黄谱检测法

长期困扰中药界的“一药两方”，甚至“一药多方”的含牛黄品种问题，将随着含牛黄中成药的质量标准的提高而得到改善。近日，国家食品药品监管局在《对政协十一届全国委员会第二次会议第2816号(医药卫体238号)提案的答复》中明确表示，正在编撰的2010版《中国药典》，对禁止使用人工牛黄的品种，将增加猪去氧胆酸和游离胆红素的检查。　　加上之前国家食品药品监管局答复湖北省食品药品监管局《关于对含牛黄及其代用品使用品种剂型界定的复函》的意见，届时，含牛黄品种的中成药生产中“李代桃僵”的使用人工牛黄的行为将得到彻底杜绝。　　标准缺失下的牛黄“乱象”：成分检测无依据　　我国现有4500种中成药，其中约有650种含有牛黄，每年牛黄的需要量约500吨左右，但是，由于牛黄一直靠农户宰杀取得，我国每年自产的天然牛黄还不足1吨。牛黄的需求一直依赖进口，2002年，为防止疯牛病通过用药途径传入，国家决定禁止进口牛源性材料制备中成药，使得天然牛黄资源更为匮乏，导致天然牛黄价格不断攀升。　　在市场竞争激烈和利益驱使的双重挤压下，部分药品生产企业在生产含牛黄品种的中成药时，铤而走险，将牛黄以人工牛黄进行代替。　　企业之所以敢于这样胆大妄为，关键在于牛黄缺乏相应的检测标准。　　据了解，2005年版《中国药典》(一部)收载含牛黄中成药品种共45个。在45个品种中：有1个品种对胆酸成分进行了含量测定 有29个品种对胆酸进行了薄层色谱鉴别(其中，有3个品种同时对去氧胆酸进行了薄层色谱鉴别，有1个品种同时对鹅去氧胆酸进行了薄层色谱鉴别，有4个品种同时对猪去氧胆酸进行了薄层色谱鉴别) 有1个品种采用糠醛法对牛黄进行检测 有14个品种无任何牛黄检测方法。《卫生部药品标准中药成方制剂》(1997年)收载的250个含牛黄(人工牛黄)品种，《新药转正标准》收载的22个含牛黄(人工牛黄)品种，《国家中成药标准汇编》(2002年)中成药地方标准上升国家标准收载的56个含牛黄(人工牛黄)品种，合计328个含牛黄(人工牛黄)品种。其中，有胆酸或胆红素含量测定的有11个(其中同时有薄层鉴别的品种有7个)品种 有胆酸类薄层鉴别的有94个品种 糠醛等理化鉴别反应的有35个品种 无任何牛黄鉴别检测项目的有188个品种。　　2004年，为保证公众用药安全，国家食品药品监管局在《关于牛黄及其代用品使用问题的通知》(国食药监注[2004]21号)明确规定国家药品标准处方中42个含牛黄的临床急重病症用药品种和国家批准的含牛黄的新药，可以将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄替代牛黄等量使用，但不得以人工牛黄替代。2005年，根据实际情况，国家食品药品监管局对《国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病用药品种名单》进行调整，将原名单中的42个品种调整为38个。　　“但是，相关的标准却没有进行明确，《国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病用药品种名单》所列品种的法定质量标准中，对牛黄功效性成分胆红素的含量测定却一个也没有 对天然牛黄及三个代用品中均有的胆酸成分要求含量测定的，只有一个品种(灵宝护心丹) 对胆酸(或去氧胆酸)要求进行薄层色谱鉴别的有16个品种。另外，有3个品种要求采用糠醛法等理化方法检测处方中的牛黄成分，有24个品种没有任何牛黄检测项目。”河北省某药品生产企业负责人这样解释道。　　这无疑为不法企业的制假售劣提供了可乘之机。