色谱平衡柱

反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的；由于色谱柱在储存或运输过程中固定相可能会干掉，这会引起键合相的空间结构发生变化。因此，新的色谱柱在用来分析样品之前，请一定要充分平衡色谱柱。反相色谱柱的平衡方法如下：以纯乙腈或甲醇作流动相，首先用低流速0.2ml/min将色谱柱平衡过夜（请注意断开检测器！），然后，将流速增加到0.8ml/min冲洗30分钟既可以进行样品的分离。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意首先用20倍柱体积的5％的乙腈/水流动相“过渡”，然后使用分析样品的流动相直至得到稳定的基线 * 相对于反相色谱柱来讲，硅胶柱或极性色谱柱需要更长的时间来平衡：这些色谱柱在出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果极性色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇会异丙醇平衡 * 请注意将预柱和分析柱一起平衡每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!

液相新手 求助 色谱柱怎样才叫平衡好了呢 是看基线是否平稳还是要看哪里 或者还有其他指标要看一般平衡多久算色谱柱平衡时间足够 仪器开机气泡没有后再开始连接色谱柱，色谱柱要在流动相中走多久才叫色谱柱平衡好了 按时间算还是按照 几倍柱长算请各位指点 谢谢

色谱柱和系统平衡如果时间不够 或者说平衡不好就做样品 具体会出现什么问题呢 新手傻瓜问题

色谱柱和系统平衡如果时间不够 或者说平衡不好就做样品 具体会出现什么问题呢 新手傻瓜问题

本人新手，想要请教各位老师，在平衡色谱柱时，经常遇到基线一直往上或往下漂移的情况，这是什么原因导致的呢？平衡色谱柱时，基线要达到什么样的状态才能算平衡好了呢？

平衡色谱柱的方法 ☆反相色谱柱：在经过出厂测试后是保存在乙腈/水的流动相体系中的， ①在平衡之前，请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶；②新柱应先以10－20倍柱体积的5％甲醇或纯乙腈作流动相冲洗色谱柱。③如果您所使用的流动相中含有缓冲盐或离子对试剂，应注意在乙腈冲洗后用高比例水"过渡"。即每天分析开始前必须先用高比例水冲洗30分钟以上（防止盐析出），再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用高比例水冲洗30分钟以上，除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟（保护柱子）。☆硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正己烷的流动相体系中的，相对于反相色谱柱来说，需要更长的时间来平衡。如果极性色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相平衡之前用异丙醇平衡。即每天分析开始前必须先用异丙醇冲洗10-20倍柱体积，再换用流动相平衡； 分析结束后必须先用异丙醇冲洗10-20倍柱体积后再用正己烷冲洗30分钟（保护柱子）。贴心提示： ①在确定分析样品的流动相时，要确保您使用的流动相和保存色谱柱的流动相互溶②平衡过程中，将流速缓慢地提高，首先用低流速0.2ml/min将色谱柱平衡过夜（注意：断开检测器）；然后，将流速增加到1ml/mol冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态。可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。③再用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂的流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）④请注意将预柱和分析柱一起平衡⑤每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！

高效液相色谱仪的使用过程中，若遇到使用不当的情况，会大大缩短色谱柱的使用寿命。为了延长色谱柱的使用寿命，应对色谱柱进行适当的保护。 　　反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈-水中的；由于色谱柱在储存或运输过程中固定相可能会干掉，这会引起键合相的空间结构发生变化。因此，新的色谱柱在用来分析样品之前，请一定要充分平衡色谱柱。反相色谱柱的平衡方法是：以纯乙腈或甲醇作流动相，首先用低流速0.2ml/min将色谱柱平衡过夜，然后，将流速增加到0.8mL/min冲洗30min以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态。平衡过程中，将流速缓慢地提高直到获得稳定的基线，这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。请一定确保所使用的流动相和乙腈-水互溶。如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意首先用20倍柱体积的5%的乙腈-水流动相“过渡”，然后使用分析样品的流动相直至得到稳定的基线。 　　对于正相色谱柱来讲，硅胶柱或极性色谱柱需要更长的时间来平衡。这些色谱柱在出厂测试后是保存在正庚烷中的，如果极性色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。当使用乙醇、异丙醇、乙酸等粘度大的流动相时，色谱柱的平衡时间要延长，甚至要加倍。

