我们用的是安捷伦1100的高效液相色谱仪,在做一个软膏剂的时候,标准规定的浓度进样10μl,峰形有前延峰,把浓度稀释一半,进样10μl,峰的对称性在1.0左右,如果再把浓度稀释一半,进样20μl的话,峰形又不对称了。大家分析一下是什么原因?液相色谱的进样量与峰形之间的关系怎样?(药品名字是“复方地塞米松乳膏”,内标法测定地塞米松含量,内标物是甲睾酮)
液相色谱一般都有定量环 20ul的居多 但是我们进样有时候进20有时候进10的 进20ul时候、大家一般用20ul定量环时候进多少 有人说 进三倍量 那如果近10ul的是不还要换定量环啊 我一直都是20的 从没有换过 一般也没有按照进3倍量!
[color=#444444]用1微升微量进液器量取0.6微升液体进样[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url],发现每次的风告知都不一样,我怀疑是进液器内有气泡,但因为1微升进液器内有铁丝,看不到进的液体和气泡,所以也只是猜测,请问,有什么办法减小误差?[/color]
本人刚接触液相色谱,想要检测某饮料中某一物质的含量采用外标法,该物质的大体含量不清楚,看了几篇参考文献说外标法中浓度范围最好包括样品浓度,这该怎么做呢?难道扩大外标法中的浓度范围吗,这样好像比较麻烦又不见得准确啊?还有就是进样量应该怎么确定啊?
当用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]溶剂极性强度大的试剂,如纯甲醇、纯乙腈,纯乙醇,而分析体系中以水为主时,如果样品进样量大,如定量管为20ul,此时单一的纯物质会出现双峰,第二峰比第一峰小(每次都不太一样),且拖尾,保留时间会提前(相对进样量少而言),将进样量减少一半以上,峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大,而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的,此情况下需要减少进样量。另一个原因是,进样量不一定大,但绝对量很大,色谱图上的双峰紧靠在一起,基本上齐高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色谱柱问题)。将样品稀释再进样就可以了,这是由于进样量过大,色谱柱过载造成的。
高效液相色谱进样量一般为多少啊
高效液相色谱进样量对分析结果有怎样的影响?
前言:按照10版药典方法检测乳糖的含量,按照系统适应性下的要求,乳糖与蔗糖达到分离要求,乳糖的理论踏板数不小于5000。下面主要考察乳糖在测试过程中,相同样品浓度下不同的进样体积对柱效的影响和不同浓度下相同进样体积对柱效的影响。测定方法:色谱柱:Ultimate®XB-NH2-3,4.6×250mm,5μm; 温度:柱温:45度,示差检测器:40度;流动相:乙腈-水=70:30; 流速:1.0mL/min; 进样量:10μL。样品配制:系统适用性:精密称取乳糖0.0255g和蔗糖0.0254g置于25ml容量瓶中加水溶解并稀释至刻度摇匀,过滤,即得。含量测定样品溶液:精密称取样品粉末0.0252g于25ml容量瓶中,用水溶解并定容,过滤即得;含量测定对照品溶液:精密称取对照品粉末0.0254g于25ml容量瓶中,用水定容,过滤即得按照测定要求,按照测定要求样品浓度为1mg/ml,进样体积:10ul考虑到我的仪器的定量环是20ul,因为是手动进样,进样量10ul可能在计算含量的时候峰面积不稳定计算会产生误差。考虑把样品浓度配制成0.5mg/ml,调整进样体积为20ul;下面上一张系统适用性图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211032333_401206_1938106_3.jpg重复了好几针,分离度和保留时间没改变,柱效依然达不到5000.乳糖对照品0.5mg/ml 进样量20ulhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211032338_401211_1938106_3.jpg测试乳糖对照品,乳糖的柱效也是比较低的。考虑到示差检测器是比较难稳定的,也考虑氨基柱在平衡中是比较难平衡的,所以采用过夜循环平衡方法进行测定。测试乳糖对照品0.5mg/ml 进样量20ulhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211040004_401226_1938106_3.jpg平衡了一夜但的柱效一点都没有改善。柱效依然不能满足要求。这个过程考虑到是否是氨基柱的问题,排除了氨基柱在使用过程中的氨基脱落导致柱效的原因,为了排除色谱柱的原因换新柱子测试,柱效还是不能满足要求。百思不得其解中,想到样品质量对柱效影响,还是进样体积对柱效是否有影响。为了证明是相同质量下,不同进量是否对柱效存在影响。下面配制1mg/ml的浓度分别进样20ul和10ul的体积。