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免疫测定系统

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  • 化学发光免疫测定

    化学发光免疫测定

    化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型。第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物,通过发光反应增强测定的敏感性;第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物,直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。  一、化学发光酶免疫测定  从标记免疫测定来看,化学发光酶免疫测定(chemiluminescentenzymeimmunoasssay,CLEIA)应属酶免疫测定。测定中2次抗原抗体反应步骤均与酶免疫测定相同,仅最后一步酶反应所用底物为发光剂,通过化学发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。两种常用的标记酶,辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)均有其发光底物,由此建立的CLEIA均在临床检验中应用。  (一)HRP标记的CLEIA  常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,通常以0.1mol/LpH8.6Tris缓冲液作底物液,鲁米诺和H2O2在无HRP催化时也能缓慢自发发光,而在最后光强度测定中造成空白干扰,因而宜分别配制成2瓶试剂溶液,只在用前即刻混合。  HRP催化鲁米诺氧化的反应可被某些酚试剂(如邻-碘酚)或萤火虫荧光素酶等加强。加强剂的作用是增强发光和延长发光时间,由此可提高敏感度。  (二)AP标记的CLEIA  在以AP为标记酶的CLEIA中,应用的底物为adamantyldioxetasephosphate,有不少衍生物的商品试剂如PPD可供应用。发光反应的反应式如下:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290913_24989_1636364_3.jpg[/img]二、化学发光标记免疫测定  化学发光标记免疫测定亦称化学发光免疫测定(chemiluminescentimmunoassay,CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件:①能参与化学发光反应;②与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂;③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力;④应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。  鲁米诺类的发光反应须有催化剂(例如过氧化物酶)催化,且与蛋白质或肽结合后其发光作用减弱,因此鲁米诺类在CLEIA中是很好的底物,但已较少用于CLIA的标记。吖啶酯类对CLIA更为适用,其显著的优点是:①氧化反应不需催化剂,只要碱性环境中就可以进行。反应物在加入H2O2后再加氢化钠溶液,发光反应迅速,本底低。②在氧化反应过程中,结合物被分解,因此游离的吖啶酯的发光不受抑制。试剂稳定性好。  三、电化学发光免疫测定  在电化学发光免疫测定(electrochemluminescenceimmunoassay,ECLI)中应用的标记物为电化学发光反应的底物三联吡啶钌,其衍生物N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯可通过化学反应与抗体或不同化学结构的抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与ELISA相似,分二个步骤进行。以双抗体夹心法测定抗原为例,第一步在试管中进行,反应物为Ru(bpy)32+标记的抗体、吸附在磁性微球上的固相抗体以及受检的标本,反应式如图[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290914_24990_1636364_3.jpg[/img]反应后除由标记抗体、固相抗体与标本中的抗原形成的夹心复合物外,尚有多余的标记抗体和固相抗体。第二步是将反应液输入特殊的检测仪器的反应室中(图18-3),随即用含三丙胺(TPA)的缓冲液冲洗。反应室电极下有磁铁。含磁性微球的夹心复合物及游离的固相抗体被吸附在电极表面,游离的标记抗体随冲洗液流出。此时在反应室中即发生如图18-1的电化学发光反应。发出的光由光电倍增管转为信号,通过电信号的测定反映标本中抗原的含量。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290915_24991_1636364_3.jpg[/img]ECLI具有以下优点:①标记物在再循环利用,使发光时间更长、强度更高、易于测定;②敏感度高,可达pg/ml或pmol水平;③线性范围宽,>104;④反应时间短,20min以内可完成测定;⑤试剂稳定性好,2~5℃可保持一年以上。  四、在医学检验中的应用  放射免疫分析因标记物的放射性在应用中存在不少问题。为替代这一广被采用的测定方法,近年来创立了多种新的标记免疫技术。化学发光免疫测定具有明显的优越性:①敏感度高,甚至超过RIA;②精密度和准确性均可与RIA相比;③试剂稳定,无毒害;④测定耗时短;⑤测定项目多;⑥已发展成自动化测定系统。因此化学发光免疫测定在医学检验中不仅能取代RIA,而且可得到更为广泛的应用。

  • 化学发光免疫测定(Chemiluminescent immunoassay, CLIA)

    化学发光免疫测定是将抗原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检测技术,最初建立于1976年。  (一)原理  化学发光免疫测定属于标记抗体技术的一种,它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原,当标记抗体或标记抗原与相应抗原或抗体结合后,发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用,发生氧化还原反应,反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光,最后用发光光度计进行检测。    (二)标记物  1.发光剂直接标记 常用鲁米诺及其衍生物等,它们属环肼类化合物,能与很多氧化物如氧、次氯酸、磺、过氧化物等反应而发光。因此可直接将鲁米诺或其衍生物标记抗体或抗原进行CLIA。这类方法特异性强,但往往会因交联影响发光物特性,降低敏感性。  2.发光催化酶标记 常用辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、葡萄糖氧化酶等标记抗体或抗原。与酶标抗体测定基本相同,差别在于CLIA是用发光性底物指示反应,有人称为发光酶免疫测定。  3. 标记物产物参与反应 标记物不直接催化发光反应,而其反应产物能使反应系统发光。如用草酸类标记抗体或标记抗原,在有H2O2作用下,生成二噁二酮,后者可使红荧稀(Rubrene)激化发光。  (三)应用  CLIA特异性强、敏感性高,可检测到10-5mol/L的抗原量。快速,一般几十分钟或1-3小时内完成。操作简便,可进行固相和均相分析。试验重复性好,试剂易标准化和商品化。目前已用于多种药物、激素、病原微生物及其代谢产物、抗体及其他生物活性物质的测定。

  • 【转帖】放射免疫测定操作的安全预防措施!

