色谱进液量

前言：按照10版药典方法检测乳糖的含量，按照系统适应性下的要求，乳糖与蔗糖达到分离要求，乳糖的理论踏板数不小于5000。下面主要考察乳糖在测试过程中，相同样品浓度下不同的进样体积对柱效的影响和不同浓度下相同进样体积对柱效的影响。测定方法：色谱柱：Ultimate®XB-NH2-3，4.6×250mm，5μm； 温度：柱温：45度，示差检测器：40度；流动相：乙腈-水=70：30； 流速：1.0mL/min； 进样量：10μL。样品配制：系统适用性：精密称取乳糖0.0255g和蔗糖0.0254g置于25ml容量瓶中加水溶解并稀释至刻度摇匀，过滤，即得。含量测定样品溶液：精密称取样品粉末0.0252g于25ml容量瓶中，用水溶解并定容，过滤即得；含量测定对照品溶液：精密称取对照品粉末0.0254g于25ml容量瓶中，用水定容，过滤即得按照测定要求，按照测定要求样品浓度为1mg/ml，进样体积：10ul考虑到我的仪器的定量环是20ul，因为是手动进样，进样量10ul可能在计算含量的时候峰面积不稳定计算会产生误差。考虑把样品浓度配制成0.5mg/ml，调整进样体积为20ul；下面上一张系统适用性图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211032333_401206_1938106_3.jpg重复了好几针，分离度和保留时间没改变，柱效依然达不到5000.乳糖对照品0.5mg/ml 进样量20ulhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211032338_401211_1938106_3.jpg测试乳糖对照品，乳糖的柱效也是比较低的。考虑到示差检测器是比较难稳定的，也考虑氨基柱在平衡中是比较难平衡的，所以采用过夜循环平衡方法进行测定。测试乳糖对照品0.5mg/ml 进样量20ulhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211040004_401226_1938106_3.jpg平衡了一夜但的柱效一点都没有改善。柱效依然不能满足要求。这个过程考虑到是否是氨基柱的问题，排除了氨基柱在使用过程中的氨基脱落导致柱效的原因，为了排除色谱柱的原因换新柱子测试，柱效还是不能满足要求。百思不得其解中，想到样品质量对柱效影响，还是进样体积对柱效是否有影响。为了证明是相同质量下，不同进量是否对柱效存在影响。下面配制1mg/ml的浓度分别进样20ul和10ul的体积。乳糖对照品1.0mg/ml 进样量20ul http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211041842_401303_1938106_3.jpg乳糖对照品1.0mg/ml 进样量10ulhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211041848_401305_1938106_3.jpg进样体积减少10ul发现柱效提高一倍多。结论：从以上实验结果分析比较当乳糖含量样品体积为20ul，样品浓度1mg/ml，柱效：3982；0.5mg/ml,浓度，柱效4253；当乳糖浓度1mg/ml的浓度进样为20ul柱效：3982；进样量10ul柱效：8413，进样体积减小一半，柱效提高一倍。说明在夜想色谱柱具有一定的饱和容量下，最大进样体积，也要决定于化合物在固定相和流动相中平衡，通过上面实验证明，随着进样量的增大，柱效降低。当进样量超出色谱柱饱和容量时，柱效也会降低。对于一定的样品量，进样体积增大，柱效降低。当进样量超出色谱柱上样最大进样体积时，柱效会有明显降低，影响分离结果。当然对于分析色谱而言，所需要的进样量和进样体积都是很小的，所以在平时很少观察到这点现象。可以看出进样量和进样体积对定性定量中对色谱柱柱效的影响。发现晚上传图太慢了， 所以今天晚上才把图传上来，供各位色友分享。

前言：前段时间药典委员会培训时一个老师讲过，以后，线性关系试验也可以用不同的进样量来进行。我想了想，这样做真好，省事多了啊！于是，来验证一下是否可行。溶出度试验条件：色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）(45:55）为流动相；检测波长210 nm理论板数以****峰计算应不低于2000。取本品，照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C第二法），以水900ml为溶剂，转速为每分钟50转，依法操作，经15分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取****对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，用水稀释至100ml，作为对照品溶液。取上述两种溶液各20μl,注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算溶出量。限度为标示量的85%，应符合规定。色谱柱信息：welchrom C18 4.6*150mm,5微米PN:WEL 518415;SN:W11212195;LN:W1811.02初步情况详见图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010018_408484_1621890_3.jpg 进样量：20微升线性关系：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010048_408488_1621890_3.bmp上面色谱图为20微升进样色谱图，下图为体积进样色谱图，两者的进样量一样，从色谱图上发现基本上无明显差异。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010052_408489_1621890_3.bmphttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010041_408485_1621890_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010044_408487_1621890_3.gif试验总结：从以上图谱对比，由于进样量的控制主要由自动进样器来操作的，由于不同的进样量，其溶剂峰也是有一定的差异的，详见最后几张张图对比图可以看出。有些品种，用这种方法也可能会不成功的，主要是扩散效应是否可以忽略。

