在液相色谱仪使用过程中,我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象,但由于使用操作不当,常常不注意间损坏了色谱柱,同时加重了液相色谱系统的污染,导致分析工作出现麻烦,现在将置换工作的基本流程列出,供用户参考:1. 首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现);2. 卸掉硅胶柱,封好保存;3. 将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次;4. 换甲醇(或已睛)冲洗系统20分钟(流速2ml/min) ,此期间空拨进样阀三次;5. 安上反相色谱柱, 流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统,直到系统平衡;6. 进三针标准品,检验面积 ﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复。
正相色谱法采用极性固定相,流动相为相对非极性的疏水性溶剂,常加入一些极性溶剂以调节组分的保留时间,常用于分离中等极性和极性较强的化合物。反相色谱法一般用非极性固定相,流动相为水或缓冲液,常加入与水互溶的有机溶剂以调节保留时间,适用于分离非极性和极性较弱的化合物。对于某些易离解化合物的分析,为控制样品在分析过程的离解,常加入缓冲液控制流动相的pH值,增加保留,以改善分离。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503311236_540204_2960432_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503311237_540205_2960432_3.png根据以上列举的液相色谱的分析方法,在日常的分析检测中,我们都是采用了哪一类分析方法:注明检测的样品,仪器条件,分析条件。对于在检测中总结的经验,采取的措施也可以分享一下,以便于共同学习,共同进步。================汇======总===============1.看图解读畅谈之一:流动相与极性及PH值http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150304/5693051/2.看图解读畅谈之二:流动相与吸光度http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150304/5693078/3.看图解读畅谈之三:流动相与水http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150307/5698035/4.看图解读畅谈之四:流动相与粘度及分配比Khttp://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150312/5705589/5.看图解读畅谈之五:色谱柱填料硅胶键合http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150323/5721015/6.看图解读畅谈之六:正反相液相色谱分析法——实例列举经验畅谈http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150331/5730704/
依利特液相3100,买回来有半年了,前面一直都是用的反向,C18柱子,使用过程也很正常。最近要用正相,Supersil Sio2柱子(新柱子,首次使用),流动相为异辛烷-二氧六环(95:5),检测溴氰菊酯。我先用的异丙醇来冲洗仪器系统,冲了400ml,压力在19Mpa,,然后换上流动相,压力在18,几分钟之后就降为0了。不能理解,这个仪器之前没有用过盐,查过溶剂也是互溶的,置换了400ml 应该仪器也没有水了,,压力为0后,我降流速为0.4,压力就在2Mpa。我想了解是什么问题,怎么解决比较好?
反相,一般乙腈,水;正相 正己烷、乙酸乙酯、异丙醇听说安捷伦正相必须要换密封垫, waters正相不能用脱气包?岛津可以通用。国产 的是什么情况
最近小弟在做一种物质的检测,不溶于水,但溶于甲醇中,是否能用反相体系来做液相?。。
在液相色谱仪使用过程中,我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象,但由于使用操作不当,往往很容易损坏色谱柱,同时加重了液相色谱系统的污染,导致分析工作出现麻烦。 那我们在实验中如何正确操作呢? 欢迎广大版友提出你们的解决方法~http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif
正反相分析系统切换时,应注意什么,有何要求?