平衡过程中，将流速缓慢地提高 　　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡) 色谱柱的再生 　　进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 表1　建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 125-4 1.6ml 30ml 250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法： 极性固定相(如Si，NH2＊，DIOL基色谱填料)的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水＊＊ 非极性固定相(如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等)的再生： 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱 注意： 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 ＊＊如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

有三个问题：1）什么是“色谱柱的平衡”，有没有比较严格的定义 ？ 2）为什么要做柱平衡？3）常压柱层析，要不要做类似的平衡 ？好像凝胶要做。越详细越好 先在此谢过了！

色谱柱的平衡和使用 反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱：如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用含水量很高（约95%）的流动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保留而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。 如何平衡色谱柱。 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间平衡）。 色谱柱的再生 建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱规格 柱体积 溶剂体积 150×4.6 2.50ml 50ml 250×4.6 5.0ml 100ml 250×10 20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法: 极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水 非极性固定相（如反向填料C18，C8等）的再生：水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水 色谱柱的维护 1、使用保护柱 2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用 3、避免流动相组成及极性有剧烈变化 4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理 5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净 6、压力升高时更换保护柱

色谱柱的平衡和使用 反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱：如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用含水量很高（约95%）的流动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保留而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。如何平衡色谱柱。 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间平衡）。色谱柱的再生 建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱规格 柱体积 溶剂体积 150×4.6 2.50ml 50ml 250×4.6 5.0ml 100ml 250×10 20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法:极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水非极性固定相（如反向填料C18，C8等）的再生：水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水色谱柱的维护 1、使用保护柱 2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用 3、避免流动相组成及极性有剧烈变化 4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理 5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净 6、压力升高时更换保护柱HPLC色谱柱的良好使用规范1.每次使用前,用0.45um/0.22um的膜过滤流动相2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿3.样品分离时一定要考虑溶剂对样品的溶解性及分离的影响 4.对样品要依据性质进行预处理5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生8.储存色谱柱时，应将缓冲盐置换干净，并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱（乙腈/甲醇）9、避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或强力震动

怎么测试一根色谱柱的柱效?一根新的色谱柱在用流动相测样品前要先平衡?这个平衡到底怎么样平衡?是用甲醇来冲洗色谱柱吗?冲洗多久?色谱柱是不是不应连着检测器来冲洗?还有这一句话:使用10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱.这个10-20倍的体积是什么意思?

1.色谱柱的维护使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围避免流动相组成及极性的剧烈变化流动相使用前必须经脱气和过滤处理如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀2. 色谱柱的再生长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。建议用来冲洗柱子的溶剂体积色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-4mm 1.6ml 30ml250-4 mm 3.2ml 60ml250-10mm 20ml 400ml选择再生方法：极性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料)的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**非极性固定相(如反相色谱填料RP-18，RP-8，CN等)的再生：水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。3.色谱柱的平衡反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤：平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

新色谱柱：建议使用50倍柱体积的50/50的乙腈/水相缓冲溶液（缓冲液的最终浓度为10mM）平衡。进样前：用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱。进行梯度分析时，进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱，色谱柱平衡不充分将导致保留时间漂移。

液相平衡色谱柱时，液相流路连接质谱吗

大家好！我使用高压液相色谱不久，有些问题想请教下大家。 我在平衡柱子时，流动向由98%的乙腈平衡到50%的乙腈，为什么在平衡的过程中会有峰出现呢？

~~如何自动平衡、处理、保存色谱柱，并自动关灯~~这里针对Waters液相来说的。其实是一个基本功能，但直到前年才知道，所以后来反思，一定要开发出软件的使用功能。其实就是那个“condition column”，也就是平衡色谱柱。相应的仪器方法就用梯度的方法，例如：solvent A为流动相（含盐）；solvent B为10%甲醇水溶液；solvent C为甲醇。那么方法可以这样设定：~~开始~~1、设定泵参数：time flow A% B% C% D%······ 1.00 100 0 0 01.00 1.00 0 100 0 031.00 1.00 0 100 0 032.00 1.00 0 0 100 062.00 1.00 0 0 100 063.00 0.00 0 0 100 02、设定检测器的event，也就是事件：64.00 lamp off~~完毕~~这样就完成了一套自动冲洗色谱柱、保存色谱柱，并自动关灯的小程序。这里是一套进样完毕，自动处理色谱柱，并关灯的设置，其实刚开始平衡色谱柱时，利用同样的功能也一样可以起到自动更换通道效果。方便啊，方便！