乳糖对照品1.0mg/ml 进样量20ul http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211041842_401303_1938106_3.jpg乳糖对照品1.0mg/ml 进样量10ulhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211041848_401305_1938106_3.jpg进样体积减少10ul发现柱效提高一倍多。结论:从以上实验结果分析比较当乳糖含量样品体积为20ul,样品浓度1mg/ml,柱效:3982;0.5mg/ml,浓度,柱效4253;当乳糖浓度1mg/ml的浓度进样为20ul柱效:3982;进样量10ul柱效:8413,进样体积减小一半,柱效提高一倍。说明在夜想色谱柱具有一定的饱和容量下,最大进样体积,也要决定于化合物在固定相和流动相中平衡,通过上面实验证明,随着进样量的增大,柱效降低。当进样量超出色谱柱饱和容量时,柱效也会降低。对于一定的样品量,进样体积增大,柱效降低。当进样量超出色谱柱上样最大进样体积时,柱效会有明显降低,影响分离结果。当然对于分析色谱而言,所需要的进样量和进样体积都是很小的,所以在平时很少观察到这点现象。可以看出进样量和进样体积对定性定量中对色谱柱柱效的影响。发现晚上传图太慢了, 所以今天晚上才把图传上来,供各位色友分享。
前言:前段时间药典委员会培训时一个老师讲过,以后,线性关系试验也可以用不同的进样量来进行。我想了想,这样做真好,省事多了啊!于是,来验证一下是否可行。溶出度试验条件:色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(45:55)为流动相;检测波长210 nm理论板数以****峰计算应不低于2000。取本品,照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录X C第二法),以水900ml为溶剂,转速为每分钟50转,依法操作,经15分钟时,取溶液10ml,滤过,取续滤液作为供试品溶液;另取****对照品10mg,精密称定,置100ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,用水稀释至100ml,作为对照品溶液。取上述两种溶液各20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算溶出量。限度为标示量的85%,应符合规定。色谱柱信息:welchrom C18 4.6*150mm,5微米PN:WEL 518415;SN:W11212195;LN:W1811.02初步情况详见图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010018_408484_1621890_3.jpg 进样量:20微升线性关系:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010048_408488_1621890_3.bmp上面色谱图为20微升进样色谱图,下图为体积进样色谱图,两者的进样量一样,从色谱图上发现基本上无明显差异。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010052_408489_1621890_3.bmphttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010041_408485_1621890_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212010044_408487_1621890_3.gif试验总结:从以上图谱对比,由于进样量的控制主要由自动进样器来操作的,由于不同的进样量,其溶剂峰也是有一定的差异的,详见最后几张张图对比图可以看出。有些品种,用这种方法也可能会不成功的,主要是扩散效应是否可以忽略。
大家使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]时如果用微量进样器进样的话,液体样品进样量是多少?咱们交流一下我们填充柱进样为1微升;毛细柱分流进样0.2或者0.4微升再补充点:不知道各位用的微量进样器是多大量程的,我们用10微升的进样0.2微升总是感觉不太保险
[color=#444444]HPLC用自动进样器进样,设定进样量是5ul,样品共有100ul(在普通色谱瓶里加了微量小玻璃管),但进一次样就少了50ul。不知道是否哪里出问题了还是自动进样器本来就是要多吸取样品的?以前都用1ml的样品量,进样多少没有注意。[/color]
