微生物检测抽滤系统

微生物过滤检测系统，常见的品牌有哪些？

一直在找寻微生物检测中抽滤设备，找到的产品感觉都不什么好用，大家有什么好的厂家推荐呢，新手先谢谢大家了

请教各位高手： 本实验现急需购买一套微生物限度检测的膜过滤系统，请问各位高手给点意见，那种比较好用。电话：13828759450，QQ:240100912

检测食品中微生物的仪器主要包括以下几种：　　无菌均质器：这种仪器广泛应用于动物组织、生物样品、食品、化妆品的均质处理，特别适合于微生物检测样本的制备。它具有均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理、不需洗刷器皿的特点。样本装在特制的一次性无菌均质袋中，不与仪器接触，有助于预防交叉污染。　　微生物鉴定系统/药敏分析仪：细菌鉴定药敏分析仪适用于对病原微生物进行种类鉴定和体外抗生素敏感试验、分析。其检测范围广泛，菌种库包含2000种以上，可鉴定临床致病菌550种以上，测试200种以上药物的敏感性。这种仪器能够实现细菌鉴定的自动化、标准化和药物试验的定量化，对于食品安全国家标准GB4789系列所要求的食源性致病菌(如弯曲杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌等)的分离鉴定非常有用。　　微生物检测仪：便携式微生物检测仪广泛应用于活菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、李斯特菌、粪肠球菌(链球菌)、酵母(酵母菌)等微生物的快速检测。这种仪器便携一体化，防水抗压，可随时随地进行检测。　　微生物限度仪：如JC-WX600微生物限度检测系统，采用不锈钢金属材料制成，配有内置隔膜液泵，不需外接抽滤瓶，液体直接通过隔膜液泵排除，减少了抽滤瓶使用上的繁琐，避免了连接不好造成抽滤速度慢等缺点。　　以上这些仪器都是食品微生物检测中常用的设备，它们为食品的安全和质量控制提供了强有力的技术支持。

乳品微生物检测抽样方案，如何理解n=5，c=2,m=50000,M=100000，

我们部门想新建微生物实验室，前期是进行纯化水的微生物检测，不知道需要什么相关仪器，需要菌种进行方法验证吗？需要什么规格的仪器进行过滤？生物显微镜的规格呢？非常感谢大家的帮助！

[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403280940208787_2774_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪的应用非常广泛，涵盖了多个领域。下面，我们将详细探讨一些主要的应用场景。　　饮用水处理：在饮用水处理过程中，余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪用于监控和控制消毒剂的投加量，确保水质安全。通过实时检测水中的余氯、总氯、二氧化氯和臭氧含量，可以有效防止水中的细菌、病毒和寄生虫等微生物的滋生，保障人们的饮用水安全。　　游泳池水质管理：游泳池水中余氯、总氯、二氧化氯和臭氧的含量对于水质管理和游泳者的健康至关重要。使用余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪可以实时监测水质，及时调整消毒剂的投加量，防止水质恶化，保障游泳者的健康。　　医院污水处理：医院污水处理过程中，需要严格控制余氯、总氯、二氧化氯和臭氧的含量，以防止有害微生物的传播。余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪的应用可以帮助医院实现污水处理过程的自动化监控，确保污水处理效果达标。　　食品加工行业：在食品加工过程中，余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪可用于监控水源和加工用水的水质。通过实时监测水中的余氯、总氯、二氧化氯和臭氧含量，可以确保食品加工过程中的水质安全，防止微生物污染，保障食品质量和食品安全。　　环境监测：在环境监测领域，余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪可用于检测地表水、地下水、工业废水等环境水体中的污染物含量。通过实时监测和数据分析，可以为环境保护和污染治理提供有力支持。　　总之，余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪的应用范围非常广泛，不仅应用于饮用水处理、游泳池水质管理、医院污水处理、食品加工行业等领域，还广泛应用于环境监测等环境保护领域。随着人们对水质安全和环境保护的重视程度不断提高，余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪的需求也将不断增长。同时，随着科技的不断进步和创新，余氯总氯二氧化氯臭氧检测仪的性能和精度也将不断提高，为水质安全和环境保护提供更加可靠的保障。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是20世纪80年代发展起来的一种新型软电离有机质谱, 作为一种新兴的蛋白质组学检测技术, 现已广泛应用于生命科学及相关领域。同时作为一项新兴的微生物鉴定技术, 受到了国内外的广泛关注。与传统的生化表型鉴定方法和分子生物学方法相比, MALDI-TOF MS具有操作简单、快速、准确和经济的特点。早在1975年, ANHALT等[1]利用质谱仪结合高温裂解技术第1次完成了细菌的鉴定, 从此拉开了质谱鉴定细菌的“ 序幕” 。随着质谱检测技术的不断完善和发展, 近年来, MALDI-TOF MS已经成功应用于微生物的鉴定, 显示了其在细菌、酵母菌等鉴定方面均具有良好的应用价值。众多的研究表明, MALDI-TOF MS技术对培养出的纯菌落进行菌种鉴定具有很高的稳定性及准确性, 对常见细菌和酵母菌的属的鉴定率能达到97%~99%, 种的鉴定率也能达到85%~97% 另外, MALDI-TOF MS大大缩短了细菌鉴定的时间, 而且其成本也较常规鉴定方法低[2, 3]。除此之外, MALDI-TOF MS已经能够成功地用于部分微生物亚种水平的鉴定和细菌耐药性的检测, 但这种方法在大多数情况下是应用于培养出的纯菌落的鉴定[3]。　　如果能够从临床样本中直接检测细菌/真菌, 突破细菌/真菌培养阳性率低、培养时间长的瓶颈, 为细菌/真菌感染性疾病的诊疗提供更快、更准确的病原学依据, 将对临床及时控制细菌/真菌感染性疾病起到更大的作用。国内外学者已尝试将质谱技术应用于临床样本的直接检测, 并取得了显著的进展。本文就MALDI-TOF MS技术在临床样本的直接检测应用作一综述。一、MALDI-TOF MS检测原理　　MALDI-TOF MS技术用于微生物鉴定的实质就是检测具有属、种或亚型特异性的生物标志的质量信号, 主要是微生物菌体内高丰度、表达稳定和进化保守的核糖体蛋白。MALDI-TOF MS 仪器主要由基质辅助激光解吸离子源(MALDI)和飞行时间质量检测器(TOF)两部分组成。MALDI的原理是用一定强度的激光照射样本与基质形成的共结晶薄膜, 基质从激光中吸收能量而汽化, 并迅速降解, 使样本分解吸附, 基质和样本之间发生电荷转移从而使样本分子发生电离 TOF的原理是带有电荷的样本分子在电场作用下加速飞过飞行管道, 因为离子的质荷比与离子的飞行时间呈正比, 所以不同质量的离子因达到检测器的飞行时间不同而被检测, 以离子峰为纵坐标、离子质荷比为横坐标形成特征性的质量图谱。将不同种属微生物经MALDI-TOF分析所形成的质量图谱与数据库中的参考图谱进行比较, 从而实现对目标微生物种或菌株的区分和鉴定[2]。二、MALDI-TOF MS直接检测临床样本的流程　　临床样本直接检测的流程主要包括3个部分:临床样本的预处理、样本上机检测和对比蛋白质指纹图谱数据库得出鉴定结果。由于目前报道最多的临床样本是阳性血培养瓶和中段尿样本, 下面将以这二者为例介绍其直接检测的流程, 其它临床样本的检测流程与之类似。(一)临床样本预处理　　MALDI-TOF MS直接用于临床样本的检测有2个基本的要求:(1)临床样本中细菌的量。为了得到准确的鉴定图谱, MALDI-TOF MS技术对置于靶板上的细菌的最低检测限约为(1× 104)~(1× 106)cfu/mL。若要直接检测拟似血流感染的血液样本以及拟似泌尿系统感染的中段尿等临床样本中的病原菌, 首先必须富集细菌 (2)临床样本的质。由于血液和血培养瓶中的大分子成分如血红蛋白和其它蛋白成分、尿液中的白细胞等有机成分会干扰细菌的谱峰, 所以直接检测前需要采取预处理措施去除这些干扰因素。1.阳性血培养瓶直接检测 直接检测阳性血培养瓶的细菌浓度常常需要1× 107 cfu/mL[2, 4]。由于在血流感染患者血液中的细菌量常常很低(最低可 1~10 cfu/mL), 因此对血样本的直接检测需要一个增菌的过程, 即采用血培养瓶增菌。目前已报道的阳性血培养病原菌预处理程序各不相同, 但预处理过程主要包含了以下2个步骤:(1)将细菌从血细胞中分离出来。先应用温和去污剂(如吐温-80、十二磺基硫酸钠、皂素等)将血液中的血细胞溶解, 然后通过不同的流程(离心、洗涤)去除其它的干扰因素, 纯化要鉴定的细菌样本 (2)将菌体中的蛋白质抽提出来。最常用的是混合溶剂处理法, 使用甲酸/乙腈溶液对样本进行处理来抽提蛋白, 利用2种溶剂的混合作用将菌体表面的蛋白和存在于细胞内的低相对分子质量的高丰度蛋白提取出来, 实现对菌株的鉴定。虽然至今尚没有规范化的处理程序, 不过目前市场上已有商品化的阳性血培养瓶预处理试剂盒Sepsityper kit(Bruker)可以提高鉴定分数和鉴定准确率, 但是花费比较高, 处理程序也费时较长[5]。另外, HAMMARSTR? M等[6]建立了一种基于声学捕捉和集成选择性富集目标(integrated selective enrichment target, ISET)的新方法用于富集样本中的细菌, 快速、准确并且简化了人工操作, 有望替代传统的以离心为基础的分离方法。2.中段尿样本 要取得一个较高的鉴定成功率, 直接检测中段尿样本中病原菌至少需要的细菌数量是1× 105 cfu/mL[7, 8]。对尿样本的预处理程序较为简单, 主要有下面几个步骤:低速离心去除白细胞, 高速离心收集细菌, 沉淀, 经过洗涤、离心之后进行蛋白质的提取(常用的是甲酸、乙腈), 经高速离心后取1 μ L上清涂布到MALDI的靶板上, 在室温下干燥后即可进行检测。