[color=#444444]我们分析的一个样品用的是正相液相色谱,但是里面有些组分不能确定,所以想做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url],但是听说不能做正相的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url],所以考虑了做反相的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url],但是反相跟正相的图完全不一样,怎么办啊?哪位高手给点指点[/color]
正相系统换反相系统注意事项在液相色谱仪使用过程中,我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象,但由于使用操作不当,常常不注意间损坏了色谱柱,同时加重了液相色谱系统的污染,导致分析工作出现麻烦,现在将置换工作的基本流程列出,供用户参考:1. 首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现);2. 卸掉硅胶柱,封好保存;3. 将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统30分钟(流速1ml/min).在期间空拨进样阀三次;4.换甲醇(或已睛)冲洗系统30分钟(流速2ml/min) ,此期间空拨进样阀三次;5. 安上反相色谱柱,流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统,直到系统平衡;6.进三针标准品,检验面积 ﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复
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[color=#444444]我的问题是:在反相高校液相色谱中,流动相有机溶剂的比例增加,所有样品的化合物的保留都会减弱,提前出峰。这是为什么?[/color][color=#444444]恳请各位给予解答,[/color]
[color=#444444]反相液相色谱法分离苯,甲苯,乙苯,联苯,先流出色谱柱的组分是什么[/color][color=#444444]没学过这方面的,百度一下也没看明白,求指教[/color]
[size=3][b]高效液相的操作中遇到的问题[/b][/size]请问薄层上展的很高的点即极性很小的点在反相柱中却最先流出是不是哪出现了问题希望有经验的给我讲解一下万分感激
反相高效液相色谱缓冲体系PH的选定反相高效液相色谱中缓冲体系PH值的选择在反相高效液相色谱分析中,选择正确的缓冲液PH值,对可离解的化合物分析的重现性十分重要,不恰当的PH值可能导致不对称峰,宽峰,分裂峰或肩峰,而尖锐的,对称的峰是定量分析中获得低的检测限以,两次分析之间较低的相对标准偏差(RSD)和保留时间的高重现性的前提。我们将讨论在使用缓冲液时如何选择缓冲液的PH值,以及如何选择正确的缓冲体系。什么时候需要缓冲溶液?在反相液相色谱分析中,流动相的PH值一般在2.5-7之间,当被分析物在反相条件下可离解,或样品的PH值在2.5-7之外时,就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基,他们的Pka在1-11之间,选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在,离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害,则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。如何选择缓冲液PH值在选择缓冲液PH值之前,应先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka两个PH值单位的,有助于获得好的、尖锐的峰,从HH公式:PH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液PH值高于或低于Pka两个单位,化合物中99%以一种形式存在,而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。如果选择不到合适的,样品的pKa与流动相的pH非常接近,那么流动相pH微小的变化,都会引起样品保留时间较大的变动。当化合物只有氨基时,缓冲体系的选择十分简单,大多数氨基化合物在PH值小于9时都被质子化,所以所有PH值在7或更低的溶液均适合应用,你也许会问水的PH值大约是7,为什么还用缓冲盐,因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性,以及色谱峰的尖锐性,PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱,减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用,而使峰更尖锐,从表1 可值,任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析,但我们认为PH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。在上面两个例子中,PH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用,在一般情况下,它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液,并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。为离子对试剂选择缓冲液为应用离子对试剂的方法选择缓冲液的过程是相似的,离子对试剂例如四丁基铵的盐,十四烷基磺酸钠等,在流动相中可与化合物中可离解的官能团配对,在缓冲液中以离子形式存在的化合物就需要应用离子对试剂。应用缓冲液PH值来调节方法选择性如前面提到的,氨基化合物的保留随PH的减小而降低,这个特性可以用来调节方法的选择性,如果两个化合物共流出,一个含有氨基,适当改变PH值就可以用来分离这一物质对。由于可离解化合物的选择性依靠PH值,所以变化PH值也可以用来鉴别未知化合物的官能团,如果PH值变小,出峰便快,则化合物中可能存在氨基,当PH变大,化合物出峰很快,或流出在死时间处,化合物可能是一种羧酸,因为羧基离子化后流出大大快于比质子化的中性化合物。总结正确选择缓冲溶液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰,捡出限,以及获得稳定的保留时间十分重要,如果你知道化合物官能团信息和化合物的Pka值这一过程将十分简单。[em01] [em01]
液相色谱柱决定最终分离效果,所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。 首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱,正相有SI等,反相有C18等。正相主要分离极性物质,反相主要分离非极性物质,氨基柱等主要分离二者之间的。 明确了色谱柱大概功能之后,确认下自己样品信息,基本就有点眉目了,方向对了,剩下的事情就是细节了如:键合相、粒径、孔径、碳载量等 键合相:确定了正反相后基本就简单了,正相很简单,我们重点讨论下反相,C18主要分离非极性和弱极性物质,因为是键合硅胶,所以C18也分好几种有常规的如C18-A,耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等,如果发现C18保留很弱,调整流动相也不行,这个时候可以考虑C8甚至C4等。 粒径:色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型,基本具备“三高”特征尤其是高速,线速度不在影响分离度,不过附带的缺点就是高压,要升级相应的硬件,成本高昂,需要谨慎考虑。 5um填料最普遍,目前来说完全可以胜任各种日常检测,即使有特殊要求,3um色谱填料基本上也能全覆盖,不过该模型下线速度和分离度是成反比的。 孔径:目前很多60~300A都有,甚至更高或者更低的。开孔的填料多了个类似分子筛功能,所以选择孔径一定要关注分子量,蛋白(分子量5000以上)一般都需要在160A以上,多肽(分子量上限在3000左右)在120A左右,一般快速柱孔径都很小,可以缩短样品路径。所以国际上还有无孔硅胶柱子,也很适合蛋白分离,彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。 碳载量:快速柱碳载量很低,如A家等,省时间,省溶剂,但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心,这个时候可以考虑英国OL Apple色谱柱,碳载量15~23%,碳载量数值就像河床的水草,越高代表越密集,保留样品能力越强,越有可能分离开难分离物质。 以上信息仅供参考,个人能力有限,欢迎大伙补充!
