色谱封系统

结合质谱和UV光谱分析，可以在单次运行中同时实现峰追踪和共流出峰的鉴定与ACQUITY UPLC H-Class四元系统结合的灵活软件可通过Auto?Blend Plus调节流动相pH值。此软件可在同一个工作流程中分析UV和质谱数据，从而简化数据分析过程

本文利用Nexera UC Prep超临界流体色谱系统完成对手性化合物快速制备，经重叠进样方式，实现相较传统分离制备效率提升1.8倍，但相同制备量下时间内的溶剂消耗降低了46%。同时对重叠进样的色谱峰进行稳定性评价，在20次重叠进样过程中，各主要色谱峰对应的峰面积的RSD在5%以内，保留时间差RSD在0.4%以内，各峰峰宽和分离度变化在2%以内，体现出良好的系统稳定性。

使用单一检测技术进行方法开发是一项比较困难的挑战，UV谱图数据有助于进行峰纯度评估和鉴定，但如果存在共流出物，峰追踪就难以实现。质谱数据可针对少数化合物实现色谱峰匹配，但如果存在同量异位化合物，就需要更多信息才能进行谱峰确证：无论是想要立即获取UV鉴定结果还是更可靠的分析定量，完整的分离都是最基本的要求。为应对这些挑战，可以使用多种检测器来对单个样品进行分析，每种检测技术分别针对不同理化特性的分子。将检测器响应整合到一个软件界面中，就可以通过精简的平台简化数据分析

仪器间方法转换对多种行业的许多实验室来说都是充满挑战性的问题。难点在于不仅要在考虑各仪器性能的同时维持保留时间不变，而且还要在仪器间方法转换时不损失分离度。安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 能够实现从延迟体积较高且混合行为不同的液相色谱系统向 Agilent 1290 Infinity 和 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统的无缝方法转换。本应用简报介绍液相色谱方法从 Waters Alliance 2695 液相色谱系统向启用/未启用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统的轻松转换，同时通过 Waters Empower 软件进行控制。采用上述两种系统对扑热息痛及其杂质进行分析，并分别将保留时间与分离度进行对比。

本文采用 Agilent Bond QuEChERS dSPE EMR-Lipid 除去蜂王浆基质中的脂肪等杂质，蜂蜜基质利用乙腈直接提取，使用Zorbax Eclipse Plus C18 色谱柱并结合 Agilent 1290 Infinity II液相色谱/6470 三重四极杆液质联用系统，采用正离子扫描模式获得了较高的灵敏度。通过方法学验证数据得到，以上 2 种方法分别适用于蜂王浆和蜂蜜基质中青霉素类药物（如青霉素G、青霉素 V、氨苄西林、苯唑西林、哌拉西林和邻氯青霉素）的残留分析。

Thermo ScientificTM DionexTM ChromeleonTM 7 色谱数据系统 (CDS) 软件采用CobraTM 峰检测算法、SmartPeaksTM 积分助手和动态交互数据处理，可节省您的宝贵时间。Cobra 检测算法可准确地检测峰起始和终止的时间，并正确地确定峰基线，无需输入一系列检测参数。独一无二的SmartPeaks 积分助手帮助用户快速、直观地确定基线。Chromeleon 7 CDS 帮助用户快速完成从样品到结果的过程，从而全面提高实验室的工作效率。

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采用通微液相色谱系统（配荧光检测器）搭配通微柱后衍生系统，可实现链霉素检测，可满足蜂蜜样品中链霉素的日常质控要求。