相关研究机构曾对7个厂家的安宫牛黄丸进行胆红素含量测定，结果发现这些产品中胆红素含量最高为37.9mg/丸，最低为0.72mg/丸，两者相差52倍。对3个厂家的牛黄清心丸进行胆红素含量测定，发现最高为0.1634mg/丸，最低为0.0273mg/丸，两者相差近6倍。　　政策冲突中的市场尴尬：标准打架欠统一　　业内人士反映，困扰含牛黄品种中成药质量的除标准欠缺外，相关政策配套不到位也是一个重要因素。　　据了解，《国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病用药品种名单》仅仅规定了品种名称，对剂型却没有明确界定，导致同一产品在剂型不一样的情况下使用不同牛黄的局面。例如：大活络丸、安宫牛黄丸、万氏牛黄清心丸、梅花点舌丸、回春丹等必须使用天然牛黄、培植牛黄或体外培育牛黄，但大活络胶囊(部颁新药转正52册)、安宫牛黄片(部颁中药14册)、安宫牛黄栓(部颁新药转正51册)、万氏牛黄清心片(地标升国标)、梅花点舌片(地标升国标)、梅花点舌胶囊(部颁新药转正41册)、回春散(地标升国标)等产品标准“处方”项下为“人工牛黄”，大大降低了含牛黄名方名药的治疗功效。　　为规范药品生产，国家食品药品监管局2007年在《关于对牛黄及其代用品使用品种剂型界定的复函》中，明确指出，“对于依据国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病症用药品种改剂型或改变用药途径的新药，可将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄替代牛黄等量投料使用，但不得以人工牛黄替代。”也就是说上述大活络胶囊、安宫牛黄片、安宫牛黄栓、万氏牛黄清心片等品种必须依规定使用牛黄、培植牛黄、体外培养牛黄。　　但是，市场上含牛黄成分的中成药依然“鱼龙混杂”：不同厂家生产的安宫牛黄丸价格差别极大，有的2.5元/粒，有的8.8元/粒，高的甚至230元/粒。那些低价格的安宫牛黄丸绝对使用的是人工牛黄。湖北某企业的质量负责人说，自2002年我国禁止进口牛源性材料制备中成药以来，使用天然牛黄或者培植牛黄、体外培育牛黄投料，按目前生产企业的工厂成本、销售成本、销售利润等计算，安宫牛黄丸成本不低于60元。　　“企业敢于造假主要在于中成药质量标准控制体系不完善。”这位业内人士介绍，近年来，为完善中成药尤其是含名贵中药材品种的中成药的质量标准，部分全国人大代表、政协委员多次在会议期间提出建议、提案，要求国家相关管理部门在完善中成药质量标准的同时，加强对含贵重药材的中成药品种的监管，以确保公众用药安全、有效。　　政协十一届全国委员会第二次会议期间，肖红等六名全国政协委员对于完善含牛黄类中成药的质量标准提出建议。建议国家有关部门加强对含牛黄中成药中相关成分的测定，杜绝药品生产中的造假行为。　　安全名义下的法律行动：剑锋犀利指向偷工减料　　据了解，针对近年来出现的药害事件，国家食品药品监管局采取一系列加强药品生产监督管理的新措施、新方法。在全国范围内推广实施的派驻监督员制度和质量授权人制度，对规范药品生产行为，加强药品监管起到了积极作用。　　同时，部分省级食品药品监管部门根据地区实际，在加强药品生产监督管理方面也进行了探索，如吉林、青海、湖北等省制定了对细贵中药材投料的有关规定，较好地遏制了药品生产中偷工减料的行为发生。　　“但这些都是治标，杜绝中成药生产贵重中药材投料‘李代桃僵’的行为，关键还是完善贵重中药材的质量控制指标。”这位业内人士这样强调。　　来自国家药典委的消息，随着药品标准提高行动的开展，国家将进一步完善对中成药质量标准控制体系，正在编撰中的2010版《中国药典》将对含名贵中药材的中成药作出针对性较强的含量控制和测定指标。