色谱科填空

微生物知识、消毒与灭菌知识填空试题一、填空题（每空2分、共50分）1．微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的 的总称。2．微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类： 、 、 。　3．微生物的形态结构： 、 、 、 、 。　4．微生物的营养包括： 、 、 、 、 。　5．对______ 和______ 进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。6．辐射灭菌法：辐射有两种类型：一种是______ ，如紫外线、红外线、微波；一种是______ ，如可引起被照射物电离的X射线、γ射线。7．过滤除菌的效果与滤膜的______ 、______ 、______ 、______ 等因素有关。　8．高压蒸汽灭菌法：超过一个大气压时，水的沸点高于______ ，反之亦然。此法适用于　______ 和______ 的物品。 有兴趣的跟帖做一下，标准答案以后帖出。建议版主：如答案全对者能否适当给加分！

求助，请在（）内填空，参照17025：1、实验室应配置（）和人员健康保护所需的安全保护设施；2、校准物质的使用要（）并能溯源到国家（国际）基准的标准物质；3、样品的接收，应检查样品标记，（）与合同规定相符。

[align=center]装填空气过滤柱[/align]在需要过滤空气中的二氧化碳和水分时，我们就需要一节空气过滤柱；[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]的淋洗液为保证日间8小时的重复性，确保淋洗液长时间（24小时）的性质不发生较大改变；方法简便，材料易得，效果又好。所以我们把装柱方法分享给大家。准备：5mL注射器/脱脂棉/钠石灰；[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301401435214_6517_5638282_3.jpeg[/img][/align]第一步，撕成两团脱脂棉，拔出注射器推杆，准备好钠石灰；[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301401428001_6511_5638282_3.jpeg[/img][/align]第二步：用推杆将一团脱脂棉推入注射器底部，推紧压实；下部绵团需要厚度1cm以上，并且要压紧压实，避免钠石灰漏下去引入杂质；钠石灰可以购买小颗粒，或进处理压碎成小块，筛去细粉末；准备填充注射器的针管[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301401430953_5975_5638282_3.jpeg[/img][/align]第三步 将钠石灰填充进注射器中，尽量填充均匀，细密，保证良好的吸收二氧化碳和水的效果；并且将另一棉团，塞进注射器尾部，用推杆压紧。此时简易的空气过滤柱就完成了。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301401442354_5153_5638282_3.jpeg[/img][/align]第四步 如图，将注射器插入专用的接口中，拧紧后保证气密性，就能起到保护淋洗液的作用；若使用比较频繁，可增大注射器针管的体积，这样能填充更多的钠石灰；当然这个过滤柱的吸收量是一定的，在使用过程中，随着吸收二氧化碳和水，钠石灰的颜色会慢慢变淡，由粉红色逐渐向粉白色过渡，因此在柱管中由相当一部分钠石灰变色后，就需要装填新的过滤柱。只要用镊子取下上端绵团，倒出旧的钠石灰，然后同样方法进行装填，即可恢复如初；

一般情况下，我们在购买色谱柱时，很少考虑色谱柱孔径方面的信息，其实，色谱柱填料孔径对分析也有些影响，具体如下：*HPLC吸附介质是多孔的颗粒，绝大多数的反应表面于孔内。因此，分析物必须进入孔内才能被吸附和分离*孔径小，含孔率高，则比表面积大，碳载量高，色谱柱分离性能也随之提高*另外，孔径大小必须和分子大小相匹配。一般情况下，分子量小于2000的分析物使用100 Å 或更小；分子量在2000-10000之间的分析物使用100-200 Å的填料；大于10000的包括多肽，蛋白质等需要选用300 Å或更大的孔径。为了达到最佳分离，一般要求孔径直径是分子直径的3倍以上

[color=#444444]有两个问题想咨询下，如下：[/color][color=#444444]现在的色谱柱填料多为有孔的，孔径一般为5 um或者3um。[/color][color=#444444]1. 不知道这个孔是指的填料颗粒表面凹凸不平的凹槽，只是为了增大与样品的接触面积？还是填料颗粒上确实有一个个的小孔，样品分子可以穿透过去？[/color][color=#444444]2. 如果是一个个的小孔，那么样品是从填料颗粒之间通过，还是从小孔中通过？上述两种通过方式是不是存在保留差异？[/color]

填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。对于内径为 4.6mm 的色谱柱，10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时，塔板数最多。 请大家提出新的见解或不同意见，请指正。