    工作人员被放射性同位素污染是生物医学实验中最大的危害之一,为了在操作过程中确保安全,有许多严格的规定和要求。虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的,但这些预防措施必须严格遵守。现对从事这一工作的一些原则作一简述,多半是一些普通的常识,但在执行时往往容易忽略而造成严重的后果。 1.放射免疫实验室中的放射性危险 对于没有封闭的放射性物质,主要的危险有下面三种: (1)β-或γ-射线的外照射 在放射免疫测定实验中,这方面的危险不大,因为放射性同位素的使用总量相当小,最常用的125I,它的能量也较小(0.027MeV),因此,其穿透能力是很小的。 (2)皮肤污染 这是在放射免疫测定中最常见的危害。高剂量的污染会导致皮肤的坏死,更为严重的是由于不注意手上污染的同位素而非常容易随着吃东西进入体内,随后又分布到全身。 (3)同位素进入人体 这是最主要的危险,通常是由于被那些皮肤或衣服上污染了同位素的人制作食品和饮料所致。同样也可能从空气中吸入。因为125I集中于甲状腺会导致甲状腺严重坏死,而且在体内长期受125I放射损伤还会导致癌症。 2.管理总则 对于操作放射性同位素的实验室应该这样设计:这些实验室应该符合使用和贮存同位素的要求。实验区域应该用国际上所接受的警告标志显示。在一些较大的实验室,对于操作大剂量放射性同位素(1mCi)的设计应该进行特别的审查。实验室内应该有通风良好的通风橱,而且还应该有淋浴的地方以便对可能出现的皮肤污染及时冲洗。对于一些没有经过同位素安全知识训练的人员不能允许进入实验室。 每一个实验室,即使是小实验室,应该指定专人(RSO)负责安全检查,此人将对有关人员进行同位素使用的安全教育,定期检查工作人员和仪器的污染情况,并帮助处理一些事故。该人对进入实验室的的所有放射性物质负责,并按照有关法令来处理同位素。 3.标记规则 下面的规则适用于所有水平的同位素标记工作。 (1)在实验室必须穿上带有从事同位素工作标记的实验服。(2)不准在实验室里吃、喝和抽烟。(3)如果溶液的放射性强度超过0.1μCi/ml,或虽然溶液中放射性强度较低,但总的放射性超过10μCi时,操作时均需戴上手套。(4)当操作的剂量大于1mCi时,手必须要用放射监测仪进行测定,这包括移去手套前后均需测定。(5)所有放射性材料,其浓度大于0.01μCi/ml或总放射强度大于1μCi时,均须标上同位素标签,标明强度、日期和体积; (6)不准用嘴来吸移液管; (7)应该尽可能采用有防护物的吸管装置; (8)所有操作台面需有保护层覆盖,并定期检查,在必要时把保护层换掉; (9)放射活性大于0.1mCi时,所有操作应在盘中进行,并在用过以后立即进行检查; (10)对于非消耗性设备(柱、注射器、吸管),若使用过高剂量放射活性材料后,必须在使用后用自来水冲洗,并浸泡在有去污剂的溶液中,直到下次再用,那些设备应该指定放在同位素实验室,不允许拿到别的地方再去使用;

  • 【分享】电化学发光免疫检测原理动态展示

    电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290841_24973_1636364_3.gif[/img]

  • 化学发光免疫分析的类型介绍

    化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型:   (一)化学发光酶免疫测定   化学发光酶免疫测定(CLEIA)是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大,具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶,发光底物为dioxetane磷酸酯,固相载体为磁性微粒贵州学|习网搜集整理。   (二)化学发光免疫测定   化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。   用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件:   1.能参与化学发光反应。   2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。   3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。   4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。   鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。   (三)微粒子化学发光免疫分析   该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0%26mu;m,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:(1)竞争反应:用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。(2)双抗体夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。   (四)电化学发光免疫测定   电化学发光免疫测定(ECLI)是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应,包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯,可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLL的测定模式与ELISA相似。其基本原理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂,将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌,随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行,不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。

  • 免疫化学发光原理

    一)原理  化学发光免疫测定属于标记抗体技术的一种,它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原,当标记抗体或标记抗原与相应抗原或抗体结合后,发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用,发生氧化还原反应,反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光,最后用发光光度计进行检测。    (二)标记物  1.发光剂直接标记 常用鲁米诺及其衍生物等,它们属环肼类化合物,能与很多氧化物如氧、次氯酸、磺、过氧化物等反应而发光。因此可直接将鲁米诺或其衍生物标记抗体或抗原进行CLIA。这类方法特异性强,但往往会因交联影响发光物特性,降低敏感性。  2.发光催化酶标记 常用辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、葡萄糖氧化酶等标记抗体或抗原。与酶标抗体测定基本相同,差别在于CLIA是用发光性底物指示反应,有人称为发光酶免疫测定。  3. 标记物产物参与反应 标记物不直接催化发光反应,而其反应产物能使反应系统发光。如用草酸类标记抗体或标记抗原,在有H2O2作用下,生成二噁二酮,后者可使红荧稀(Rubrene)激化发光。  (三)应用  CLIA特异性强、敏感性高,可检测到10-5mol/L的抗原量。快速,一般几十分钟或1-3小时内完成。操作简便,可进行固相和均相分析。试验重复性好,试剂易标准化和商品化。目前已用于多种药物、激素、病原微生物及其代谢产物、抗体及其他生物活性物质的测定。

  • 【资料】化学发光免疫分析

    [size=4]化学发光免疫分析  [/size][url=http://baike.baidu.com/view/1401709.htm][size=4]化学发光免疫分析[/size][/url][size=4](chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。[/size]

  • 【转帖】免疫检测中的基础知识、实验操作步骤、影响因素及质量控制。

    免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法,其基本原理是抗原抗体的特异性识别。酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是实验室比较常用的免疫检测方法。因为可用于农残的初筛,所以特转载本专题为您详细讲解免疫检测中的基础知识、实验操作步骤、影响因素及质量控制。希望大家能对它有所了解.

  • 【转帖】放射免疫分析试剂!

    1、标准品  标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。  按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物  标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。  要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体  应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。  根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂  以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制:  活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型)  右旋糖酐T200.2g  加0.1mol/L PB 至100ml  电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液  放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。  目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。  在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA• 2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。  在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6):  0.1mol/l PB        980.0ml  0.3mol/L EDTA• 2Na     10.0ml  0.2%洗必泰溶液       10.0ml  溶菌酶           1.0g

  • 【转帖】放射免疫分析试剂!

