色谱科小柱

1、 背景按技术包分析方法分析A项目时，出现下图情况：基线噪音很大，基线无法重合，空白和样均不平行。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011430586327_1111_3433829_3.jpeg[/img]2、 异常调查排查了色谱柱、稀释剂、样品等因素后发现此现象依然存在，经过分析发现此项目使用到了捕集小柱。仔细观察捕集小柱，发现捕集小柱的方向装反了。于是将捕集小柱的方向调整过来后正常，如图[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011430589962_1272_3433829_3.jpeg[/img]3、 异常分析捕集小柱其实和色谱柱基本上是一致的，它是靠死吸附来吸附流动相的杂质。理论上使用是没有正反之分都可以用的。但是当吸附一段时间后大部分的脏东西首先会在柱前端聚集。如果我们使用捕集小柱用反相当于人为把脏东西冲到系统中了，从而导致基线噪音大。因此捕集小柱最好固定一个方向使用，不要更换方向（最好统一规定按照箭头的方向使用避免混淆不清楚）。其次通过这个案例可以尝试反冲捕集小柱从而起到净化的作用延长捕集小柱的寿命。4、 捕集小柱知识拓展鬼峰来源：理论上讲，在HPLC系统中的任何一个节点均有可能引入鬼峰，依据鬼峰出现的频率，其主要来源于流动相部分，样品制备以及自动进样器部分，仪器流路及检测器部分等，如图所示。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011430591554_5751_3433829_3.png[/img]应对鬼峰的基本原则就是找到鬼峰的来源，更换流动相、更换添加剂或对仪器污染部分进行清洗。此外，由于大部分的鬼峰来源与流动相及色谱柱之前部分流路，如有机相中污染物，水相中污染物，缓冲盐，流动相瓶和混合过程产生等。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]流路中安装捕集柱，可消除大部分的鬼峰干扰。鬼峰捕集柱：它是一种用来消除或者减小由于有机相中污染物、水相中污染物、缓冲盐、流动相瓶、色谱柱混合过程产生的鬼峰的柱子。达到降低不明因素对分析方法的干扰，提高分析结果的准确性的目的。捕集柱可视为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的一个净化部件，既有在线过滤器过滤固体颗粒物的能力，又能去除进样器前有机污染物，对仪器和色谱柱是更好的保护，同时让色谱图更加完美[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209011430593224_254_3433829_3.png[/img]捕集柱使用注意事项1. 捕集柱出厂前保存在甲醇中，如使用磷酸盐等盐类体系，请在使用前用含水流动相平衡过渡；2. 若流动相中添加了离子对试剂，鬼峰捕集柱可能会对其产生吸附，从而削弱离子对试剂的作用，影响目标物的保留和峰形；3. 当将质谱作为检测器时，该产品可能会有溶出引起基线噪声。4. 捕集柱对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]混合器前出现的鬼峰，有良好的消除能力，对样品残留和进样器污染等无效。5. 如流动相中含有缓冲盐，请在使用前后，用10%有机相水溶液（如： 10%甲醇水溶液，10%乙腊水溶液）进行过渡冲洗，避免盐析出，导致填料堵塞。更多精彩内容可关注“研发分析之路”

安谱SPE小柱使用体验原创征文表格安谱Poly-Sery HLB 与传统C18小柱对卡马西平和咖啡因的回收率比较 实验目的（实验背景及目的）： 药物是一种可以影响人体生理过程、生化过程以及病理过程的一些物质，它在人类生活中必不可少，给人类带来了很多益处，用来预防疾病、诊断疾病、治疗疾病。但在给人们带来益处的同时也伴随着水环境风险和生态安全问题，随着药物的大量使用、人与动物的排泄、污水厂对药物处理的局限性，使得药物不断进入城市河流及海洋湖泊中。药物在水环境中的的含量比较低，一般为ng/L~ug/L水平，低于仪器分析要求的检出限，同时由于水中的污染物成份复杂，从样品中分离纯化、富集目标物就显得尤为关键。而检测SPE小柱的性能可通过回收率体现出来。实验方法（前处理，标准品配置，色谱条件等）：标准品配制：标准储备液的配制：配制1 mg/mL的标准物质溶液于试剂瓶中，放于4℃冰箱储存，都用甲醇溶解。工作液：用甲醇配制单个标准品所需浓度进行化合物优化。用储备液配制所需浓度混合标准溶液。储存方式都为4℃冰箱。预处理方法：见图片色谱条件：流动相为B相甲醇和C相0.1%（v：v）的甲酸水溶液。为有效地分离目标物并得到较好峰型，做了多种梯度淋洗程序的对比，最终采用11 min的梯度淋洗程序。柱温30℃，进样量10 μL，流速0.2 mL/min。 SPE小柱信息1： 货号SBAA- 或SBEQ-CA3185描述Poly-Sery HLB为水浸润型聚合物SPE固相萃取小柱。Poly-Sery HLB吸附剂的技术参数为平均粒径：60 μm，平均孔径：180 A，比表面积：710 m2/g规格200 mg，6 mL/30 pcsSPE小柱信息2： 货号其他品牌1描述 规格 SPE小柱信息3： 货号其他品牌2描述 规格 目标化合物 咖啡因（Caffeine）和卡马西平(Carbamazepine)样品基质 河水样品基质中主要干扰物及其他成分 河水中的其他与两个目标物结构相似的药品以及河水中的污染物质及金属离子等分析方法（参考标准） SPE+UHPLC-HESI/MS/MS 具体操作步骤 溶剂 体积mL 流速 备注 活化 甲醇 5×3 5 mL/min 平衡 超纯水 5×3 5 mL/min 上样 水样 500 10 mL/min 淋洗 超纯水 5×3 5 mL/min 洗脱 甲醇：二氯甲烷：丙酮（40:40:20） 3×2 2 mL/min 之后 氮吹至近干，定容到1 mL,加入内标物其它 进样前样品需经过0.22 um的针式过滤头过滤检测仪器（GC/GC-MS/HPLC/LC-MS） HPLC/LC-MS色谱条件 色谱柱：Hypersil GOLD-C18色谱柱 其它 GC（升温程序，载气等）/LC(柱温，流动相条件等) 柱温为30℃，流动相为B相甲醇和C相0.1%（v：v）的甲酸水溶液 检测器（条件） 喷雾电压:3 200V；蒸汽压温度:300℃；鞘气压:30 arb；辅气压:5 arb；毛细管温度:30