请问有谁知道奥泰克色谱柱的填料是什么吗，会不会损坏微膜抑制器呢，谢谢

现在色谱填料粒径分布叫宽，如何如何把色谱填料细小颗粒除去？大家有何高见？

请问大侠们哪个厂家有悟空微球填充色谱柱？玻璃微球、二氧化硅微球都可以。谢谢！

[align=center][b]C18柱的填料对色谱柱的影响[/b][/align]柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响。填料主要的物理性能包括如下：颗粒度、孔径、孔体积、键合相化学、含碳量及烷基化处理。(1)颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小。实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值。如粒径“5μm”并不是柱中填料所有的颗粒直径都是5μm，实际上有一个颗粒分布度。这种分布度对柱反压及柱效有重要作用。一般来说，平均颗粒度越小，颗粒分布度越小，色谱柱效越高，反压亦越高。目前C18柱填料粒径在4～10μm之间。(2)孔径是指填料颗粒间的孔间隙。一般所说的孔径是指填料的平均孔径。球形填料装柱后平均孔径分布比较窄，柱床结构均匀，柱效高，重现性好；无定形填料平均孔径分布较宽，柱床结构不均匀，流动相线性速度不均匀，谱带扩宽。平均孔径的大小对分离大分子化合物有较大的影响，在分离含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应，或产生吸附效应从而影响定量的回收率及准确度。因而在用反相色谱分离诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30 nm)的反相柱填料。孔体积作为硅胶多孔性的参数，在分离分析较大分子化合物时可作参考，选用较大孔体积的反相柱填料。(3)化学键合相填料在高效液相色谱法中占有极重要的地位。它可以键合极性较大的有机基团，采用极性较小的溶剂作流动相。亦可键合极性较小的有机基团，选用极性较大的溶剂作流动相。C18色谱柱是以硅烷化键合型(Si-O-Si-C)存在的，这类键合反应目前应用最为普遍。(4)碳含量即填料中的含碳量。传统的测量技术是将填料加热到碳氢键断裂，然后通过测定损失的重量或形成的二氧化碳来计算碳含量。可以通过增加碳键的长度或增加键合密度来增加碳含量。碳含量增加，柱子的保留值增加。键合相的色谱行为与键合密度有关，也与硅胶的密度及填料的表面积有关，填料的密度越高，填柱所需的硅胶量越多，柱子的含碳量也越高。如果用2种不同密度相同碳含量的填料填充柱子，其保留行为将明显不同。因此，单独以碳含量来预测色谱行为是不够的。(5)C18硅烷化试剂是一个大于2 nm大分子，因此会与已键合在相邻的硅醇基上的C18硅烷化试剂产生严重的立体位阻。其结果导致在硅胶表面有大量的残留硅醇基没有与硅烷化试剂反应，这些极性的硅醇基在一定色谱条件下会与碱性化合物相互作用引起峰形拖尾，从而可影响定量分析结果。这些问题在一定程度上可以通过烷基化处理加以克服。烷基化处理是在键合相上完成的独立反应，以减少在硅胶表面的硅醇基。烷基化处理采用小分子(如三甲硅烷)的试剂，其空间位阻远小于C18基团。大多数固定相仅有30%可覆盖的键合位置。据报道，通过某些极活跃的化学试剂及特殊的反应条件，最高的覆盖量可达50%。很好地了解硅胶键合相的物理特性将有助于在高效液相色谱的反应中选择合适的色谱柱。表面上看C18柱虽然化学官能团相同，而实际上不同品牌的C18柱性能可能有很大差别，从而产生不同的分离结果。本文节选于微信公众号《化工仪器网》，对部分内容进行了修改

各种品牌的液相色谱填料孔径都有差别，有的60A，有的100A,有的120A,有的180A,有的300A,不同的填料孔径在分析中有什么区别吗》？

“核壳型填料液相色谱柱以其尖锐的峰型，快速的分析速度和低使用压力受到广大高速高通量液相分析用户的喜爱。”你知道什么叫核壳型填料吗？

一、填空题1、气相色谱柱的老化温度要高于分析时最高柱温 ℃，并低于 的最高使用温度，老化时，色谱柱要与 断开。2、气相色谱法分析非极性组分时应首先选用 固定液，组分基本按 顺序出峰，如为烃和非烃混合物，同沸点的组分中 大的组分先流出色谱柱。3、气相色谱分析中等极性组分首先选用 固定液，组分基本按 顺序流出色谱柱。4、一般说，沸点差别越小、极性越相近的组分其保留值的差别就 ，而保留值差别最小的一对组分就是 物质对。5、气相色谱法所测组分和固定液分子间的氢键力实际上也是一种 力，氢键力在气液色谱中占有 地位。

