色谱扣除法

[align=center][font=宋体]赛默飞色谱软件[/font][font=宋体]变色龙[/font][font=宋体]自动扣除空白样品的浓度[/font][/align][font=宋体] [/font][font=宋体]分析样品时，很多时候因为分析物以及稀释溶剂、流动相、添加剂等导致空白也有一定的数值，为了让检验检测结果更加准确。我们在检测大部分样品的时候都需要制作一个空白样品，检测完毕后，每一个样品的检测浓度都要减去空白的检测浓度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]很多时候每一个样品的浓度都需要我们手动记录，然后手动减去空白浓度，再代入国标公式进行计算。在赛默飞色谱软件变色龙中有这么一个功能，[/font][font=宋体]“色谱图扣除”可以自动减去空白样品的浓度值。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]“色谱图扣除”功能是在进样评估中是否应考虑[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]扣除[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]空白运行进样或任何其它进样的吸收值。如果选择了进样，右侧的框会显示色谱图。选择对应的选项。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在赛默飞用户手册里面告诉我们有[/font][font=宋体]“色谱图扣除”，分别有“不扣除”、“扣除固定进样”、“扣除固定进样”三个选项。[/font][/font][img=,690,283]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310170925492503_3567_5979722_3.png!w690x283.jpg[/img][font=宋体][font=宋体]勾选[/font][font=宋体]“不扣除”就是不启用这个功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]勾选[/font][font=宋体]“[font=宋体]扣除对应序列中最近的空白进样[/font]”，使用当前序列中完成的空白进样。这个时候要注意，自己的样品序列中要有空白类型的样品。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]勾选[/font][font=宋体]“扣除固定进样”，使用特定的空白进样进行校正。单击浏览选择进样当扣除空白进样时，从当前的色谱图逐点扣除空白进样的色谱图。如果当前进样是交正标准品进样，则将两个色谱图之间的差值用于校正。[/font][/font]但是在我的软件里面只有两个选项，分别是不扣除、扣除对应序列中最近的空白进样[font=宋体][img=,690,200]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310170923518297_2890_5979722_3.png!w690x200.jpg[/img][/font][font=宋体]大家可以选择适合自己的方法区扣除空白样品的数值。[/font]

[align=center]小议质谱图扣除[/align]扣除质谱图操作方法：在色谱图中要从其中扣除谱图的扫描处双击鼠标右键。现在双击第二个扫描。然后选择[b]谱图/扣除[/b]。对于背景较大的色谱图，可以在一定程度上减少或消除背景的影响。例如m/z 32,28,44等离子的扣除。对于未完全分离的合峰，合理的扣除质谱图能够得道可能较为纯净的质谱图，以利于检索，提供匹配度。例子1 [img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302231222682_8708_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图1. 4.694min色谱图和质谱图***********************************************在图1中4.694min的峰峰顶检索是乙酸乙酯。如图2.[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302233155265_2954_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图 2. 4.694min顶点质谱图和检索结果*******************************************从图2看出，检索的乙酸乙酯匹配度很高，确认无疑。但还出现一下非乙酸乙酯的离子。例如m/z99,103,117,131,145。说明有可能含有别的成分或本底干扰等。进一步点击峰前后位置，分析后面部分的m/z73,103,117离子变大。4.721min的质谱图如下：[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302233448455_8321_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图 3. 4.721min的质谱图4.721min检索认为乙酸乙酯，但匹配度小了，因为有干扰。然后选取峰前面和4.721min 相当高度的位置4.667min进行扣除得到结果是乙缩醛，匹配度83。如图4：[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302235046764_4110_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图4. 扣除后的检索结果********************************************************把这个峰提取两种化合物的主要[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图如下。可以看到峰尾巴处稍有不同。[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302235311761_7171_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图 5. 提取两种化合物的主要[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图******************************************************************如果用amdis处理这种情况更容易些。例 2[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302235544382_9938_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图6. 28.089min峰的顶部和前面28.089min的质谱图********************************************************同例1，顶部检索为ethyl benzoate，但出现一个无关离子m/z60。28.089min的质谱图就不一样了。扣除峰后面的28.181min得到检索结果如下，是异戊酸。扣除后检索匹配度提高了。[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808302236153922_6782_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图 7.**************************************************小结：对于未分离峰，质谱扣除后能提高检索匹配度。但必须选择合理合适的扣除点。可以利用提取[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图来帮助选择合适的扣除位置。快捷方式可能是选择其它软件来鉴别合峰，例如Amdis等解卷积或拆分软件。

