梯度仪

请教 高压梯度和低压梯度应用场合有什么不同？ 具体地说，某一项分析如果采用高压梯度，是不是一定也可以采用低压梯度呢？ 或者仅仅是经济条件方面不同呢？双泵的高压梯度和低压梯度仪器配置，资金相差大约有多少？

二元高压梯度（双泵+在线混合器）与四元低压梯度（单泵+低压梯度阀+脱气机+混合器），对于上面两个配置，现在哪个实用性更好？哪个洗脱效果更好？一般首选哪个配置？ 顺便弱弱的问一下，如果我选二元高压梯度，对于像甲醇：水：冰醋酸（48：52：1）这种三种溶剂甚至四种的流动相该怎么去弄呢？它总共才二个溶剂通道吧。。。。

如题，请各位大神帮忙解答一下，高压梯度和低压梯度的优缺点各在哪里？高压梯度泵后混合可减少气泡的产生，但有人也说在检测器内（恢复常压后）可能会产生气泡。如果这样，是否高压梯度最好也配在线脱气？低压梯度的精度可以做到多少？对于串联泵来说，除了混合体积不够的原因外，比例阀切换频率如果和泵运行频率同步的话，是否也会造成基线不平（波浪形基线）？二元低压梯度最好的切换比例阀的方式是什么？按照时间周期或者是按照泵的运转周期？有没有熟悉waters或agilent的大神帮忙告知一下这两家是如何做的？感谢！

通常说的高压梯度和低压梯度到底有什么区别呢？一直很疑惑？

想做一个高压梯度泵梯度混合器的了解，请大家有二元高压梯度仪器的说说自己的仪器型号及梯度混合器的体积。

这款[url=http://www.f-lab.cn/pcr/pcrsg-500.html][b]梯度PCR热循环仪[/b]PCRSG-500[/url]是真正意义上的[b]梯度PCR仪,[/b]适合[b]聚合酶链式反应[/b]为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。[b]梯度PCR热循环仪PCRSG-500特点[/b]方便而灵活的模块更换设计密封样品设计，用于低温保存,清洁和干燥双阶热盖压力调节器，确保完美密封镀金或镀银模块，增加热传导效率，实验更为有效超大尺寸高对比度LCD显示屏[img=梯度PCR热循环仪]http://www.f-lab.cn/Upload/PCRSG-500.jpg[/img]具有指导性的界面方便用户使用操作可调旋钮配置，适合各种试管断电内存保存功能超低噪音，节能，寿命长热盖可在任何角度停止金属材料盖子，更加安全可靠可以连接硬盘和鼠标可与计算机连接进行多功能控制Windows系统方便免费程序升级[b]梯度PCR热循环仪PCRSG-500参数[/b]容积：96x0.2mL, 54x0.5mL，96x0.2ml,77x0.5ml,384well温度范围：0-99℃最大加热速率：=4.5℃/s均匀性：=4℃/s温度精度：=+/-0.2℃温度梯度范围：30-99℃梯度扩散：1-30℃梯度均匀性：=0.2℃加热盖温度：20-110℃可存储命令数：1000最大循环数：999显示：5.7''LCD尺寸：380x270x250mm重量：7.8kg[color=#1C1C1C]更多PCR仪请浏览官网：[url]http://www.f-lab.cn/pcr.html[/url][/color]

ICS1000加上RFC30可以走一阶梯度而ICS-2000可以走多阶梯度。那一阶梯度和多阶梯度有什么区别呢？如果我要走 Time A B 0 10% 90% 5 40% 60% 8 40% 60% 10 10% 90%这样的梯度，用ICS1000加上RFC30能实现吗？

各位大侠：请教一个问题，液相色谱仪梯度有高压和低压的区分，我一直弄不明白这两种梯度方式那种更具优势，梯度混合效果更好，请给一个好的答案！！！！！！！！！！！！！中国心中国心中国心