[size=4]在快速分离中要取得成分保留时间的重现性要比常规分析中更加困难。保留时间的重现性(RSD)和时间的平方根成反比增大,所以需要比常规分析更为严格的送液性能。 快速液相色谱的目标就是高通量,也就是说每天或每小时有更多的样品被分析。为了实现高通量,不仅要缩短单个样品分析时间,而且整个循环进样和分析时间也必须优化。追求快速化的本意不仅是缩短分析时间,而且是缩短分析周期。通常通过缩短色谱柱或提高流动相的流量来达到目的。但是,使用常用的粒径5μm的填充柱,使用任何方法分离性能都会明显下降,从而使快速化失去意义。 因此,以下两种方法得以发展:[/size][list][*][size=4]使用小粒径的填料 通过这个方法将使快速分离成为可能。但是,由于色谱柱里流动阻力的增加,仪器各部件和色谱柱所承受的压力也将显著地增加。[/size][*][size=4]高温分离 较高的温度可以加速物质的扩散,同时可以减小色谱柱里的流动阻力,也使得快速分离成为可能。高温分析在降低柱压方面很有效,但是高温引起色谱柱的劣化、导致样品分解等不足在应用时需要引起注意。 [/size][*][size=4][/size][*][size=4]小柱管和小体积的流通池降低了柱外峰展宽效应。[/size][/list][size=4] 这里使用的小柱管使的色谱柱容量大大下降,小体积的流通池也使它比常规的紫外检测池里瞬时样品量少,那要做杂质检测时,如果没有提高检测器的灵敏度的话,会不会使一些杂质无法被检出,大家有没有谁做过杂质检测的对比?[/size]
[color=#444444]最近用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]检测总是出现这样的问题,同一样品,进样体积一样,但出峰高度差不少,含量变化也很大,一个含量在70%,一个30%左右,能浮动8%左右,这样根本没法定量啊,即使是粗略的定量。为什么重复性会这么差呢,是色谱的问题,还是色谱条件,或者操作的问题?[/color]
各位老师,我最近在苯甲醇氧化反应,今天在检测反应液(主要成分是苯甲醇、苯甲醛、苯甲酸、溶剂为乙酸乙酯)的时候,在其他色谱条件相同的条件下,当进样量为0.2ul的时候,苯甲醇的转化率为89%,但当进样量为0.4ul时,苯甲醇的转化率为79%,当进样量降低为0.1ul的时候,苯甲醇的转化率变的更低,将为60%多,而各进样条件下苯甲醛的选择性基本相同,我想问问各位老师为什么进样量不同时,苯甲醇的转化率会相差这么大,我该以哪一个进样量条件下的转化率为准呢?而一般的进样量是多少?是怎么确定的?我的色谱条件为:进样器:150℃、柱温:280℃、检测器:280℃,手动进样,采用面积归依法计算各组分含量。柱子为SE-54,50m×0.32mm×0.50mm,国产色谱,按理说,同样的样品在相同条件下,含量应该会一样的,怎么我在进样量不同时得出了不同的含量呢?我再问一下,SE-54对苯甲醇、苯甲酸、苯甲醛、乙酸乙酯可以分的开吗?麻烦各位老师指导指导我,谢谢了!
液相色谱,面积归一化进样量与峰面积有关系吗?
液相色谱进样量一样出峰为什么不一样
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的进样量一般选多少,液体我一般2微升,气体80微升,对吗,期待高手赐教
高效液相色谱法测定促进消化片中熊果酸的含量 本所研制的促进消化片由山楂、麦芽、鸡内金、莱菔子等药味组成,具有清胃消食之功效。用于脾胃虚弱所致的食积,症见不思饮食、嗳腐酸臭、脘腹胀满;消化不良见上述证候者。其中君药为山楂。 中药山楂是蔷薇科山楂或山里红的干燥成熟果实。具有消食健脾,行气散瘀功效,用于肉食积滞,胃脘账满,泻痢腹痛,瘀血经闭,产后瘀阻,心腹刺痛,疝气作痛;高血脂症。主产山东、河北、河南、辽宁、山西等省,多为栽培。 随着中药现代化发展战略的提出,为控制产品质量,确保临床疗效,对中药的鉴别和检查提出了很高的要求。本文采用高效液相色谱法对方中山楂的有效成分熊果酸进行含量测定,为建立促进消化片的质量标准提供依据。材料与方法1 仪器与材料安捷伦1200 配紫外检测器循环水式真空泵(河南郑州)旋转蒸发仪(东京理化)紫外可见分光光度计(瓦里安)SZ-97A自动三重水蒸馏器(上海亚荣生)电子天平(万分之一,梅特勒托利多)超声波清洗机(昆山)熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所),促进消化片(本所自制),阴性对照(自制),甲醇(分析纯、色谱纯,国药)2 方法2.1 色谱条件色谱柱为依利特 (250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-水:醋酸(65∶34:1);检测波长210nm;体积流量1mL﹒min-1;柱温38℃;进样量20μl。理论塔板数按熊果酸峰计算,应不低于3000。2.2 溶液的配制2.2.1对照品贮备液的制备精密称取于五氧化二磷干燥器中减压干燥24小时的熊果酸10.56mg,溶于适量甲醇,移至50mL容量瓶中,加甲醇定容,制成每1mL含熊果酸0.2112mg的溶液,作为熊果酸对照品贮备液。2.2.2对照品溶液的制备精密量取熊果酸对照品贮备液1mL置5mL容量瓶中,加甲醇定容,制成每1mL含熊果酸0.04224mg的溶液,作为熊果酸对照品溶液。2.2.3供试品溶液的制备取100片促进消化片粉碎过120目筛,精密量取粉末1g,甲醇超声提取30分钟,过滤,滤液水浴蒸干后,残渣加适量甲醇,超声处理30 min,转入50 mL容量瓶中,加甲醇定容,摇匀,以0.45[/size
我用自动进样,定量环为100微升的液相色谱分析样品,现进样量要改为10微升,进样能准确吗?