Nexera Bio液相色谱系统和Shim-pack Bio SEC色谱柱在单抗SEC分析中，可以提供良好色谱峰型，带来快速有效分离，保证稳定可靠分析。

过去，体积排阻色谱 (SEC)是评估重组蛋白生物治疗药物中非共价蛋白质聚集体 (高分子量物质[HMWS])时应用最广泛的方法1。但近年来，由于SEC色谱柱和LC系统的性能提升，使用SEC对这些样品中的蛋白质片段(低分子量物质[LMWS]) 在非变性的条件下进行分析的方法也越来越受到人们的关注。其中最受关注的， 是针对铰链区水解降解所产生IgG单克隆抗体(mAb)片段的分析方法2。相较于将单体(约150 KDa)与二聚体和更高分子量形式HMWS(≥ 300 KDa)分离的传统分离方法，LMWS片段(分子量为mAb单体分子量三分之二(约100 KDa)的mAb主 要形式)的分离可能更具挑战性。这是由于LMWS与单体的大小 (流体动力学半径)相比于单体与HMWS蛋白质的大小更加接近。由于蛋白质洗脱顺序中低浓度LMWS峰作为主(单体)峰上的拖尾肩峰洗脱，使分离难度进一 步增加。 虽然使用粒径为亚2 µ m的SEC色谱柱能够提高效率，从而提高HMWS和LMWS的分析通量，但由于色谱柱硬件和填料的限制，这些高柱效SEC颗粒仅适用于内径为4.6 mm或更小的色谱柱。使用HPLC色谱系统时，通常因SEC粒径为3 µ m及以上，可以选择7.8 mm内径的色谱柱。虽然许多HPLC系统也能够在这些内 径为4.6mm的SEC色谱柱所需流速和背压下运行，但存在一个经常被忽视的事实，即典型HPLC配置的柱外扩散相对大于这些UPLC SEC色谱柱所产生的峰体积，导致观察到的峰分离度明显降低。柱外扩散可以看作是样品在通过不含色谱柱的LC系统流路时发生的体积增加现象。

阿莫西林有关物质检测一、实验方法 Cometro高效液相色谱系统； 色谱柱：Comasil C18 250*4.6mm，5μm； 波长：254nm； 流速：1.0ml/min； 样品：阿莫西林原料样品（约2mg/ml），对照品（20μg/ml）； 进样量：20μl 流动相：A 磷酸盐（pH=5）-乙腈=99:1； B 磷酸盐（pH=5）-乙腈=80:20。 梯度洗脱时间/min流动相A/%流动相B/% 0.00 92 815.00928 40.00 0 10055.000100 56.00 92 870.00928二、实验结果1、阿莫西林样品Channel A Results Name Retention Time Area Theoretical plates (USP) Resolution (USP)12.787946461110.00000 2 5.142 27245 9917 13.4913437.08024450115328.24395 阿莫西林 11.223 4690129 8036 10.83894417.26882531199510.68492 5 25.923 13824 160765 19.46456627.47078571614745.81389 7 30.797 10138 315697 13.50415831.830153393725634.83051 9 33.063 4103 206428 4.936511034.923201423596407.09890 11 37.430 3251 64676 6.101471239.79230501088574.40964 梯度假峰 41.345 8157 266135 3.86885梯度假峰46.2103161520574113.36384 梯度假峰 58.990 38043 61357 18.792752、阿莫西林对照品Channel A Results Name Retention Time Area Theoretical plates (USP) Resolution (USP)阿莫西林12.74853226120320.00000 梯度假峰 41.603 6591 367607 78.05457梯度假峰46.4172467924544914.82780 梯度假峰 58.977 48226 57297 18.466543、梯度空白Channel A Results Name Retention Time Area Theoretical plates (USP) Resolution (USP)梯度假峰41.51365603523790.00000 梯度假峰 46.323 24802 236337 14.55634梯度假峰58.977428665680018.45865三、结论 1、第一张图关注8个杂质小峰，第二张图关注12min处的大峰。由第三张图我们可以判断41min，46min，58min处的峰为梯度假峰，因此不予考虑，其次根据药典规定“供试品溶液任何小于对照溶液主峰面积0.05倍（53226*0.05=2613.3）的峰可忽略不计”，实验者已经在积分的时候忽略。 2、根据有关物质的二条规定我们逐条分析： 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积； 分析：对照品的主峰面积为53226，杂质1-12均小于它，此点合格。 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰的三倍。 分析：对照品主峰面积的三倍为159678，杂质1-12峰面积和为147116，此点合格。 3、此样品符合10版药典阿莫西林有关物质相关标准。