高压二元梯度与四元低压梯度究竟哪一个好呢，请大家踊跃发言

仪器需要过夜检测，样品检测要求一针空白一针样品，以一个样品是50%-100%梯度，另一个是70%-100%梯度，怎么设置才能让其再一个序列里面完成？ 小白一枚望大神指点指点

请教：进行梯度洗脱时，用低压梯度还是高压梯度好？有什么区别？谢谢！

由于JJC 705-202规程中对于梯度误差的检定只给出了二元的，现在四元梯度使用越来越多，各家的检定都是自定一套，没有统一标准。如何定才最合理？很想知道大家的想法。

怎样做梯度洗脱啊，是直接在泵上设置就行么？内梯度和外梯度的拆别在哪里？

液相梯度洗脱中，分线性梯度、凸形梯度、凹形梯度、分段梯度，请教一下，凸形和凹形的程序如何设置呢？这两种梯度是否可以采用分段梯度来达到同样的效果呢？

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。 梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。 两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。 在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视： ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 ③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。 ④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

小弟做游离氨基酸，先用的梯度是：0.01min B 0% ,12min B 15% ,30min B 34% ,30.01min B 100% ,40min B 0% ,50min B 0%.这是经典的做氨基酸的梯度，但我用得不行，峰总有几个连在一起已经排除了其他条件对峰的干扰可能（全部按标准做的）后认为应该提高洗脱能力，对于反向柱，降低B的含量于是采用这个梯度：0.01min B 0% ,13min B 7% ,23min B 23% ,29min B 35% ,35min B 40% ,40min B 100% ,45min B 100% ,47min B 0%这个梯度已经降低了B的含量，但还是无法把峰分开哪位大侠做过的指点一下偶的迷津，帮我设计一个合理的梯度在此多谢了买新柱子老板是绝对不会答应的