    1、标准品  标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。  按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物  标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。  要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体  应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。  根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂  以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制:  活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型)  右旋糖酐T200.2g  加0.1mol/L PB 至100ml  电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液  放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。  目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。  在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。  在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6):  0.1mol/l PB        980.0ml  0.3mol/L EDTA2Na     10.0ml  0.2%洗必泰溶液       10.0ml  溶菌酶           1.0g

  • 化学发光免疫分析

    化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度,但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来,许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中,在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法,由于这种方法具有灵敏度高,特异性强,精密度好,线性范围宽,仪器设备简单,试剂价格低廉,方法稳定、快速等优点,已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。  化学发光免疫分析包括三大类型:即标记化学发光物质的化学发光免疫分析;标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。  (一) 原理  尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光,但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合,建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里,酶的活性是基于下列发光反应进行检测的:  HRP         luminol+H2O2───→产物+hν                 产 物                  ↑       Eosin+H2O2 ──────┘               HRP 二) 操作步骤  1. 包被抗体 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚,再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体,同时设空白对照,置4℃过夜。  2. 洗涤 用抽滤针头吸干管内液体,加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次,每次加2ml,放置3~5min,用抽滤针头吸干管内液体。  3. 加待检血清和阳性标准品 用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。  4. 洗涤 同2。  5. 加酶标抗体  用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体,每管加入300μl,空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。  6. 洗涤 同2。  7. 化学发光测定 给每管加入300μl底物溶液,置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中,并置于测量位置,加入300μl 5.0×10-4M luminol。记录仪记录化学发光强度。  8. 同时用ELISA方法进行对照,结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。  结果判定(1) 定性 按下列公式判别阴、阳性:          L样品-L空白     ┌≥2.1 为阳性   S/N = ──────── = 商│       L阴性对照-L空白    └<2.1 为阴性   (2) 定量 以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标,不同稀释倍数为横坐标,作出剂量反应曲线(标准曲线),犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。

  • 【原创】一个板油的问题,关于酶标仪的使用,你能帮忙么?

    在 2008-4-2 11:01:56 您来信中写道:====== 请教2个问题:我用酶联免疫测定激素含量GA和ABA,每个样品在酶标板内重复3孔,板间还要做重复吗? [B][color=#DC143C][size=4]ruojun: 不需要了,板间的差异为系统误差[/size][/color][/B]。 还有,同样的测定项目,不同板之间,每板在测定的时候都需要做标准曲线吗? [B]ruojun: 每板需要做标准曲线,因为每次的反应条件可能不同。注意样品的加入速度,尽量短的时间内完成。[/B] 板油的回信:====================================== ====谢谢您! 好人天天快乐!==================================

  • 酶联免疫法(Elisa)检测系统有用的吗??

    采用酶联免疫法(Elisa)检测系统,需要配置仪器主要为酶标仪。该系统2小时左右出结果。可以检测氯霉素、链霉素、四环素、磺胺、硝基呋喃、庆大霉素、新霉素、沙星等。大家知道每个项目的具体检出限值吗?

  • 朊蛋白与免疫系统相互作用的新发现

    朊蛋白与免疫系统相互作用的新发现http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011123113381385.jpg  12月29日,据《每日科学》报道,痒病是一种神经退行性疾病,它可以作为其他由蛋白积累致组织畸形(蛋白质病)疾病的模型,如阿尔兹海默氏病和帕金森氏病。有关这些基因的许多问题仍然悬而未决。在一个新的博士论文研究中,发现了数个与阮蛋白(PrPSc,与疾病的发展有关)摄取相关的因子以及朊蛋白是如何与肠道内的免疫细胞相互作用。  羊瘙痒病属于一组被称为"传染性海绵状脑病(TSE)"的疾病,因为它们可以在动物个体之间传播,并导致大脑产生海绵状、退行性改变。这些疾病不仅折磨羊,还折磨牛(牛海绵状脑病,又称疯牛病,BSE)、鹿(鹿慢性消耗性疾病,又称疯鹿病,CWD)以及人类(克雅氏病CJD)。它们在一定程度上也可以在物种见传播,在20世纪90年代,超过200人经由食物感染而患上了克雅氏病。  传染性海绵状脑病(TSE),或者称阮病毒疾病,被认为是感染了一种能致病的蛋白质变体--朊蛋白,它是机体细胞的正常组成部分,在脑中含量最为丰富。一般而言,阮病毒疾病可能是传染的、遗传的或偶发/自发的。当正常的朊蛋白突变成致病的变种,疾病便发生了,变种朊蛋白在空间结构上与健康的朊蛋白不同。由于变种的朊蛋白具有不同的空间结构,机体细胞很难降解它,因此它就一直在积累。  因为朊蛋白(PrPSc)是在疾病早期在肠道系统的淋巴组织中被发现,推测它是经由肠胃道传染。在兽医学家Caroline Piercey Akesson博士研究杂交仪期间,研究了朊蛋白在肠道内的吸收,从而对疾病发展的早期阶段所发生的过程有了新的了解。与早先的推测相反,她通过免疫电镜证明阮蛋白不是直接从肠道转运到肠道相关的的淋巴组织。相反,她发现朊蛋白自由地穿过或穿进肠道淋巴组织之外的淋巴细胞。  树突状细胞据推测发挥着"看门人"的作用,它决定机体能容忍什么以及当面对外来物时该策划哪一种免疫防御反应。Akeeson的目标之一就是树突细胞与朊蛋白摄取之间的相互作用。首先,需要了解正常的羊肠道内树突状细胞的特点;其次,去调查哪一类型的细胞与阮病毒的摄取有关。  她的研究结果表明,不是树突状细胞,而是巨噬细胞负责朊蛋白的摄取。Akesson的研究揭示,朊蛋白利用了肠道中大分子物质摄取的正常生理通道,这可能对机体的免疫监视系统有显著影响。一个可能的后果就是免疫耐受被激活,从而阻碍了肠道对所吸收的朊蛋白的正常免疫反应。  今后的研究能够揭示免疫细胞是如何运输朊蛋白及机体是如何处理朊蛋白,这将具有非常重要的意义,不仅是为了提供更多的关于痒病的知识,还为研究人类和其他动物中神经退行性蛋白质病提供重要见解。  Caroline Piercey Akesson于12月20日在挪威兽医科学系进行了博士论文答辩,论文的题目是:研究阮病毒的摄取及其与羊肠道中免疫细胞的早期相互作用。

  • 冠状病毒入侵,免疫系统如何应对(二) 实验室可以开展哪些免疫监测?