[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406241035541757_6274_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　食品微生物检测仪，作为现代食品安全检测的重要工具，其在食品生产、流通、监管等各个环节中发挥着不可替代的作用。随着科技的不断进步和人们对食品安全要求的日益提高，食品微生物检测仪的应用也日益广泛，成为了确保食品安全的重要手段之一。　　一、食品生产环节中的应用　　在食品生产过程中，原料、设备、环境等多种因素都可能对食品的微生物污染产生影响。食品微生物检测仪能够快速、准确地检测食品中的微生物含量，帮助生产企业及时发现污染问题，确保食品生产的卫生安全。同时，该仪器还可以对食品中的营养成分、添加剂、防腐剂等成分进行检测，确保食品的成分符合标准，保障消费者的健康权益。　　例如，在乳制品生产过程中，食品微生物检测仪可以检测原料乳中的微生物含量，确保原料乳的卫生质量。在加工过程中，该仪器可以检测乳制品的卫生状况，防止因加工设备、生产环境等污染导致的产品质量问题。此外，食品微生物检测仪还可以对乳制品中的营养成分进行检测，确保产品的营养价值符合标准。　　二、食品流通环节中的应用　　在食品流通环节，食品微生物检测仪同样能够发挥重要作用。食品在储存、运输、销售等过程中，容易受到外界环境的影响，导致微生物污染和食品变质。食品微生物检测仪可以在短时间内对食品进行快速检测，及时发现食品中的问题，避免食品流入市场，保障消费者的健康。　　例如，在超市中，食品微生物检测仪可以对销售的食品进行抽检，确保食品的卫生质量。在冷链物流中，该仪器可以检测食品在运输过程中的温度变化和微生物污染情况，确保食品在运输过程中始终保持低温状态，防止微生物的繁殖和污染。　　三、食品安全监管中的应用　　食品安全监管部门可以利用食品微生物检测仪对市场上的食品进行抽检，快速了解食品的质量状况，及时发现和处理问题食品，保障消费者的健康权益。同时，该仪器还可以与食品安全监管平台进行对接，实现数据的实时共享和监管。监管部门可以通过平台对食品生产、流通等环节进行全程监管，确保食品安全的每一个环节都得到有效的控制。　　例如，在食品进口环节，海关可以使用食品微生物检测仪对进口食品进行快速检测，确保进口食品的卫生质量符合国家标准。在食品生产企业监管中，监管部门可以使用食品微生物检测仪对企业的生产环境、原料、成品等进行抽检，确保企业的生产符合卫生标准和食品安全要求。　　随着科技的不断进步和人们对食品安全要求的日益提高，食品微生物检测仪的应用将更加广泛和深入。未来，食品微生物检测仪将向更高精度、更快速度、更多功能的方向发展，以满足不同领域和不同需求的检测要求。同时，随着物联网、大数据等技术的应用，食品微生物检测仪将与食品安全监管平台实现更紧密的对接和协作，为食品安全监管提供更加全面、高效、智能的支持。

[size=4]节选自《中国药品检验标准操作规范》2005年版无菌检查、微生物限度检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。无菌检查、微生物限度检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10平方米，不小于5平方米；高度不超过2.4m。由1~2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18~26℃，相对湿度45%~65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2~2.5W/平方米），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40/μW/平方厘米，不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。无菌室的洁净度检查无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。沉降菌检测方法及标准；以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将碟盖盖好，置32.5℃±2.5℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均不超过1个。浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机理的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定期校验，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其它培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5分钟，调节流量、转盘、转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.5℃±2.5℃培养48小时，取出检查，浮游菌落数平均不得过5个/平方米。每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。无菌操作台面或超净工作台还应定期请有关部门检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≥0.5μm的粒数不得超过3.5个/升，≥5μm的粒数为0，空气流速应≥0.35m/s，可根据无菌状况必要时置换过滤器。[/size]

一、适用范围适用于食物中毒样品中致病菌的快速筛查，常规样品中卫生指标菌与致病菌的日常监测以及检测样品的采集。 二、工作意义食品在生产、加工、储存、运输和销售等各个环节都有可能受到有害微生物的污染，从而引起食品腐败变质和食源性食物中毒的发生，而且一些危险的致病菌不断涌现出来。据世界卫生组织估计，在全世界每年数以亿计的食源性疾病患者中，70％是由于食用了各种致病性微生物污染的食品和饮水造成的。中国社科院发布的首部食品安全绿皮书《中国食品安全报告（2007）》指出，当前我国食品安全的形式依然严峻，其中微生物污染和化学性食物中毒是影响我国食品安全的最主要因素。微生物污染包括细菌性污染、病毒和真菌及其毒素的污染。2000年至2002年，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对全国部分省市的生肉、熟肉、乳和乳制品、水产品、蔬菜中的致病菌污染状况的监测结果表明，微生物性食物中毒仍居首位，占39.62％；化学性食物中毒占38.56％；动植物性和原因不明的食物中毒均占10％左右。为了减少和防止由微生物污染事件的发生，对食品采用有效的检验方法进行检测和监督是非常必要的。利用传统的检测方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性和灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作繁琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重。有条件的实验室采用了PCR仪、全自动细菌鉴定仪、全自动荧光酶标免疫测试系统等先进设备进行检验，具有快速、灵敏、准确的优点，但这些先进设备价值昂贵，基层检测监管单位和食品生产企业一般难以配备。1955年德国学者F.J.Forg 发明了一种简单快速的大肠菌群快速检测法—纸片法，使原来的检测周期由72小时缩短到15小时，材料成本降低了四分之三，同时大大简化了操作程序。从此，这种集化学、高分子学和微生物学于一体的检测方法开始发展起来，近十几年来发展更为快速。纸片法或测试片法是基于微生物具有复杂多样的酶系统，通过加入特异性酶的底物，在酶的作用下游离出发色基团，直接观察菌落颜色即可对菌类做出鉴定。从而使传统方法需要几步不同反应、几天甚至更长时间才能完成的检测过程简化为一步完成，检测时间缩短到24小时以内，不但能够大大提高检测工作的效率，还可减少大量人工成本。目前国外已有一些知名品牌，国内一些企业出品的此类产品其质量也是越来越好，为此项工作的开展与普及奠定了基础。另外，在国标检测方法基础上研发出的大肠菌检测试剂盒以及致病菌增菌检测试剂盒，采用包被技术将干燥培养基包被在试剂盒中，随时取用，也大大简化了实验前的准备工作。而且，大肠菌检测试剂盒秉承了国标方法中大肠菌阳性结果时的产酸产气的观察理念，保证了检测结果的准确性。至于致病菌增菌检测试剂盒，除日常卫生指标的控制外，更加有利于食物中毒因子的筛选和卫生保障应急处理时使用。