合成着色剂是一个食品实验室常常开展的检测项目，目前的检测方法也比较的成熟，但是也有仪器耗时长，分离不理想的情况。尤其是对于硬件配置不是很多的实验室而言，如果能在仪器跑样的时间节约一半的时间势必会极大的提高仪器的利用效率。出于效率改进，我们在色谱柱上开始动动想法，首先来分享一张常规C18色谱柱的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604280925_591716_2486941_3.jpg图中为普通的C18 25cm*4.6mm 5μm 色谱柱图，流动相为甲醇-乙酸铵体系可以看到分离的难点为柠檬黄与新红之间resolution是不足1.5，容易造成误判，分析时间为25min为了解决分离度与与分析时间的问题，我们尝试用小柱进行方法开发在此感谢welch 月旭提供的免费试用，先看看色谱柱信息：月旭LP-C18 2.1*50mm core-shell 2.7μ welch PN:965-04010首先我们要解决几个问题：a.柱压的问题：我们都知道一般粒径越细的柱子柱压会很高，液相系统能不能耐受，我现在安捷伦1200型四元低压系统液相系统，是达不到UPLC的要求，月旭LP-C18 2.1*50mm core-shell 2.7μ 这款柱子在0.4mL/min 、柱温40、甲醇流动相体系压力表现为115bar ，50%左右甲醇极大压力135，乙腈系统压力就更不用说了，普通液相都能耐受。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604280946_591717_2486941_3.jpgb.死体积的问题：如果你是UPLC系统就忽略此条，对于四元低压系统，需要在泵后到柱前换上细内径的管、尤其注意预混器死体积的影响c.进样体积与检出限之间的取舍：大体积进样可能色谱柱过载，产生严重的溶剂效应，配制样品的溶液尽量与起始流动相一致，并且要降低进样体积，不必过于担心检测限，小柱的峰宽普遍比较小，控制好死体积的影响都会得到不错的峰高d.出峰过快的问题：避免在3倍死时间内出峰，杂峰干扰能让你崩溃好了，现在看看5cm小柱用普通四元低压系统的优化结果：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604281012_591726_2486941_3.png特点就是：10分钟结束战斗！新红与柠檬黄完全的基线分离（新红标准浓度配制较低），死时间约0.4min梯度条件如图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604281018_591728_2486941_3.png柱温：低柱温对于弱保留物分析有利，为了保证分离度改为25℃流动相：柠檬黄、新红对于有机比例很敏感，乙腈洗脱强度太高不利于微调，所以只能用甲醇体系，起始有机相比例控制好，后期给予4min以上的再平衡时间很重要检测波长：亮蓝采用变换检测波长为595nm极大的降低了检出限值进样量：进样体积约3μL左右峰高等同于25cm*4.6mm 5μm 柱进样10μL总结特点：节约仪器时间、节约流动相、改善了分离度，本人用的是四元低压系统，死体积溶剂延迟等问题还是会增加梯度调节难度和增加样品扩散，相信UPLC或拌UPLC的二元高压会有更出色的表现

为促进北京地区色谱技术的应用与交流，了解色谱技术的发展趋势，“2014年北京色谱年会”定于2014年12月12日在北京四川龙爪树宾馆召开。本届色谱年会的主题是“色谱技术在环境和食品安全分析中的应用”，年会上张玉奎院士、江桂斌院士等色谱相关研究领域著名的专家、学者做了大会报告，介绍色谱技术的最新成果与应用进展。会议共吸引了各个行业约400多位色谱工作者到场倾听、交流。 默克密理博作为厂商参加了此次会议，会议上展示了色谱柱、薄层板、色谱流动相、样品前处理小柱等色谱相关的产品，并与参会者就色谱技术及前处理方法做了深入交流，特别是Chromolith整体化色谱柱、ZIC-HILIC亲水作用色谱柱、EXtrelut® NT液液萃取小柱更是受到与会者的特别关注，普遍表示希望有机会能够体验一下或计划尝试一下。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412231148_528477_1342_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412231149_528478_1342_3.png