[align=center]小议背景扣除（BSB）[/align][align=center] [/align]本文举例介绍背景扣除（BSB）方法，并介绍扣除某一峰或多个峰的方法。1. 背景扣除操作方法（安捷伦工作站为例）：打开所要处理的色谱图（TIC），观察整个基线的背景（本底）情况，在基线的适当的空白处（无任何峰或信号并能体现色谱图本底的地方），点击得到质谱图。在文件（File）菜单下面，点击”扣除背景”Subtract Background(BSB)，就得到扣除上面所选背景的BSB质谱图。同时在色谱总离子窗口２会由原来的“TIC:***.d\Data.MS”变成“TIC:***.d\Data.MS”。新的BSB图谱要干净一些，因为已经扣除了一定量的本底干扰。特别是对于小的色谱峰的检索更有利。可以多次选择不同的基线位置来多（n）次扣背景，在色谱总离子窗口２会由原来的“TIC: ***.d\Data.MS”变成“TIC: ***.d\Data.MS”。注：BSB是整个TIC范围来扣除本底（选择一个本底），subtraction是对一个峰（点）做本底扣除。相减后会在下面出现已经相减的质谱图（质谱图窗口1）。BSB不用在每个峰检索时间都做基线本底影响的扣除，一次操作即可。2. 例1，空气本底高的处理基线背景一般有漏气或气源问题带来的m/z28, 32, 44等离子干扰 有氦气含有较多的氩气污染的情况m/z40 有柱子流失或隔垫流失带来的硅氧烷离子，有样品污染的残留带来的污染等。[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808311359418144_3579_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图1. 漏气的本底***************************************************图1的例子，基线比较平整，但点击基线部分（例如15min）m/z32的比较高，有少量m/z40,44等离子。可以选择基线平直的地方来扣背景。这个例子比较简单，基线本底是一样的，基线平直，容易处理。对于大峰，含量高的组分，扣除背景对于检索影响很小，作用不大。但对于小峰进行背景扣除会的提高检索效果，匹配度增加。[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808311400554464_8327_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图2. 扣除背景前后检索匹配度对比*****************************************************从图2看出23.11min的小峰的匹配度从直接检索的59变成80。24.6min的匹配度从68上升为86。原始质谱图本底干扰很大，质谱图也不好看。********************************************3. 例2 柱流失等本底的处理[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808311403310214_5252_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图3. 柱流失等本底******************************************从上面图谱看这个图谱的本底有柱流失m/z207和其它一些离子的干扰，可以采用多次扣除背景的方法可能会好些。4. 扣除某一峰或多个峰（作假？别学）扣除某一峰的质谱图（不是本底），操作和背景扣除相似，只是用峰代替基线背景。[img=,690,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808311403524927_7156_1615838_3.jpg!w690x514.jpg[/img]图4. 原创色谱图，消去一个峰和4个峰的色谱图对照图*******************************************************从图4 看到用这种方法一些色谱峰被消去了。但其它峰的某些离子也会被减少或消去，检索的话就会可能某些失真。只是表面是改变了原来的色谱图的样子罢了。也许可能用于某些情况下作图，例如把溶剂峰或不需要的峰抹去的情况下，但最好还是保留原来实际的图谱为好。以上几种背景扣除（BSB）方法可以灵活应用，提高匹配结果或改善图谱。

[align=center]新手快速入门之如何使用CDS软件来进行背景扣除[/align]在上一节内容中，我们学习了如何使用安捷伦CDS软件在数据分析界面进行报告模板添加以及如何导出分析报告。接下去在本节中，我们将学习如何使用CDS软件来进行背景扣除。背景扣除是一个比较实用的工具，它可以用来对我们的色谱图进行美化，也可以降低色谱柱本底流失对色谱出峰造成的影响。在环境监测领域已经有标准将背景扣除纳入其中，作为实验分析的关键步骤。比如在做水质、土壤和沉积物中的C10~C40石油烃时，由于方法采用的是半定量分析方法，因而在对出峰进行积分时，采用的是整段积分，因而基线的波动就会对积分结果造成很大影响。只有在基线非常平齐的时候，积分出来的结果才会更接近真实值。这里我们采用CDS软件进行背景扣除，在执行此操作前，我们首先需要采集背景图谱。在石油烃分析中，升温速率快，温度高，对基线波动贡献最大的就是色谱柱本身的柱流失，因而采集背景图谱时仅仅是采集不进溶剂进行程序升温时的背景噪音。在其余地方，比如[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]中，我们可以采集进空针，梯度洗脱造成的背景噪音。空白背景噪音采集完成后，便可以进行样品分析。◆数据采集完成后，打开数据结果集，点击Blank空白，此时我们可以看到空白基线是不平的，有起伏波动。选择的样品出峰图上后端也是有基线抬高的情况，假如我们有目标峰出峰在起伏上，而要进行整段积分，那可想而知积分出来的结果是不对的。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203129298_2367_3141805_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203130884_5501_3141805_3.png[/img]◆进入到批处理方法中，选择“General”下面的“Signals”信号，找到右边的“Blank Subtraction”空白扣除，点击进去。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203132196_9721_3141805_3.png[/img]◆我们可以看到默认是“None”，剩下有两个选项，一个是“All injections”，代表将背景扣除应用到该序列所有进样中，另外一个是“samples only”，代表只应用于样品中，校正曲线的几个点不扣除。这里我们选择所有“All injections。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203133215_3235_3141805_3.png[/img]◆选择所有后原先灰色的地方都变亮可以进编辑选择了，“Use blanks defined in the sequence”意思是在一开始编辑序列的时候，在要作为背景扣除的那个空白栏里，样品类型就设定好，后面就默认该样作为背景扣除。如果一开始序列里没有进规定，那我们就选择下面“Use specific blank”给它指定一个样作为背景扣除，其余部分默认不变。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203134230_5852_3141805_3.png[/img]◆指定好要扣除的背景空白后，点击process all，对所有样品执行这一背景扣除操作，然后保存结果。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203135347_1343_3141805_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309251203136479_5198_3141805_3.png[/img]接下来我们看一下背景扣除的效果，上面两张图分别为校正曲线扣除背景后的效果和样品扣除背景后的效果，我们可以对比一下一开始空白和样品图，注意15~25min一段基线，原先是抬高不平的，现在就很平齐，积分起来也不会有什么问题，所以这个功能还是蛮实用的。本节使用CDS软件进行背景扣除的分享就到此结束了，下一节我们来学习如何使用CDS软件进行报告模板的自定义编辑。