过去，体积排阻色谱 (SEC)是评估重组蛋白生物治疗药物中非共价蛋白质聚集体 (高分子量物质[HMWS])时应用最广泛的方法。但近年来，由于SEC色谱柱和LC系统的性能提升，使用SEC对这些样品中的蛋白质片段(低分子量物质[LMWS]) 在非变性的条件下进行分析的方法也越来越受到人们的关注。其中最受关注的，是针对铰链区水解降解所产生IgG单克隆抗体(mAb)片段的分析方法。相较于将单体(约150KDa)与二聚体和更高分子量形式HMWS(≥ 300 KDa)分离的传统分离方法，LMWS片段(分子量为mAb单体分子量三分之二(约100 KDa)的mAb主要形式)的分离可能更具挑战性。这是由于LMWS与单体的大小(流体动力学半径)相比于单体与HMWS蛋白质的大小更加接近。由于蛋白质洗脱顺序中低浓度LMWS峰作为主(单体)峰上的拖尾肩峰洗脱，使分离难度进一步增加。虽然使用粒径为亚2µ m的SEC色谱柱能够提高效率，从而提高HMWS和LMWS的分析通量，但由于色谱柱硬件和填料的限制，这些高柱效SEC颗粒仅适用于内径为4.6mm或更小的色谱柱。使用HPLC色谱系统时，通常因为SEC粒径为3µ m 及以上，可以选择7.8mm内径的色谱柱。虽然许多HPLC系统也能够在这些内 径为4.6mm的SEC色谱柱所需流速和背压下运行，但存在一个经常被忽视的事实，即典型HPLC配置的柱外扩散相对大于这些UPLC SEC色谱柱所产生的峰体积，导致观察到的峰分离度明显降低。柱外扩散可以看作是样品在通过不含色谱柱的LC系统流路时发生的体积增加现象。

摘要由于可以在短时间内实现快速高效的分离，小内径 (id) 色谱柱在气相色谱 (GC) 中的应用日益流行。Agilent Intuvo 9000 气相色谱系统的流路内具有内置的保留间隙柱（芯片式保护柱或跳线芯片）和用户自定义的热区，在该系统中使用这些色谱柱对于用户是一项特殊挑战。正确使用这些功能可实现与 Agilent 7890 气相色谱系统类似的高分离度快速分离。本应用简报展示了小内径色谱柱在 Intuvo 9000 气相色谱系统中的应用。

本文利用GC-2010 Pro气相色谱仪搭配ECD检测器，参考现行标准《GB 31657.1-2021 食品安全国家标准 蜂蜜和蜂王浆中氟胺氰菊酯残留量的测定 气相色谱法》，建立了蜂蜜和蜂王浆中氟胺氰菊酯残留量的测定方法。实验结果表明，在10~500 μg/L的浓度范围内，氟胺氰菊酯标准曲线线性关系良好，相关系数为0.9999。取浓度为20 μg/L的标准品溶液，重复进样6次，氟胺氰菊酯面积的RSD%为0.98%，仪器精密度良好。加标回收率实验中，氟胺氰菊酯的平均加标回收率在97.6~106.3%之间。该方法简单方便，能够有效地检测蜂蜜和蜂王浆中氟胺氰菊酯的残留量。

