事会委托成立的独立调查委员会，29日在奥克兰公布了有关浓缩乳清蛋白污染误报风波的调查报告。报告称，虽然消费者不会面临肉毒杆菌风险，但恒天然在生产流程和应对误报风波过程中仍存在诸多问题和值得改进的地方。　　这份历时2个多月完成的独立调查报告指出，这次肉毒杆菌误报风波并非由单一事件或个人造成。恒天然集团对一些关键决定缺乏高层监管，对事态升级的应对不够迅速，对可能受影响产品的追踪也不及时……这些因素相互作用，造成了浓缩乳清蛋白污染误报风波，并对恒天然集团的国际声誉造成负面影响。　　报告还指出，恒天然并未对浓缩乳清蛋白粉进行亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌测试 生产线上的自动清洗系统需进一步完善 在涉及"爆炸性声誉风险"时，恒天然高管和董事会应对不够及时 在污染风波公开后的头两个星期，恒天然集团和新西兰政府之间步调不够一致，而且显得信心不足。　　针对此次风波，调查委员会还提出33项整改建议。专家们建议恒天然进一步审核其食品质量、安全监管和测试系统，确保达到高品质要求。报告还建议恒天然加强风险管理和危机管理的流程，如成立经过专门培训的多学科事件管理团队和加强定期培训体系，并设立新的危机应对委员会。此外，报告还建议恒天然修订生产厂家的清洁程序。该调查委员会还表示，在9个月和19个月后，会根据上述建议检查恒天然的整改进度。　　恒天然集团当天对董事会独立调查报告表示欢迎。恒天然集团首席执行官西奥史必根思表示，该报告涵盖范围广泛，内容深入，为恒天然管理层提供了重要、深刻的分析和建议。　　新西兰政府层面对有关上述污染误报风波的调查仍在进行中，调查报告有望于今年12月公布。　　今年8月3日，新西兰初级产业部宣布，恒天然旗下工厂生产的约38吨浓缩乳清蛋白粉被检测出含有肉毒杆菌毒素，这些乳清蛋白粉作为原料生产婴幼儿配方奶粉、饮料等产品，已有部分出口至中国等海外市场。　　然而，新西兰初级产业部随后于8月28日宣布，该部门对恒天然集团生产的浓缩乳清蛋白进行了多次重新检测，结果未发现其中含有致病的肉毒杆菌，而是含有一般不会引发食品安全问题的梭状芽孢杆菌。初级产业部还表示，恒天然集团的客户有理由继续关注该集团的浓缩乳清蛋白生产厂的卫生状况。