[color=#444444]我最近在苯甲醇氧化反应,今天在检测反应液(主要成分是苯甲醇、苯甲醛、苯甲酸、溶剂为乙酸乙酯)的时候,在其他色谱条件相同的条件下,当进样量为0.2ul的时候,苯甲醇的转化率为89%,但当进样量为0.4ul时,苯甲醇的转化率为79%,当进样量降低为0.1ul的时候,苯甲醇的转化率变的更低,将为60%多,而各进样条件下苯甲醛的选择性基本相同,我想问问各位老师为什么进样量不同时,苯甲醇的转化率会相差这么大,我该以哪一个进样量条件下的转化率为准呢?而一般的进样量是多少?是怎么确定的?我的色谱条件为:柱温:150℃、气化温度:280℃、检测器:280℃,手动进样,采用面积归依法计算各组分含量。柱子为SE-54,50m×0.32mm×0.50mm,国产色谱,[/color][color=#444444]按理说,同样的样品在相同条件下,含量应该会一样的,怎么我在进样量不同时得出了不同的含量呢?我再问一下,SE-54对苯甲醇、苯甲酸、苯甲醛、乙酸乙酯可以分的开吗?麻烦各位老师指导指导我,谢谢了![/color][color=#444444]我问问各位老师,我该怎么做才能避免这种问题的发生,还有,我问一下造成这种问题的原因是什么,是仪器的问题呢?还是我的操作问题呢?谢谢了[/color]
我用自动进样,定量环为200微升的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析样品,现进样量是5微升,进样能准确吗? 会不会导致对照品连续进样5针,峰面积忽大忽小?
作者:黄彩虹; 雷鹏; 甘莲莲; 黄义; 李新中;(中南大学湘雅医院药剂科; 中南大学药学院;)摘要:目的建立高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量。方法Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.01%磷酸(10∶90);检测波长:273 nm;柱温:30℃;流速:1 mL.min-1,进样量:5μL。结果没食子酸在0.018 2~0.182 4μg线性关系良好,回归方程为Y=2 969.4X-4.252,r=0.999 9。平均加样回收率为98.36%,RSD为2.83%。结论本方法简便、快速、重复性好,可用于测定地锦草中没食子酸的含量。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061108_381762_1606903_3.jpg
其他讲座资料看[url=http://www.instrument.com.cn/bbs/detail.asp/threadid/1679222/forumid/25/year/2009/query/search] 学习[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]跟yuen72老师入门[/url]在塔板理论脉冲进气的情况下,样品进样都在第0块塔板上。如此,第0块塔板体积应该等于进样体积。但是,在毛细管柱的进样上,明显并不如此。以0.32mm色谱柱正常柱效为3300块塔板每米来看,每块塔板高度应为0.3mm。如果考虑进样量为0.2ml,分流比为50倍,则进入色谱柱的样品体积是为0.004ml,如此应该占有50mm的色谱柱,按照塔板理论假设,理论塔板高度应为50mm。为什么会出现这样的差异呢?显然问题来自与理论假设中的脉动进样。通常,我们把实际进样体积占色谱柱高度与理论塔板高度之比称为进样宽度,这里即50mm/0.3mm=167块塔板。在样品逐渐进入色谱柱的时候,溶解和解析的过程是不断进行的,实际的样品进样过程中,已经形成了色谱峰的形状。