今年新建的厂房，按照第二次征求意见稿GMP的要求做的车间，现在准备开始做验证，也要以第二次征求意见稿GMP来制定微生物监测标准，现有如下问题： 1、表面微生物的监测方法的标准是什么？我们现在只有浮游菌和沉降菌检测方法的国家标准。我们这版GMP和欧盟GMP一样，那欧盟的监测表面微生物的检测方法是什么啊？ 2、98版里的微生物标准应该是静态的吧？ 3、我们现在使用的表面微生物标准在制定的时候分为：表面微生物和人体微生物两部分，表面微生物又分为:关键表面、一般表面和地面；人体微生物：手套和洁净衣。但是第二次征求意见稿GMP中是这么分的：接触碟的标准和5指手套的标准这两个。那我现在要重新制定标准，要以第二次征求意见稿GMP来制定，应该怎么制定啊？请问下大家现在的表面微生物的标准是怎么制定的啊？？ 4、第二次征求意见稿GMP中悬浮粒子的检测方法是参照ISO14644-1，但是我们现行的国家标准是GB/T16292-1996医药工业洁净室悬浮粒子的测试方法，那我现在就以SO14644-1来制定悬浮粒子的操作SOP，可以吗？ 5、第二次征求意见稿GMP中A级区悬浮粒子的频率及采样量，应能及时发现所有人为干预、偶发事件及任何系统的损坏。这话怎么理解啊？我们现在的悬浮粒子检测频率是一个季度一次。我们现行的这个频率肯定不行了，那到底多少算合适呢？？

1. 包装材料的大肠埃希菌检查？答：根据包装材料的不同，大肠埃希菌的检查方法大致有两种，一种是将浸提液合并后，取一部分，接种胆盐乳糖培养基进行检查；另一种是将浸提液合并后，薄膜过滤，然后按规定的方法检验。2. 抗真菌药品的微生物限度检查法答：这类产品的霉菌和酵母菌计数方法需要进行调整，可以根据产品剂型的不同，选择薄膜过滤法或培养基稀释法等方法。3. 为什么在日常样品检测中还需要做阳性对照（国外不需要）？答：为了确保每一次检测对可能存在的微生物都是有效的。4. 对于同一个品种，药典为什么不规定统一的检测方法？答：本版药典进行过这样的尝试，也有某些品种已经收载了统一的检测方法，如注射用头孢类抗生素的无菌检查。之所以没有大量收载，主要是由于检测方法还没有经过必要的复核。将微生物检验的统一方法收载在品种的各论项下，始终是努力的方向。5. 梭菌检查中需置厌氧条件下培养48小时，是否指在厌氧培养箱中？答：需要在厌氧培养装置中进行培养，未必一定是厌氧培养箱。6. 控制菌检查方法验证时，采用多种方法均未检出控制菌，如何处理？答：在确保所使用的各种方法都没有错误的情况下，如果仍无法使试验菌生长，则应该采用薄膜过滤法进行检查。理由是该方法能够最大程度地去除产品的抑菌作用。7. 常规的监督抽样检品（包括原料）在进行微生物限度检查时，是否一定要进行活螨检查并在原始记录与报告书中体现？答：需要进行检查。可以在原始记录中体现，报告书上可以不出现，除非当发现有活螨检出。8. 药包材微生物限度检查规定了合格质量水平，通常产量下取样8个，要求8个瓶子均符合规定，如何进行？答：每个瓶子分别进行实验。9. 大肠埃希菌具体操作规程？答：参见中国药品检验标准操作规程。10. 动物组织及动物类原药材的提取物入药，是否需要检沙门菌？答：需要进行沙门菌检查。11. 关于中国药典菌落计数结果的判断还存在疑义，望能举例说明。答：不清楚所指的存在疑义是指哪方面。2010年版对结果报告进行了较大篇幅的修订，目前的规定应该比05版更为清晰、明确。12. 需做沙门菌检验样品量的确定？答：10g（ml）用于样品计数检验和其他控制菌检查，10g（ml）用于沙门菌检查，10g（ml）用于沙门菌检查的阳性对照。需要进行沙门菌检查的样品，检验用量应为30g（ml）。13. 日常的实验室装备能否达到梭菌无氧的培养要求？答：完全可以。可以采用厌氧培养盒（罐）。14. 如果一个产品有两个规格，是否可以取其中之一做阳性对照？答：每个规格均需进行阳性对照。15. 细菌数为100g/g的，样品稀释级只做1:10,1:100的倍数就可以了吗？答：可以。16. 培养时间3天，5天，可理解为72小时，120小时吗？答：可以。这样更为严谨。17. 中国药品检验标准操作规范“已做验证试验的供试品，在检查时刻不必再做阳性对照”如何理解？答：该标准操作规范中在无菌检查法中规定“供试品无菌检查应进行阳性对照试验”，表明不论是否进行了方法验证，在产品的每一次检验过程中，还必须进行阳性对照。在控制菌检查的大肠埃希菌项下，指出“已做验证试验的供试品，在该供试品检查时不必再作阳性对照”。该规定仅适用方法验证与供试品检查同时开展的情况。2005年版药典和2010年版药典在控制菌检查中均对阳性对照试验有明确规定，“进行供试品控制菌检查时，应做阳性对照试验。”产品检验中应以药典规定为准。18. 无菌检查和微生物限度检查中，产品中规定的溶解液是否可以换成其他的溶液？答：可以。19. 制剂通则中，没有微生物检查项目的，是否可不进行微生物项目检测？答：可以。主要是二部制剂通则中口服片剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂。20. 在细菌、霉菌和酵母菌计数中，适用性检查细菌是培养48小时，霉菌和酵母菌是培养72小时，供试品检查中细菌是培养3天，霉菌和酵母菌是培养5天，那方法验证中应参照哪个时间进行培养。答：应按照供试品检验时的条件，即细菌3天，霉菌和酵母菌5天。21. 测定纯化水微生物限度时，每张滤膜过滤量是多少合适？需要先稀释吗？过滤完后需不需要冲洗？假如我取10ml纯化水通过双杯体封闭式薄膜过滤器过滤，每张滤膜上的计数是以5ml为单位还是10ml为单位？答：过滤量应以培养后出现的微生物数不超过100cfu/膜为标准。一般可不稀释。不需要冲洗。每张滤膜的过滤量为5ml。22. 药典中关于纯化水的微生物限度是：细菌、霉菌及酵母菌总数每1ml不得过100个。这句话的意思是细菌总数每1ml不得过100个，霉菌及酵母菌总数不得过100个，还是细菌+霉菌+酵母菌总数每1ml不得过100个。如果是三者总数的话，那细菌总数限度是多少？霉菌及酵母菌总数限度又是多少？答：是总数不得过100个。没有必要考虑各自的限度值。

制药纯化水系统通常应用连续的方法控制微生物，并进行周期性消毒。以热系统、冷系统以及常温系统讲述制药纯化水设备系统在不同温度时对连续微生物控制的影响。1.“热”系统防止细菌生长的最有效和最可靠的方法是在高于细菌易存活的温度下操作。如果制药纯化水设备分配系统维持在热状态下，常规的消毒可以取消。有很多的历史数据表明系统在80℃的温度下操作，能防止微生物的生长。目前很多企业在70℃的温度下验证水系统。在较低的温度下操作的优点包括节约能源、对人体伤害风险低、减少红锈的生成。系统在这个范围内的较高温度下操作在微生物污染方面具有更高的安全性。但在80℃以下的有效性必须在实例的基础上用检测数据来证明，需要注意的是，这个温度范围不会去除内毒素。2.“冷”系统通常情况下，“冷”系统是在4～l0℃(我国药典附录中提及的是低于4℃)的温度下操作。在15℃ 以下，微生物的生长率明显降低，因此与常温系统相比，冷系统的消毒频率可能要降低。特定温度下的有效性与否，在任何特殊系统中相关的消毒频率必须在实例的基础上通过统计分析来确定。虽然“冷”系统被证明是有效的，但是其需要能耗及与其相关的成本很高。3.“常温”系统任何制药用水系统的循环温度都是通过需要达到的微生物标准或需要达到的使用温度来确定的。在行业中，“常温”的纯化水设备系统通常使用臭氧或热消毒，与“热”或“冷”系统相比，通常需要较低的生命周期成本，并且还减少了能量消耗。然而，在没有提高系统消毒水平的情况下，在储罐和分配循环中缺少温度控制会导致系统内生物膜的形成，偶尔或不可预测地产生微生物不符合规定的水，以及导致不在计划内的水系统停机。