[size=3][font=宋体] [color=#0162f4][b]庆5.1—答题送积分[/b][/color][color=#0162f4][u]活动规则：[/u]1.只要您参与，就会有积分奖励！（五一期间回帖会有更多积分鼓励！）2.没有唯一答案，只有最佳答案，只要意思正确就能加分！尤其是适用于问答题！[u]奖励措施：[/u]1.按照各帖说明的分数给予加分，答案有扩展（如问答题等）或纠错者，双倍积分奖励2.活动结束统计[u]总得分前3名[/u]的板油，将再次给予10个积分、8个积分、5个积分的奖励！[u]公布答案：[/u]2010年5月20日前公布答案，欢迎大家参与！[/color][u][size=4]活动内容1：[/size][/u][b]填空：[color=#f10b00]【每题2分，共计10分】[/color][/b][/font][/size][size=3]1.GLP[/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3]GMP[/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3]GSP[/size][size=3][font=宋体]、[/font][/size][size=3]GCP[/size][size=3][font=宋体]的含义分别是[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]。[/font][/size][size=3]2.[/size][size=3][font=宋体]药品检验程序一般分为[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]，并写出[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]和[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]。[/font][/size][size=3]3.[/size][size=3][font=宋体]药品质量标准的主要内容包括[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]和[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]。[/font][/size][size=3]4.[/size][size=3][font=宋体]我国现行的法定药品质量标准包括[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]和[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]。[/font][/size][size=3]5.[/size][size=3][font=宋体]中国药典的内容有[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]、[/font][/size][u][size=3] [/size][/u][size=3][font=宋体]。[u]相关链接：[/u][size=2]1.【庆5.1—答题送积分】考考你的基础知识2—问答题[/size][url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100430/2529676/[/url][size=2]2.【庆5.1—答题送积分】考考你的基础知识3—单选[/size][url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100430/2529684/[/url][size=2]3.【庆5.1—答题送积分】考考你的基础知识4—多项选择[url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100430/2529688/[/url][/size][/font][/size]

近几年，液相色谱仪器在硬件方面最大了突破就是推出了UHPLC或UPLC系统;但在色谱柱填料及形式方面也还是有一些新的技术，我收集了相关资料，简单回顾一下此方面相关的新技术。　　一、色谱柱填料新技术　　1、亚2微米填料　　首当其冲就是很热门的亚2微米填料。根据色谱速率理论，粒径越小，柱效越高，而且当粒径小到亚2微米左右时，线速度的提高，其分离度就不再降低，而亚2微米填料的优势也正在与此。这个理论很早就有，但是为什么UPLC或UHPLC直到2004年才出现呢?原因主要是粒径减小，柱压的急剧升高，因此亚2微米填料对系统的耐压性能要求很高，长久以来，材料及工艺不能满足亚2微米填料对系统的要求。　　随着材料及技术的进步，2004年沃特世推出了首款商品化地UPLC系统及配套的亚2微米填料的色谱柱。如今已有沃特世、安捷伦、赛默飞（戴安）、岛津、日立、珀金埃尔默等10余家公司推出UHPLC系统;国内上海伍丰也推出了国内首台UHPLC系统。但在填料方面，相比于常规的液相色谱填料，能够生产亚2微米色谱柱的公司还不是很多，色谱柱的种类也偏少。但毫无疑问，UPLC或UHPLC、亚2微米填料是液相色谱发展的主流。沃特世公司首席科学官Thomas E.Wheat先生认为，“未来10-15年，UPLC有可能完全取代HPLC。”　　2、核壳型填料　　最近，多家公司推出了一种新型液相色谱填料——核壳型填料。这种填料的优势在于，其可以缩短分析时间，提高柱效，但是对系统压力的增加却不是很多。换句话说，可以部分实现亚2微米填料的优势，但是由于对系统耐压要求不高，其可以在常规的HPLC上运行，可视为UPLC/UHPLC好的替代品。　　核壳型填料就是在坚实的硅胶核心上生成一个均匀的多孔外壳。由于核心硅球是实心的，这样样品在通过色谱柱时，只需要花费少量的时间便能扩散出硅球表面的颗粒孔中，在较短时间完成扩散，更快地传质，因此分析速度及柱效都较原来普通的色谱柱有很大提高。目前，生产和供应核壳型填料的厂家有安捷伦、菲罗门、Sigma-Aldriich等。　　3、整体柱(monolithic column)　　整体住也是近年来液相色谱柱填料研究的又一大方向。整体柱,又称为棒状柱、连续床层、无术塞术，是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相。与常规装填的液相色谱柱相比具有更好的多孔性和渗透性，以及具有灌注色谱的特点，即色谱柱中既有流动相的流通孔又有便于溶质进行传质的中孔(几十个纳米)，目前多应用于对生物大分子进行快速分离分析，应用还具有一定的局限性。目前，商品化的整体柱产品也不是很多，主要还处于科研阶段。在售的整体柱比较有名的是默克公司的ChromolithTM。　　二、色谱柱新形式　　1、色谱饼　　色谱饼这一说法源自西北大学现代分离科学研究所、现代分离科学陕西省重点实验室耿信笃教授课题组，其与普通的色谱柱最大区别在于，其柱直径远远大于柱长，因而呈现饼的形状，故称为色谱饼。　　此种形式的改变带来的好处是，色谱柱的平衡时间、进样、洗脱及色谱柱的平衡时间都显著地缩短，从而实现了快速。当然使用色谱饼的前提是，分离度不能有很大的损失。目前，这一形式的色谱柱在分析蛋白方面有很好地效果。　　2、固定相优化液相色谱(Phase Optinized Liquid Chromatography POPLC)　　固定相优化色谱产品来自于德国BISCHOFF公司，上海通微是该产品在中国的代理。POPLC改变了我们原来创建分析方法的传统思路，不从改变流动相或更换色谱柱来改善分析效果的角度出发，而是从“优化固定相”的角度出发来摸索分析方法。据悉，目前商品化的固定相种类非常多，如何从中选出适合的固定相是头疼的问题。研发者希望通过固定相的组合能帮助方法开发人员更快更好地找到适合的固定相。　　德国BISCHOFF公司开发的POPLC系统由迷你柱管、填装不同填料的可替换短柱芯和分析软件三部分组成。在实验中，先选择几根装有不同填料的短柱芯作为一个实验组，通过单根柱子先做基础实验，然后用配套软件计算可能的柱连接方式(即将各种固定相串联)，再预测分离效果，最后做验证实验。实验表明，这种方式可以有效缩短分离时间，相应提高检测灵敏度。