    [align=center][b][size=14pt]冠状病毒入侵,免疫系统如何应对(二)[/size][size=14pt] [font=等线]实验室可以开展哪些免疫监测?[/font][/size][/b][/align][align=center][size=11pt]会议时间[/size][size=11pt]:[/size][size=11pt]2020年[/size][size=11pt]4[/size][size=11pt]月[/size][size=11pt]2[/size][size=11pt][font=等线]日[/font]1[/size][size=11pt]4[/size][size=11pt]:00[/size][/align][b][size=12pt]内容[/size][size=12pt]介绍:[/size][/b][size=10.5pt]人体的免疫系统在抗病毒感染中发挥着至关重要的作用,而流式细胞术是免疫功能的主要检测手段。从常规淋巴细胞亚群[/size][size=10.5pt]CD4、CD8绝对值的监测,到T细胞活化、细胞因子、趋化因子和颗粒酶素,穿孔素等细胞功能性复杂应用研究,对于临床科研及科研工作者,课程带领大家去选择适合自己实验的免疫功能方案。[/size][b][size=12pt]讲师[/size][size=12pt]介绍:[/size][size=11pt]楼丽霞[/size][size=11pt]:[/size][/b][size=11pt][font=等线]贝克曼库尔特产品高级应用支持,医学检验专业,从事流式相关检测及应用推广工作近[/font]10年,有丰富的临床流式技术经验[/size][size=11pt]。[/size][size=10.5pt]报名地址[/size][size=10.5pt]:[/size][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_12628.html][u][color=#0000ff]https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_12628.html[/color][/u][/url]

  • 海洛因和吗啡成瘾可通过免疫系统阻断

    中国科技网讯 据物理学家组织网8月15日(北京时间)报道,一个国际研究小组获得了重大突破,他们发现了人体免疫系统放大对阿片类药物依赖性的关键机制,并证实可通过药物来阻断吗啡和海洛因成瘾,同时帮助缓解疼痛。临床试验预计将在未来18个月内进行。 澳大利亚阿德莱德大学和美国科罗拉多大学博尔德分校的科学家通过实验室研究发现,一种名为纳洛酮的药物可以选择性地阻断免疫成瘾反应。这项发表于《神经科学杂志》的新成果有望带来“二合一”型药物,既可缓解病人的剧烈疼痛症状,又能帮助海洛因成瘾者戒除药物依赖。 “我们的研究确凿地表明,我们可以通过大脑的免疫系统来阻止成瘾,而不针对大脑的神经系统。”研究论文的主要作者、阿德莱德大学医学院的马克·哈钦森说,“在成瘾过程中,中枢神经系统和免疫系统都发挥着重要作用,但我们的研究显示,只需阻止大脑中的免疫反应,就能阻断对阿片类药物的渴望。” 该团队将研究重点放在名为TLR4的免疫受体上。“阿片类药物,比如吗啡和海洛因,绑定TLR4受体的方式与免疫系统对细菌的正常反应相同,但问题是,TLR4随即变成了药物依赖性的放大器。”哈钦森说。 哈钦森表示,纳洛酮能够自动关闭对药物的依赖,它减少了对阿片类药物的需要以及与成瘾相关的行为,同时,大脑中的神经化学也在发生变化——大脑不再生产多巴胺了,这种重要的化学物质能够向大脑传递服用药物后的兴奋感。 研究论文的另一作者、科罗拉多大学博尔德分校神经科学中心教授琳达·沃特金斯说:“这项工作从根本上改变了我们对阿片类药物、奖励和上瘾机制的了解,多年来我们一直在怀疑TLR4可能是阻断阿片类药物成瘾的关键,现在我们掌握了证据。” 沃特金斯表示,用来阻止成瘾的药物纳洛酮是上世纪70年代发明的一种非阿片类镜像药物,他们相信可以将它与吗啡合用,进而开发出帮助患者缓解剧烈疼痛的同时又不至于让人上瘾的新止疼药物。(记者 陈丹) 总编辑圈点 药物成瘾是一个引人入胜的科学课题,因为对它的研究可以揭示出大脑运作是多么复杂。如哈钦森团队揭示的,药物依赖的形成不光涉及中枢神经,其关键一环是免疫受体发挥作用。相关实验不光证明,纳洛酮与吗啡共用可避免成瘾,还为今后研制戒毒新药提供了思路。或许有一天,在药物成瘾与戒断机理完全揭示之后,人类将告别毒品引发的生理痛苦。 《科技日报》(2012-08-16 一版)

  • 免疫检测技术的应用有哪些?