1、拿样/取样拿样：已有人取好样品，放在一个固定的地方，检测员每天上班后，拿好一个干净的密闭容器，去把样品拿回实验室，期间必须防止样品被污染。取样：也叫抽样，需要自己去取/抽，去成品库取成品，去车间现场取半成品、接触面、非接触面、水、冰、内包袋、空气、辅料等。无菌取样，熟悉取样方法、流程，带好取样工器具，做好样品标识。取完样，放在干净密闭的容器，带回实验室，做好样品登记。2、无菌室灭菌 一般采用紫外灯灭菌。实验室前、后打开紫外灯照射30分钟。注意实验前关灯后30min方可进入室内工作。很多人分不清无菌室和超净工作台的使用和区别，本人理解：无菌室是用来做样品前增菌的，超净工作台是用来做致病菌分离和特征/可疑菌落的进一步验证的。3、配制培养基和相关试剂 现在用的干粉培养基较多，按照检测方法需要的培养基，采购回来就行；用过的厂家有：北京陆桥、青岛海博和广州环凯。按照样品数量配制相应的培养基，也可以多配点，放着冷藏保存，其有效期为7天。干粉培养基保质期一般是3年，开封后保质期为1年，但是使用的情况稀少。而配制培养基的水，我们一般选择单蒸水。 培养基一般选择湿热灭菌法，称量好干粉培养基，加入相应的单蒸水，搅拌溶解后分装，塞上瓶塞或试管塞，用报纸或牛皮纸包扎好，橡皮筋捆好，放入高压灭菌锅。现在有些实验室是手提式灭菌锅，其需要手动排气，人工计时，看压力表，比较累。 培养皿和吸管：一般选择干热灭菌，可我工作过的几个实验室，干燥箱基本是用来干燥的（使用温度高容易坏，灭菌时间太久不想等待），也可以不用外校。培养皿和吸管包扎好后，放入高压灭菌锅灭菌。 培养基、培养皿、吸管等，灭好菌后，需冷却；然后通过传递窗搬进无菌室。4、无菌室增菌 采样注意部位和代表性，一般采取可食部位，而致病菌采样部位视具体样品而定。为了注意交叉污染，现在一般采用拍打式均质器。5、做好标识 每个实验室标识最好是统一的做法，这样大家都能认识，把增菌好的试管和瓶子，通过传递窗拿到培养室放进相应的培养箱进行培养。6、整理无菌室 做完实验，需要把无菌室整理好，工器具摆好位置，台面做好清洁卫生。打开紫外灯灭菌30分钟。7、影响微生物检测结果的因素7.1人 上岗培训，熟悉检测方法；7.2机 仪器设备正常运行，定时维护保养；7.3料 材料正确，有效；7.4法 检测方法适合样品检测要求；7.5环 环境满足微生物检测要求。8、废弃物灭菌 实验后的培养基等废弃物，收集整理，放入灭菌袋内打包，经过121℃、30min灭菌后放到医疗废物收集桶内。

(二)泌尿系统感染病原菌的快速检测　　因泌尿系统感染的中段尿样本中的细菌量相对很高, 中段尿样本也是MALDI-TOF MS直接检测的理想选择[30], 并且常常是单一菌种感染, 避免了MALDI-TOF MS在鉴定混合菌样本的不足[31]。泌尿系统感染是人类常见的感染性疾病, 临床泌尿系统感染最常见的病原菌为大肠埃希菌(70%~95%)、腐生葡萄球菌(5%~10%)以及其它肠杆菌科细菌, 如奇异变形杆菌和肺炎克雷伯菌。有研究表明MALDI-TOF MS对尿液样本中这些细菌的鉴定效率和准确率要优于传统鉴定方法和其他鉴定系统[7, 32, 33]。1.鉴定效能 FERREIRA等[7]选取尿液中细菌大于1× 105 cfu/mL的样本进行直接的MALDI-TOF MS鉴定, 结果显示尿液样本经过差速离心法处理后, 可将91.8%的菌株鉴定到种、92.7%的菌株鉴定到属的水平。　　杨溪等[33]使用MALDI-TOF MS技术对临床收集到的1 040份尿液样本进行直接快速检测, 共鉴定出含细菌的样本526份, 其中尿细菌培养菌落数≥ 1× 105 cfu/mL, 培养出1种/2种菌的尿液样本MALDI-TOF MS的直接鉴定率分别为92.7%(430/464)和75%(96/128)。MALDI-TOF MS直接检测法的鉴定结果与尿细菌培养法鉴定出的细菌菌种一致, 符合率为100%。2.与流式细胞术联用 怀疑泌尿系统感染的尿液样本一般经离心后取沉淀直接进行检测, 但考虑到临床上有60%~80%的尿液样本是阴性的, 为了减少分析的时间和人工的工作量, 有学者将MALDI-TOF MS与流式细胞术联用检测, 用流式细胞术筛除细菌数量不足的尿液样本, 而MALDI-TOF MS用来检测筛选结果为阳性的尿液样本, 取得了良好的鉴定效果[34, 35]。MARCH ROSSELLó 等[34]建立了这样一种微生物鉴定程序:先用流式细胞仪进行菌落计数筛查出单一细菌阳性的尿液样本, 然后再进行MALDI-TOF MS检测, 发现细菌数在1× 107 cfu/mL时是足够的细菌浓度, 有87.5%的敏感性, 而细菌数在(1× 105)~(1× 107)cfu/mL之间的样本经过4 h的预增菌, 得到用于分析的足够的细菌数量后, 可以达到91.7%的敏感性。3.细菌含量对鉴定结果的影响 由于中段尿中病原菌数 2.0), 而随着样本中细菌数的降低, 鉴定成功的比例和鉴定分数也在下降, 当菌落数 1× 104 cfu/mL的中段尿样本, 应用MALDI-TOF MS直接检测即可取得满意的鉴定效果。4.中段尿样本直接检测的新方法 DEMARCO等[31]近期描述了一种透析过滤的方法, 通过脱盐、分馏、富集等步骤对100例阳性尿液样本在MALDI-TOF MS分析前进行了预处理, 实验结果表明这种预处理方法能够正确地鉴定阳性尿液样本, 并且正确分类了所有临床相关菌尿症的阴性尿液样本, 包括一组污染的尿液样本和一组临床上无关紧要的定植菌。敏感性和特异性分别是67%和100%。5.中段尿样本直接检测的不足之处 与直接检测培养阳性的血样本一样, 对于含有2种或2种以上细菌感染的中段尿样本, MALDI-TOF MS常常表现为鉴定能力不足[33, 35] 尿液蛋白质如α -防御素[8]会造成鉴定结果不能正确匹配数据库 对酵母菌的鉴定能力也有待于进一步提高 对于核糖体蛋白序列差异很小的菌种也常常不能区分。(三)其它无菌体液　　MALDI-TOF MS直接检测和鉴定其它无菌体液样本如脑脊液、胸腹水和关节液等中细菌的报道尚不多。NYVANG HARTMEYER等[37]首次报道了通过直接将脑脊液样本离心取上清直接进行MALDI-TOF MS分析, 肺炎链球菌性脑膜炎可以在30 min内做出诊断, 为后续治疗方案的选择和结果的解释提供了重要的参考依据。SEGAWA等[38]也用同样的方法对一例肺炎克雷伯菌引起的脑膜炎做出了诊断, 但同时也指出在实际应用中能获得的样本量少, 细菌数少可能会限制它的应用。另外, 还可将无菌体液样本转移到血培养瓶中进行孵育, 待报阳后进行检测也是可行的。有研究应用MALDI-TOF MS检测了46份液体, 包括移植养护液、关节液、深部脓疱样本、骨小孔样本用血培养基孵育, 发现44/46(96%)能鉴定到种的水平, 余下的2份被鉴定到属的水平[18]。四、总结与展望　　MALDI-TOF MS是一种简单、快速、高通量和高效的微生物鉴定手段, 在临床样本直接检测方面较传统的鉴定方法具有更大的优势, 能显著降低样本检测的周转时间和成本, 但尚存在着一些不足之处, 主要表现在:(1)MALDI-TOF MS在检测和鉴定细菌方面的敏感性还不高, 不能直接鉴定患者血样本中的病原菌(细菌数量太少) (2)对于一些核糖体蛋白差异较小的细菌用其辨别有较大的困难 (3)目前的研究都有各自不同的操作过程, 在样本处理、质谱图采集和分析等方面没有统一的标准, 可能会影响分析结果在实验室内和实验室间的可重复性 (4)标准的鉴定参考图谱数据库尚不够完善, 需要进一步拓展 (5)对一些细胞壁难以破坏的细菌(如革兰阳性菌、酵母菌)和混合菌等的鉴定能力还不够高。但是相信随着更加有效的样本预处理方法、更加严格的检测过程控制和更高分辨率的图像处理技术的实现, MALDI-TOF MS用于直接检测临床样本中的微生物会有更广阔的前景。