在2010版《中国药典》编撰工作和国家标准提高行动中，国家药典委对含牛黄品种安排了标准提高任务，对禁止使用人工牛黄的品种，将增加猪去氧胆酸和游离胆红素的检查，同时进一步缩减使用人工牛黄的品种。　　在进一步完善药品质量控制标准体系的基础上，相关的法律保障也加大了对制售假劣药品的严厉打击。2009年5月27日施行的《最高人民法院、最高人民检察院关于办理生产、销售假药、劣药刑事案件具体应用法律若干问题的解释》明文规定，生产、销售的假药“属于急救药品的”，应当认定为刑法第一百四十一条规定的“足以严重危害人体健康”。　　“相对含牛黄类品种，‘两高解释’剑锋直指38个品种中以人工牛黄替代牛黄、体外培育牛黄、配置牛黄的违法行为。牛黄市场‘李代桃僵’现象匿迹将指日可待。”该业内人士强调。　　8月18日，国家基本药物目录公布，为保证基本药物的质量，国家食品药品监管局将制定严格的监管办法，监督目录品种的生产。在含牛黄类的中成药，只有安宫牛黄丸位列《国家标准处方中含牛黄的临床急重病用药品种名单》。即安宫牛黄丸中必须使用牛黄或培植牛黄，体外培育牛黄。这意味着安宫牛黄丸的生产、流通将将接受全面的“体检”。完善质量控制体系，加快立法进程等这些措施，无疑为药品安全提供了有力的支撑。　　相关链接：　　牛黄具有清热、解毒、镇惊、止咳、平喘等作用，现代医学研究证明其能促进红细胞及血红蛋白生成，是治疗心脑血管系统疾病的特效药物，还具有抑制和拮抗抗癌药毒副作用等功效。目前市场上共有牛黄及其代用品四种，即天然牛黄、体内培植牛黄、体外培育牛黄、人工牛黄　　1 天然牛黄　　本品为牛科动物黄牛或水牛胆囊、胆管或肝管中的结石。天然牛黄可分蛋黄和管黄。天然牛黄的一般成分及含量为：胆红素72%~76.5%，胆汁酸4.3%～6.1%，胆酸0.8%~1.8%，去氧胆酸3.33%～4.3%，胆汁酸盐3.3%~3.96%，胆固醇2.5%～4.3%，脂肪酸1%～2.1%，卵磷脂0.17%～0.2%，钙2.3%～2.6%。此外尚含有3种类胡萝卜素物质及多种氨基酸、微量元素和类肽的平滑肌收缩成分。　　2体内培植牛黄　　本品是利用活牛体，以外科手术的方法在牛的胆囊内插入致黄因子，使之生成牛黄。由于人工培植牛黄是在与天然牛黄相同的特定生态因素条件下形成的，故经测定其理化特性、性味、色泽、药效成分含量等与天然牛黄无明显差异。　　3体外培育牛黄　　本品以牛科动物牛的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。“体外培育牛黄”是运用现代生物工程技术，在牛体外模拟牛体内胆结石形成的原理和生物化学过程，经细菌培养，在多种酶作用下，从而培育出的一种生物优质牛黄。　　检测结果表明：其技术参数、质量指标、功能及主治与天然牛黄一致。经对其进行药检及采用双盲法对其在7家医院进行的1850多例临床实验结果表明，体外培育牛黄其疗效和性能非常接近甚至超过天然牛黄，且主要药理成分比天然牛黄稳定，是天然牛黄的理想代用品。　　4人工牛黄　　本品是以牛胆汁酸、胆红素、胆固醇与无机盐(硫酸镁、硫酸亚铁和磷酸三钙)为原料，与淀粉混合而成，临床疗效与天然品大体相似。人工牛黄多数为土黄色疏松粉末，也有制成不规则球形或方形的产品。由于人工牛黄胆红素、去氧胆酸等含量较低，国家相关部门规定，其不得用于含牛黄类临床急重症中成药品种的生产。