0.1%三氟乙酸乙腈-0.1%三氟乙酸水进行梯度洗脱，出现好几个系统峰，做杂质测定时要扣除，最近做的时候系统峰变大，不知道有什么原因引起的，如何消除系统峰

[align=center]开发了一个梯度方法，当我在我的系统上运行它重复性很好，但我不能在另一个系统上得到相同的结果？[/align]当梯度法从一个高效液相色谱系统转移到另一个系统时，偶尔会出现一些困难。除非系统完全相同，否则用户通常会在保留时间上发生一些变化。大多数情况下，留存率的变化不会影响到解决方法的效果，人们通常可以忽略这些差异。另一方面，通过对潜在原因的正确理解，我们可以调整梯度，以从不同的HPLC系统获得相同的性能。梯度驻留体积：它是梯度混合点和柱顶之间的体积。在你通过注入样品开始分析后，梯度将不会到达柱的顶部，直到梯度停留体积被清除。这意味着你的样本最初要经历一段等稳迁移的时期，直到梯度赶上。由于不同系统的梯度停留体积不同，这种等稳偏移时间也会不同，可能导致滞留时间的差异，甚至影响分辨率。另一种可能是梯度本身。系统与系统之间可能存在组成差异。对于今天生产的大多数HPLC系统，这应该只是次要的问题。但是，一般来说，任何梯度系统都能在成分的中间范围，即50% a和50% B的混合物中，提供具有最高准确度的成分。当非常不成比例的a和B混合时，例如5% a或95% a，准确性就会受到影响。[align=center]哪些可能导致我的方法传输问题?[/align]最简单的事情是比较你的梯度两个系统。为了做到这一点，你断开色谱柱，并在梯度的b溶剂中添加紫外线吸收剂。如果你使用的是反相体系，你可以在b溶剂中加入10mg /L的对羟基苯甲酸丙酯。然后在两个系统上运行渐变并记录基线。然后将这两个情节相互比较。你需要找到梯度开始的点，你还需要测量梯度剖面。如果你的梯度是线性的，那么你只需要检查梯度的斜率。很有可能你会发现两种仪器之间的梯度开始是不同的，而轮廓是非常相似的，只是被一些时间抵消了。在这种情况下，你有一个不同的梯度停留体积。[align=center]是否有一种简单的方法来补偿驻留体积的差异?[/align]有一个解决方案大多数时候都是有效的。如果梯度停留体积在你的方法转移到的系统上较小，你可以通过在梯度开始时设计一个补偿体积差异的等稳部分来补偿停留体积的不足。剩下的梯度保持不变。另一方面，如果第二个系统的梯度停留体积比第一个系统的梯度停留体积大，则情况更困难。原则上，您可以启动梯度，然后在延迟一段时间后注入样品，这段时间可以解释两种系统之间梯度停留体积的差异。但在自动系统上，这可能是不可能的，因为注入会触发梯度的开始。在这种情况下，您可能需要回到原点并重新开发该方法。[align=center]我能做什么来防止这种情况在未来发生?[/align]您可以通过为最终将使用该方法的HPLC系统开发该方法来避免这种情况。这需要一些远见和一些计划，但通常不是不可能的。您首先需要做的是描述可能用于您的方法的系统。对于每个系统，你需要知道两件基本的事情:梯度驻留体积和合成精度。你可以在一个实验中得到这两个信息:如上所述，你在你的b溶剂中添加一个紫外线吸收剂。然后你在0% B到100% B的增量5%的多个步骤梯度。流量应该是通常使用的流量，所以最有可能你将使用1毫升/分钟的流量。步骤之间的间隔应该是几分钟，或者5分钟。现在在不同的系统上运行这个梯度，而不需要一个柱，并记录检测器的响应。为每一步编程的时间和实际发生的步骤之间的时间延迟给你梯度延迟时间。台阶的高度给了你构图的一个度量。步骤会被抹去一点，这是系统中混合体积的函数。现在您已经确定了系统的特征，您可以围绕系统的特征设计您的方法。正如我之前提到的，最大的问题通常是渐变驻留体积。如果您知道需要转移您的方法的系统比开发您的方法的系统有更大的驻留体积，那么您应该在您的方法开发中自动添加一个等稳步骤，以补偿这种差异。如果目标系统的驻留体积小于开发系统的驻留体积，那么您应该能够通过在转移方法时在方法的开始部分添加一个梯度延迟时间来简单地补偿这一点。如果在渐变过程中存在组成差异，你也可以通过调整渐变轮廓来弥补这些差异，但我从来没有遇到过这种情况。本讨论假设柱与起始流动相处于完全平衡。我偶尔会遇到这样一种情况，在常规分析中，梯度彼此跟随得如此之快，以至于柱在起始流动阶段永远不会恢复平衡。你会发现，如果你的第一个梯度总是给出不同于后续梯度的结果，你就会遇到这种情况。这可能有利于加快方法的速度，但当将该方法转移到具有不同驻留体积的另一个系统时，这可能会造成困难。

梯度洗脱对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。梯度洗脱特点：提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。梯度洗脱的形式线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大，直线斜率越大。指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。折线形： 选择适当的A,B溶剂强度：A溶剂为低强度；　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-10之间。初步分离　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。梯度形式选择经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；　 可选择线形梯度，或凹形梯度。② 前半部分离良好，后半部峰重叠；　 可选择凸形梯度。③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。　 可选择折线梯度。