如果填料颗粒大小减半，则理论塔板数加倍（假设柱长不变）。如果填料颗粒大小减半，则柱压增加为原来的四倍。 如果柱长加倍，则理论塔板数加倍。如果柱长加倍，则分析时间加倍。随着柱长增加，柱压也线性地增加。 以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例： 一个装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱可生成 6000 块理论塔板，这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。将颗粒大小由 10um 减小到 5um，柱长仍为 200mm，则可生成 12000 块理论塔板。然而，这个色谱柱可生成相当于原来四倍的柱压。通常情况下不需要生成 12000 块塔板，因此柱长可减半至 100mm，结果生成 6000 块塔板，同时分析时间也缩短一半；柱压仅比最初装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱高两倍。请大家提出新的见解或不同意见，请指正。

3um的色谱柱填料之间的孔径有多大？建议使用多少孔径的滤膜？

没看过之前米的天空授课，不知道有没有什么新意，总是让人想起麦考利夫。

1、 粒径一般认为，基质的颗粒形状和大小，主要影响流体动力学行为，影响分离效率。填料的粒径决定了填充液相色谱柱的柱效。从VanDeemter方程可知，在优化的流动相线速度下，最佳理论塔板高度为： H min=2.48 dp根据这一公式，可以计算出不同力度填料填装的柱子可获得的最大理论塔板数。例如，3um粒子可获得13.4万理论塔板/米，5um粒子可获得8万理论塔板/米。但是，小粒子填料容易造成柱压高、易堵塞、寿命较短。为保证一定的流动相线速度就得提高输液压力，虽然，大多数高效液相色谱仪的压力上限可允许达到42Mpa,但因长时间工作在高压状态下肯定会缩短输液泵及进样阀的使用寿命。为此，小粒径的柱子一般较短。2、 填料形状现在，10um以下的分析型柱多使用球形填料，而制备型的柱子则多选用无定形填料，因为无定形填料较为便宜且大粒度填料的粒间孔较大，所填装的柱子并不需太高的压力便能很好的运行。3、 孔径及孔径分布填料粒子的孔径及孔径分布，主要从三个方面影响反相色谱的色谱行为。首先，是孔径影响了粒子必表面积的大小，从而对配基的数量，即碳含量造成影响，它涉及到样品的负载量。其次，孔径的大小，从空间上必然对溶质的分子量大小有所限制。此外，孔的不均一性，及孔径分布，也会带来尺寸排阻效应。4、 比表面积 填料的多孔性，极大地增加其比表面积。对于无孔的小球，其比表面积是很小的。但是一旦具多孔性，则多孔微球的比表面积为球 外比表面积与孔内表面积之和。比表面积不同，其键合配基的量亦有所不同。所以，即使是以相同的反应条件制备的同样配基的反 相填料，也会有不同的保留行为。特定溶质的保留值随比表面积的增大而减少。 5、 基质硅胶的纯度硅胶基质上残存的硅羟基和杂质金属离子，共同造成了以硅胶为基质的反相填料的“次级保留行为”。较多的杂质金属离子，会使具有螯合作用的样品被吸附在柱子上。在生物医药体系的分离、分析中，经常会遇到强极性的溶质，他们在制造不良的反相色谱柱中，经常会因强烈的非特异性吸附而难以获得良好分离。究其原因，除孔径大小的因素外，最大的可能是硅胶表面的覆盖率低和基质含金属离子太多所致。