    [font=宋体][b]免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域。[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]免疫疾病诊断[/font][/font][font=宋体][font=宋体]用免疫血清学方法对人和动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断,是免疫技术最突出的应用。尤其是酶标抗体技术,已成为多种传染病的常规诊断方法,如已有的人各型肝炎、猪瘟等[/font] [font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]试剂盒,它们简便、快速,又具有高度的敏感性和可重复性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]动物植物生理活动研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质,它们在体内含量极微少,但在调节机体的生理活动中起重要作用,因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能(如生长生殖等)。由于这些物质含量极低,用常规化验方法难以准确测出。目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出[/font] [font=Calibri]ng(10 -9 g) [/font][font=宋体]及 [/font][font=Calibri]pg(10 -12 g) [/font][font=宋体]水平的物质,它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质,研究动物、植物生理和生物防治的重要手段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]物种及微生物鉴定[/font][/font][font=宋体]各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同,物种种源越远,抗原性差异越大,因此可用区分抗原性的血清学反应进行物种鉴定、物种的分类等工作。血清学反应在细菌、病原菌等微生物鉴定和血清型及亚型的分析方面已得到广泛应用。但对动物种源,植物和昆虫分类方面还是一个新的领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]动物、植物性状的免疫标记[/font][/font][font=宋体]通过分析动物、植物的一些优良性状(如高产、优质、抗逆性等)的特异性抗原,然后用血清学方法进行标记选择育种,这是一个很有前途的方向,它比分子遗传学标记选择育种简便。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]免疫增强药物和疫苗的研究[/font][/font][font=宋体]疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果。在研究一些免疫增强药物,尤其研究肿瘤药物时,需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用。因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]发病机理研究[/font][/font][font=宋体]传染病的病原从机体特定部位感染,并在特定组织细胞内增殖,引起发病。一荧光抗体感染或免疫酶组化染色,可在细胞水平上确定发病等病原微生物的感染细胞,还可用于研究自身免疫病和变态反应性疾病的发病机理,如免疫复合物的沉积部位的分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分子生物学研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在基因工程的分离、克隆的筛选,表达产物的定性与定量分析,表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如通常用免疫沉淀方法分离[/font] [font=Calibri]mRNA [/font][font=宋体]基因,酶标抗体核酸探针(地高辛核酸探针)检测筛选克隆,免疫转印技术分析表达产物的分子量、 [/font][font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]RIA [/font][font=宋体]分析表达量、免疫亲和层析纯化表达产物,免疫方法分析表达产物的性质如免疫原性。免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州建立了全面的免疫学检测平台,包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Flow Cytometry[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biacore[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Octet[/font][font=宋体]等检测技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service][b]免疫学检测服务[/b][/url]类型:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][b][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化[/font] [font=Calibri](IHC) [/font][font=宋体]单染服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫荧光[/font] [font=Calibri](IF) [/font][font=宋体]单染检测服务[/font][/font][font=宋体]多重染色服务[/font][font=宋体][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色及特殊染色服务[/font][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b][font=宋体]流式细胞[/font] [font=Calibri](FACS) [/font][font=宋体]检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA/ELISpot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]技术服务[/font][/font][font=宋体]石蜡组织芯片定制服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注义翘神州免疫学检测服务[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service[/font][/font]

  • 如何做好ELISA(一)——设备耗材篇

    如何做好ELISA(一)——设备耗材篇酶联免疫吸附技术(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一项经典的分析方法,最早可追溯到19世纪末诞生的免疫凝集试验。1896年,Widal发现在伤寒杆菌中加入伤寒病菌病人的血清可致伤寒杆菌发生特异的凝集现象,利用这种凝集现象可有效的诊断伤寒病,这就是最早的用于病原体感染诊断的免疫凝集试验,亦即著名的肥达试验(Widal test)。但是,以免疫沉淀和免疫凝集反应为基础的免疫检验技术的局限性还是非常明显的,如测定灵敏度低,除少数外,基本上都是定性测定等,这些缺陷大大限制了其在病原体感染诊断及体液中微量生物活性物质测定中的应用价值。60年代末,在酶免疫组织化学的基础上,Engvall和Perlmann以及Van Weeman和Schuurs等发展了一种酶标固相免疫测定技术,即酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA),这种简单方便的免疫测定技术出现后,成为了一种稳定,可靠的快速定量分析方法,目前已原来越多的用于食品检测中,用于测定毒素、兽药、农药、非法添加物、过敏原、转基因等等。但是,作为一种生化分析方法,仪器、试剂是其重要的硬件条件,对结果有着显著的影响,必须严格核查和验收:

  • 免疫学检测形成的原因有哪些?免疫学检测包括哪些?

    [font='calibri'][size=13px]免疫学检测形成的原因有哪些?免疫学[/size][/font][font='calibri'][size=13px]检测包括哪些?[/size][/font]免疫学检测形成的原因:免疫学检测是基于免疫系统对外来物质或抗原的反应而产生的,可分为体液免疫学检测和细胞免疫学检测两大类。体液免疫学检测是通过血液、唾液、乳汁等体液样本中的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等成分的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时,免疫系统会产生相应的抗体和细胞因子等免疫反应,这些免疫反应产物可通过体液免疫学检测方法进行检测。细胞免疫学检测是通过检测机体内的免疫细胞和免疫分子的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时,免疫系统会产生相应的抗原提呈细胞,并引导记忆细胞和效应细胞的产生,这些记忆细胞和效应细胞可以在特定情况下识别和消灭病原体或肿瘤细胞,这些细胞和效应细胞本身也可以被检测出来。总之,免疫学检测的目的是通过检测机体的免疫反应,了解机体的免疫状态,为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。免疫学检测包括哪些?免疫学检测是指通过各种方法检测机体对病原体或某些生物物质的免疫反应程度,以及机体内的免疫细胞、免疫分子和免疫活性物质的含量及其分布等情况的一种医学技术。免疫学检测广泛应用于各种疾病的诊断、治疗和预防,包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫学诊断等。以下是一些常见的免疫学检测项目:体液免疫学检测:主要包括免疫球蛋白的测定,如IgA、IgM、IgE等;补体检测,如总补体溶血活性、补体C1、C2等;免疫复合物检测,如抗体-抗原复合物、补体-抗体复合物等;细胞免疫学检测:主要包括T细胞亚群分析、B淋巴细胞分化抗原检测、自然杀伤细胞抗体检测、T细胞活化抗体检测等;抗体检测:如抗药抗体、中和抗体等;细胞因子检测:如白细胞介素-2、-4、-6等;自身抗体检测:如抗核抗体、抗胰岛素抗体等;感染免疫检测:如病毒特异性抗体、细菌特异性抗体等。总之,免疫学检测是一种非常重要的医学技术,可以帮助医生判断机体的免疫状态,为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原,可定性、定位和定量的检测。依托自主研发生产的优质抗体、蛋白试剂、先进的实验仪器以及经验丰富的技术人员,义翘神州建立了全面的免疫学检测平台,包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。义翘神州免疫学检测服务包含:①WB/Sally Sue高通量检测服务②[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测服务[/url]③免疫组化检测服务④多重免疫荧光和免疫组化服务⑤免疫荧光检测服务⑥HE染色及特殊染色服务⑦ELISA/ELISpot检测服务⑧IP/Co-IP检测服务⑨TMA芯片定制服务更多详情可以查看:https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