液相新人,有个疑问请教各位老师,分析极性化合物,为什么不直接采用正相系统或者Hilic色谱柱,而要在反相系统中使用离子对试剂来增强保留?
请问 高效液相色谱的正相与反相怎么区分
离子色谱 液相色谱 气路(氮气或氦气) 对用NaOH流动相,用于保护流动相以免同空气接触。其它系统可以不用气路,用量少。 一般无,但ELSD和MS需要,用量大。 流路系统 全peek材料,耐强酸强碱和一般反相有机试剂 特殊金属材料为主,耐有机溶剂,不耐强酸强碱 流动相 以强酸强碱为主,兼反相系统,不能用于正相。流动相种类少 正反相系统兼离子交换。种类相对较多。 试剂要求 对去离子水要求极高,大于17.8mΩ,成本很高。有机试剂也要考虑离子杂质,至少HPLC级。 水要求相对较低,大于10 mΩ,成本不高。要求HPLC级试剂。 色谱柱 通用性较差,样品对柱子有很强的选择性,品牌少选择余地小,价格高。 通用性强,品牌多选择余地大,价格相对较低。 抑制器 有二种:单柱法(无) [fo
反相液相,进流动相后出峰,在3min左右。理论上流动性平衡柱子之后,以流动相为样品,进流动相应该有溶剂峰吗?为什么?如果设置的进样量大于自动进样器的最大进样量会出现什么情况(自动进样器6通阀)?
常规C18 色谱柱在高水相条件下长时间操作,经常会出现“柱塌陷” 现象,造成分析物的保留时间和分离度骤降。极性改性反相色谱柱由于采用独特的极性改性技术,通过引入极性基团使其表面更容易被水润湿,从而有效地避免了该现象的发生。此外,极性改性反相液相色谱柱在高有机相下表现同样出色,能在LC-MS 测试中加快去溶剂化的过程,从而有效提高LC-MS 的检测灵敏度。极性改性反相液相色谱柱的流动相适用范围可以从100% 水相到100% 有机相,使方法开发更加简单易行。极性改性反相色谱柱是以高纯硅胶为基质,采用独特的极性改性技术生产的色谱柱。这个系列的色谱柱不但保留了传统硅胶基质反相色谱柱的性能,而且又增加了一些新的特性:• 填料表面具有极性基团,适合于高水相条件下的分离• 增强了对亲水性、极性化合物的保留能力• 独特的选择性和优异的分离度• 降低了碱性化合物与残余硅羟基的相互作用,提高了色谱峰的对称性• pH 范围更宽,适合于分析酸、碱化合物迪马科技极性改性反相液相色谱柱有两个系列:一个是Spursil(思博尔)系列,包括Spursil C18 和Spursil C18-EP,二者的结构差异如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506021619_548446_1610895_3.jpg一个是Diamonsil Plus 系列,包括Diamonsil Plus C18-A 及 Diamonsil Plus C18-B,Diamonsil Plus C18-B的极性略大约Diamonsil Plus C18-Ahttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506021624_548450_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506021624_548451_1610895_3.jpg
1.利用C18柱反相高效液相测定维生素D3的含量时流动相能否加入缓冲液?一般加入的缓冲液有哪些?以及缓冲液的ph值和所占流动相的比例是多少?2.利用C18柱反相高效液相测定维生素D3的含量时,它的含量如何计算?计算公式是什么?如何推导?与中国药典2010版有什么不一样?影响因子在反相高效液相中如何测定以及计算?3.测定维生素D3含量时,对照品的单位是mg,而样品中含有的维生素D3的单位是国际单位(IU),在配制溶液时,单位是否要换成一致,对后面的含量计算有什么影响?一般维生素D3在上反相液相是进样所配制的浓度范围是多少?