色谱柱填料的粒径越小，是不是孔径也越小呢？

新的色谱科20%OV-101涂布Cormsorb WHP填充柱，我要接TCD检测器，请问填充柱还需要老化么？老化方法是怎样的？请各位高手指点，谢谢。[em61]

沃特世公司隆重推出CORTECS 2.7 μm硅胶实心核颗粒色谱柱产品，该系列产品为HPLC色谱柱性能树立了全新的标杆。与此同时，新产品也扩充了CORTECS色谱柱家族，沃特世曾于2013年推出了首个1.6 μm实心核颗粒系列色谱柱。沃特世在刚刚结束的HPLC 2014大会上展出了最新的色谱柱产品。沃特世公司推出实心核颗粒色谱柱，难道原来的填料颗粒是空心的？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gif

[color=#444444]过小颗粒填充入色谱柱会堵塞管路，那么该如何去除小于2微米的颗粒呢？[/color]

该贴已结,欢迎大家继续讨论作对80%以上的给分:1. 空心阴极灯是一种( )光源，它的发射光源具有( )特点。当灯电流升高时，由于( )的影响，导致谱线轮廓( )，测量灵敏度( )，工作曲线( )，灯寿命( )。2. 在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]中，干扰效应大致上有( )( )( )( )( )。3. 试样在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]过程中，除离解反应外，可能还伴随着其它一系列反应，在这些反应中较为重要的是( )，( )，( )反应。4. 在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法中，当吸收为1%时，其吸光度A为( )。5. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]分析方法中，目前应用比较广泛的主要方法有( )，( )。6. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]法测定NaCl中微量K时，用纯KCl配制标准系列制作工作曲线，经多次测量结果( ) 。其原因是 ( )，改正办法是( )。 7. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]线的变宽是由( ),( ),( ),( )四个大方面引起. 8. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度分析中，是利用处于( )的待测原子蒸气，对从光源辐射的( )的吸收来进行分析的。

手上有张英语试卷，有几题不会，对我较重要，不敢轻下判断，请各位费心替我看看。解决一题我再出下一题吧，以免我搞不清楚。题号:4 题型:单选题（请在以下几个选项中选择唯一正确答案） 本题分数:5内容:____ you like to go with us to the movies tonight?选项:a、Couldb、Wouldc、Cand、Will

高效液相色谱(HPLC)不仅是一种有效的分析分离手段,也是一种重要的高效制备分离技术。色谱柱是HPLC系统的核心,不同性能的填料是HPLC广泛应用的基础。液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。　　正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。　　反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。　　常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。1960年代末科克兰（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯（Horvath）、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。　　1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法（HPLC）正式建立。在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在医`学教育网搜集整理有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。　　1960年代前，使用的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相，这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳，实现了高速传质，为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基础。随着填料粒径的降低，更高的柱效也得以实现。　　1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵，但后者的脉冲信号很大，难以满足高效液相色谱的要求。1970年代，往复式双柱塞恒流泵，解决了这一问题。1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶医`学教育网搜集整理，平均粒径只有7μm，具有极好的柱效，并逐渐取代了无定形微粒硅胶。之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高，多次使用成为可能。1970年后，适合分离生物大分子的填料又成为研究的热点。1980年后，改善分离的选择性成为色谱工作者的主要问题，因此改变流动相的组成提高选择性是关键。如今利用基于亚2μm填料的超高压液相色谱技术、基于核-壳型填料的快速分离技术、基于杂化硅胶填料的高温液相色谱技术等。硅胶经表面化学键合、聚合物包覆等有机改性可制得先进的大分子限进填料、温敏性填料、手性填料等,大大扩展了HPLC的应用范围，随着科学技术的进步填料的发展朝着多样性多功能的综合型方向发展。