理想情况下，在运行色谱方法时，样品稀释剂组分应尽可能接近方法起始条件。这样做的目的是最大程度减小由样品溶剂效应引起的谱带展宽和峰畸变，进而避免出现峰不对称性、峰分裂或数据不可用的情况。引起溶剂效应原因是稀释剂与流动相之间存在洗脱强度差异。当稀释剂的洗脱强度高于流动相时，峰展宽和峰形异常的情况通常会更加严重1-2。事实上，业内普遍认为，最好是将进样的样品溶解于起始流动相中。然而，给定样品的预处理常常需要将分析物溶解在与流动相组分相差很大的溶剂中。为了避免溶解度问题和峰形不佳的问题，许多方案都要求在预处理过程中挥干样品溶剂，然后将样品复溶于流动相中。然而，这个额外的步骤非常耗时，所需时间往往比HPLC分析的时间还要长1。一般而言，推荐的做法是避免使用比流动相更强的溶剂来溶解样品和标准品。这种做法基于如下假设：强于流动相的进样溶剂会干扰样品在柱头处的吸附，而采用大体积进样时尤其如此2。遗憾的是，这种做法在实践中可行性不佳，因为分析人员往往必须根据样品的溶解度来决定有机溶剂的含量，以确保样品能够完全溶解。对于扩散体积较大的传统LC系统，这种现象带来的问题较少，因为柱前样品/溶剂/流动相混合很充分，可以缓解溶剂效应造成的色谱峰问题。然而，对于现代的低分散U(H)PLC系统，如果以较大体积进样含有高有机相的样品，就会出现问题，并可能导致峰对称性变差或峰分裂。

目前通用的农残分析流程是用QuEChERS样品前处理方法对样品进行除杂和富集，前处理最后一步通常是以强极性溶剂如乙腈作为富集溶剂，离心过滤后进样。然而由于溶剂效应的影响，普通液相色谱进样体积一般小于等于20 μ L，超高效液相色谱进样量一般为1~5 uL。使用岛津大体积进样分析系统，可在普通岛津UHPLC系统上改装完成，借助岛津独有混合器实现柱头聚焦，富集、分离同步完成；可直接进样200 μ L强溶剂样品，且不影响峰型与分离效果，较大程度提高方法灵敏度。

本应用简报重点介绍了使用配备两根 Agilent J&W DB-HeavyWAX 色谱柱的双通道Agilent 8890 气相色谱系统根据 ASTM 方法 D7504 分析单环芳烃1。在每个气相色谱通道上使用双塔同时进样分析不同样品，样品通量可提高 100%。利用保留时间锁定(RTL) 在每个通道上获得精确的保留时间一致性，使色谱峰鉴定和校准更简单且更可靠。该系统在目标化合物之间表现出优异的分离能力，并能对 0.0004%–99.9787%（ 重量百分比）范围内的分析物进行定量分析。在几种不同芳烃溶剂的重复分析中观察到的精密度超过了 ASTM 重现性要求。

气相色谱和气质联用系统发生气体泄漏都会对系统性能造成显著而具有累积性的影响。色谱柱永久性损坏、保留时间变短和进样口活性增高是气相色谱和气质联用系统存在氧气暴露后在温度升 高时的表现。所有这些影响都在本研究中得到证实。气质联用系统会出现信号显著丢失、背景噪声升高、电子倍增管电压迅速增大等现象。

基于在色谱和质谱领域的深厚底蕴，赛默飞率先推出离子色谱-质谱联用系统（IC-MS）,开启色谱质谱联用新篇章，以应对日益增长的高灵敏度和高选择性离子分析需求与挑战。

动物源性样品（肌肉、内脏、蜂产品、水产品、乳制品等）经过提取后，采用薄壳型填料反相 C18 色谱柱 — Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱分离，经配有安捷伦喷射流 (AJS) 电喷雾离子源的安捷伦三重四极杆液质联用系统在负离子模式下监测。