如下图,上面的是进样宽度为100块塔板高度情况下,进样完毕时组分浓度的柱内分布。当包括进样在内共有200块塔板体积载气进入色谱柱后,形成的色谱峰成为下面的形状。注意,图中横坐标为色谱柱头0至n块塔板。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903060121_136950_1641581_3.jpg[/img]理论塔板高度事实上是与进样无关的,只与载气流速、纵向扩散速度和传质速度有关,即速率理论:H = B/u + Cu 。因此在相同线速度(纵向扩散相同)和相比(液膜厚度与内径成正比)的情况下,存在理论塔板高度与毛细管色谱柱内径成正比的关系,因为此时传质距离正好与内径成正比。[B]因此,厚液膜的色谱柱,因为增加了液相厚度而增加了液相传质阻力,因此并不能提供更好的理论塔板数。相反的,厚液膜色谱柱理论塔板数(即柱效率)要略低一些。[/B]这与我们实际工作似乎略有出入,事实上,实验室中经常发现厚液膜的柱子具有更好的分离度R。但这与理论并不冲突,发生这样情形的原因在于进样量。
我们知道液相色谱可以通过六通阀和四元梯度泵减少死体积,那么我们把柱放大,(大概2l的柱子)进液量增加,(进液体积100l左右,淋洗也要10l,)这些方法也可以吗?或者说能保证两种进液不混合吗?
气象色谱在分析样品时,进样量与“色谱柱的容量”有关吗
各位老师,大家好,最近在做苯甲醇氧化反应,今天用气相色谱分析苯甲醇、苯甲醛、苯甲酸、乙酸乙酯(用作溶剂)的含量时,其他色谱条件未改变、且都相同的情况下,当进样量为0.2ul时,苯甲醇的含量为89%,但当进样量为0.4ul的时候,苯甲醇的转化率为79%,两次进样量的条件下,苯甲醛的选择性基本相同,我想请教一下各位老师,哪个结果较为准确呢,为啥进样量不同,各组分含量变化会如此之大呢?我的色谱条件为:进样器:150℃、柱温:280℃、检测器(FID):280℃。柱子为毛细管柱SE-54,规格为:50m×0.32mm×0.50um。手动进样,国产色谱,采用面积归依法计算各组分含量的。按理说,同样的样品,含量是定的,怎么进氧量不一样时,结果反而还不一样,请各位老师给我指导指导我该怎么做,造成这种问题的原因是什么?是仪器的问题,还是我方法的问题,我该怎么做才能消除这种问题呢?谢谢了
请问怎样消除[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]毛细管柱因液体进样量太大(10μl)而导致的目标物在仪器上的残留污染,谢谢![em0810]
液相色谱进样测定问题。谢谢!新人请教液相色谱岛津10A手动进样问题1.推动进样针将药品注入时正确的推动方式是怎样的?是“快速”“匀速”么?还是无要求2.推针结束后应该立即将进样伐扳(不知称之为“进样伐”是否正确)下,如果这个动作做的很缓慢,换句话说,慢慢的将进样伐下,这样的话会对数据造成怎样的影响?会出现样品流失造成峰面积显著偏小么??(前提已经注入需求量的5倍量的前提下..) 谢谢诸位
[size=18px]在fid检测器里,信号值控制在多少比较合适。我现在进样0.8微升,溶质稀释4倍,而溶剂峰峰高约6万,担心进样量过大没有增大进样量,比较难以进行微量分析。[/size][size=18px]是否有句话说[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]填充柱可接受的单个组分的量是1μg,那这个组分是否包括溶剂呢?[/size]
我在做口服溶液时,发现一个一个奇特的现象,完全相同的条件(仪器型号、检测器、流动相、色谱柱、柱温),自动进样所测得含量就是比手动进样含量高至少2%,最大时达3.4%(采用外标法),安捷伦公司派人来了6次,至今没有解决该问题。