[align=center][b][size=15px]梯度的缩放[/size][/b][/align][size=15px]问题：我在150 mm x 4.6 mm色谱柱上开发了一个洗脱方法。但是有两个相邻杂质峰分离不好，我希望用250 mm 柱长的色谱柱来解决这个问题。但是，当我使用250 mm 的长柱时，得到的结果却不尽人意：这两个相邻杂质峰的分离度更差，而且其他的杂质峰洗脱顺序也发生了一定变化。但是色谱柱的生产商告诉我这两种长度的色谱柱的填料是一样的。为什么会出现这种问题呢？[/size][size=15px]回答：如果15 cm和25 cm色谱柱中的填料确实相同，那使用更长的色谱柱，各杂质峰应该得到相同的分离，且具有更高的分离度。但您测试时，其他的杂峰的洗脱顺序发生变化，说明两个色谱柱中的填充剂不相同。但是因制造商坚持认为两根色谱柱的填料来自同一批次，并且由于您已经使用15厘米色谱柱已有一段时间，因此您这个问题，要怀疑在您的方法开发过程中该15cm的色谱柱在已经老化，已不能代表该型号色谱柱填料。这种情况并不少见，并且通常是色谱工作者感到严重挫败的原因。因此，我始终建议进行方法开发及方法验证时使用新的色谱柱。[/size][size=15px]问题：我还有另外的相同填料的15cm的色谱柱，当我运行相同的梯度时，在另外一根相同填料15cm的色谱柱上各峰的出峰情况与我已使用的这一根一致。这说明我使用得这根色谱柱并没有老化，不是吗？[/size][size=15px]回答：确实有这个可能。不过您说您使用的是梯度方法，这使问题变得复杂化。你如何将这个梯度方法从短柱上转移至长柱上的？[/size][size=15px]问：我没有把梯度方法进行缩放，而是在短柱及长柱上用了相同的梯度程序、相同的流速及相同的运行时间。[/size][size=15px]答：这很可能就是原因所在。当在不同的色谱柱上使用梯度方法时，梯度体积应与色谱柱体积成比例地缩放，以使具有相同洗脱结果。当然，与等度色谱法一样，这会增加色谱柱的分析时间。由于系统死体积，还会发生一些其他复杂情况。在下文中，我将更详细地讨论梯度方法的缩放比例。[/size][size=15px]为了能够在不同色谱柱之间获得相同的梯度分布，应与色谱柱体积成正比地改变梯度体积。如果想在15 cm的色谱柱与25 cm的色谱柱上获得相同的洗脱结果，在两根色谱柱具有相同的内径前提下，使用较长的色谱柱时，您的梯度体积应大25/15 = 5/3。如果在两色谱柱上都保持相同的流速，则梯度持续时间和其他梯度事件时间应相应增加5/3。[/size][size=15px]当更改色谱柱直径时，也要遵循与色谱柱体积成比例地缩小或放大梯度体积的规则。如果要将梯度从150 mm x4.6 mm的色谱柱缩放到150 mm x 3 mm的色谱柱，则应将梯度体积减小2.35倍。通常，这将是必然的选择，因为无论如何您都正在减少与柱体积成正比的流速。在这种情况下，您可以使梯度曲线保持恒定并获得（与更换柱子之前）相同的结果。[/size][size=15px]到现在为止，所有计算都假定您使用的仪器的死体积可以忽略不计和/或对分离没有影响。通常，这种计算方式适用于在梯度后期洗脱的保留良好的化合物。但是，对于前期洗脱的化合物而言，并不一定是这种情况。在常用的单泵梯度系统中，梯度是在泵的低压侧产生的，而在较旧的系统中，会明显的延迟梯度到达色谱柱前端的（时间）。此梯度方法中这一段的死体积，可能会影响前期洗脱化合物的洗脱模式。更改色谱柱尺寸时，梯度方法的死体积与色谱柱体积的比率应保持恒定。不幸的是，当想要将梯度从较大体积的色谱柱缩放到较小体积的色谱柱时，这种计算方式的转化可能存在较严重问题。幸运的是，您希望将梯度从体积较小的柱子放到体积较大的柱子上，从而简化了这种情况。[/size][size=15px]为了调整梯度的延迟（使前后一致），首针需要测量仪器的死体积。最好在没有色谱柱的情况下，测定少量的具有紫外吸收的化合物（例如用甲醇作为溶剂的1％丙酮），以1 ml / min的流速从甲醇到甲醇运行一个阶梯梯度，以达到最佳效果。测量梯度程序从开始变化到变化至终浓度一半的时间，再成倍调整流速运行，通过对比流速调整前后的时间的变化就可以计算出仪器的死时间。在使用体积较小的色谱柱时，由于这个死体积会使我们设定的梯度程序上延迟到达柱前端，因此，我们需要以相同的比率（死体积/柱体积）在较大的色谱柱上进行推迟梯度，以得到完全相同的梯度曲线。例如，如果使用150 mm x 4.6 mm色谱柱时系统的死体积为1 ml，则对于250 mm x 4.6 mm色谱柱应为1.66 ml。因此，在充分考虑了150 mm色谱柱和250 mm色谱柱上获得的实际梯度分布差异后，我们需要为250 mm色谱柱的梯度程序在开始阶段先加上0.66 ml的等度运行。完成此操作后，两根色谱柱均获得相同的洗脱曲线。[/size]