本应用简报采用质量源于设计 (QbD) 原则在亚 2 µ m 粒径色谱柱上开发了一套方法，并将其转换为传统 HPLC 方法。采用安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 实现不同液相色谱系统间之的无缝方法转移。初始方法开发在 Agilent Infinity 1290 系统中进行，其中包括在不同色谱条件（涉及洗脱液、流速、梯度斜率和温度等多重组合）下对不同亚 2 µ m色谱柱进行固定相筛选。采用实验设计 (DOE) 原理对性能最佳的固定相系统进行后续优化，以便建立 ICH 设计空间。安捷伦方法转换软件用于将亚 2 µ m 色谱柱填料方法转换为传统色谱柱填料方法。Agilent 1290 Infinity UHPLC 系统与 ISET 技术结合使用以模拟 Agilent 1260 Infinity HPLC 系统。这样可以为 HPLC 方法建立设计空间。随后在Agilent 1260 Infinity HPLC 系统中对转移后方法的重现性和分离度进行验证。结果清晰表明 ISET 与 Fusion QbD 方法开发与验证软件 (S-Matrix) 的结合使用能够在 QbD 原则下将 UHPLC 方法有效转换为 HPLC 方法。

本文建立的离子色谱法直接测定蜂王浆中生物胺的方法。前处理方法简单无需衍生化，避免了衍生化带来的干扰和衍生物不稳定问题，提高方法稳定性，灵敏度高。将本方法应用于蜂王浆中生物胺含量的检测具有较高的实用价值。

本文建立的离子色谱法直接测定蜂王浆中生物胺的方法。前处理方法简单无需衍生化，避免了衍生化带来的干扰和衍生物不稳定问题，提高方法稳定性，灵敏度高。将本方法应用于蜂王浆中生物胺含量的检测具有较高的实用价值。

多残留农药分析已成为食品分析的主流方法，该方法能够同时测定多种农药，并且这一数量还在不断增加。QuEChERS 是样品前处理的优选方法。它能够减少基体载入量，但获得的样品还不够干净。尽管对样品进行了净化，但久而久之，农药分析仍然会出现响应降低以及峰不对称的情况。对于这一问题，传统气相色谱系统的合理解决方案是减少批次规模或提高进样口或色谱柱/保留间隙柱维护的频率。Agilent_Intuvo 9000 气相色谱系统能够有效解决这些问题，还带来了创新型惰性流路的其他优势2。重新设计的模块化流路配置全新构想的保留间隙柱，保护分析柱免受基质污染，从而无需修剪色谱柱。即使是最复杂的分析物，创新型流路都能够维持最高的色谱完整性（响应和峰形）。此外，Intuvo9000 气相色谱的宽度仅有 27_cm，体积小巧，对于台面空间有限的实验室来说尤其有利。

在本应用简报中，我们展示了利用阴离子交换色谱法，在使用四种不同的高盐洗脱缓冲液（最大浓度为 2 M）进行线性和阶梯梯度洗脱条件下，对四种蛋白质进行分离的相关信息。Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统的流路设计中未采用铁/钢质材料，因此可耐受生物分析和生物纯化应用中的严苛条件，从而保持其出色的 UHPLC 性能。使用四种盐（氯化钠 (2 M)、氯化钾 (1 M)、乙酸钠 (1 M) 和四甲基氯化铵 (1 M)）进行线性梯度洗脱时，均可获得极高的保留时间和峰面积精确度。此外，使用 2 M 氯化钠作为洗脱缓冲液时，结果表明保留时间和分离度可保持稳定达 48 小时以上。在此类条件下，采用不锈钢材质的液相色谱系统会面临一些问题，例如盐引起的腐蚀，因此需要执行特殊的、繁杂的清洗步骤。使用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统则可以完全避免此类清洗步骤，从而提高生物分析或生物纯化应用的通量和效率。