用安谱气相前处理SPE小柱的平行性实验，我觉得还是不错的，各位大侠给个说法吧！！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211640_426432_1612314_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211726_426435_1612314_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211726_426436_1612314_3.jpg以上是前处理，下面是气相色谱的图谱和数据，第一组平行性实验：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211728_426437_1612314_3.bmphttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211729_426438_1612314_3.bmp第二组平行性试验：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211730_426439_1612314_3.bmphttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302211730_426440_1612314_3.bmp忙活了几天，终于有组基本数据，还没有还得及分析，就与你们分享了，做的不好敬请各位批评指正哟！！！这是根据NY/T761-2008的检测方法，步骤是：准确称取25.0g样品放入250ml的广口试剂瓶中，加入50.0 ml乙腈，在均质机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5～7g氯化钠的100 ml具塞量筒中，收集滤液40～50 ml，盖上盖子，剧烈震荡1min,在室温下静止30min,使乙腈和水相分层。从100 ml具塞量筒中吸取10.00ml上层乙腈溶液，放入50ml烧杯中，将烧杯放在80±1℃水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气，蒸发近干，加入2.0ml正己烷，盖上铝箔待检测。将SPE小柱依次用5.0ml丙酮+正己烷（10+90）、5.0ml正己烷预淋条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入样品溶液，用50ml刻度离心管接受洗脱液，用5ml丙酮+正己烷（10+90）涮洗烧杯后淋洗弗罗里析柱，并重复一次。将盛有淋洗液的小烧杯置于氮吹仪上，在水浴50±1℃温度条件下，氮吹蒸发至近干，用正已烷准确定容至5.0ml，在旋涡混合器上混匀，待测。样品一式两份做平行样。

实验目的（实验背景及目的）：国家标准GB2760-2011版GB2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定姜黄（INS100ii，turmeric）和姜黄素（INS100i，curcumin）可作为食用色素在人造黄油、碳酸饮料、胶基糖果、巧克力制品、冷冻饮品等食品中使用，分别规定了使用量。国内目前尚未制定食品中姜黄素的HPLC和LCMSMS检测方法标准，因此建立一种快速、简便、可供确认用的检测方法十分必要。实验方法： 固相萃取柱的选择是关系到固相萃取净化步骤回收率的重要因素，它直接决定着分析组分能否定量地吸附、保留在固相萃取柱上和被一定量的洗脱溶剂洗脱。固定相的选择主要依据目标化合物的性质和样品基体（即样品的溶剂）性质。本实验对比了WatersSep-Pak C18、Agilent-ODS-C18和Anpelclean PA 聚酰胺小柱对姜黄素的净化效果，最终选择国产AnpelcleanPA 聚酰胺固相萃取柱小柱（60 mg，3 mL）。聚酰胺固定相广泛适用于各类含色素样品的净化。利用新的聚酰胺化学技术，制成与水和大多数有机溶剂，及pH0-pH14的酸性和碱性溶剂都兼容的小柱。由于聚酰胺既有亲水性又有亲脂性，对极性和非极性化合物都可以保留。与硅胶类填料不同的是，聚酰胺小柱如果在处理时不慎干涸，也能得到同样的结果。SPE小柱信息1： 货号SBAA- 1400603描述Anpelclean PA 规格60mg, 3ml聚酰胺固相萃取柱使用前，依次用3 mL 甲醇、3 mL 水活化。将上清提取液2.5 mL全部过柱，过滤速度不宜过快。上样完毕后，以2 mL 5 %甲醇水（5.9）淋洗固相萃取柱,淋洗后抽干固相萃取柱。用1.0 mL的 2 %氨化甲醇（5.5）洗脱并收集，洗脱液需尽快转移到氮吹仪，在40℃用氮气吹干后，用1.00 mL甲醇（5.1）溶解定容，过0.45 mm亲水聚四氟乙烯（PTFE）针式滤膜，供仪器测定。本标准HPLC法流动相体系采用“0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈”体系，等度洗脱。姜黄素用甲醇配制成混合标准储备溶液，校正后母液浓度大致为200μg/mL，在室温或低温避光条件下，有效期至少可达6个月。以420 nm作为UV-vis或DAD检测器的检测波长；采用常规C18柱（250×4.6mm,5μm）；流速：1.00 mL/min；进样量：15μL；柱温：25℃。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041901_559116_1608728_3.png 1.果冻定量限添加10 mg/kg的HPLC色谱图

安谱推出新外型的SPE小柱连接件，可用于1,3,6mL小柱，设计更人性化，使用更方便，欢迎大家垂询：021-54890099http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212311921_417764_1931372_3.jpg