高效液相色谱法测定促进消化片中熊果酸的含量 本所研制的促进消化片由山楂、麦芽、鸡内金、莱菔子等药味组成，具有清胃消食之功效。用于脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食、嗳腐酸臭、脘腹胀满；消化不良见上述证候者。其中君药为山楂。 中药山楂是蔷薇科山楂或山里红的干燥成熟果实。具有消食健脾，行气散瘀功效，用于肉食积滞，胃脘账满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，疝气作痛；高血脂症。主产山东、河北、河南、辽宁、山西等省，多为栽培。 随着中药现代化发展战略的提出，为控制产品质量，确保临床疗效，对中药的鉴别和检查提出了很高的要求。本文采用高效液相色谱法对方中山楂的有效成分熊果酸进行含量测定，为建立促进消化片的质量标准提供依据。材料与方法1 仪器与材料安捷伦1200 配紫外检测器循环水式真空泵（河南郑州）旋转蒸发仪（东京理化）紫外可见分光光度计（瓦里安）SZ-97A自动三重水蒸馏器（上海亚荣生）电子天平（万分之一，梅特勒托利多）超声波清洗机（昆山）熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所），促进消化片（本所自制），阴性对照（自制），甲醇（分析纯、色谱纯，国药）2 方法2.1 色谱条件色谱柱为依利特 (250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水：醋酸(65∶34：1)；检测波长210nm；体积流量1mL﹒min-1；柱温38℃；进样量20μl。理论塔板数按熊果酸峰计算，应不低于3000。2.2 溶液的配制2.2.1对照品贮备液的制备精密称取于五氧化二磷干燥器中减压干燥24小时的熊果酸10.56mg，溶于适量甲醇，移至50mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1mL含熊果酸0.2112mg的溶液，作为熊果酸对照品贮备液。2.2.2对照品溶液的制备精密量取熊果酸对照品贮备液1mL置5mL容量瓶中，加甲醇定容，制成每1mL含熊果酸0.04224mg的溶液，作为熊果酸对照品溶液。2.2.3供试品溶液的制备取100片促进消化片粉碎过120目筛，精密量取粉末1g，甲醇超声提取30分钟，过滤，滤液水浴蒸干后，残渣加适量甲醇，超声处理30 min，转入50 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，以0.45[/size

作者：黄彩虹; 雷鹏; 甘莲莲; 黄义; 李新中;（中南大学湘雅医院药剂科; 中南大学药学院;）摘要：目的建立高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量。方法Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.01%磷酸(10∶90);检测波长:273 nm;柱温:30℃;流速:1 mL.min-1,进样量:5μL。结果没食子酸在0.018 2~0.182 4μg线性关系良好,回归方程为Y=2 969.4X-4.252,r=0.999 9。平均加样回收率为98.36%,RSD为2.83%。结论本方法简便、快速、重复性好,可用于测定地锦草中没食子酸的含量。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061108_381762_1606903_3.jpg

其他讲座资料看[url=http://www.instrument.com.cn/bbs/detail.asp/threadid/1679222/forumid/25/year/2009/query/search] 学习[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]跟yuen72老师入门[/url]在塔板理论脉冲进气的情况下，样品进样都在第0块塔板上。如此，第0块塔板体积应该等于进样体积。但是，在毛细管柱的进样上，明显并不如此。以0.32mm色谱柱正常柱效为3300块塔板每米来看，每块塔板高度应为0.3mm。如果考虑进样量为0.2ml，分流比为50倍，则进入色谱柱的样品体积是为0.004ml，如此应该占有50mm的色谱柱，按照塔板理论假设，理论塔板高度应为50mm。为什么会出现这样的差异呢？显然问题来自与理论假设中的脉动进样。通常，我们把实际进样体积占色谱柱高度与理论塔板高度之比称为进样宽度，这里即50mm/0.3mm=167块塔板。在样品逐渐进入色谱柱的时候，溶解和解析的过程是不断进行的，实际的样品进样过程中，已经形成了色谱峰的形状。如下图，上面的是进样宽度为100块塔板高度情况下，进样完毕时组分浓度的柱内分布。当包括进样在内共有200块塔板体积载气进入色谱柱后，形成的色谱峰成为下面的形状。注意，图中横坐标为色谱柱头0至n块塔板。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903060121_136950_1641581_3.jpg[/img]理论塔板高度事实上是与进样无关的，只与载气流速、纵向扩散速度和传质速度有关，即速率理论：H = B/u + Cu 。因此在相同线速度（纵向扩散相同）和相比（液膜厚度与内径成正比）的情况下，存在理论塔板高度与毛细管色谱柱内径成正比的关系，因为此时传质距离正好与内径成正比。[B]因此，厚液膜的色谱柱，因为增加了液相厚度而增加了液相传质阻力，因此并不能提供更好的理论塔板数。相反的，厚液膜色谱柱理论塔板数（即柱效率）要略低一些。[/B]这与我们实际工作似乎略有出入，事实上，实验室中经常发现厚液膜的柱子具有更好的分离度R。但这与理论并不冲突，发生这样情形的原因在于进样量。