为临床标本病原微生物直接检测开拓新方法 中国科技网讯 近日，记者从第三军医大学大坪医院野战外科研究所获悉，该院所检验科主任陈鸣教授带领科研团队通过8年攻关，成功构建了用于大分子检测的漏声表面波生物传感器检测系统。该检测技术具有高度特异性、敏感性和低成本的特点，并已应用于单核苷酸多态性的检测，对临床诊断和指导疾病治疗有重要意义。日前，相关论文发表在国际传感器领域权威期刊《生物传感器与生物电子学》杂志上。 单核苷酸多态性（SNP）作为第三代遗传标记，目前广泛应用于病原微生物分型、临床耐药分析等领域。用于检测SNP的DNA测序、单链构象多态性等传统非均相分析方法，操作复杂且通量不高，导致数据可靠性降低。虽然基因芯片、变性高效液相色谱仪等技术能快速、高效、大批量检测基因组中的SNP，但设备价格昂贵，且技术上需要放射性或荧光标记等，还存在重复性差、结果难以标准化判定等缺陷。 生物传感器这种方法可以解决检测中存在的不足。随着声光、微电子技术的发展，一种新型传感器——漏声表面波传感器逐渐发展起来。与其他类型的生物传感器相比，漏声表面波传感器的检测基频更高，同时更适用于液相分析。 在长达8年的实验研究中，课题组与其他单位合作，共同设计制作了双通道LSAW传感器和数据分析采集软件，成功地构建了漏声表面波传感器检测系统。该系统建立了基于“DNA酶连接反应和生物酶放大”的新型漏声表面波生物传感器SNP检测技术。实验证明，该检测方法具有较高的灵敏度。 据介绍，该课题组构建的新型漏声表面波生物传感器SNP检测技术，与传统的SNP检测方法完全不同，将为临床标本病原微生物的直接检测开拓全新的方法。（邹争春 记者陈磊） 《科技日报》（2012-04-27 一版）

1 基本知识1.1 生物安全柜：防止操作过程中含有危险性生物气溶胶散逸的负压空气净化排风柜。1.2 主要用途：生物安全柜广泛应用在医疗卫生、疾病预防与控制、食品卫生、生物制药，环境监测以及各类生物实验室等领域，是保障生物安全和环境安全的重要基础。1.3 生物安全柜的分级：生物安全柜分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级三大类以满足不同的生物研究和防疫要求。1.3.1Ⅰ级生物安全柜：Ⅰ级生物安全柜有前窗操作口的安全柜，操作者可通过前窗操作口在安全柜内进行操作。用于对人员和环境的保护，不要求对产品的保护。前窗操作口向内吸入的负压气流保护人员的安全；排出气流经高效过滤器过滤后排出保护环境不受污染。是在不要求对产品的保护的条件下，可以满足操作生物危害等级为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级致病因子要求的生物安全柜。1.3.2Ⅱ级生物安全柜：Ⅱ级生物安全柜有前窗操作口的安全柜，操作者可通过前窗操作口在安全柜内进行操作，对操作过程中的人员、产品及环境进行保护。前窗操作口向内吸入的负压气流保护人员的安全；经高效过滤器过滤的垂直下降气流用以保护产品；气流经高效过滤器过滤后排出保护环境不受污染。是用于对人员、受试样本及环境进行保护，且能够满足操作生物危害等级为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级致病因子要求的生物安全柜。Ⅱ级生物安全柜按排放气流占系统总流量的比例及内部设计结构分为A1、A2、B1、B2共四种类型。1.3.2.1 Ⅱ级A1型生物安全柜：前窗操作口流入气流的最低平均流速不低于0.40m/s；下降气流为安全柜的部分流入气流和部分下降气流的混合气体，经过高效过滤器过滤后送至工作区；污染气流经过高效过滤器过滤后可以排到实验室或经安全柜的外排接口通过排风管道排到大气中；安全柜内的污染部位可以处于正压状态，并且这些正压区域可以没有负压区域包围。Ⅱ级A1型生物安全柜不能用于有挥发性有毒化学品和挥发性发射性核素的实验。1.3.2.2 Ⅱ级A2型生物安全柜：前窗操作口流入气流的最低平均流速不低于0.50m/s；下降气流为部分流入气流和部分下降气流的混合气体，经过高效过滤器过滤后送至工作区；污染气流经过高效过滤器过滤后可以排到实验室或经安全柜的外排接口通过排风管道排到大气中；安全柜内所有生物污染部位处于负压状态或者被负压通道和负压通风系统环绕。Ⅱ级A2型生物安全柜用于进行以微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验时，必须连接功能合适的排气罩。1.3.2.3 Ⅱ级B1型生物安全柜：前窗操作口流入气流的最低平均流速不低于0.50m/s；下降气流大部分由未污染的流入气流循环提供，经过高效过滤器过滤后送至工作区；大部分被污染的下降气流经过高效过滤器过滤后通过专用的排气管道排入大气中；安全柜内所有生物污染部位均处于负压状态或者被负压通道和负压通风系统包围。如果挥发性有毒化学品或放射性核素随空气循环不影响实验操作或实验在安全柜的直接排气区域进行，Ⅱ级B1型生物安全柜可以用于以微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验。1.3.2.4 Ⅱ级B2型生物安全柜：前窗操作口流入气流的最低平均流速不低于0.50m/s；下降气流来自经过高效过滤器过滤的实验室或室外空气；流入气流和下降气流经过高效过滤器后通过排气管道排到大气中，不允许回到安全柜和实验室中；所有污染部位均处于负压状态或者被直接排气的负压通道和负压通风系统包围。Ⅱ级B2型生物安全柜可以用于以挥发性有毒化学品和放射性核素为辅助剂的微生物实验。1.3.3Ⅲ级生物安全柜：具有全封闭、具有不泄漏结构的，最高安全防护等级的安全柜，适用于高风险的生物试验。人员通过与柜体密闭连接的手套在安全柜内实施操作。安全柜内对实验室的负压不低于120Pa。下降气流经高效过滤器过滤后进入安全柜。排出气流经两道高效过滤器过滤或通过一道高效过滤器过滤再经焚烧处理。是能够满足操作生物危害等级为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级致病因子要求的生物安全柜。2 检测项目和技术指标2.1 箱体泄漏检测：给生物安全柜增压到500Pa，封闭加压空气，30min后压力下降值小于10%；2.2 洁净度：5级(具体参数见下表)；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609261035_612129_1638093_3.bmp3 检测设备和实验条件3.1环境条件3.1.1环境温度：（15～30）℃；3.1.2相对湿度：≤70%。3.2 检测设备3.2.1微压计：测量范围(0～600)Pa,误差≤±5Pa；3.2.2照度计：测量范围(0～1000)lx,误差≤±10%；3.2.3风速仪：引用误差≤±3%；3.2.4尘埃粒子计数器：直径分辨力0.1μm。4 检测方法4.1 箱体泄漏检测4.1.1封好箱体的前窗和排气孔，使安全柜成为一密封系统；4.1.2移开装饰嵌板和通道上的其他障碍物，露出要测试的压力通风系统；4.1.3在测试区连接压力计以显示内压；4.1.4对生物安全柜加压到500Pa，封闭加压空气，30分钟内压力下降值不超过初始压力值的10%。4.2 洁净度4.2.1开启生物安全柜，在正常工作条件下运行10min；4.2.2使粒子计数器的采样口置于工作台面上200mm，距内表面及工作窗大于100mm位置进行采样，共5个点，各点洁净度均应满足洁净度要求。4.3 垂直气流平均风速4.3.1在距离内侧壁板及工作工作窗100mm围成的，工作台面上方300mm处的平面区域内，使用风速仪测量垂直气流的风速，测量点不少于10个，以各点风速的平均值作为安全柜垂直气流平均风速。4.4 工作窗口进风平均风速4.4.1Ⅰ级、Ⅱ级生物安全柜进风平均风速的检测：1) 测排风量：用套管和排风口连接，套管长度等于排风口长边的2倍，使用风速仪测量排风口风速共6次，以6次读数的平均值作为套管截面平均风速，以套管截面平均风速乘以套管截面积得到排风量。2） 测送风量：在送风散流板垂直向下150mm，距边墙50mm围成的平面区域内测量垂直气流风速，测量点不少于6次，以垂直气流平均风速乘以送风面面积得到送风量。3） 排风量与送风量的差为工作窗口进风风量。4） 用工作窗口进风风量除以工作窗开口面面积，得到工作窗口进风平均风速。4.4.2Ⅲ级生物安全柜进风平均风速的检测：开启生物安全柜，把风速仪探测头放在手套口的中心处测量风速6分钟，每1分钟记录一次读数，共6次。以6次的平均值作为生物安全柜进风平均风速，每个手套口分别检测，均应符合要求。4.5 柜体内外负压差使生物安全柜正常工作，使用压差计测量柜内、外的压差。4.6操作台面平均照度4.6.1在工作台面上均匀选择不少于5个照度测量点，各测量点间的距离不超过300mm，与侧壁距离大于150mm。4.6.2关闭生物安全柜的背景照明，用照度计依次测量各点，以各点测得的照度的平均值作为生物安全柜操作台面平均照度。5 检测周期每年检测一次，仪器修理后应重新检测，确保符合使用要求后再使用。并建议每3个月对生物安全柜进行箱体泄漏检测，并检查洁净等级。6 仪器使用中的注意事项6.1 操作前应将本次操作所需的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过气幕破坏气流；并且在移入前用75%酒精擦拭表面消毒，以去除污染。6.2 打开风机5～10分钟，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操作。6.3安全柜内不放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。6.4 操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防可能溅出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。6.5柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量产生气流，干扰柜内气流稳定；且明火可能损坏HEPA滤器。6.6工作时尽量减少背后人员走动以及快速开关房门，以防止安全柜内气流不稳定。6.7在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。6.8 安全柜应定期进行检测与保养，以保证其正常工作。工作中一旦发现安全柜工作异常，应立即停止工作，采取相应处理措施，并通知相关人员。6.9 工作完成后，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10～15分钟，同时打开紫外灯，照射30分钟。（在紫外灭菌时要关闭通风;紫外光对人体有损害，注意个人保护。）6.10安全柜应定期进行清洁消毒，柜内台面污染物可在工作完成且紫外灯消毒后用2%的84消毒液擦拭。柜体外表面则应每天用1%的84消毒液擦拭。6.11柜内使用的物品应在消毒后再取出，以防止将病原微生物带出而污染环境。6.12 缓慢移动原则：为了避免影响正常的风路状态，柜内操作时手应该尽量平缓移动。6.13 物品平行摆放原则：为了避免物品和物品之间的交叉污染现象产生，在柜内摆放的物品应该尽量呈横向一字摆开，避免回风过程中造成交叉污染。同时避免堵塞背部回风隔栅影响正常风路。6.14 避免震动原则：柜内尽量避免震动仪器（例如离心机、旋涡振荡器等）的