最近液相要做正相柱,原先一直用的是反相柱,听说要更换泵上的密封垫,更换之后原来反相的密封垫就没用了?安捷伦的销售说的,是不是真的啊,要不然花费成本也太高了吧,换一次就耗费1000左右。
请问“等度反相高效液相色谱法”中的“等度”是什么意思?是指等度洗脱吗?谢谢!
怎么看自己的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]是正相 还是反相色谱
反相液相色谱中 调整流动相组分比例影响分离效果 是通过改变流动相比例改变流动相极性 来改变分离效果的吗
由于液相色谱能在常温下对大分子量的有机组分进行分离,而且有多种分离模式,因而应用范围要比气相色谱广泛。若能实现LC/LC联用、那么就能对更复杂的有机样品进行分离分析。但正因为液相色谱有正反相和离子交换等许多分离模式,导致两种不同分离模式联用的困难,因而目前还没有完整的LC/LC二维色谱问世。一般是各自实验宝根据自己分离祥品的性能自行组装LC/LC二维色谱。常见的LC/LC联用是采用多通阀接口装置进行切换。LC/LC多通阀接口装置和GC/GC多通阀接口装置原理是一致的,也是通过多通阀门的切换将前一级液相色谱分离出的某种组分传递到后一级液相色谱中继续分离。由于液相色谱的流动相可以是酸碱性,也可以是水或有机溶剂,且在高压下进行,因此,LC/LCL联用的接u多通阀的耐蚀和密封要求比GC/GC联用接口要高得多。现在的LC/LC二维色谱的多通阀一般是六通阀,采用高级不锈钢为基材,并用填充石墨的聚四氟乙烯为密封材料。LC/LC六通阀接日需要耐高压,一般应达50MPa ,但不像GC/GC的多通阀需要耐高温,只需耐50-80℃中温即可。LC/LC联用主要功能是可以实现对有机样品中某些组分的多次循环分离,也可以净化样品和富集痕量组分。和气相色谱不同的是,液相色谱的往都较短,一般不超过30cm,而气相色谱的毛细管柱已超过30m,相差100倍。增加液相色谱的柱长可以提高分离效果,但长柱填充和制作困难大。若将相同短柱半联使用,或将短柱流出组分返回柱中再分离,操作和效果都不理想。这样,利用六通阀接口,将两台液相色谱仪联用可以解决这个间题。另外,对于反相分配液相色谱,水相组分中的微量有机物的富集也可以通过LC/LC联用自动实现,操作和成本均比目前固相萃取(solid phase extraction,SPE)技术要好得多。因此,现在分析环境和水中痕量农药残留一般用LC/LC联用技术。
原文来自:JANUARY 2003 LC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] NORTH AMERICA VOLUME 21 NUMBER 1 19,20,22,24,26http://www.chromatographyonline.com/反相高效液相色谱柱的清洗和再生(二)http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生(三)http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/[size=4]本文原是2年前让我的研究生左莹暑假特意翻译的,只是后来忘了。一个月前,在整理电脑资料中发现了这篇文献翻译,我重新校对,修整了一些错误,但仍可能会有些翻译不对的地方,或者语句不畅,请大家指正。[/size][color=#00008B]][color=#00FFFF][size=4]反相高效液相色谱柱的清洗和再生[/size][/color][/color] 这个月的“关注色谱柱”着眼于将一根污染的柱子回到或接近初始状态的实用方法。Ron Majors 会讨论硅胶基质或其它类型的反相柱子的清洗步骤。 反相液相色谱是迄今为止高效液相色谱法(HPLC)中使用最广泛的技术[1]。它的广泛使用是因为它能应用于大部分的非极性化合物、许多可电离的及离子化合物的分析。大部分用于反相色谱的固定相是亲水性的,因此分析物是通过其与固定相之间的亲水作用的程度来进行分离的,含有亲水组成的基团也有相似的保留行为。 表一列举了最常见的键合硅胶的固定相(1)。一些比较次等的固定相比如说一些混合固定相(例如:苯基-乙基),末端封尾和不封尾类型的,一些极性固定相同样属于硅胶键合。其它一些各种各样的填料同样也被用于反相液相色谱,包括聚合物,涂布有硅和铝的聚合物,涂有氧化锆的无机-有机杂化物和石墨化的碳。