p　　从一个老牌军工企业广州无线电集团的内部校准实验室改制而来，15年间已发展成为一家综合性、全国性、军民融合的国有控股第三方计量检测机构，广州广电计量检测股份有限公司(以下简称广电计量)到底有何成长“秘诀”?/pp　　“我们始终坚持将质量作为我们发展的‘生命线’，通过严格的内部质量控制，为客户提供高质量的服务，赢得市场的认同。”3月12日，广电计量总经理黄敦鹏在接受中国质量报专访时，谈及广电计量发展的秘密武器只有两个字：质量。/pp　　据了解，广电计量的前身是一个老牌军工企业——广州无线电集团的内部校准实验室，曾长期主要为集团内部军工配套服务，在集团主营业务陷入困境的时候为求生存被逼走向市场自谋生路，于2002年改制成立了有限责任公司。广电计量刚成立的时候，只剩下9名员工，注册资本100万元，就是在这样的条件下开始了艰苦奋斗的创业历程。以市场化为导向，坚守质量生命线，立足体制改革、机制创新、管理创新，持续加大技改投入，广电计量终于闯出了一条高速发展之路，营业收入持续10多年保持40%以上的高速增长，规模不断壮大。/pp　　目前，广电计量已经发展成为综合性、全国性、军民融合的国有控股第三方计量检测机构。业务范围从单一的计量校准扩展到产品环境可靠性试验、电磁兼容检测、农产品食品检测、环保检测、化学分析、产品全球认证、软件工程化服务、信息系统开发、测控仪器开发等一站式服务能力 在全国建有20个检测基地，实验室面积超过15万平方米，初步构建了覆盖全国的服务保障网络。/pp　　“作为一家计量检测机构，我们的本质特点或者说关键点就是数据的准确可靠，只有客户信任你的数据，你才有价值和市场，每一份证书、一个数据都至关重要，我们的质量就是要保证证书、数据的可靠，经得起检验，因此我们在发展中始终把数据放在关键环节进行质量管理，将质量看成是我们成长的‘生命线’。”黄敦鹏说。/pp　　据介绍，广电计量在内部质量控制方面逐渐形成了属于自身的独到做法，首先是在内部控制方面严防死守，用高标准严要求带来高质量，包括建立高于实验室认证的内部标准体系，同时在质量意识、质量管理体系建设方面不遗余力，用一套严格的运行体系保证质量。“我们知道，质量是需要成本的，我们这么做相当于要革自己的命，只有更严格的质量控制才有可能带来质量上的优势，成为市场上有竞争力的实验室。”黄敦鹏说。/pp　　目前，广电计量在全国建立了20个检测基地，所有的实验室都执行统一的标准，实施一体化垂直管理。管理体系、流程文件每年都接受20多次实验室资质认证认可的评审，请业内专家提意见而不断完善，千锤百炼来打造一流的质量管理体系。严格的质量控制也换来了市场的好口碑，助力自身不断成长。/pp　　除内部质量控制之外，给客户提供高质量服务这是广电计量的另一条质量“生命线”。“在保证报告质量的前提下，如何给客户提供便捷、周到的服务，也是我们在市场竞争中不断发展的重要方面。”黄敦鹏表示，围绕客户需求，构建便捷、周到的服务体系，才能不断得到客户的认可，自身也会不断发展壮大。/pp　　高质量的服务也换来了高收益的回报。比如广电计量先后参与国家级食品安全、环保等方面的项目，一方面在项目里提供检测技术报告 另一方面协助做数据分析并提供相关的意见建议，都获得了良好的效果，他们先后参与的长株潭耕地污染监测、河南省农产品产地土壤重金属污染普查等项目都获得了客户的高度认可 还比如他们为吉利汽车供应商的品质管控提供技术支撑，为其量身打造针对性的服务保障体系，获得吉利集团的高度肯定。/pp　　当前，我国正在进入高质量发展的新时代，检验检测市场也面临着深度改革的现状，对于行业未来的发展，黄敦鹏充满信心。“计量检测是国民经济发展和各行业、产业发展的重要支撑力量。科技要发展，计量须先行，计量检测既是科学前沿领域，也是产业基础领域的支撑，是永远的朝阳产业。”黄敦鹏说。/pp　　有机构曾经预测，我国计量检测行业未来每年将保持10～15%的复合增长率。面对行业良好的发展前景，广电计量也制定了宏伟的发展目标和发展计划，力争成为一家行业龙头企业，在每一个细分领域进入行业的前列。“近3年我们累计投入十几亿元进行实验室建设，今年还会继续扩充全国实验室基地和服务网络，既为国内的检验检测机构改革提供参考案例，更为‘中国制造2025’，推动高质量发展，实现质量强国梦做出我们的贡献。”黄敦鹏最后说道。/p