如题，生产原料药，是不是每批必须作微生物限度检测？我们是每批都做，但有人告诉我们说，不必每批都作，可以抽检.

摘要： 　　微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。　　概述：　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。　　生长量测定法　　体积测量法：又称测菌丝浓度法。　　通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。　　称干重法：　　可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。　　比浊法：　　微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。　　菌丝长度测量法：　　对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。微生物计数法　　血球计数板法:　　血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。　　染色计数法：　　为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。　　比例计数法：　　将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。　　液体稀释法：　　对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。　　平板菌落计数法：　　这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。　　试剂纸法：　　在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。　　膜过滤法：　　用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。　　生理指标法：　　微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。测定含氮量：　　大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。　　测定含碳量：　　将少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。　　还原糖测定法：[/si

gb/t32470-2016检测土臭素时，天然水样要求过滤,要求经过0.45um滤膜过滤（抽滤？）。问题1，抽滤是否会将土臭素和异莰醇抽走，降低被测浓度？问题2，既然是顶空富集，萃取纤维与被测溶液不直接接触，为啥还要过滤？问题3，萃取纤维如何放进色谱进样口？直接放进衬管吗？

大家好，现在市面上有没有说下成像系统，可以检测浮游生物等水质指标。可不可以提供信息。

(二)MALDI-TOF MS分析　　目前主要有4种MALDI-TOF MS系统[9]:MALDI Biotyper系统 (Bruker Daltonics, 德国), VITEK MS系统 (BioMé rieux, Marcy l’ Etoile, 法国), the AXIMA@SARAMIS 数据库 (AnagnosTec, 德国)和the Andromas (Andromas, 法国), 其中前2种质谱系统已获得中国食品和药品监督管理局许可证, 可以用于临床样本的检测。　　在进行质谱分析前, 应根据不同的检测对象和使用的激光类型选择合适的基质。基质由基质复合物和基质溶剂组成。常用溶剂有:乙醇、乙腈和一种强酸如三氟乙酸、甲酸等。常用的基质是2, 5-二羟基苯甲酸(2, 5-dihydroxybenzoic acid, DHB)、ɑ -氰基-4-羟基肉桂酸(ɑ -cyano-4-hydroxycinnamic acid, ɑ -CHCA)、3, 5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸(sinapinic acid, SA)等。将经过提取的微生物样本细胞内容物与等量的基质溶液(通常是1 μ L)混合或分别点加在样本靶板上, 待室温条件下干燥后(使得样本与基质共结晶)上机检测即可。(三)鉴定结果分析　　将质谱检测得到的谱峰与数据库进行模式匹配, 得到一个鉴定分数。基于软件给出的在列表中第1种微生物的鉴定分数, 根据各自质谱分析系统的判断标准得出检测结果。目前文献报道有2种判断标准:第1种是由STEVENSON等[10]提出的, 鉴定结果按照匹配程度进行打分, 分值在0~3之间。当得到的鉴定分数≥ 2.0时, 表示待测菌株有较大的把握被鉴定到种的水平 鉴定分数在1.7和2.0之间时, 表示菌株被鉴定到属的水平, 分值 1.7表示产生的鉴定结果不可信。第2种标准是LA SCOLA等[11]提出的, 当一个样本经过4次点样鉴定, 当列表中第1种微生物的鉴定结果均一致, 并且至少2次的鉴定结果鉴定分数≥ 1.900, 或者4次的鉴定分数均≥ 1.200, 表明微生物能被正确鉴定。有学者发现通过改进上述的鉴定标准可以得到更好的鉴定效果, ROSSELLó 等[12]认为在临床样本直接鉴定时, 鉴定分数要比直接纯培养的低, 可能会对分析结果造成干扰, 而厂商推荐的鉴定标准有些严格, 只有得到很高的鉴定分数结果才是被接受的。因此提出新的标准增加可接受的准确鉴定数:当一个样本4次点样中至少有2次的鉴定结果一致, 并且对列表中的第1个微生物种的鉴定分数均≥ 1.4时, 即表示能够准确鉴定, 这种标准与纯培养的鉴定结果有100%的符合率。NONNEMANN等[5]、GORTON等[13]将种的鉴定分数降到1.5, 可以将种的鉴定率从56%提升到76%、54%提升到63%。以上均提示了厂商推荐的cut-off值比较保守, 使得鉴定的敏感性降低。此外, 由于目前的数据库尚不完善, 对于部分菌株可能会出现鉴定失误的情况, 实验室工作人员应在商品数据库的基础上建立和丰富自己的参考数据库, 以提升鉴定的准确率。三、MALDI-TOF MS在临床样本直接检测中的应用　　从临床样本直接检测微生物可以节省转种培养的时间。目前已取得显著进展的是从血培养阳性样本中直接检测细菌和酵母样真菌, 而从中段尿和其他无菌体液样本中的直接检测也在快速发展。(一)血流感染病原菌的快速检测　　血流感染的发病率和死亡率都相当高, 快速准确的血流感染病原菌鉴定对于临床抗菌药物的合理使用和病愈率的提高至关重要。直接检测能显著减少鉴定时间( 29 h), 使得在血培养阳性的第1个24 h内接受适当抗菌药物治疗的患者增加11%[14]。CLERC等[15]认为基于MALDI-TOF MS 对血培养阳性样本的检测可能会成为血培养阳性患者管理中除了革兰染色报告之外的第2个关键步骤。近年来, 有不少的研究应用MALDI-TOF MS直接鉴定临床微生物样本, 取得明显进展的是从血培养阳性样本中直接鉴定细菌和酵母样真菌[5, 10, 16], 而混合菌和厌氧菌等的鉴定还有待更多的研究。1.鉴定效能 (1)细菌:在引起血流感染常见菌的鉴定方面, MALDI-TOF MS技术已经在肠杆菌科细菌、葡萄球菌等病原菌的直接鉴定方面取得了很好的鉴定结果。