我用的可做4元梯度，我想问的是，在做多种组分时，怎样根据等度图谱，设梯度洗脱，可使基线不会有太显著飘逸和梯度变化的时间点以及梯度曲线怎样选择？

我的是兰博液相,做梯度时候,梯度变化时不能停止,一边降到0一边升的很高到2,有时到梯度该转换时不转换,不受控制,请问:问题在哪里?

最近发现一个有趣的现象，当流动相由水相（0.1%三氟乙酸）急速转换成有机相（乙腈）时，不同类型色谱柱梯度峰是有很大差别的。梯度 时间/min水相(%)有机相(%)0.01100030100030.010100600100611000751000http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605161055_593487_1987954_3.gif

目前HPLC仪器制造厂家大都推出四元低压梯度（带在线脱气）系统，而在数年前大都是两元高压梯度，当然是用在梯度时。那么两元高压梯度和四元低压梯度（带在线脱气）系统比较一下，各有什么优缺点。讨论范围不仅是性能，还应考虑生产成本和销售利润。大家觉得如何。我目前还是觉得这是国外厂商的一种销售技巧，从目前的售价看，四元的比二元高压并低不了太多，但他们节约的成本是不少的。我认为高压梯度在作高精度分析时优势明显。

实验用到梯度洗脱，A：40mM磷酸盐缓冲溶液 B：乙腈：甲醇：水（45:45:10）时间(min)B(%)001.9018.15718.610022.310023.20260请教大家：梯度之前的平衡，要用哪一相平衡柱子？还是要运行几个空白梯度进行平衡？我用的是A相，直至压力和基线稳了才进行梯度分析，这样对吗？关于梯度洗脱柱平衡的注意事项请大家多指教一下。

各位大神，我用了一个初始有机相相比例为20在15min内升为80，后保持5min，后10min平衡为初始比例的一个梯度，结果是我要的化合物主峰基本都在15到20min左右，我想让峰保留时间提前，怎么调节梯度的初始比例跟时间比较合适呢？请大家帮忙解答。

很少用到梯度洗脱，请教个问题，可能没有实际意义只是有点想不明白自动进样，如果样品运行时间和梯度设置的周期不一样的话，比如运行时间10min，而一个周期设了20Min,那么仪器是如何工作的呢，是梯度走一半继续下一针呢，还是进下一针时还在运行上一个余下的梯度呢，相反恩如何运行时间长而周期设短了呢，还有最后一个指令结束后是一直按照最后的条件走吗

做专属性实验，比较两种洗脱方法的优劣，制定质量标准草案，完善现有标准，梯度按英国药典本品原料药的色谱条件进行，等度按本品制剂中国质量标准色谱条件进行，把样品破坏后，分别用等度与梯度洗脱，只是流动相与流速不同，其他色谱条件相同，各杂质峰用紫外扫描后，应该是同一峰吗？出峰个数、峰面积应该一样吗？

单梯度与双梯度磁场的比较