我们是碳酸盐淋洗液，请教几个问题1.AS23是正相还是反相色谱柱？2.平衡的具体步骤是什么？3.平衡是不是和进样一个样子，就是把淋洗液换成平衡用的溶液？4.不平衡会不会导致峰拖尾等峰形问题？以上请不吝赐教，谢谢

[table=100%][tr][td]大神，在进液相之前，应该如何平衡色谱柱，流动相有盐和没盐各自需要如何平衡，如何判断是豆平衡好了，另外，使用完之后，如何冲洗啊，[/td][/tr][/table]

【实验背景】玩儿液相的都知道，分析样品之前，打开液相之后，先要平衡色谱柱。色谱柱平衡不好，进再多次的样品也是白费！因为保留时间漂来漂去，连认清谁是谁都没有办法，又况论计算呢？有哥们或者姐们会说，我多进几针，看什么时候保留时间稳定了，峰面积差不离了，就可以开始做样了嘛。对头，说这话的哥们或者姐们说的很对。但是，我是比较爱惜生命的人，我不愿一直呆在液相前面，忍受着电脑的辐射、有机溶剂的“熏陶”，老老实实的一针针的等着采集完，然后去比对保留时间、峰面积。我更愿意“唰唰”的自动进样几次，看几针后保留时间稳定，计算一下需要的平衡时间。下次再用该色谱柱做这个样品的时候，让它先走上那么长的时间，然后，直接进样品采集就OK了。

新手做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]，在毕业师兄临走前现学的色谱仪操作。流动相是纯乙腈-30mM磷酸盐缓冲液PH2.3，梯度洗脱程序。自己做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]前，先把流速调到1ml/m，两个流动相各脱气几分钟（因为使用比较频繁，一个星期用三四次），再分别用100%的A/B相冲柱子，冲到基线平了之后再上样，一般每个流动相都会冲十来分钟。参考文献里的梯度洗脱程序有28分钟，每个样结束后有14分钟平衡柱子，而我平衡柱子的方法是每个样跑结束后，就有梯度洗脱程序继续跑，等基线平了之后加下一个样，不知道我的操作是不是对的。还有就是所有样品测完之后，等用梯度洗脱程序把基线冲平之后，一般冲十多分钟，再用100%的甲醇冲20多分钟，最后关闭仪器。不知道我的平衡方法是不是有问题，希望各位大佬们帮我看看。

我们呢的Varian3800不能平衡，但是进样口，色谱柱，流速，压力，都平衡了，仪器始终是Not Ready，求大神支个招吧！

例如 250mm*4.6mm的一根色谱柱，加入用10倍柱体积的流动相平衡，那么这个柱体积是4.2ml？还是去除柱中填料所占空间后的2.2ml呢？谢谢！

凝胶色谱，色谱柱测定范围在几百到两千，需要平衡多长时间？

如题~新的APS-2 HYPERSIL色谱柱如何平衡？

求助，刚用岛津LC-20AD，工作站是Labsolution，请问如果不进样要怎么来平衡色谱柱？每次平衡柱子或或者洗柱子都得进一针，然后会存了很多洗柱子的数据文件，我想的是不进样直接平衡柱子或洗柱子，要怎么操作？

我用watershed 的液相加 紫外检测，色谱柱 是 C18，流动相 为 甲醇 和 0.05mol磷酸氢二钾、0.1%甲酸的水溶液，以前这样用都没有出问题，可是这次起初平衡时还不错在-0.00280，但在1h后 基线突然飙升到1.5左右 然后一直上下波动，不知道 什么原因 请求高手指点 非常感谢