南京大学化学化工学院鞠熀先教授研究组在质谱成像分析方面取得重大进展，相关成果日前在线发表于Angew. Chem. Int. Ed., DOI: 10.1002/anie.201601096。该成果由14级博士生胡骏杰为第一作者，鞠熀先教授为通讯作者完成。　　质谱技术由于高通量和免标记的优势，在酶活性分析中得到广泛关注。然而，由于生物样品的成分复杂，组分丰度的分布差异大，其应用常被复杂的样品前处理所限制。为简化繁琐的样品前处理和数据分析过程，鞠熀先教授研究组发展了质谱成像分析新技术，实现了对多种酶活性的便捷可视化分析。该工作首先需攻克质谱成像分析尤其是通常MALDI-MS检测存在的难题，大幅度提高质谱信号与信噪比，从而通过逐点扫描，获得清晰的质谱图像。该课题组以磷脂分子修饰多肽底物，利用具有两亲特性的磷脂分子保证其在疏水玻片表面的有序组装，构建模拟生物膜，从而增强MALDI芯片的表面生物相容性，以使分析对象酶更易接近其底物，大幅度提高了质谱信号 同时这一设计增加了酶反应产物的分子量，可以避免基质与生物样品中杂质的干扰，改善了检测信噪比与质谱分辨能力。他们以含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶家族(Caspase-1, -2, -3和-8)为模型，将相应多肽底物分别与磷脂骨架的分子连接并组装嵌插于疏水玻片表面，制备出用于酶活性检测的阵列芯片 在目标酶的作用下，底物被剪切产生质量位移，各酶的活性通过酶切产物的质荷比进行颜色编码，实现了多种酶活性的可视化与高通量定量检测(图1)。这一方法已成功用于细胞内水解酶家族的抑制剂筛选和化疗过程癌细胞中Caspases酶活性演化的监测，为耐药性细胞鉴别及抗癌药物筛选提供了有力工具，并可方便地扩展应用于其它酶系统，为探究更多过程中酶的作用机制提供了新途径。　　质谱芯片的制备及Caspase酶活性的可视化分析原理　　鞠熀先教授研究组自2000年开始质谱研究，以解决实际问题为出发点，建立了海洛因及其代谢物的LC/MS分析方法及鼠药的GC/MS快速检测方法等。2010年后，随着生命分析化学国家重点实验室的建立与生命科学研究的需求，该研究组将纳米技术、化学衍生及化学生物学与传统质谱分析方法结合，通过功能化碳纳米角、磁性碳纳米管等纳米材料，提出低丰度生物小分子(Chem. Eur. J., 2013, 19, 102-108)与蛋白(Nanoscale, 2014, 6, 3150-3156)的选择性富集手段，建立了无需另加基质的MALDI-MS检测方法。特别是，针对阻碍MALDI-MS定量分析的瓶颈，该课题组利用分子标记实现了MALDI定量(Anal. Chem., 2014, 86, 8275-8280 Anal. Chem., 2015, 87, 4409-4414)，并用于多肽和酶活性的定量检测，创造性地改变了传统认识，扩展了这一技术的应用范围。 原文链接：MALDI-MS Patterning of Caspase Activities and Its Application in the Assessment of Drug Resistance