各种不同的固定相都有其自身的优点和缺点。表1 HPLC固定相中的使用比例*固定相 使用比例C1839C826CN**14.5苯基12C43.7亲水作用1.8C21.2C10.8其它0.8聚合物0.5* 来源于文献1** 包括正相色谱,因为正相与反相使用无法确定比例。 反相色谱柱由于可使用多种流动相和添加剂而得到了广泛的使用。其中使用添加剂的一些技术可改变或修饰填料表面。有时,这些添加试剂本身就会污染填料表面或键合相。 由于使用了亲水性的键合固定相,硅胶表层有了其他的化学特征。残余的硅羟基存在于所有的硅胶键合相的表层。图一描述了可能存在的不同类型的硅羟基(2)。由于是弱酸的特性,这些硅羟基会同某些分析物和基体化合物相互作用,尤其是同一些碱性化合物。因为硅羟基的Pka值大约是在4.5左右。电离可能发生在中间的pH值,因此存在其同阳离子产生静电作用的可能性。比较老的A型硅胶可能含有高浓度的金属离子(通常为100ppm,或更高),这些金属离子会在硅胶表面提供更强的酸性,同样还会和金属螯合化合物(3)相互作用。残留的硅羟基会在末端不封尾的键合硅胶和短链键合的固定相上(例如C2和C4固定相)造成较多的麻烦。 色谱柱的使用者必须清楚色谱柱固定相的表面特征和可能存在的分析物—固定相表面的相互作用,所以在使用和发展反相色谱方法时必须考虑可能存在的基体相互作用。比如一些非常疏水的材料如玉米油、特别芳香类材料和蜡可以附着在反相填料表层并改变填料层的特征。含有蛋白质的生物液体会吸附在填料表层,尽管分析者尽了最大的努力来保护高效液相色谱柱以防止外来物质对其的伤害,最终是,某些分析物-基体化合物还是会对固定相产生不利的影响。 当一根色谱柱被污染之后,它的色谱性征可能已经不同于未被污染的色谱柱了。被污染的色谱柱可能会表现出反压力的问题。对于一根被污染的色谱柱则必须通过清洗和再生将它恢复到原来的操作条件。“关注色谱柱”这部分将会讨论一些实用的方法来将色谱柱恢复或接近到初始状态。由于键合的硅胶柱是最常用的,所以我要着重讨论他们。在最后,我将会论述一些其他类型的反相色谱柱的清洗程序。 反相色谱柱中污染物是怎样的形成? 通常,样品基体里总是含有一些对分析者来说不感兴趣的化合物。盐类、脂质、含脂肪的化合物、腐殖酸、疏水性的蛋白质和其他的一些生物化合物就是在使用中能够接触到高效液相色谱柱的可能物质。这些物质可能会比所需分析的物质更强或更弱的保留能力。那些保留能力比较弱的化合物如盐类,将以死体积被洗脱出来。这些不希望发生的干扰可以通过检测器观察到,它表现为一些色谱峰、斑点、基线干扰,甚至是一些倒峰。如果样品基体组成在色谱柱中有强的保留性,且流动相组成本身就不强到足以使其洗脱出来,这些被吸附的、或是被吸收的化合物将会累积,通常是在经过多次进样之后堵塞在色谱柱的柱头。这种特征是在等度条件下观察得到的。中等保留能力的样品混合物可以被缓慢的洗脱出来,其表现为宽峰、基线干扰或基线漂移。 有时,这些吸附的样品组成达到了比较高的浓度,它们便表现为一种新的固定相。被分析物可与这些杂质作用并表现为新的分离机理。它可能会引起保留时间的变化和峰的拖尾。如果色谱柱受到了比较严重的污染,色谱柱的反压力会达到一个无法承受的高度,这将会使泵超压工作,在堵塞的位置引起柱的塌陷并产生中空。表2分析柱的柱体积柱的尺寸(mm*mm)死体积(mL)250 * 4.62.5150 * 4.6 1.5150 * 3.00.64150 * 2.10.2850 * 4.60.5030 * 4.60.3015 * 4.60.15反相高效液相色谱柱的清洗和再生(二)http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生(三)http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=26431]反相高效液相色谱法测定淫羊藿叶[/url]发个帖子和大家分享~欢迎回帖~[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=26432]反相高效液相色谱法测定淫羊藿叶[/url]
求教高效液相色谱的反相柱哪个牌子好一些
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=41260]反相液相色谱对多肽的分离、纯化与制备[/url]