  • 在人类骨髓中发现可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞

    近日,来自加利福尼亚大学的研究者发现了在人类骨髓干细胞和所有的免疫细胞之间存在一类“环节缺失”(missing link)的细胞。这或许为我们深入理解免疫系统以及免疫系统疾病发生的分子机制提供帮助。相关研究刊登在了9月2日的国际杂志Nature Immunology上。这项研究是在人类骨髓中进行的,因为其包含了产生人类自出生后所需血液的所有的干细胞。理解成人正常血液的形成是揭开白血病发病机制关键的一步。之前的研究中,研究者重点研究了骨髓中的血液干细胞,这种干细胞生存时间比较久,可以再生,而且可以产生所有的血液细胞。在这过程中,干细胞可以分裂产生其发育的中间状态体,称为前体干细胞,前体干细胞可以产生血液的不同谱系,比如产生红细胞或者血小板等。和干细胞一样,祖细胞也非常稀少,因此研究就好比海里捞针一样,研究者Lisa这样说,此前的研究工作中,他们发现了一种具有部分分化能力、相当成熟的淋巴祖细胞。在这项最新的研究中,研究者描述了一种更为原始的可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞。

  • 上海生科院许琛琦小组发现人体免疫系统工作新机制

    我科学家发现人体免疫系统工作新机制来源:科技日报 12月3日,国际权威学术期刊《自然》在线发表了中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所/国家蛋白质科学中心(上海)许琛琦研究员领导的研究组的最新成果,首次证明钙离子能改变脂分子功能来帮助T淋巴细胞(简称T细胞)活化,提高T细胞对外来抗原的敏感性,从而帮助机体清除病原体。这项新成果对治疗自身免疫病、慢性病毒感染、肿瘤等多种与T细胞相关的疾病有很好的指导意义。该论文也是新成立的国家蛋白质科学中心(上海)的第一篇学术论文。人体的免疫系统复杂而精确,其中T细胞是一种关键的功能细胞,是保证机体健康的基础,与肿瘤、艾滋病、免疫缺陷症等疾病直接相关。艾滋病病毒正是通过感染T细胞从而破坏免疫系统并使人致病。据许琛琦介绍,T细胞发挥功能的基础是识别外来抗原,这项功能由T细胞抗原受体(TCR)来行使。每一个T细胞表面都有几千个TCR,TCR的周围是脂质分子,它们通过静电力将TCR的活化位点屏蔽起来,保证它们在没有抗原的时候不会活化,接受抗原刺激后则快速活化。钙离子在细胞内担任非常重要的“信号使者”角色。T细胞被抗原活化后,细胞外的钙离子会通过钙离子通道流入细胞内,细胞内钙离子浓度会在数秒之内提高10倍,并维持几个小时。这些钙离子能够直接结合TCR周围的脂质分子,中和它们的负电荷,从而解除脂质分子对TCR活化位点的屏蔽,帮助TCR活化,将比较弱的抗原刺激信号放大,使得T细胞获得完全的效应功能。这种机制大大提高了T细胞对抗原的敏感性。美国科学院院士,斯坦福大学医学院免疫、移植与感染研究所所长、著名免疫学家Mark Davis教授指出,这项工作令人激动,揭示了钙离子对TCR活化及其T细胞生理功能的重要作用,解决了T细胞活化的一个关键性问题。据《东方早报》报道,昨天,国际权威学术期刊《Nature》(《自然》)在线发表了中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所/国家蛋白质科学中心(上海)许琛琦研究员领导的研究组的最新成果:一种人体免疫系统工作新机制,即钙离子可以激活体内的T淋巴细胞(简称T细胞),而T细胞正是消灭病原体的“主力部队”。  身体不舒服了,就会生病。可对很多市民来说,恐怕并不了解“病”是怎么一回事。其实,人体内的免疫系统复杂而精确,病原体进入后,就会与体内的免疫细胞进行一番厮杀,谁能胜出就决定了最后的结果。在免疫系统这支“军团”中,T细胞是一种关键的功能细胞,堪称是“指挥官”加“士兵”,它的数量以及“活力”,影响着健康的程度。许琛琦表示,例如肿瘤、艾滋病、免疫缺陷症、自身免疫病等多种疾病都与T细胞的功能相关,艾滋病毒正是通过感染T细胞从而破坏人的免疫系统。  据了解,在T细胞的表面,活跃着一种名为TCR的抗原受体,它们就如同是部队中的“侦察兵”,只要察觉到抗原信号,就会通知T细胞本身,让其参加“战斗”。许琛琦研究组发现,作为人体内必需的钙离子,除了组成骨骼和牙齿外,居然还在细胞内担任非常重要的“通信兵”角色。T细胞被抗原活化后,细胞外的钙离子经通道流入细胞内,浓度会在数秒内提高10倍,并维持几个小时。这些钙离子能直接结合TCR周围的脂质分子,帮助TCR活化,将比较弱的抗原刺激信号放大,激活“沉睡”中的T细胞,从而让其加入到与疾病的争斗中。  就理论上来说,钙离子信号通路是多种疾病的药物靶点。但是,许琛琦强调,目前只是在基础科学领域的研究,要落实到临床医学,还需要不断的实验。另外,他也表示,此钙离子是细胞内的活性钙,浓度很低,靠吃钙片和骨头汤等传统“补钙”方式并不能增加其含量。身体里的钙有什么作用?它能强健骨骼、让肌肉不会轻易抽筋,还能增强机体免疫力。这是中国科学院生物化学与细胞生物学研究所/国家蛋白质科学中心(上海)许琛琦研究员课题组的最新发现:在细胞里的钙离子,能帮助人体内T淋巴细胞的活化,提高T淋巴细胞对“外敌入侵”的敏感性,从而帮助机体清除病原体。昨天凌晨,国际权威学术刊物《自然》在线发表了这一发现。  T淋巴细胞是人体免疫系统中的“高级部队”。它巡游在人体内,一旦发现细菌、病毒等“外敌”入侵,即使数量极其微小,也会及时行动起来,召集其他“免疫大军”,坚决将其清除——其敏感程度,只有神经细胞可相媲美。  也正因此,T细胞也成了不少病毒、肿瘤细胞的攻击对象。比如,艾滋病毒就直接攻击T细胞,因为一旦让T细胞“缴械”,它就能在人体内长驱直入。  经过几年努力,许琛琦有了新发现。原来,在每一个T细胞的膜上,都有多达几千个信号接收器TCR(T细胞抗原受体),像哨兵一样担任警戒任务。TCR身上有数个活化位点,平时被脂质分子包裹着。这些位点如开关,一旦侦察到外敌,就会迅速激活并打开细胞上的“钙闸门”,将细胞外的钙离子放进细胞,让细胞内钙离子浓度迅速增加10倍。  当钙离子进入细胞后,它们会拉开其他的脂质分子,打开更多的TCR开关,从而活化T细胞,开启各种“应急预案”,有的产生蛋白质御敌,有的下令免疫细胞增殖——齐心协力消灭“坏蛋”。  “T细胞这种信号放大机制,还是首次发现。”许琛琦介绍。病毒专家、中科院上海巴斯德研究所所长孙兵研究员对此很感兴趣,既然只要去掉TCR上的脂质分子屏蔽,就能增强T细胞功能,那么我们可以设计药物来完成这个任务,使被病毒“挟持”的T细胞恢复活力,就能清除体内病毒,尤其是慢性病毒,如乙肝病毒。国际免疫学权威、美国斯坦福大学医学院免疫、移植与感染研究所所长马克·戴维斯教授评论说:“这项工作揭示了T细胞工作的一个关键性机制,完成得非常漂亮,其发现令人兴奋。”