Agilent Intuvo 9000 中采用内置保留间隙柱所带来的优势远远超过在气相色谱系统中使用小内径色谱柱时所面临的潜在挑战，这些挑战还可以通过选择正确的芯片式流路和方法参数轻松克服。使用内径大于 0.2 mm 的色谱柱时，分析物谱带展宽不构成问题。如果需要使用内径小于0.2 mm 的色谱柱，可最大程度减小柱外谱带展宽的影响。与芯片式保护柱相比，使用跳线芯片产生的柱外体积更小，因此分析物谱带展宽更少。如果方法需要使用恒温柱温箱条件，则应使用跳线芯片。这有助于减少分析物谱带展宽的数量。如果需要使用芯片式保护柱（由于分析物基质较脏），则应考虑使用柱温箱升温程序或增加色谱柱内径，以最大程度降低小内径色谱柱可能引起的分析物谱带展宽的影响。

使用三通道Agilent 7890B 气相色谱系统测定炼厂气。通道1 使用了FID 检测器和氧化铝PLOT 色谱柱，用于测定从甲烷到C6+ 的烃类。通道3 使用氮气为载气，用于测定氢气。通道2 采用了G3507A 大阀箱(LVO)，在恒温条件下以氦气为载气，用于测定永久性气体和硫化氢。永久性气体通道使用的是微填充柱（外径1/16 英寸，内径1.00 mm）。对位于7890B 气相色谱系统主柱温箱内的通道1 和3 的色谱柱进行程序升温。包括硫化氢在内的平均分析时间大约为8.5 分钟。

本应用简报展示了使用 Agilent 8697 顶空进样器和 Agilent 8890 气相色谱系统对用于分析饮用水中卤代烃和苯及其衍生物的方法 GB/T 5750.8-2022 进行的验证。整个系统提供了出色的性能，具有高灵敏度和稳定性。对于大多数分析物而言，相关系数 (R2 ) 为 0.999 甚至更高。峰面积 RSD 为 0.53%–5.49%。所有化合物的方法检出限(MDL) 为 0.001–0.63 μg/L，回收率为 75.5%–129.1%。

本文利用超高效二维液相色谱系统在完成颠茄（流）浸膏特征图谱分析的同时，将硫酸阿托品峰分多次切割收集在 40 µ L 的样品环阵列中，然后再将每个环中的收集馏分连续转移进入第二维完成再次分离，并对硫酸阿托品进行定量分析。本文所述方法检测限为 1.5 µ g/mL，定量限为 5.1 µ g/mL；在 0.025-0.5 mg/ mL 的浓度范围内，硫酸阿托品的线性相关性良好；分别进样 6 次 0.25 mg/mL 硫酸阿托品对照品溶液和样品溶液，其峰面积相对标准偏差 (RSD) 分别为 0.5% 和 0.7%；硫酸阿托品的样品加标回收率为 98.05%。相比于 2015 年版《中国药典》测定颠茄（流）浸膏中硫酸阿托品的复杂样品前处理过程，本方法实现了高效、简便、低有机溶剂消耗和自动化等特点。

本文开发了一套新的二维液相系统，通过将亲水作用色谱（HILIC）与反相色谱（C8）组合，可以实现一次进样分离极性跨度大的目标物质：高极性物质利用HILIC柱分离，中低极性物质利用反相柱分离。两种分离模式通过一个高压十通阀及定量环连接，利用系统软件编辑时间梯度程序及十通阀切换；且一种模式分离的同时，另一种模式平衡色谱柱或进行柱头聚焦，节省分析时间。选择LogP范围介于-8.79~13.87的60种目标物（34种氨基酸、2种核苷酸、3种糖、21种脂质）对系统进行验证，60种物质均获得了良好的保留与分离。两组保留时间接近的同分异构体在本系统中亦获得了良好的分离，未因阀切换影响分离度。60种物质标准溶液线良好，相关系数r20.9908。连续6针重复进样，保留时间RSD0.39%，峰面积RSD5.9%。高浓度样品分析后系统无残留。大鼠血浆样品分析结果表明，该系统峰容量显著大于普通单柱系统。另外，该系统内含一个UHPLC子系统，可用于常规分析，提高系统的适用性。