大量的研究评估了MALDI-TOF MS用于直接鉴定阳性血培养瓶的表现, 不同文献报道的种水平的鉴定率在54%~99%不等[5, 10, 11, 17, 18, 19], 主要是由于所鉴定细菌种类/数量的不同, 或是运用了不同的预处理/提取方法, 或是定义了不同的cut-off值。SCHMIDT等[19]、SCHUBERT等[20]应用不同的操作程序直接鉴定阳性血培养瓶样本, 结果显示103株代表临床最常见的13个属24个种的样本中, MALDI-TOF MS准确鉴定其中的72%(86.6%革兰阴性菌, 60.0%革兰阳性菌) 500例样本中, 其中革兰阳性菌358例, 革兰阴性菌98例, 总体种的鉴定率达到了86.5%, 其中革兰阳性菌是89.8%, 革兰阴性菌是86.3%。国内最新的研究也显示, 陈峰等[21]运用分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS直接检测, 革兰阴性菌和革兰阳性菌中有84.0%和75.0%能被准确鉴定到种的水平 对于血流感染中最常见的病原菌的菌种鉴定符合率达到83.3%~96.9%。以上研究均显示了MALDI-TOF MS在血流感染直接鉴定方面的良好表现, 并呈现出了如下特点:对革兰阴性菌的鉴定率比革兰阳性菌高 无荚膜的细菌较有荚膜的细菌(细胞壁难以破坏提取到足够的菌体蛋白)的鉴定率高 混合细菌感染时鉴定能力有限, 多数情况下只能鉴定出其中一种优势细菌 对草绿色链球菌的鉴定效果较差(鉴定不出, 或将缓症链球菌鉴定为肺炎链球菌)[10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20], 需要进行另外的确证试验 (2)真菌:MALDI-TOF MS在鉴定酵母菌方面有较高的鉴定率。FERRONI等[18]、YAN等[16]的研究表明酵母菌鉴定的正确率可达91%~100%。但是也有学者得到了相反的结果, GORTON等[13]和PAOLUCCI等[22]直接鉴定的正确率只有56%和41%, 可能是因为鉴定使用的血量过少(1.5 mL), 或是在处理样本的过程中样本的丢失导致了低鉴定率 (3)其它细菌:目前关于厌氧菌的直接鉴定的报道较少, 并且显示了鉴定成功率并不理想, 可能是因为厌氧菌对生长条件的要求较为苛刻, 导致增菌的数量达不到要求, 还需要更多的研究来优化其鉴定条件。2.不同的检测方法 上述结果均是MALDI-TOF MS直接检测报阳血培养瓶的样本所得到的。有研究表明报阳血培养瓶的样本也可以转种到固体培养基上进行短暂孵育(如2~4 h)后再进行鉴定, 则具有更大的优势。KROUMOVA等[23]在质谱法分析实施蛋白提取程序之前, 将样本富集到一个增菌培养基中孵育大约2 h后再进行质谱分析, 同时达到增菌和减少血液成分干扰的目的, 提升了鉴定分数, 使鉴定结果更可信 IDELEVICH等[24]将血培养阳性的样本转种到血平板孵育1.5、2、3、4、5、6、7、8、12和 24 h(对照), 分别直接进行MALDI-TOF MS检测, 直到有可靠的到种水平的鉴定结果出现(鉴定分数≥ 2.0), 结果发现革兰阳性球菌平均鉴定到种所需要的孵育时间是5.9 h, 革兰阴性杆菌平均鉴定到种所需要的孵育时间是2 h。如果增加了蛋白提取程序, 革兰阳性球菌的孵育时间将缩短至3.1 h, 但对革兰阴性杆菌的影响不明显。这种方法可以有效地减少额外的人工操作时间和费用。HONG等[25]的研究也表明, 这种方法能得到可靠的鉴定结果(与传统生化方法的属水平的一致率是98.9%), 并且这种方法不会受血培养系统的影响, 成本低, 易于操作。3.与药物敏感性联合检测 为了克服MALDI-TOF MS不能做体外药物敏感性试验的不足, MALDI-TOF MS已经开始与药物敏感性试验联合用来直接检测阳性血培养瓶的样本[26], 用不含活性炭的血培养基在过滤和洗涤之前用溶解细胞的缓冲液进行孵育, 然后将从过滤膜上收集的微生物直接进行MALDI-TOF MS分析, 剩下的样本用VITEK 2系统孵育并进行药物敏感性试验, 将94.0%的样本鉴定到了种的水平, 药物敏感性试验与传统方法相比有93.5%的一致率, 并且相较于传统的56.3 h, 新方法鉴定和药物敏感性试验所用的时间缩短到了11.4 h。证明了在一天内完成微生物鉴定和药物敏感性试验的可行性。为获得更好的治疗争取了时间并且减少了住院的费用[27]。4.检测结果的影响因素 有研究指出不同的血培养瓶和血培养系统可能会产生鉴定结果的差异[19, 28, 29]:使用含有活性炭的血培养瓶和BacT/ALERT血培养系统的鉴定率较低, 使用含有树脂的血培养瓶和BACTECTM血培养系统鉴定率较高。其中一项研究比较了含有活性炭的和不含活性炭的血培养瓶在BacT/ALERT血培养系统下的鉴定表现, 发现使用不含活性炭的血培养瓶的MALDI-TOF MS的鉴定率为30%, 而含有活性炭的血培养瓶的鉴定率只有8%[28]。而另一项研究比较了3种不同的血培养系统— — BACTECTM, VERSATREK和BacT/ALERT对鉴定率的影响, 经这些鉴定系统培养的阳性血培养瓶的鉴定成功率分别是76%、69%和62%[29]。此外, 使用不同的细菌蛋白提取程序也会影响鉴定成功率[11]。

[font=&][size=16px][color=#333333]点击链接查看更多：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-37786.html[/url]服务背景[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font][color=#333333] 除臭剂检测是指利用相关实验室仪器设备，按照国家相关法规及标准对各类化妆品进行成分和含量的检测，以达到监管化妆品卫生质量，保障消费者使用健康安全性。除臭剂的安全问题备受关注，在我国市场中销售都须经过检测以保证产品质量。下面给大家介绍相关知识[/color][font=&][size=16px][color=#333333]检测内容[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]检测范围：物理除臭剂、化学除臭剂、微生物型除臭剂、植物型除臭剂和复合型除臭剂等。检测项目 ：常规项目：甲醛、甲醇、巯基乙酸、氢醌、苯酚、维生素D2、维生素D3、氨基酸 无机检测：可溶性锌盐、硼酸和硼酸盐、总氟、锶、镉、汞、砷、铅、pH值、游离氢氧化物 微生物：细菌总数、粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌 性激素：雌三醇、己烯雌酚、雌二醇、睾丸酮、甲基睾丸酮、黄体酮 防腐剂：甲基氯异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸，对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯 微生物指标：菌落总数、霉菌和酵母计数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、军团菌等 理化指标：总活性物、铅、砷、汞等重金属，甲醇、甲醛、黄曲霉毒素、耐寒、耐热、磷酸盐、pH、水分含量等 毒性试验：鼠伤寒沙门氏菌/细菌回复突变试验、急性经口毒性试验、急性经皮毒性试验等安全性检测：杀菌剂、防腐剂、防霉剂和抗菌剂等