  • 过程工程所以温敏性水凝胶作为黏膜免疫投递系统的研究获得进展

    近日,中科院过程工程研究所马光辉研究员领导的研究团队在温敏性水凝胶作为黏膜免疫投递系统的研究中获得进展。研究论文Thermal-sensitive hydrogel as adjuvant-free vaccine delivery system for H5N1 intranasal immunization在生物材料类顶级期刊Biomaterials上发表(2012,33:2351-2360)。  该论文以季铵化修饰的壳聚糖和甘油磷酸钠为原料,采用离子交联法制备得到了一种壳聚糖季铵盐水凝胶。该水凝胶具有温度敏感性,在室温下为流动的溶胶态,而到达37 ℃体温时能迅速转变为凝胶态。该方法制备水凝胶简单安全,避免了有机交联剂的使用,生物相容性好,而且能保持凝胶的正电性利于黏膜黏附。该研究团队报道这一发明的论文曾获得Top 50 highly cited articles by Chinese mainland authors 2006 - 2010(Biomaterials)奖和Highest cited original research 2006 awards (Int. J. Pharm.)奖,而此次是将温敏凝胶创新性地用于H5N1裂解疫苗的鼻黏膜免疫投递系统。  实验表明,研究所制备的水凝胶给药方便,在鼻黏膜上能迅速转变为凝胶态进行黏附,有效延长疫苗抗原在鼻腔的停留时间,促进抗原渗透黏膜,从而增强系统免疫与黏膜免疫,其效果显著优于单纯H5N1裂解疫苗经鼻免疫的效果。  该研究工作获得审稿人高度评价,认为这是一项设计巧妙的创新性工作,并且充分肯定了温敏性水凝胶作为H5N1流感裂解疫苗投递系统的免疫效果。除H5N1疫苗外,该温敏性水凝胶还有望作为一种普适性的疫苗黏膜免疫投递系统,用于预防其他经黏膜入侵机体的病毒感染。  以上研究工作受到国家自然科学基金(20904058)、973计划(2009CB930300)、北京市自然科学基金(7112091)等项目资助。(过程工程研究所)http://www.cdstm.cn/attachments/2012/06/287332_2012060115385415qeA.jpg壳聚糖季铵盐温度敏感水凝胶(a:溶液状态;b:凝胶状态)

  • 免疫自稳、免疫监视、免疫防御的区别

    [font=宋体][font=宋体]人体免疫系统是一个复杂而精细的网络,它时刻保护着我们免受外界病原体的侵害。其中,免疫自稳、免疫监视和免疫防御是免疫系统的三大核心功能,它们各自承担着不同的任务,共同维护着我们的健康。免疫自稳负责调节和维持免疫系统的内部稳定,防止免疫反应过度或不足;免疫监视则时刻监控体内细胞的异常变化,及时识别和清除可能的癌变或感染细胞;而免疫防御则是免疫系统对外界病原体的直接抵抗,通过产生特异性抗体和细胞免疫反应来清除入侵者。本文将深入探讨这三大功能的区别与联系,帮助读者更好地理解人体免疫系统的运作机制。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]一、免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫监视是身体长期进化过程中形成的自然防御功能。这个功能似乎打开了第三个视角来监控身体的每一个动作。没有侵略者,没有异己[/font][font=Calibri]......[/font][font=宋体]免疫监测最重要的是区分敌人和我。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]监视功能有两个方面[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①自我识别[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]自我识别是指免疫系统如何识别身体内的正常细胞和组织,以避免对它们产生攻击。这是非常重要的,因为免疫系统必须能够区分自身组织和外来物质之间的差异。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异常细胞监测[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]异常细胞监测是免疫系统如何检测和识别异常细胞的过程。这些异常细胞包括被感染的细胞、突变细胞、癌细胞等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、免疫防御[/font][font=宋体]——重要保障[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御是指通过识别和消除外来病原体来保护身体免受疾病入侵的过程。免疫防御由免疫系统中的各种细胞免疫和分子共同发挥作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如何发挥免疫防御的作用?[/font][font=宋体]当免疫系统检测到外来病原体时,他将启动免疫防御机制,将免疫细胞引导到感染位置,并以各种方式消除病原体。免疫细胞包括不同类型的白细胞和淋巴细胞,其功能和特征不同。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御除了直接消除病原体外,还有另一个重要的作用,即刺激免疫细胞产生抗体,从而促进身体产生免疫记忆。当身体再次遇到同一病原体时,免疫系统可以快速、更有效地抵抗它,然后再次预防疾病。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]但免疫防御可不是绝对的!有时病菌会以各种方式避免免疫系统的攻击,使感染难以有效控制。例如,一些病菌可以通过改变其表面抗原的结构来防止被免疫细胞识别,然后避免攻击。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外,一些病原体还能通过影响免疫系统的功能来抑制免疫反应,从而获得更长的生存时间。因此,有必要不断研究和实践免疫系统的机制,以及病原体的避免策略,然后开发更有效的辅助治疗策略。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]三、免疫自稳[/font][font=宋体]——维持平衡[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是指机体免疫系统在正常状态下维持一种平衡状态,以保持免疫系统的正常功能和机体的健康。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是一个复杂而精确的调节过程,涉及多种细胞类型、分子信号和调节机制。它的目的是确保免疫系统对病原体和异常细胞的敏感性和应答能力,同时避免对自身组织的过度反应和自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是怎么发挥作用的?[/font][font=宋体]免疫自稳的关键是保持免疫系统的平衡。免疫系统需要在处理外部侵入的病原体时快速启动免疫反应,但也需要在免疫反应结束后及时关闭反应,以免损害自己的组织。通过调节免疫细胞之间的相互影响,保持免疫系统的平衡,避免过度激活或自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之,免疫细胞的三大作用机制即:免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我、免疫防御——重要保障、免疫自稳——维持平衡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫细胞在人体内起着至关重要的作用,它们是维护人体健康不可或缺的卫士。然而,随着年龄的增长,人体的免疫细胞数量会逐渐减少,这也是人体衰老的一个重要标志。为了保持免疫力的强盛,我们需要及时补充免疫细胞,让它们继续发挥守护身体的作用。只有这样,我们才能保持健康的体魄,远离疾病的侵扰。因此,重视免疫细胞的补充与养护,对于维持人体免疫力的稳定和健康至关重要。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多重染色服务,包含[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]免疫荧光和免疫组化服务[/b][/url],更多详情可以查看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