水质在线监测系统参数汇总：目前水质在线监测参数主要有30项，分别为温度、PH、溶解氧、电导率、浊度、叶绿素、蓝藻、高锰酸盐指数、化学需氧量、生物需氧量、氨氮、硝酸盐氮、亚硝酸盐氮、总磷、磷酸盐、总氮、总有机碳、水中油、余氯、氯离子、总氯、氟化物、氰化物、总酚、硅酸盐、硫酸盐、硫化物、臭氧、重金属（铜离子、铝离子、六价铬、铁离子、总铁、锰离子、镍离子、锌离子、钠离子、镉离子）。这些参数监测原理主要基于电极法和分光光度法。

微生物检测，公司是否可以让另一家集团内公司（在同一楼办公）代做车间环境微生物检测（本公司无产品微生物检测要求），自己公司化验室无微生物检测设备和条件。这样是否合规和认可？有什么好方法解决。

RO膜刚清洗好，电导率已降到10以下，这样的话还有必要再检测微生物吗，若是电导率高需检测大肠菌群，这样的话还有检测的意义吗

水污染生物监测和检测方法及其研究进展摘 要: 扼要介绍了生物监测的理论、方法和特点。综述了近年来水污染生物监测的发展趋势及其研究动态与方向。阐述了水污染生物监测近期研究方向。关键词：水污染 生物监测 研究进展1 引言生物监测是系统地利用生物反应来评价环境的变化，并将其信息应用于环境质量控制程序中的一门科学。生物监测的目的是希望在有害物质还未达到受纳系统之前，在工厂或现场就以最快的速度把它检测出来，以免破坏受纳系统的生态平衡；或是能侦察出潜在的毒性，以免酿成更大的公害[1]。生物监测是理化监测的重要补充，对于评价环境质量状况有着十分重要的作用。理化监测一般只考虑瞬时污染状况，要做到长期连续监测，在经济上往往是不合适的。要了解污染的累积效应，采用生物监测更合适。同时，仅利用污染物质的浓度值来反映污染程度及危害也是不全面的，因为某些污染物质在环境中的含量极微不等于毒性极微，反之亦然。用生物监测进行配合，充分利用指示生物对污染物毒性反应的敏感性，便能较准确地反映真实的污染状况。2 水污染的生物监测2.1 水污染生物监测的理论依据在一定条件下，水生生物群落和水环境之间互相联系、互相制约，保持着自然的、暂时的相对平衡关系。水环境中进入的污染物质，必然作用于生物个体、种群和群落，影响生态系统中固有生物种群的数量、物种组成及其多样性、稳定性、生产力以及生理状况，使得一些水生生物逐渐消亡，而另一些水生生物则能继续生存下去，个体和种群的数量逐渐增加。水污染生物监测就是利用这些变化来表征水环境质量的变化[2]。2.2 水污染生物监测的特点同理化监测相比，生物监测有自己的特点：生物监测能反映各种污染物的综合影响；理化监测是定期采样，结果不能反映采样前、后的情况，而水中生物，汇集了整个生长期环境因素改变的情况；有些水生生物对污染物很敏感，有些连精密仪器都测不出的微量元素的浓度，却能通过“生物放大”作用在生物体内积累而被测出[2]。生物监测也有自己的不足之处：生物监测不能定性和定量地测定水质污染；检测的灵敏性和专一性方面不如理化检测；某些生物检测需时较长。2.3 水污染生物监测的方法2.3.1利用指示生物在水体中的出现或消失、数量的多少来监测水质许木启 [3]利用白洋淀水体中浮游动物群落优势种的变化来判断水体的污染程度和自净程度。结果表明，府河—白洋淀水体从上游至下游，浮游动物耐污种类逐渐减少，广布型种类逐渐出现较多，在下游许多正常水体出现的种类均有分布；同时，原生动物由上游的鞭毛虫至中游出现纤毛虫，在下游则发现很多一般分布在清洁型水体的种类，表明府河—白洋淀水体从上游到下游水体的污染程度不断减轻，水体具有明显而稳定的自净功能。2.3.2利用水生生物群落结构的变化来监测水质蒋昭凤等 [4]用底栖动物的变化趋势评价湘江水质污染，结果发现湘江干流底栖大型无脊椎动物种类数和物种的多样性指数从上游到下游呈减少趋势，表明毒杀生物的有毒物质对湘江的污染较为明显，并且可根据湘江干流各断面种类数的减少程度判断出各断面的污染程度；同时也观察到，随着时间的推移，底栖大型无脊椎动物种类数和多样性指数也呈减少趋势，说明这种有毒污染仍在发展之中。2.3.3水污染的生物测试水污染的生物测试是利用水生生物受到污染物质的毒害所产生的生理机能的变化，测试水质污染状况。Belding [5]根据鱼的呼吸变化指示有毒环境，在有污染物存在的情况下，鱼腮呼吸加快且无规律。德国[6]从1977年开始研究利用鱼的正趋流性开展生物监测，在下游设强光区或适度电击，控制健康鱼向下游的活动；或间歇性提高水流速度，迫使鱼反应。如果鱼不能维持在上游的位置，则表明污染产生了危害。3 国内外水污染生物监测的研究进展近几年来，应用生物监测环境技术的研究广泛开展，出现了一些新方法、新材料和新的监测物，提高了生物检测的灵敏性。3.1 水污染生物监测及其检测的新方法3.1.1 利用遗传毒理学监测水体污染环境污染物质对人类及其它生物危害最为严重的问题是对细胞遗传物质造成的损害。因此，近20年来环境生物检测技术的研究和应用，尤其是细胞微核技术和四分体微核技术在动植物以及人类染色体受外界理化因子的损伤等方面的分析、诱变剂的测试筛选，以及应用于环境监测的研究得到了广泛的发展[7]。微核在生物细胞内的形成途径以及与染色体畸变的相关性早已被人们所认识，用微核测定法替代染色体畸变方法来监测环境污染物对生物遗传物质的损伤具有简便、快速、灵敏度高等优点。最常用的蚕豆根尖细胞微核试验技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物微核监测方法，该技术自1982年由Degrassi等建立以来，在环境诱变和致癌因子的检测研究中，特别是在水质污染和致突变剂检测研究中得到了广泛应用[8]。吴甘霖 [9]在利用水花生根尖微核技术（MCN）对马鞍山市废水的监测研究中，发现利用水花生根尖微核可作为监测水体污染的新材料。其根尖细胞微核率 MCN（‰），不仅可用于监测不同废水的污染程度，而且由于该植物长期生活在污染水体中，还能反映不同废水的污染物富集程度及现状。当外界环境中存在一定浓度的致突变物时，可使细胞发生损伤，从而使微核细胞率上升。另外微核细胞率的上升，提示环境中存在有致突变物，即受试水样中含有能打断DNA分子的诱变剂或能打断纺锤丝的纺锤丝毒剂，从而表现出遗传毒性。单细胞凝胶电泳（SCGE），即彗星试验也是一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。它比微核试验更有益，因为环境中的遗传毒物浓度一般很低，而彗星试验检测低浓度遗传毒物具有高度灵敏性，所研究的细胞不需要处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。目前它已经被用于检测哺乳动物、蚯蚓、一些高等植物、鱼类、两栖动物以及海洋无脊椎动物的细胞[11]。Mirjana Pavlica等 [10]用暴露在五氯苯酚（PCP）中的淡水蚌类（Dreissena polymorpha Pallas）血细胞进行彗星试验，观察血细胞中DNA损伤程度。在进行实验室实验和原位实验后，发现高浓度的PCP(80g/L)会引起血细胞中DNA断裂，表明用彗星试验检测DNA损伤能够监测水体中PCP污染。SOS显色法[12]是国内在20世纪80年代发展起来的一种遗传毒性检测新方法，具有快速、准确、灵敏及假阳性率低的特点，被广泛用于遗传毒性的测定中。其原理是：在DNA分子受到外因引起的大范围损伤、其复制又受到抑制的情况下，会导致一种容易发生错误的修复。所有这些在遗传毒物处理后大肠杆菌中出现的一系列反应统称为SOS应答。SOS显色法有许多优于Ames的特点：（1）快速、简便，测定过程只需7ｈ；（2）灵敏，被处理的细胞全产生或不产生SOS反应，用分光光度法测定β-ONPG(邻硝基苯β-Ｄ-半乳糖苷)分解产物非常灵敏；（3）准确，SOS显色法测定的是遗传毒物对细胞原发的直接反应，其阳性结果十分可信，而Ames试验的假阳性率较高。因此，SOS显色法已引起人们的密切关注，成为一种值得推广的水质监测评价方法。