  • 仪器介绍 II:拜耳ACS 180SE 全自动免疫分析仪

    仪器介绍 II:拜耳ACS 180SE 全自动免疫分析仪

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204261141_363473_1699466_3.jpg ACS全自动化学发光免疫分析系统由拜耳公司生产,采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统。20世纪90年代初首次推出全自动化学发光免疫分析系统ACS:180。90年代中期推出第二代产品为ACS:180SE分析系统(图2),最 近该公司又推出了ACS:CENTAUR。第二代产品将微机与主机分开,软件程序加以改进,使操作更灵活,结果准确可靠,试剂贮 存时间长,自动化程度高等优点。 1.仪器测定原理 该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒 极微小,其直径仅1.0µ m,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:⑴竞争反应: 用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与 抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。⑵夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体 -测定抗原-发光抗体的复合物。 上述无论哪种反应凡所结合的免疫复合物均被磁铁吸附于反应杯底部,上清液吸出后,再加入碱性试剂;其免疫复合物被氧化激发,发射 出 430nm波长的光子,再由光电倍增管将光能转变为电能,以数字形式反映光量度,计算测定物的浓度。竞争法是负相关反应。夹心法 是正相关反应。 2.实验操作 本仪器测定所用试剂均包括两种:固相磁粉和液相发光试剂。每套试剂可放置于试剂托盘的任意位置上,由仪器扫描标签条码后自动加样 。根据测定项目不同,试剂用量在50~450µl之间。测定标本必须用血清,禁止用血浆,以防纤维蛋白将管路堵塞。 由于是自动化仪器,其操作极其简单:①将样品编号排入样品盘。②按试验项目将所用试剂放入试剂盘,并观察辅助试剂。③自由编排程 序,按“START”键运行,根据所编工作表,在微机的控制下,仪器自动放置反应杯,自动加样与试剂,并根据实验项目不同进行温育。温育时间一般在 2.5~7.5分。从第一个测定开始至16分钟,分析仪自动计算报告结果。然后每20秒有一个结果报出,即每一分钟报告3个结果 。如果60个样品同时测定,120个实验项目仅用一个小时即可完成。④随时可加入急诊检查项目。⑤打印报告方式可有三种:按测定 混合项目排列报告;按病人编号排列报告;按每一种项目排列报告。 3.仪器组成及特点 该仪器由主机和微机两部分组成。主机部分主要是由仪器的运行反应测定部分组成,它包括原材料配备部分、液路部分、机械传动部分及光路检测部分。微机系统是该仪器的核心部分,是指挥控制中心。该机设置的功 能有程控操作,自动监测,指示判断,数据处理,故障诊断等,并配有光盘。主机还配有预留接口,可通过外部贮存器自动处理其他数据 并摇控操作,以备实验室自动化延伸发展。 ACS:180SE分析仪为台式,其主要特点为:①测定速度:每小时完成180个测试,从样品放入到第一个测试结果仅需要15分 钟,以后每隔20秒报一个结果。②样品盘:可放置60个标本,标本管可直接放于标本盘中,急诊标本可随到随做,无需中断正在进行 的测试。③试剂盘:可容纳13种不同的试剂,因此每个标本可同时测定13个项目。④全自动条码识别系统:仪器能自动识别试剂瓶和 标本管,加快了实验速度。⑤灵敏度:达到放射免疫分析的水平。 4.测定项目 现有检测项目 47项,更多的项目还在开发之中。①甲状腺系统:总、游离T3,总、游离T4,促甲状腺素,超敏促甲状腺素,T3摄取量。②性腺 系统:绒毛膜促性腺激素,泌乳素,雌二醇,雌三醇,促卵泡成熟素,促黄体生成素,孕酮,睾酮。③血液系统:维生素B 12,叶酸,铁蛋白。④肿瘤标记物:AFP,CEA,CA15-3,CA125,CA19-9,β2 微球蛋白,PSA。⑤心血管系统:肌红蛋白,肌钙蛋白T,肌酸激酶-MB。⑥血药浓度:地高辛,苯巴比妥,茶碱,万古霉素,庆大 霉素,洋地黄,马可西平。⑦其他:免疫球蛋白E,血清皮质醇,尿皮质醇,尿游离脱氧吡啶。

  • ELISA-酶联免疫吸附剂测定

    enzyme linked immunosorbent assay,ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上,进行免疫反应的定性和定量方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。

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